იმუნომიკრობიოლოგიური კვლევები

იმუნოლოგიური მეთოდები გამოიყენება მრავალი პრობლემის გადასაჭრელად:

1. ადამიანის იმუნური სისტემის მდგომარეობის (იმუნური სტატუსის) შეფასება იმუნური სისტემის უჯრედების და მათი პროდუქტების რაოდენობრივი და ფუნქციური მახასიათებლების დასადგენად.

2. ადამიანის ქსოვილების შემადგენლობისა და მახასიათებლების განსაზღვრა: სისხლის ჯგუფები, Rh ფაქტორი, ტრანსპლანტაციის ანტიგენები.

3. ინფექციური დაავადებების დიაგნოსტიკა და მათ მიმართ რეზისტენტობა ანტისხეულების ტიტრების გამოვლენითა და განსაზღვრით (სეროდიაგნოსტიკა), ორგანიზმში პათოგენების ანტიგენების გამოვლენა, ამ ანტიგენებზე უჯრედული რეაქციების განსაზღვრა.

4. ადამიანისა და ცხოველის ორგანიზმებიდან იზოლირებული ბაქტერიებისა და ვირუსების კულტურების სეროიდენტიფიკაცია.

5. ადამიანის ორგანიზმში და გარემოში ნებისმიერი ნივთიერების გამოვლენა, რომელსაც გააჩნია ანტიგენური ან ჰაპტიკური თვისებები (ჰორმონები, ფერმენტები, შხამები, წამლები, წამლები და სხვ.).

6. იმუნოპათოლოგიური მდგომარეობის, ალერგიის, ტრანსპლანტაციის და სიმსივნის საწინააღმდეგო რეაქციების იდენტიფიცირება.

სეროლოგიურ რეაქციებში ანტიგენსა და ანტისხეულს შორის ურთიერთქმედების პროცესი ორ ფაზაში მიმდინარეობს:

1) კონკრეტული- ურთიერთქმედების ფაზა, რომელშიც ხდება ანტისხეულების (პარატოპების) და ანტიგენის ეპიტოპების აქტიური ცენტრების დამატებითი კავშირი. ეს ფაზა ჩვეულებრივ რამდენიმე წამს ან წუთს გრძელდება;

2) არასპეციფიკური- მანიფესტაციის ფაზა, რომელიც ხასიათდება იმუნური კომპლექსების წარმოქმნის გარეგანი ნიშნებით. ეს ეტაპი შეიძლება განვითარდეს რამდენიმე წუთიდან რამდენიმე საათამდე.

ანტისხეულების ოპტიმალური სპეციფიკური ურთიერთქმედება ანტიგენთან ხდება იზოტონურ ხსნარში, რომლის pH ახლოს არის ნეიტრალურთან. ანტიგენ-ანტისხეულის რეაქციას ინ ვიტრო სისტემაში შეიძლება ახლდეს რამდენიმე ფენომენი.

აგლუტინაცია,

ნალექი,

ლიზისი.

რეაქციის გარეგანი გამოვლინებები დამოკიდებულია ანტიგენის ფიზიკურ-ქიმიურ თვისებებზე (ნაწილაკების ზომა, ფიზიკური მდგომარეობა), ანტისხეულების კლასსა და ტიპზე (სრული და არასრული), აგრეთვე ექსპერიმენტულ პირობებზე (საშუალო კონსისტენცია, მარილის კონცენტრაცია, pH, ტემპერატურა. ).

ანტიგენებისა და ანტისხეულების პოლივალენტურობა უზრუნველყოფს შეუიარაღებელი თვალით ხილული აგრეგატების გამოჩენას. ეს ხდება ქსელის ფორმირების თეორიის შესაბამისად, რომლის მიხედვითაც ანტისხეულების და ანტიგენის სხვა მოლეკულები თანმიმდევრულად მიმაგრებულია მიღებულ ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსზე. შედეგად, იქმნება ქსელის სტრუქტურები, რომლებიც გადაიქცევა ნალექებად. რეაქციის ბუნება და სიმძიმე დამოკიდებულია ანტიგენებისა და ანტისხეულების რაოდენობრივ თანაფარდობაზე. რეაქციები ყველაზე ინტენსიურია, როდესაც რეაქტორები ექვივალენტურ თანაფარდობაში არიან.

ბადის (ქსელების) წარმოქმნის აუცილებელი პირობაა თითოეული ანტიგენის მოლეკულისთვის სამზე მეტი ანტიგენური განმსაზღვრელი და თითოეული ანტისხეულის მოლეკულისთვის ორი აქტიური ცენტრის არსებობა. ანტიგენის მოლეკულები არის ბადისებრი კვანძები, ხოლო ანტისხეულების მოლეკულები არის დამაკავშირებელი რგოლები. ანტიგენისა და ანტისხეულების კონცენტრაციების ოპტიმალური თანაფარდობების არე (ექვივალენტური ზონა), როდესაც ნალექის წარმოქმნის შემდეგ სუპერნატანში არც თავისუფალი ანტიგენები და არც თავისუფალი ანტისხეულები არ არის გამოვლენილი.

დალექვის უნარის მქონე აგრეგატები წარმოიქმნება ანტიგენების შერწყმის სრულ ანტისხეულებთან. არასრული ანტისხეულები (მონოვალენტური) არ იწვევს ქსელური სტრუქტურების და დიდი აგრეგატების წარმოქმნას. ასეთი ანტისხეულების გამოსავლენად გამოიყენება ანტიგლობულინების გამოყენებაზე დაფუძნებული სპეციალური მეთოდები (კუმბსის რეაქცია).

სეროლოგიური რეაქციები, მათი მაღალი სპეციფიკისა და მგრძნობელობის გამო, გამოიყენება ანტიგენებისა და ანტისხეულების გამოსავლენად და რაოდენობრივად შესაფასებლად. იმუნორეაგენტების რაოდენობა რეაქციებში გამოიხატება ტიტრით - შრატის ან ანტიგენის მაქსიმალური განზავება, რომლის დროსაც რეაქცია კვლავ შეინიშნება.

მიკრობიოლოგიურ და იმუნოლოგიურ ლაბორატორიებში სეროლოგიური რეაქციები გამოიყენება ორი მიზნით:

1) მიკროორგანიზმების, ტოქსინების, ზოგადად ანტიგენის სეროიდენტიფიკაციისთვის ცნობილი ანტისხეულების გამოყენებით (იმუნური დიაგნოსტიკური შრატი),

2) სეროდიაგნოსტიკისთვის - პაციენტის სისხლის შრატში ანტისხეულების ბუნების განსაზღვრა ბაქტერიულ, ვირუსულ, ნაკლებად ხშირად სხვა ინფექციურ დაავადებებში ცნობილი ანტიგენის (diagnosticum) გამოყენებით.

ცნობილი იმუნური დიაგნოსტიკური შრატები საჭიროა ანტიგენის ზოგადი, სახეობისა და ტიპის დასადგენად. ისინი მიიღება ცხოველებში (ხშირად კურდღლებზე) მოკლული ან ცოცხალი მიკროორგანიზმების, მათი დაშლის პროდუქტების, ნეიტრალიზებული ან ადგილობრივი ტოქსინების გაზრდილი დოზებით. ცხოველების იმუნიზაციის გარკვეული ციკლის შემდეგ ხდება ცხოველის მასიური სისხლდენა ან სრული სისხლდენა. სტერილურ ჭურჭელში შეგროვებულ სისხლს შედედების დასაჩქარებლად ჯერ ათავსებენ თერმოსტატში 37°C ტემპერატურაზე 4-6 საათის განმავლობაში, შემდეგ კი მყინვარში ერთი დღის განმავლობაში. მიღებული გამჭვირვალე შრატი ასპირირებენ სტერილურ ჭურჭელში, უმატებენ კონსერვანტებს, ადგენენ ანტისხეულების ტიტრს, ამოწმებენ სტერილობაზე და ასხამენ ამპულებში.

Გამოყენებულია არაადსორბირებულიდა ადსორბირებულიდიაგნოსტიკური შრატები. არაადსორბირებული შრატებს აქვთ ანტისხეულების მაღალი ტიტრი, მაგრამ შეუძლიათ გამოიწვიონ ჯგუფური (ჯვარედინი) რეაქციები.

ადსორბირებული შრატები ხასიათდება მოქმედების მკაცრი სპეციფიკით (ისინი რეაგირებენ მხოლოდ ჰომოლოგიურ ანტიგენთან). შრატი, რომელიც შეიცავს ანტისხეულებს მხოლოდ ერთი კონკრეტული ანტიგენის მიმართ, ეწოდება მონორეცეპტორი.

ისინი ასევე აწარმოებენ შრატებს, რომლებიც ეტიკეტირებულია ფტოროქრომებით, ფერმენტებით, რადიოიზოტოპებით, რაც შესაძლებელს ხდის ანტიგენის კვალის მაღალი სიზუსტით გამოვლენას.

როგორც ანტიგენები (დიაგნოსტიკები) სეროლოგიურ რეაქციებში გამოიყენება ცოცხალი ან მოკლული ბაქტერიების სუსპენზია, მათი დაშლის პროდუქტები, ტოქსინები და ვირუსები. ზოგიერთ შემთხვევაში გამოიყენება ექსტრაქტები ან ქიმიურად იზოლირებული ანტიგენები მიკროორგანიზმებიდან და ცხოველების ქსოვილებიდან.

ყველა იმუნომიკრობიოლოგიური მეთოდი შეიძლება დაიყოს 3 ჯგუფად:

1) საფუძველზე ანტიგენის პირდაპირი ურთიერთქმედება ანტისხეულებთან(აგლუტინაციის, ნალექის, ჰემაგლუტინაციის, იმობილიზაციის ფენომენები და ა.შ.);

2) საფუძველზე შუამავალი ანტიგენ-ანტისხეულის ურთიერთქმედება(არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის, კოაგლუტინაციის, ლატექსის აგლუტინაციის, ნახშირის აგლომერაციის, ბენტონიტის აგლუტინაციის, კომპლემენტის ფიქსაციის რეაქციები და ა.შ.);

3) გამოყენება მარკირებული ანტისხეულები ან ანტიგენები(ფლუორესცენტური ანტისხეულების მეთოდი, ფერმენტული იმუნოანალიზი და რადიოიმუნოანალიზი და სხვა მეთოდები).

აგლუტინაციის რეაქციები

ანტიგენები ნაწილაკების სახით (მიკრობული უჯრედები, ერითროციტები და სხვა კორპუსკულური ანტიგენები) მონაწილეობენ ამ რეაქციებში, რომლებიც ერწყმის ანტისხეულებს და გროვდება.

აგლუტინაციის რეაქციის დასაყენებლად(RA) მოითხოვს სამ კომპონენტს: 1) ანტიგენს (აგლუტინოგენს);

2) ანტისხეული (აგლუტინინი)

3) ელექტროლიტი (იზოტონური ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარი).

მიახლოებითი აგლუტინაციის რეაქცია (RA)

მიახლოებითი, ან ლამელარული RA მოთავსებულია მინის სლაიდზე ოთახის ტემპერატურაზე. ამისათვის შრატის წვეთი 1:10 - 1:20 განზავებით და ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარის საკონტროლო წვეთი პასტერის პიპეტით ცალ-ცალკე წაისვით მინაზე. კოლონიები ან ბაქტერიების ყოველდღიური კულტურა (დიაგნოსტიკის წვეთი) შეჰყავთ ორივე ბაქტერიოლოგიურ მარყუჟში და საფუძვლიანად შერეულია. რეაქციები მხედველობაში მიიღება რამდენიმე წუთში ვიზუალურად, ზოგჯერ გამადიდებელი შუშით (x5). დადებითი RA შრატთან ერთად წვეთით, აღინიშნება დიდი და პატარა ფანტელების გამოჩენა, უარყოფითი RA, შრატი თანაბრად მოღრუბლული რჩება.

გაფართოებული აგლუტინაციის რეაქციაპაციენტში სპეციფიკური ანტისხეულების ტიტრის დასადგენად.

გაფართოებული RA სეროდიაგნოსტიკისთვის მოთავსებულია პაციენტების შრატში. ის ასევე განზავებულია ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარით 1:50 - 1:100-დან 1:800-მდე ან 1:1600-მდე. ვინაიდან შრატის ქვედა ტიტრები შეიძლება შეიცავდეს ნორმალურ აგლუტინინებს, რომლებიც გვხვდება ჯანმრთელ ადამიანებში ან სხვა დიაგნოზის მქონე პაციენტებში (დიაგნოსტიკური ტიტრი ). როგორც ანტიგენი ამ რეაქციაში, გამოიყენება დიაგნოსტიკა - ცნობილი სუსპენზია, როგორც წესი, მოკლული ბაქტერიების.

1 მლ ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარი წინასწარ შეედინება აგლუტინაციის მილებში. პირველს ემატება 1 მლ 1:100 გაზავებული შრატი, შერევის შემდეგ 1 მლ გადადის მეორეში, მეორიდან მესამეში და ა.შ. შედეგად მიღებული შრატების ორჯერ განზავებისას (1:100-დან 1:1600-მდე ან მეტი), ემატება 1-2 წვეთი ბაქტერიების სუსპენზია, რომელიც შეიცავს 3 მილიარდ მიკრობ სხეულს 1 მლ-ზე. მილებს შეანჯღრიეთ და ათავსებენ თერმოსტატში 37°C-ზე 2 საათის განმავლობაში, შემდეგ ინახება ოთახის ტემპერატურაზე ერთი დღის განმავლობაში.

გაფართოებული აგლუტინაციის რეაქციის აღრიცხვა ხორციელდება თითოეული სინჯარის თანმიმდევრული შეფასებით, საკონტროლო მილებიდან დაწყებული, ნაზი შერყევით. საკონტროლო მილებში არ უნდა იყოს აგლუტინაცია. აგლუტინაციის რეაქციის ინტენსივობა აღინიშნება შემდეგი ნიშნებით: ++++ - სრული აგლუტინაცია (აგლუტინაციის ფანტელები აბსოლუტურ გამჭვირვალე სითხეში); +++ - არასრული აგლუტინაცია (ფანტელები ოდნავ ოპალესცენტურ სითხეში); ++ - ნაწილობრივი აგლუტინაცია (ფანტელები აშკარად ჩანს, სითხე ოდნავ მოღრუბლულია); + - სუსტი, საეჭვო აგლუტინაცია - სითხე ძალიან ბუნდოვანია, მასში არსებული ფანტელები ცუდად გამოირჩევა; - - აგლუტინაციის ნაკლებობა (სითხე თანაბრად მღვრიეა).

შრატის ტიტრი აღებულია როგორც მისი ბოლო განზავება, რომელშიც აგლუტინაციის ინტენსივობა შეფასებულია მინიმუმ ორი პლუსით (++)

აგლუტინაციის რეაქცია (ლათ. აგლუტინაცია- შემაკავშირებელი) - კორპუსების (ბაქტერიები, ერითროციტები და ა.შ.) შეერთება ანტისხეულებთან ელექტროლიტების არსებობისას.

აგლუტინაციის რეაქციავლინდება ფიფქების ან ნალექის სახით, რომელიც შედგება კორპუსკულებისგან (მაგალითად, ბაქტერიებისგან), „ერთად შეკრული“ ანტისხეულებით (ნახ. 7.37). აგლუტინაციის რეაქცია გამოიყენება: პაციენტისგან იზოლირებული პათოგენის დასადგენად; პაციენტის სისხლის შრატში ანტისხეულების განსაზღვრა; სისხლის ჯგუფების განსაზღვრა.

ბრინჯი. 7.37 ა, ბ. აგლუტინაციის რეაქციასთანIgM-ანტისხეულები (ა) დაIgG-ანტისხეულები (ბ)

1. პაციენტისგან იზოლირებული პათოგენის განსაზღვრა მიახლოებითი აგლუტინაციის რეაქცია მინაზე (სურ. 7.38). პაციენტისგან იზოლირებული ბაქტერიების სუსპენზია ემატება აგლუტინირებული შრატის წვეთს (განზავება 1:20). იქმნება ფანტელი ნალექი.

ბრინჯი. 7.38.

გაფართოებული აგლუტინაციის რეაქცია პაციენტისგან იზოლირებულ პათოგენთან (ნახ. 7.39). აგლუტინირებული შრატის განზავებას ემატება პაციენტისგან იზოლირებული ბაქტერიების სუსპენზია.

ბრინჯი. 52

2. პაციენტის სისხლის შრატში ანტისხეულების განსაზღვრა
გაფართოებული აგლუტინაციის რეაქცია პაციენტის სისხლის შრატთან (ნახ. 7.39). Diagnosticum ემატება პაციენტის შრატის განზავებას.
- აგლუტინაცია O-diagnosticum-ით (გახურებით მოკლული ბაქტერიები, რომლებიც ინარჩუნებენ 0-ანტიგენს) ხდება წვრილმარცვლოვანი აგლუტინაციის სახით.
- H-diagnosticum-ით აგლუტინაცია (ფორმალინით მოკლული ბაქტერია, რომელიც ინარჩუნებს ფლაგელის H-ანტიგენს) მსხვილმარცვლოვანია და უფრო სწრაფად მიმდინარეობს.
3. აგლუტინაციის ტესტი სისხლის ჯგუფების დასადგენადაგლუტინაციის რეაქცია სისხლის ჯგუფების დასადგენად გამოიყენება ABO სისტემის დასამყარებლად (ცხრილი b) ერითროციტების აგლუტინაციის გზით იმუნური შრატის ანტისხეულებით სისხლის ჯგუფების A (I), B (III) ანტიგენების წინააღმდეგ. კონტროლი არის: შრატი, რომელიც არ შეიცავს ანტისხეულებს, ე.ი. შრატის AB (IV) სისხლის ჯგუფები; ანტიგენები, რომლებიც შეიცავს A (II), B (III) ჯგუფების ერითროციტებს. უარყოფითი კონტროლი არ შეიცავს ანტიგენებს, ანუ გამოიყენება O (I) ჯგუფის ერითროციტები.

ცხრილი 7.6. ABO სისხლის ჯგუფების განსაზღვრა

რეაქციის შედეგები		ჯგუფი
		კუთვნილება
		გამოკვლეული სისხლი
ერითროციტებით	შრატი (პლაზმა)
სტანდარტული	სტანდარტით
შრატი

მიკრობიოლოგიაში

"აგლუტინაციის რეაქცია და მისი ტიპები (RA)"

Გეგმა:

1. შესავალი………………………………………………………………………………………..3

2. RA მინაზე……………………………………………………………………………………….4

3. სინჯარა PA………………………………………………………………………………….5

4. გამოყენებული ლიტერატურა………………………………………………………………………..7

1. შესავალი.

მიკრობული ანტიგენისა და ანტისხეულების ურთიერთქმედება მკაცრად სპეციფიკურია და მიმართულია ცხოველის ორგანიზმში პათოგენისა და მისი ტოქსინების გასანეიტრალებლად. ანტიგენისა და ანტისხეულების ურთიერთქმედებას in vitro გარკვეულ პირობებში თან ახლავს ხილული მოვლენები (აგლუტინაცია, ნალექი, იმუნური ლიზი), რაც საშუალებას იძლევა გამოიყენოს AG-AT რეაქციები, სახელწოდებით სეროლოგიური (ლათინური serum-serum-დან), პრაქტიკული მიზნებისთვის. ბიოქარხნები აწარმოებენ ანტიგენებს და იმუნურ შრატს (ანტისხეულებს) ცნობილი სპეციფიური მიმართულების (დიაგნოსტიკური). სეროლოგიურ რეაქციებში ასეთი შრატების დახმარებით შესაძლებელია უცნობი მიკროორგანიზმის იდენტიფიცირება ან ცნობილი ანტიგენის გამოყენებით ორგანიზმში ანტისხეულების აღმოჩენა, რომლებიც სინთეზირებულია პათოგენის შეყვანის საპასუხოდ და ამით დიაგნოზის გაკეთება (სეროლოგიური დიაგნოზი). . გარდა ამისა, სეროლოგიური რეაქციები შეიძლება გამოყენებულ იქნას ვაქცინაციის ან ინფექციური დაავადების შემდეგ იმუნური პასუხის ინტენსივობის შესაფასებლად.

აგლუტინაციის რეაქციები, როგორიცაა არაპირდაპირი აგლუტინაცია და Coombs, ეფუძნება კორპუსკულური ანტიგენების ინ ვიტრო ურთიერთქმედებას ანტისხეულებთან და შედეგად მიღებული კომპლექსების ნალექის უნარს. კორპუსკულური ანტიგენების სახით გამოიყენება ბაქტერიული უჯრედები ან ხსნადი ანტიგენები, რომლებიც ამოღებულია მიკროორგანიზმებიდან და ადსორბირდება მატარებლების კორპუსებზე: ერითროციტები, ლატექსის ნაწილაკები და ა.შ.

კორპუსკულური ანტიგენების ანტიგენური დეტერმინანტები კონკრეტულად ურთიერთქმედებენ ჰომოლოგიურ ანტისხეულებთან (რეაქციის სპეციფიკური, უხილავი ფაზა), შემდეგ კი ანტიგენ-ანტისხეულის კომპლექსები ქმნიან დიდ, შეუიარაღებელი თვალით ხილულ კონგლომერატებს, რომლებიც აგროვებენ - აგლუტინატს (რეაქციის არასპეციფიკური, ხილული ფაზა). . მიკრობების არაფლაგელურ ფორმებში (ბრუცელა) წარმოიქმნება მარცვლოვანი აგლუტინანტები, ფლაგელებში (ეშერიხია, სალმონელა) - მსხვილ ბამბა, რომლებიც სინჯის მილის ძირში დევს შებრუნებული ქოლგის სახით და ადვილად იშლება შერყევისას. . ანტიგენები და ანტისხეულები ურთიერთქმედებენ მხოლოდ ელექტროლიტის თანდასწრებით (0,8% ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარში). რეაქციის მიმდინარეობაზე გავლენას ახდენს ელექტროლიტში მარილის კონცენტრაცია, სუსპენზიაში არსებული მიკრობული უჯრედების რაოდენობა, შრატში კონცენტრაცია, pH, ტემპერატურა და სხვა ფაქტორები.

აგლუტინაციის რეაქცია (რა).

განასხვავებენ სპეციფიკურ აგლუტინაციას, გროვა ემყარება ანტიგენის ურთიერთქმედებას თანჰომოლოგიური ანტისხეული , ცხოველის სხეულში შემავალი კრომმა შემოიღო ეს ანტიგენი (იმუნოაგლუტინაცია); არასპეციფიკური (ქიმიური), რომელიც გამოწვეულია გარემოს pH-ის ცვლილებებით, ელექტროლიტების კონცენტრაციით; სპონტანური, ტო-რუუ შეინიშნება, როდესაც ბაქტერიები (რომლებიც R- ფორმაშია) შეჩერებულია ფიზიოლოგიურ ხსნარში და გაცხელებისას, რაც დაკავშირებულია ბაქტერიული უჯრედის კოლოიდური მდგომარეობის ცვლილებასთან. ანტიგენი , RA-ში ჩართულს ეწოდება აგლუტინოგენი, ანტისხეულს - აგლუტინინი, მიღებულ ნალექს - აგლუტინატი. აგლუტინატის წარმოქმნისას მნიშვნელოვანია ანტიგენისა და ანტისხეულების რაოდენობრივი თანაფარდობა (ოპტიმალური ფენომენი). ანტისხეულების სიჭარბით ან დეფიციტით, ა.

აგლუტინაციის რეაქცია (RA) არის ერთ-ერთი პირველი იმუნოლოგიური რეაქცია, რომელიც გამოიყენება მიკრობიოლოგიურ პრაქტიკაში. პირველად (1895) ფ. ვიდალმა გამოიყენა RA ტიფური ცხელების დიაგნოზისთვის. მოგვიანებით (1897) ა. რაიტმა იგივე რეაქცია გამოიყენა ადამიანებში ბრუცელოზის დიაგნოსტირებისთვის. RA-მ ასევე იპოვა გამოყენება ქათმების პულოროზის, ლეპტოსპიროზის, კვერნაების ინფექციური აბორტის დიაგნოსტიკაში, აგრეთვე მიკრობების უცნობი კულტურების ტიპირებაში ცნობილი აგლუტინირებული შრატის მიხედვით. RA არის ძალიან მგრძნობიარე; მას შეუძლია აღმოაჩინოს 0,01 მკგ ანტისხეულების პროტეინის აზოტი 1 მლ-ში.

შემუშავებულია აგლუტინაციის რეაქციის რამდენიმე ვარიანტი, რომლებიც განსხვავდება მეთოდოლოგიური განხორციელებით და კვლევის მიზნებით.

2. რა მინაზე.

RA-ს ამ ვარიანტში შესაძლებელია როგორც შრატის, ასევე ანტიგენის ტესტირება, მაგრამ ეს ვარიანტი ყველაზე ხშირად გამოიყენება მიკროორგანიზმების იდენტიფიკაციისთვის.

1. მიკროორგანიზმის იდენტიფიცირებისთვის (მ/ო), ცალ-ცალკე გამოიყენება ცალ-ცალკე ცხიმოვანი შუშის სლაიდზე ცნობილი აგლუტინირებადი შრატის, როგორიცაა სალმონელიოზი, და მარილიანი ხსნარის წვეთი (საკონტროლო). შემდეგ, ბაქტერიოლოგიური მარყუჟის გამოყენებით, შესწავლილი კულტურის ბაქტერიული მასა იღება კოლონიიდან პეტრის ჭურჭელში ან დახრილი MPA-ს ზედაპირიდან სინჯარაში და ცალ-ცალკე ჩერდება იმუნურ შრატში და ფიზიოლოგიურ ხსნარში ერთგვაროვანი სუსპენზიის მიღებამდე. . შედეგი მხედველობაში მიიღება 2 ... 4 წუთის შემდეგ.

შედეგების აღრიცხვა: არ უნდა იყოს ცვლილება საკონტროლო ნიმუშში. ბაქტერიული კულტურის სპეციფიკური შესაბამისობით იმუნურ შრატთან, ჩნდება აგლუტინატის ფანტელები (დადებითი შედეგი), აგლუტინაციის ფენომენის არარსებობის შემთხვევაში, დასკვნა ხდება, რომ შესწავლილი ბაქტერიული კულტურა არ შეესაბამება იმუნურ შრატს.

2. შესწავლილ სისხლის შრატში ანტისხეულების გამოვლენა განხილული იქნება ბრუცელოზის სეროდიაგნოსტიკის დროს გამოყენებული ვარდ-ბენგალის ტესტის მაგალითის გამოყენებით. 0.3 მლ შესწავლილი ცხოველის სისხლის შრატი და 0.03 მლ ბრუცელას ანტიგენი (ბრუცელას უჯრედები შეღებილი ვარდისფერი ბენგალით) გამოიყენება შუშის სლაიდზე. კომპონენტები საფუძვლიანად ურევენ ჭიქის შერყევით და შედეგი მხედველობაში მიიღება 4 წუთის შემდეგ.

აღრიცხვის შედეგები: დადებითი რეაქციით ჩნდება აგლუტინატის ვარდისფერი ფანტელები. ამ ტიპის სეროლოგიური რეაქცია კლასიფიცირდება როგორც ხარისხობრივი, რადგან ის შეიძლება გამოყენებულ იქნას ცხოველის სისხლის შრატში პათოგენის ანტისხეულების გამოსავლენად, მაგრამ მათი რაოდენობრივი შინაარსის შეფასება შეუძლებელია.

აგლუტინაციის რეაქცია.

აგლუტინაციის რეაქცია არის მიკრობული ან სხვა უჯრედების (ერითროციტების) ადჰეზია და დალექვა ანტისხეულების მოქმედებით ელექტროლიტის თანდასწრებით. რეაქციის ხილული ეფექტი (აგლუტინაციის ფენომენი) არის ნალექის წარმოქმნა, რომელსაც აგლუტინატი ეწოდება.

ეს რეაქცია გამოიყენება სეროდიაგნოსტიკადა სეროიდენტიფიკაცია. RA გამოიყენება სეროდიაგნოსტიკისთვის (პაციენტების სისხლის შრატში ანტისხეულების გამოვლენა) ტიფი და პარატიფოიდური(ვიდალის რეაქცია), ბრუცელოზი(რაიტის რეაქცია), ტულარემია და ლეპტოსპიროზი. RA გამოიყენება სეროიდენტიფიკაციისთვის (პაციენტისგან იზოლირებული პათოგენის ტიპის დასადგენად) როდესაც ნაწლავური ინფექციები, ყივანახველა, ქოლერადა ა.შ.

კომპონენტებირეაქციები:

1. ა ანტიგენი (აგლუტინოგენი) -ეს არის მთლიანი (არ განადგურებული) მიკრობული ან სხვა უჯრედები ( კორპუსკულარული, უხსნადი ანტიგენი). აგლუტინოგენები- ეს შეჩერებაა ცოცხალიან მოკლესმიკრობული უჯრედები ან ნებისმიერი სხვა უჯრედი. ანტიგენები შეიძლება იყოს უცნობი ან ცნობილი. უცნობი აგლუტინოგენი არის მიკრობული კულტურა, რომელიც იზოლირებულია პაციენტის სხეულიდან, რომელიც უნდა განისაზღვროს. ცნობილი ანტიგენი. დიაგნოსტიკა- სადიაგნოსტიკო პრეპარატი - მიცვალებულთა შეჩერებამიკრობები ცნობილი სახეობებიფიზიოლოგიურ ხსნარში. ეს შეჩერება ბუნდოვანი (გაუმჭვირვალე)), რადგან მიკრობული უჯრედები არ იშლება, მაგრამ ხელუხლებელი რჩება. ცნობილი აგლუტინოგენი გამოყენებული იქნება პაციენტის შრატში უცნობი ანტისხეულების გამოსავლენად.

2. ანტისხეულები (აგლუტინინი)- აღმოჩენილია სისხლის შრატში. ანტისხეულები ასევე შეიძლება იყოს უცნობი ან ცნობილი. უცნობი ანტისხეულები, რომლებიც უნდა განისაზღვროს, გვხვდება სისხლის შრატში ავადმყოფი ადამიანი. ცნობილი ანტისხეულები გვხვდება იმუნური დიაგნოსტიკური შრატები, რომლებიც ე.წ აგლუტინირებადი შრატები. ისინი გამოიყენება სეროიდენტიფიკაციისთვის, ე.ი. უცნობი ანტიგენის დასადგენად - მიკრობული კულტურის სახეობა.

3. ელექტროლიტი- 0,9% ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარი.

RA დაყენების გზები.

1. სავარაუდო (ფირფიტა) RA- შესრულებულია მინაზე. შუშის სლაიდზე წაისვით 2 წვეთი შრატი და 1 წვეთი იზოტონური ხსნარი. მიკრობული კულტურა შეჰყავთ შრატის ერთ-ერთ წვეთში და იზოტონური ხსნარის წვეთში მარყუჟით და შერეულია. იზოტონური ხსნარის წვეთი მიკრობებით – ანტიგენის კონტროლი, წვეთი მიკრობებისგან თავისუფალი შრატები – ანტისხეულების კონტროლი, წვეთი შრატი მიკრობებით – გამოცდილება.თუ შრატი შეიცავს მასში შერეული მიკრობული ანტიგენების შესაბამის ანტისხეულებს, მაშინ ანტისხეულები და ანტიგენები სპეციალურად დაუკავშირდებიან ერთმანეთს და 1-3 წუთის შემდეგ ექსპერიმენტულ წვეთში გამოჩნდება აგლუტინატის ფანტელები. ანტიგენის კონტროლი უნდა იყოს მოღრუბლული და ანტისხეულების კონტროლი მკაფიო. რეაქციის შედეგების აღრიცხვა ხორციელდება აგლუტინატის ფანტელების გამოჩენით . თუ ფანტელები ამოვარდება, რეაქცია დადებითია, ე.ი. ანტიგენი შეესაბამება ანტისხეულს და ანტიგენი შეიძლება გამოყენებულ იქნას ანტისხეულების იდენტიფიცირებისთვის, ან პირიქით. თუ სიმღვრივე რჩება, რეაქცია უარყოფითია.

2. გაფართოებული აგლუტინაციის რეაქცია -ტარდება საცდელ მილებში. ჯერ ავადმყოფის სისხლის შრატის 2-ჯერადი განზავება ამზადებენ 1:50-დან 1:1600-მდე. 1 მლ ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარი შეედინება 6 სინჯარაში. პირველ სინჯარაში ემატება პაციენტის სისხლის შრატის 1 მლ 1:50 განზავებით, ურევენ და მიიღება განზავება 1:100, შემდეგ 1 მლ განზავება 1:100 გადადის მეორე სინჯარაში. და მიიღება განზავება 1:200 და ა.შ. დარჩა ორი სინჯი ანტიგენისა და შრატის გასაკონტროლებლად. შრატის კონტროლს ემატება მხოლოდ 1:50 განზავებული შრატი, ანტიგენის კონტროლს ემატება მხოლოდ ანტიგენი. ყველა დანარჩენ მილს ემატება 0,1 მლ ანტიგენი - diagnosticum (O- ან H-) და ყველა მილი მოთავსებულია თერმოსტატში 37°C-ზე 18-20 საათის განმავლობაში. რეაქციის შედეგების აღრიცხვა ტარდება ბუნების, წარმოქმნილი ნალექის (აგლუტინატის) რაოდენობის და სიმღვრივის ხარისხის მიხედვით. აღრიცხვა ტარდება მხოლოდ შემდეგი შედეგებით კონტროლებში: შრატის კონტროლი - გამჭვირვალე, ანტიგენის კონტროლი - მოღრუბლული. O-ანტისხეულები იძლევა წვრილმარცვლოვან ნალექს. H-ანტისხეულები - მსხვილმარცვლოვანი. ბოლო სინჯარის მიხედვით, რომელშიც ჯერ კიდევ ჩანს აგლუტინაციის რეაქცია, დაყენებულია დიაგნოსტიკური ტიტრი.

დაავადებების სეროდიაგნოსტიკისას მნიშვნელოვანია არა მხოლოდ კონკრეტული პათოგენის სპეციფიკური ანტისხეულების აღმოჩენა, არამედ მათი რაოდენობის იდენტიფიცირება, ე.ი. დაადგინეთ ანტისხეულების ასეთი ტიტრი, როდესაც შეგვიძლია ვისაუბროთ ამ პათოგენით გამოწვეული დაავადების არსებობაზე. ამ ტიტრს დიაგნოსტიკური ტიტრი ეწოდება. მაგალითად, მუცლის ტიფის დიაგნოსტიკისთვის აუცილებელია ანტისხეულების ტიტრის გამოვლენა 1:400, მაგრამ არანაკლებ. კიდევ უფრო ზუსტი შედეგები მიიღება დაწყვილებულ შრატებში ანტისხეულების გაზრდის გამოვლენით.პაციენტის შრატი იღება დაავადების დაწყებისას და 3-5 ან მეტი დღის შემდეგ. თუ ანტისხეულების ტიტრი გაიზარდა მინიმუმ 4-ჯერ, მაშინ შეიძლება ვისაუბროთ მიმდინარე დაავადებაზე.