Zasady pobierania, dostarczania, odbierania, przetwarzania i rejestracji materiału biologicznego. Ogólne kliniczne badania laboratoryjne – dokument. Wymagania dotyczące organizacji pomieszczeń dla laboratorium PCR Technika pobierania materiału do badania PCR

obecny

MU 4.2.2039-05

INSTRUKCJE METODOLOGICZNE

4.2. METODY KONTROLI. CZYNNIKI BIOLOGICZNE I MIKROBIOLOGICZNE

Technika zbierania i transportu biomateriałów do mikrobiologii
laboratoria

Data wprowadzenia 2006-07-01

2. ZALECANY DO ZATWIERDZENIA przez Komisję Państwowego Racjonowania Sanitarnego i Higienicznego w ramach Federalnej Służby Nadzoru Ochrony Praw Konsumentów i Opieki Społecznej w dniu 6 października 2005 r. (Protokół nr 3).

3. ZATWIERDZONE I WPROWADZONE przez Szefa Federalnej Służby Nadzoru Ochrony Praw Konsumentów i Opieki Społecznej, Głównego Państwowego Lekarza Sanitarnego Federacji Rosyjskiej G. G. Onishchenko w dniu 23 grudnia 2005 r.

5. WPROWADZONY PO RAZ PIERWSZY.

1 obszar zastosowania

1 obszar zastosowania

1.1. Wytyczne określają zasady pobierania i transportu materiałów biologicznych do laboratoriów mikrobiologicznych w celu poprawy jakości wyników badań laboratoryjnych oraz organizowania działań przeciwepidemicznych i profilaktycznych, a także zapobiegania zakażeniom szpitalnym wśród personelu medycznego i pacjentów.

1.2. Wytyczne są przeznaczone do użytku przez organy i organizacje Federalnej Służby Nadzoru Ochrony Praw Konsumentów i Opieki Społecznej, a także mogą być wykorzystywane przez organy i organizacje służby zdrowia.

2. Postanowienia ogólne

2.1. Uzyskanie wiarygodnych danych dotyczących identyfikacji źródeł zakażenia jest niezbędne do terminowej i skutecznej organizacji działań przeciwepidemicznych i zapobiegawczych, oceniających poziom podatności populacji podczas nadzoru epidemiologicznego.

2.2. Opracowana technika pobierania i transportu materiałów biologicznych do laboratoriów mikrobiologicznych pozwoli na obniżenie poziomu błędu przedanalitycznego oraz poprawę jakości pracy laboratoriów w zakresie obiektywizacji wyników.

2.4. Wytyczne mogą być stosowane podczas prowadzenia nadzoru epidemiologicznego nad opornością na środki przeciwdrobnoustrojowe patogenów wyizolowanych i zidentyfikowanych w laboratorium, optymalizacji stosowania leków przeciwdrobnoustrojowych oraz środków w zakresie zapobiegania, kontroli i ograniczania oporności na poziomie lokalnym, regionalnym i krajowym.

3. Ogólne wymagania dotyczące pobierania próbek materiału biologicznego do badań mikrobiologicznych

3.1. Aby zapobiec zakażeniu personelu medycznego i pacjentów podczas pobierania próbek biomateriałów i ich dostarczania do laboratorium, konieczne jest:

nie zanieczyszczać zewnętrznej powierzchni naczyń podczas pobierania i dostarczania próbek;

nie zanieczyszczać dokumentów towarzyszących (skierowań);

zminimalizować bezpośredni kontakt próbki biomateriału z rękami pracownika medycznego, który pobiera ją i dostarcza do laboratorium;

używać sterylnych jednorazowych lub należycie zatwierdzonych pojemników (pojemników) do pobierania, przechowywania i dostarczania próbek do tych celów;

transport próbek na nośnikach lub stosach z oddzielnymi gniazdami;

przestrzegać warunków aseptycznych, aby zapobiec zakażeniu pacjenta w trakcie wykonywania środków inwazyjnych;

pobierać próbki do sterylnych naczyń jednorazowych lub szklanych (niezanieczyszczonych biomateriałem, nieuszkodzonych przez pęknięcia, wyszczerbione krawędzie i inne defekty)

3.2. Próbki biomateriału należy pobierać w następujący sposób:

przed rozpoczęciem antybiotykoterapii, przy braku takiej możliwości - bezpośrednio przed ponownym wprowadzeniem (odbiorem) leków;

w ilości (masa, objętość) niezbędnej do wykonania analizy, ponieważ niewystarczająca ilość biomateriału do badań prowadzi do fałszywych wyników;

przy minimalnym zanieczyszczeniu materiału normalną mikroflorą, tk. jego obecność prowadzi do błędnej interpretacji uzyskanych wyników, na przykład w badaniu plwociny, próbek z nosa, gardła (gardła), narządów płciowych itp.

3.3. Podczas pobierania próbki upewnij się, że podczas otwierania pojemnika z biomateriałem w laboratorium nie powstaje aerozol: próbki krwi i innych płynów ustrojowych są ostrożnie przenoszone ze strzykawki bez spieniania do suchego i / lub wypełnionego pożywką ( naczynia z antykoagulantem).

3.4. W kierunku badania wskaż: nazwisko, imię, patronimikę pacjenta; rok urodzenia; oddział, w którym się znajduje; numer historii medycznej (karta ambulatoryjna); diagnoza; materiały przesłane do badań i zadań badawczych; data i godzina pobrania materiału (godziny); leki przeciwbakteryjne (odpornościowe), jeśli próbka jest podawana na tle antybiotyku i / lub immunoterapii; nazwisko, imię i nazwisko lekarza prowadzącego (konsultanta), który wysyła próbkę do badania. Przy przesyłaniu biomateriałów uzyskanych podczas autopsji wskazany jest również oddział, w którym pacjent zmarł.

3.5. Przed pobraniem próbki, zwłaszcza przy zastosowaniu metod inwazyjnych, brane jest pod uwagę prawdopodobieństwo ryzyka i korzyści dla pacjenta, a także znaczenie tego konkretnego rodzaju biomateriału dla celów obiektywizacji diagnozy klinicznej oraz oceny prowadzonych lub planowanych działań terapeutycznych na konto.

4. Ogólne wymagania dotyczące dostarczania próbek biomateriałów do laboratorium mikrobiologicznego

4.1. Wszystkie pobrane próbki są przesyłane do laboratorium mikrobiologicznego natychmiast po otrzymaniu, z wyjątkiem przypadków, gdy używane są pojemniki z mediami transportowymi dopuszczone do użytku w tych celach w Federacji Rosyjskiej zgodnie z ustaloną procedurą.

Jest to konieczne do:

utrzymanie żywotności patogenów i możliwości izolowania drobnoustrojów wymagających specjalnych warunków hodowli (Haemophylus i inne);

zapobiegają przerostowi szybko rosnących i aktywnych mikroorganizmów;

utrzymanie proporcji początkowych stężeń izolatów w obecności asocjacji drobnoustrojów w próbce;

skrócenie czasu kontaktu próbki z niektórymi miejscowymi środkami antyseptycznymi, które mogą mieć działanie przeciwbakteryjne;

obiektywizacja diagnozy klinicznej choroby infekcyjno-zapalnej i ocena wyników terapii.

4.2. Dopuszcza się stosowanie metod alternatywnych w celu wydłużenia czasu dostarczenia biomateriału do laboratorium.

Próbki należy przechowywać w lodówce w temperaturze 2–8°C, z wyjątkiem niżej wymienionych.

4.2.1. Gdy próbka jest przechowywana w specjalistycznym pojemniku transportowym (system transportowy) zatwierdzonym do użytku zgodnie z ustaloną procedurą, który jest sterylną jednorazową probówką z agarem lub płynnym podłożem transportowym oraz sondą wacika wbudowaną w korek i sterylnie zapakowaną rura. Próbki przechowuje się w takich pojemnikach w temperaturze pokojowej (18-20 °C). Podłoża transportowe, specjalne gęste z węglem aktywnym i bez, pozwalają na utrzymanie żywotności mikroorganizmów wymagających specjalnych warunków hodowli przez 48-72 godziny.

W przypadku próbek dla bakterii beztlenowych i flory kałowej stosuje się specjalne pojemniki z pożywką transportową, probówki z pożywkami do izolacji Campylobacter i Helicobacter, zatwierdzone do stosowania w zalecany sposób. Takie środowiska tworzą atmosferę anabiotyczną dla drobnoustrojów, co przyczynia się do zmniejszenia ich metabolizmu, zahamowania wzrostu oraz zapobiegania ich wysuszaniu i gromadzeniu się produktów odpadowych.

Każda próbka pobrana do płynnego podłoża jest dokładnie mieszana z podłożem.

4.2.2. Gdy krew jest hodowana w bulionie, to po otrzymaniu próbkę przechowuje się w termostacie w temperaturze 35-37°C.

Jeżeli próbki są pobierane w specjalnych pojemnikach do późniejszego badania z podłożem dwufazowym, należy je przechowywać w temperaturze pokojowej (18-20 °C).

4.2.3. W przypadku występowania drobnoustrojów zależnych od temperatury (Neisseria sp.) próbki pozostawia się w temperaturze pokojowej (18-20 °C).

4.3. Do transportu próbek zbadanych na obecność tlenowców i fakultatywnych beztlenowców należy użyć:

jednorazowe sterylne suche probówki z wbudowaną sondą gazikową (bulwy) lub pojemniki ze środkiem transportowym zatwierdzonym do użytku do tych celów w Federacji Rosyjskiej w zalecany sposób; dopuszcza się stosowanie sterylnych probówek szklanych zamkniętych gazoprzepuszczalnym korkiem z wbudowaną sondą gazikową przygotowaną w laboratorium;

jednorazowe sterylne pojemniki z nakrętką (dopuszcza się szkło z gazoprzepuszczalnym korkiem) - do pobierania próbek moczu, plwociny, kału, płukania oskrzelowo-pęcherzykowego, biopsji (kawałków tkanki);

sterylne jednorazowe z nakrętką lub probówkami szklanymi - do zbierania sterylnych płynów, płukania oskrzelowo-pęcherzykowego, oddzielone od drenów lub zeskrobin;

sterylne szalki Petriego - do pobierania próbek włosów lub do transportu zeskrobków z oznaczeniami na dnie szalki;

specjalne sterylne sondy wymazowe z nosogardzieli i układu moczowo-płciowego z aluminiową osią (średnica osi - 0,9 mm) i wacikiem bawełnianym lub wiskozowym na końcu (średnica tamponu - 2,5 mm) zamocowane w korku zamykającym sterylną szklaną rurkę jednorazowego użytku - dla próbek od nosogardła dla B. pertusis i cewki moczowej u mężczyzn.

4.4. Do transportu próbek badanych na obecność beztlenowców stosuje się pojemniki ze specjalnymi mediami transportowymi oraz probówki z pożywką tioglikolową; probówki z pożywką do izolacji Campylobacter i Helicobacter, zatwierdzone do użytku w tym celu w Federacji Rosyjskiej w zalecany sposób. Próbka pobrana w płynnej pożywce jest z nią dokładnie wymieszana. Zalecane są następujące metody pozyskiwania próbek:

wypływ z drenów służących do czynnej aspiracji ubytków jest odsysany sterylną strzykawką z szczelnym tłokiem w objętości 2-4 ml; na napełnioną strzykawkę nakłada się sterylną igłę, zamyka sterylnym wacikiem, ze strzykawki usuwa się nadmiar powietrza; wacik jest wrzucany do roztworu dezynfekującego; koniec igły jest wstrzykiwany do sterylnego gumowego korka iw tej postaci strzykawka z materiałem jest dostarczana do laboratorium;

zawartość ognisk infekcji i ubytków, uzyskaną przez ich nakłucie, pobiera się w objętości 2-4 ml za pomocą strzykawek 2, 5, 10 ml z ciasnym tłokiem; nadmiar powietrza usuwa się ze strzykawki zakrywając igłę sterylnym wacikiem, który następnie wrzuca się do roztworu dezynfekującego; igłę dezynfekujemy poprzez przetarcie wacikiem zwilżonym 70% alkoholem etylowym; w celu uszczelnienia koniec igły jest wstrzykiwany do sterylnego gumowego korka iw tej postaci strzykawka z materiałem jest dostarczana do laboratorium.

Po zebraniu dużej objętości materiału (3 ml lub więcej) bakterie beztlenowe mogą zachować żywotność przez 24 godziny w temperaturze pokojowej (18–20 °C).

Jeśli wypływ wynosi tylko kilka kropel, jest on przenoszony ze strzykawki do małego pojemnika lub do probówki z medium transportowym zaraz po otrzymaniu (pojemnik z medium transportowym odbierany jest w laboratorium dzień wcześniej).

Fragmenty tkanek (materiał biopsyjny) w przypadku podejrzenia infekcji beztlenowej pobierane są do sterylnych jednorazowych pojemników z nakrętką (dozwolone - w szklanym naczyniu ze szlifowanym wieczkiem) i natychmiast dostarczane do laboratorium.

4.5. Do transportu próbek zbadanych na obecność wirusów stosuje się specjalne pojemniki z płynnym podłożem do konserwacji wirusów.

5. Próbki różnych rodzajów biomateriałów i środowiska otaczającego pacjenta

Tabela 1

Szkło używane do dostarczania próbek do laboratorium

Źródło i rodzaj materiału klinicznego	Produkty używane do dostarczania próbek
	Specjalne pojemniki transportowe z pożywką, z neutralizatorami antybiotykowymi i odczynnikami niszczącymi komórki krwi lub bez nich, dopuszczone do użytku w tym celu w Federacji Rosyjskiej w przepisowy sposób; dwufazowe medium w fiolkach
ośrodkowy układ nerwowy
Trunek	Sterylne probówki jednorazowe z zakrętką; sterylne szklane probówki z korkiem z celulozy lub gazy bawełnianej
Materiał na ropnie mózgu i materiał biopsyjny na procesy zapalne w ośrodkowym układzie nerwowym	Strzykawka z igłą włożona do sterylnego gumowego korka; probówka z podłożem tioglikolowym, zamknięta sterylnym gumowym korkiem; pojemniki transportowe z pożywką do przechowywania beztlenowców
dolne drogi oddechowe
Materiał biopsyjny płuc i tchawicy; plwocina naturalnie kaszląca i indukowana; skrobanie z oskrzeli	Sterylny pojemnik jednorazowy z zakrętką (do zbierania plwociny); sterylny szklany pojemnik przygotowany laboratoryjnie
Aspirat tchawicy, płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe, popłuczyny z oskrzeli	Sterylny jednorazowy pojemnik do pobierania plwociny z zakrętką; szczelnie zamknięta sterylna szklana fiolka
Zaaspirować przez tchawicę i płuca	Specjalne pojemniki transportowe z pożywką do beztlenowców; strzykawka z igłą wsuniętą w sterylny gumowy korek; pojemnik z pożywką tioglikolową; sterylny plastikowy pojemnik jednorazowego użytku z zakrętką; szczelnie zamknięta fiolka
górne drogi oddechowe
Wymazy z nosa, gardła, nosogardzieli, ucha zewnętrznego	Sterylna sonda jednorazowego wymazu osadzona w sterylnej suchej probówce (probówce) lub pojemniku transportowym z odpowiednią pożywką; statek transportowy na wirusy; sterylne szkło zmontowane w laboratorium
Płyn do płukania nosa, aspirat z przełyku	Sterylny pojemnik jednorazowy z zakrętką; statek transportowy na wirusy
Płyn z tympanocentezy, aspiracja zatok z aspiracji igłowej	Strzykawka z igłą zdezynfekowana po manipulacji wacikiem zwilżonym 70% alkoholem etylowym i umieszczona w sterylnym gumowym korku; istnieje możliwość przeniesienia materiału ze strzykawki do sterylnych jednorazowych lub szklanych probówek lub specjalnego naczynia z pożywką do transportu beztlenowców
Tkanka uzyskana podczas operacji nosa, gardła, ucha	Sterylny pojemnik jednorazowy z zakrętką; probówka z tioglikolem lub innym medium transportowym, szczelnie zamknięta sterylnym gumowym korkiem; szczelnie zamknięta sterylna jednorazowa fiolka plastikowa lub szklana
Zadrapania ze spojówki kącika oka	Rozmazy na sterylnych, beztłuszczowych preparatach szklanych; materiał, który zostanie zabrany do specjalnego pojemnika transportowego z pożywką lub zaszczepiony w pożywce
płyn wewnątrzgałkowy	Rozmazy na sterylnych, beztłuszczowych preparatach szklanych; materiał przyjmowany do specjalnego pojemnika transportowego z pożywką do beztlenowców lub strzykawki z igłą uprzednio zdezynfekowaną 70% etanolem, wklejoną w sterylny gumowy korek
Wyładowanie pobierane sterylnym szklanym pręcikiem lub sterylnym wacikiem z błony śluzowej dolnego fałdu przejściowego, z krawędzi powiek, z owrzodzeniem - z rogówki (po znieczuleniu), z kątowym zapaleniem spojówek - z rogów powieki	Sterylna jednorazowa lub szklana probówka z bulionem cukrowym, w której osadzona jest sonda do wymazu, lub sterylny szklany pręcik używany do pobrania próbki; specjalny pojemnik transportowy z pożywką na wirusy
Sekret z worka łzowego	Jednorazowa sterylna sonda do wymazówki zamontowana w sterylnej suchej probówce (probówce) lub w szklanej probówce
układ moczowo-płciowy
Średnia porcja swobodnie płynącego moczu; z kanału krętego używanego do stworzenia sztucznego pęcherza; cewnik u pacjentów intensywnej terapii. Wypłukiwanie z pęcherza. Próbka pobrana podczas obustronnego cewnikowania cewki moczowej	Sterylny jednorazowy pojemnik na mocz z zakrętką lub sterylna jednorazowa rurka z zakrętką; lub specjalną jednorazową rurkę do zbierania moczu. Używając sterylnej probówki szklanej z korkiem z celulozy lub gazy bawełnianej należy uważać, aby nie zamoczyć korka materiałem (objętość próbki 10-20 ml)
Próbka uzyskana podczas aspiracji nadłonowej	Sterylna strzykawka bez igły, zamknięta sterylnym gumowym korkiem; sterylna strzykawka z igłą uprzednio zdezynfekowaną 70% alkoholem etylowym i zatopioną w gumowym korku
Materiał z żeńskich narządów płciowych
Płyny: owodniowe, jajowody, Bartholina	Specjalny kontener transportowy z medium do beztlenowców; strzykawka bez igły, zamknięta sterylnym gumowym korkiem; strzykawka z igłą nasączoną 70% alkoholem i umieszczona w sterylnym gumowym korku (objętość próbki 1-2 ml)
Próbki z kanału szyjki macicy, cewki moczowej, pochwy	Jednorazowa sterylna sonda do wymazówki osadzona w sterylnej suchej probówce (bulwie) lub pojemniku wysyłkowym ze specjalną pożywką; sonda z wymazówką osadzona w korku z celulozy lub gazy bawełnianej sterylnej szklanej probówki. Szkiełko mikroskopowe z przygotowaną wymazówką do badania infekcji bakteryjnych przenoszonych drogą płciową i wirusów. Tuba z podłożem transportowym z węglem aktywowanym do przechowywania gonokoków przez 48 godzin lub dłużej
Próbki materiału z endometrium	Sterylny pojemnik jednorazowy z nakrętką lub probówką lub pojemnik transportowy z medium beztlenowym; sterylne wyroby szklane
Materiał zewnętrznych narządów płciowych	Sterylna strzykawka bez igły, zamknięta sterylnym gumowym korkiem; szkiełko z rozmazem pokryte szkiełkiem nakrywkowym w celu określenia T. pallidum; sonda na wymazówkę zamontowana w sterylnej jednorazowej (tubek) lub szklanej probówce; specjalna tuba transportowa z aktywowanym węglem drzewnym do przechowywania gonokoków i pojemników transportowych na wirusy i chlamydie; wymazy na szkiełkach w celu wykrycia innych infekcji przenoszonych drogą płciową
Materiał z męskich narządów rozrodczych
wymazy z cewki moczowej	Sonda-tampon na aluminiowej osi (cewkowa sonda-tampon), osadzona w sterylnych jednorazowych (tubuszkach) lub szklanych probówkach; specjalna rurka transportowa z pożywką z węgla aktywowanego do konserwacji gonokoków i naczyń transportowych dla wirusów i chlamydii; wymazy na szkiełkach w celu wykrycia innych infekcji przenoszonych drogą płciową
wytrysk, sperma	Sterylny pojemnik jednorazowy z zakrętką; sterylna tuba lub tubka jednorazowa lub szklana
Materiał najądrza w zapaleniu najądrza	Specjalny pojemnik transportowy z pożywką dla beztlenowców lub pojemnik z pożywką tioglikolową; sterylny pojemnik jednorazowy z nakrętką lub sterylną szklaną rurką z korkiem z celulozy lub gazy bawełnianej
Uszkodzenie penisa	Strzykawka bez igły, zamknięta sterylnym gumowym korkiem; szkiełko z rozmazem na T. pallidum, pokryte szkiełkiem nakrywkowym; sonda na wymazówkę zamontowana w sterylnej jednorazowej (tubek) lub szklanej probówce; kontenery transportowe na wirusy i chlamydie; wymazy do wykrywania innych czynników infekcji przenoszonych drogą płciową
Materiał na podejrzenie rzeżączki
Wymazy z odbytu, kanału szyjki macicy, cewki moczowej, pochwy	Sonda na wymazówkę zamontowana w sterylnej jednorazowej (rurki) lub szklanej probówce; specjalna tuba transportowa z aktywowanym węglem drzewnym do przechowywania gonokoków przez 48 godzin lub dłużej
Przewód pokarmowy
Jama ustna	Sonda na wymazówkę zamontowana w sterylnej jednorazowej (rurki) lub szklanej probówce; sterylny jednorazowy lub szklany pojemnik do pobierania popłuczyn z jamy ustnej
Płukanie żołądka lub płyn do płukania; aspirat dwunastnicy; próbka uzyskana podczas sigmoidoskopii; materiał z biopsji odbytnicy	Sterylny pojemnik jednorazowy z zakrętką; specjalny sterylny pojemnik do zbierania plwociny; sterylny szklany pojemnik; aspirat - w sterylnej strzykawce z igłą uprzednio zdezynfekowaną i wbitą w sterylny gumowy korek
Wymaz z odbytu	Jednorazowa sterylna sonda do wymazówki osadzona w sterylnej suchej probówce (bulwa); lub sterylną probówkę ze specjalnym medium transportowym; sonda wacikowa wykonana z materiału nierdzewnego, osadzona w korku z celulozy lub gazy bawełnianej sterylnej szklanej rurki
Kał na obecność infekcji jelitowych („disgroup”), Helicobacter, Campylobacter	Sterylna probówka z wacikiem w soli fizjologicznej z gliceryną; pojemnik transportowy z pożywką dla beztlenowców w próbkach kału, ze specjalnymi pożywkami z węglem aktywnym i bez do izolacji Campylobacter sp. i Helicobacter sp.; sonda do wymazu w suchej sterylnej jednorazowej probówce (tubówce); sterylna szklana rurka osadzona z sondą na wymazówce na metalowym drucie z tytanu, stali, aluminium. Nie wolno używać tamponu z drewnianą osią
Kał na obecność dysbakteriozy zgodnie z ogólnym i gatunkowym składem drobnoustrojów („dla flory”)	Specjalny pojemnik transportowy z pożywką dla beztlenowców w próbkach kałowych, ze specjalnymi pożywkami z węglem aktywnym lub bez, do izolacji Campylobacter sp. oraz Helicobacter sp., dopuszczone do użytku do tych celów w Federacji Rosyjskiej w określony sposób; sonda wacikowa w fiolce z solą fizjologiczną z gliceryną w sterylnej fiolce jednorazowej lub szklanej; specjalny jednorazowy sterylny pojemnik z zakrętką; szklany pojemnik montowany w laboratorium
Kał na obecność dysbakteriozy z ilościowym opisem wyizolowanych i zidentyfikowanych drobnoustrojów („dla dysbakteriozy”)	Specjalne sterylne jednorazowe pojemniki z nakrętką i szpatułką do pobierania materiału i pobierania próbek do inokulacji o standardowej wadze; montowany w laboratorium specjalny sterylny szklany pojemnik
Skóra i tkanka podskórna
Wrzody, guzki (zgrubienia guzkowe), płytkie, powierzchowne rany (ropne; oparzenia); głębokie rany lub ropnie, kości	Specjalne sterylne jednorazowe pojemniki z zakrętką; sterylne probówki z korkami jednorazowymi lub szklanymi o pojemności 5 ml; pojemniki ze specjalnymi mediami do beztlenowców
Wysięk tkanek podskórnych i miękkich; aspiracja tkanek miękkich	Sterylna strzykawka bez igły, zamknięta sterylnym gumowym korkiem; strzykawka z igłą uprzednio zdezynfekowaną 70% alkoholem etylowym i zatopioną w gumowym korku
Sterylne płyny ustrojowe, z wyłączeniem krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, moczu (patrz wyżej)
Płyny
Opłucnej, otrzewnowej, puchlinowej, stawowej, maziowej	Sterylny pojemnik jednorazowy z zakrętką; zamknięta strzykawka bez igły lub z igłą uprzednio odkażona 70% alkoholem etylowym i zatopiona w sterylnym gumowym korku
Biomateriał do diagnostyki PCR
Krew; inne płyny ustrojowe	Sterylne jednorazowe probówki z korkiem 1,5 ml z antykoagulantem. Probówkę odwraca się 3-5 razy, aby wymieszać próbkę z antykoagulantem. Dostawa do laboratorium - w stojaku wykonanym z materiałów przeznaczonych do sterylizacji w autoklawie
Materiał do biopsji; zeskroby; plwocina i inne rodzaje biomateriałów	Sterylne suche probówki jednorazowe typu "Eppendorf" i inne podobne. Dostawa do laboratorium - w specjalnym stojaku wykonanym z materiałów przeznaczonych do sterylizacji w autoklawie
Próbki środowiska otaczającego pacjenta
Powietrze	Sterylne szalki Petriego jednorazowe (=90 mm) lub szklane (=100 mm) z gęstą pożywką. Dostawa do laboratorium w specjalnych pojemnikach transportowych
Wymycia z obiektów otoczenia otaczającego pacjenta
Próbki do oznaczenia sterylności
Krew i składniki krwi z działu, który je pobiera	Pojemniki z przygotowanym materiałem dostarczane są do laboratorium w specjalnych pojemnikach transportowych.
Wymywaczy z instrumentów medycznych, węży do urządzeń stosowanych na oddziałach resuscytacji i anestezjologii, a także na salach operacyjnych; ręce personelu medycznego; Bielizna	Sterylne sondy na wymazówki umieszczone w przezroczystych probówkach z przezroczystym bezbarwnym płynnym podłożem. Próbki dostarczane są do laboratorium na stojakach wykonanych z materiałów przeznaczonych do sterylizacji w autoklawie.
Materiał chirurgiczny: tampony, serwetki, turundy, waciki na drewnianej osi	Sterylne przezroczyste probówki z korkami, z przezroczystym bezbarwnym płynnym podłożem z 3-5 sterylnymi szklanymi kulkami. Próbki dostarczane są do laboratorium na stojakach wykonanych z materiałów przeznaczonych do sterylizacji w autoklawie.
Materiał na szew: katgut przechowywany na sali operacyjnej w alkoholowym roztworze jodu	Sterylna probówka (butelka z korkiem) z roztworem neutralizatora (podsiarczyn sodu)
Jedwabne, kapronowe, monomeryczne nici syntetyczne przechowywane na sali operacyjnej w roztworze alkoholowym	Sterylna rurka z korkiem ze sterylną wodą destylowaną jako płynem do płukania. Próbki materiału szwów są dostarczane do laboratorium na stojakach do sterylizacji w autoklawie.
Popłuczyny z pola operacyjnego pacjenta	Przed obróbką na polu: w przezroczystych probówkach wypełnionych przezroczystą płynną pożywką. Po przetworzeniu pola: sterylna probówka (butelka z korkiem) z roztworem neutralizującym (podsiarczyn sodu). Dostawa materiału do laboratorium odbywa się na stojakach do sterylizacji w autoklawie.
Próbki do oznaczania czynników immunologicznych systemu ochrony przeciwinfekcyjnej (system przeciwinfekcyjnej odporności organizmu - SAIR)
Krew i inne płyny ustrojowe w celu określenia humoralnych czynników ochronnych	Jednorazowe strzykawki do probówek (vacutainer); sterylne jednorazowe probówki z zakrętką; sterylne szklane probówki ze sterylnymi korkami z gumy, celulozy lub gazy bawełnianej. Próbki dostarczane są do laboratorium w specjalnym stojaku wykonanym z materiałów przeznaczonych do sterylizacji w autoklawie. Używając probówek szklanych z korkami z gazy bawełnianej - nie moczyć ich podczas transportu
Krew i inne płyny ustrojowe w celu określenia komórkowych czynników ochronnych	Sterylne probówki jednorazowe z zakrętką; sterylne szklane probówki szczelnie zamknięte sterylnym gumowym korkiem. Jednorazowe probówki z antykoagulantem do wirowania. Dostawa do laboratorium odbywa się w specjalnym stojaku wykonanym z materiałów przeznaczonych do sterylizacji w autoklawie.
Rozmazy cytologiczne pod kątem antygenów bakteryjnych i wirusowych (na przykład w przypadku podejrzenia infekcji przenoszonych drogą płciową)	Sterylne szkiełko beztłuszczowe; w przypadku T. pallidum szkiełko należy przykryć szkiełkiem nakrywkowym. Dostawa do laboratorium odbywa się w jednorazowym pojemniku lub sterylnych jednorazowych lub szklanych szalkach Petriego w specjalnych pojemnikach

Notatka. Próbki ropy, płynów i tkanek należy dostarczyć do laboratorium w specjalnych sterylnych jednorazowych pojemnikach z nakrętkami. Sondy na wymazówki - suszyć w sterylnych jednorazowych probówkach (bulwach) lub w pojemnikach z pożywką transportową, jeśli materiału nie można dostarczyć do laboratorium bezpośrednio po pobraniu próbki. Do tych celów można wykorzystać media transportowe, m.in. w jednorazowych probówkach zapakowanych razem ze sterylną sondą na wymazówkę, dopuszczoną do użytku w Federacji Rosyjskiej w zalecany sposób. Sondy-tampony są produkowane (przygotowywane) przy użyciu wielu materiałów: do samego tamponu (bawełna, bawełna, wiskoza, dakron), do osi sondy-tampon (drewno, plastik, metal nierdzewny - tytan, stal, aluminium) i gęste podłoża agarowe: z węglem i bez węgla dla beztlenowców.


Wiele klinicznie istotnych beztlenowców, takich jak Clostridium perfringens, Bacteroides fragilis, jest wystarczająco tolerancyjnych na obecność tlenu i są dobrze zachowane w dużej ilości ropy, próbek płynów i tkankach ciała, a także na wymazówce w specjalnym transporcie lub tioglikolu głoska bezdźwięczna.

Bardziej wrażliwe na tlen (np. fusobakterie) są również dobrze zachowane w próbce materiału biologicznego, a jeśli materiał zostanie wysiany w ciągu 2-3 godzin od momentu jego pobrania, to nie jest wymagana szczególna uwaga na sposób dostarczenia . Beztlenowce wymagające specjalnych warunków hodowli nie przeżywają na próbniku wymazowym w pojemniku transportowym z podłożem nieprzeznaczonym do dostarczania beztlenowców, z wyjątkiem pojemników ze specjalnym podłożem transportowym lub tioglikolem.

Jednocześnie mikroorganizmy te rosną o 5-7 dni dłużej niż czas, w którym większość praktycznych laboratoriów inkubuje szalki zaszczepione materiałem do izolacji i identyfikacji tlenowców i fakultatywnych beztlenowców. Z tego powodu rutynowe badanie na obecność beztlenowców przy użyciu specjalnych transportowych pojemników beztlenowych z pożywką wydaje się nieodpowiednie w zwykłych laboratoriach praktycznych i można ograniczyć się do probówek z pożywką tioglikolową.

Do zbierania i transportu próbek używane są media, pojemniki, narzędzia i materiały, które są dopuszczone do użytku w Federacji Rosyjskiej w określony sposób.

6. Zasady i techniki pozyskiwania próbek różnego rodzaju materiału biologicznego do badań mikrobiologicznych

Zaleca się, aby pobranie od pacjenta jakiejkolwiek próbki wymagającej zastosowania metod inwazyjnych wykonał lekarz (z wyjątkiem próbki krwi, którą może pobrać pielęgniarka zabiegowa).

Jeżeli konieczne jest pobranie materiału za pomocą sondy na wymazówkę na otwartej powierzchni roboczej lub w przypadku innej inwazyjnej interwencji, dopuszczalne jest użycie gotowych sond na wymazówkę o międzynarodowym poziomie bezpieczeństwa co najmniej klasy IIA, zatwierdzonych do użytku celów w Federacji Rosyjskiej w określony sposób.

6.1. próbki krwi

Próbki do określenia obecności czynników biologicznych we krwi (bakteremia, wiremia itp.) Pobiera się przez nakłucie żył obwodowych (często żyły łokciowej), tętnic lub z pięty u noworodków.

Pobranie próbki z założonych na stałe cewników dożylnych lub dotętniczych jest dozwolone tylko w przypadku podejrzenia infekcji odcewnikowej lub niemożności uzyskania jej przez nakłucie żyły.

6.1.1. W ostrej posocznicy, zapaleniu opon mózgowych, zapaleniu kości i szpiku, zapaleniu stawów, ostrym nieleczonym bakteryjnym zapaleniu płuc i odmiedniczkowym zapaleniu nerek, przed rozpoczęciem antybiotykoterapii pobiera się 2 próbki z dwóch naczyń lub dwóch skrawków naczynia krwionośnego.

6.1.2. Jeśli podejrzewasz obecność zapalenia wsierdzia i powolną sepsę przy niewielkim (10-30 CFU/ml) stężeniu patogenu w krążeniu:

w przypadku ostrego procesu pobiera się 2 próbki z dwóch odcinków naczyń (różnych naczyń) w ciągu pierwszych 1-2 godzin wzrostu temperatury ciała (nie w szczycie temperatury!) i przed rozpoczęciem terapii ;

w przebiegu podostrym lub powolnym pobiera się 3 próbki pierwszego dnia w odstępie 15 minut lub więcej. Jeżeli wszystkie próbki są ujemne, drugiego dnia po wysiewie pobiera się 3 kolejne;

u pacjentów z zapaleniem wsierdzia otrzymujących antybiotyki pobiera się 2 oddzielne próbki w każdym z trzech dni z pozytywną kliniczną dynamiką terapii;

w celu potwierdzenia rozpoznania klinicznego „zakaźnego zapalenia wsierdzia”, w przypadku braku możliwości uzyskania wymaganej liczby próbek krwi od pacjenta do analizy mikrobiologicznej lub w przypadku posiewów ujemnych, próbki krwi przesyła się do badania czynników immunologicznych układu obronnego organizmu (system odporności na infekcje - SAIR); dostawa do laboratorium odbywa się w sterylnych szklanych lub jednorazowych probówkach z pokrywką (korkiem), otrzymanych dzień wcześniej w laboratorium;

jeśli pacjent cierpi na wrodzoną wadę serca (CHD), należy pamiętać, że CHD jest zwiastunem infekcyjnego zapalenia wsierdzia, a ustalenie immunologicznych czynników CAD jest zawarte w algorytmie badania takiego pacjenta.

6.1.3. U pacjentów, których terapia obejmuje antybiotyki, w ciągu 48 godzin pobiera się 6 próbek; próbki należy pobrać bezpośrednio przed podaniem (pobraniem) kolejnej dawki leku.

6.1.4. Jeśli pacjent ma gorączkę niewiadomego pochodzenia, początkowo pobiera się 2 próbki z różnych naczyń krwionośnych (dwóch odcinków naczynia), następnie po 24-36 godzinach kolejne 2 próbki na tle wzrostu temperatury ciała (nie przy szczyt temperatury!).

6.1.5. Technika pozyskiwania próbki krwi. Pobieranie próbek krwi do hodowli przeprowadzają 2 osoby przy łóżku chorego lub w gabinecie zabiegowym.

Aby uzyskać próbkę, wykonaj następujące czynności:

zdezynfekować obszar skóry nad naczyniem wybranym do nakłucia: skórę posmarować wacikiem zwilżonym 70% alkoholem etylowym, a następnie innym wacikiem zwilżonym 1-2% roztworem jodu lub innym zatwierdzonym do tego celu środkiem dezynfekującym w zalecany sposób, okrężnymi ruchami, zaczynając od środka, w ciągu 30 s;

poczekaj, aż leczony obszar wyschnie. Nie wolno dotykać naczynia po leczeniu skóry przed wprowadzeniem igły;

podczas pracy z fiolkami z podwójnym medium: sterylną strzykawką pobrać 10 ml krwi od dorosłych, od dzieci - 5 ml; otwórz fiolkę nad płomieniem lampy spirytusowej; wstrzyknąć krew do fiolki ze strzykawki, po wyjęciu igły; spalić szyjkę i korek fiolki w płomieniu lampy alkoholowej, zamknąć fiolkę korkiem; ostrożnie, aby nie zamoczyć korka fiolki, mieszaj jej zawartość ruchem okrężnym.

Używając gotowych fiolek z pożywką i odczynnikami, które neutralizują antybiotyki i niszczą komórki krwi lub bez nich, zatwierdzone do użytku do tych celów w Federacji Rosyjskiej w określony sposób, dorośli otrzymują 10-30 ml krwi, dzieci - 0,5 - 3,0 ml.

W którym:

równolegle z dezynfekcją obszaru skóry w celu nakłucia, zakrętki do butelek są traktowane 70% alkoholem etylowym (roztwór jodu nie może być stosowany do leczenia zakrętek podczas pracy z butelkami, na przykład Bactec, Vital i inne podobne zatwierdzone do użytku do tych celów w Federacji Rosyjskiej w ustalonej kolejności);

krew pobraną od dorosłych, w równych objętościach, podczas nakłuwania korka pojemnika, wprowadza się do pojemników „aerobowych” i „beztlenowych”; krew otrzymana od dzieci - w specjalnej butelce "dziecięcej", podczas nakłuwania korka pojemnika.

6.1.6. Po nakłuciu żyły i posiewie krwi w pojemniku z pożywką, aby zapobiec ewentualnemu podrażnieniu (oparzeniu), pozostałości jodu usuwa się z obszaru skóry pacjenta wacikiem zwilżonym 70% alkoholem etylowym.

6.2. Testy na procesy zakaźne i zapalne ośrodkowego układu nerwowego (OUN)

6.2.1. Trunek. 4,0-5,5 ml płynu mózgowo-rdzeniowego uzyskanego przez nakłucie lędźwiowe z przestrzeni podpajęczynówkowej między kręgami L3-L4, L4-L5 lub L5-S1, a także przez nakłucie komór bocznych mózgu jest przesyłane do laboratorium mikrobiologicznego w celu badań .

Pobieranie próbki odbywa się poprzez powolne napełnianie trzech probówek trzema porcjami materiału do badań laboratoryjnych. Używać sterylnych probówek z ciasno dopasowanymi wieczkami (jednorazowych z korkiem lub szklanym z jałowym gumowym korkiem).

Spośród trzech rurek do nakłucia lędźwiowego, zawsze wysyłaj rurkę z najbardziej mętną zawartością, zwykle drugą rurkę w procesie pobierania.

Po otrzymaniu materiału przez nakłucie komór bocznych mózgu świeżo pobrany płyn mózgowo-rdzeniowy ze strzykawki, po uprzednim wyjęciu igły, wprowadza się do sterylnej probówki nad płomieniem lampki alkoholowej, szyjką probówki a korek wypala się w płomieniu lampy alkoholowej (podczas pracy ze szklaną probówką zamkniętą bawełnianym gazikiem lub gumowymi korkami), zamkniętą korkiem.

We wszystkich przypadkach podejrzenia zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych oprócz płynu mózgowo-rdzeniowego pobierany jest materiał z domniemanych ognisk zakażenia: wymazy z nosogardła, ucha środkowego, próbki krwi i przesyłany do laboratorium wraz z płynem mózgowo-rdzeniowym. Dobrym sposobem na zachowanie meningokoków na długi czas (do 48 godzin) jest pobranie materiału wacikiem i umieszczenie go w probówce z podłożem transportowym z węglem aktywnym lub bez.

Alkohol do badań mikrobiologicznych jest natychmiast wysyłany do laboratorium na poduszce grzewczej, aby utrzymać temperaturę 35-37 °C. Jeśli nie jest to możliwe, płyn mózgowo-rdzeniowy zbiera się w pojemniku z pożywką i pozostawia w lodówce (w temperaturze 4-8 °C) do rana, a następnie dostarcza do laboratorium.

Jeśli konieczne jest przeprowadzenie badań wirusologicznych, próbki płynu mózgowo-rdzeniowego umieszcza się w lodówce w temperaturze 2-8 ° C lub zamraża lub przechowuje w temperaturze pokojowej przy użyciu pojemników ze specjalnym płynnym podłożem.

6.2.2. Materiał z ropni mózgu. Biorąc pod uwagę, że w 90% przypadków w próbce rosną beztlenowce, materiał jest odsysany z ogniska i wysyłany do laboratorium w pojemnikach ze środowiskiem beztlenowym zatwierdzonym do użytku do tych celów w Federacji Rosyjskiej w zalecany sposób lub w strzykawce którym pobrano próbkę, po wyjęciu igły i zamknięciu strzykawki jałowym gumowym korkiem.

Próbka jest dostarczana natychmiast po otrzymaniu.

6.2.3. materiał biopsyjny. Próbki pobierane są w trakcie operacji, umieszczane w pojemniku z pożywką beztlenową lub w sterylnej probówce z pożywką tioglikolową, zamkniętej sterylnym gumowym korkiem.

Materiał jest natychmiast wysyłany do laboratorium.

6.3. Testy na procesy zakaźne i zapalne oczu

Większość próbek oka jest pobierana przez okulistę. Próbki te należy zaszczepić na pożywce przy łóżku pacjenta lub w gabinecie zabiegowym lub w gabinecie lekarskim w momencie przyjęcia, a zaszczepiony materiał przekazać do laboratorium w celu hodowli, izolacji, identyfikacji i określenia wrażliwości na antybiotyki patogeny. Próbki pobrane metodami inwazyjnymi i innymi agresywnymi pobierane są równolegle z wymazem ze spojówki, który w takich przypadkach służy jako kontrola.

Dzień wcześniej, przez 6-8 godzin (noc), odwołaj wszystkie leki i zabiegi.

W obecności specyficznych objawów klinicznych procesu infekcyjno-zapalnego lub podejrzeń lekarza konieczne jest przygotowanie rozmazów przed znieczuleniem w celu określenia chlamydii i wirusów, a leki są wysyłane do laboratorium. W celu zachowania chlamydii i wirusów materiał jest gromadzony w pojemnikach z mediami transportowymi.

Wyładowanie zbiera się za pomocą sterylnego szklanego pręta lub sterylnego sondy-tamponu: wykonuje się dwa lub trzy ruchy wzdłuż błony śluzowej dolnego fałdu przejściowego, od krawędzi powiek; z owrzodzeniem - z rogówki (po znieczuleniu), z "kątowym zapaleniem spojówek" - z kącików powiek.

Sekret z worka łzowego jest pobierany sterylną sondą wacikową po delikatnym masażu.

Materiał pobrany za pomocą sztyftu i/lub wacika jest umieszczany w pojemniku z pożywką transportową lub w sterylnej szklanej probówce z pożywką płynną i dostarczany do laboratorium, uważając, aby nie zamoczyć korka z celulozy lub gazy bawełnianej rura.

W przypadku korzystania z sond z wymazówką zaleca się stosowanie jednorazowych pojemników z podłożem transportowym lub sterylnych szklanych probówek z korkami z bawełnianej gazy wypełnionych sterylnym podłożem.

Najbardziej poprawne informacje na temat czynnika sprawczego procesu zapalnego można uzyskać z analizy mikrobiologicznej zeskrobań.

6.3.1. Zapalenie spojówek i zapalenie powiek i spojówek. Dzień wcześniej, na 6-8 godzin (noc), wszystkie leki i zabiegi są odwoływane u pacjentów w szpitalu.

Próbki ze spojówki pobiera się przy użyciu sterylnej, wstępnie zwilżonej sondy-tamponu z wiskozy lub alginianu wapnia, umieszczonej w jednorazowej sterylnej probówce lub szklanej probówce. Próbki z każdego oka pobiera się oddzielnymi wymazami wykonując dwa lub trzy ruchy okrężne po błonie śluzowej.

Bulwy z wymazami z każdego oka oznaczają odpowiednio „prawo” i „lewo” oraz od razu wysłane do laboratorium.

Przed skrobaniem wstrzykuje się 1-2 krople środka znieczulającego, na przykład chlorowodorku proparakainy lub innego, który jest dostępny i zatwierdzony do stosowania w tych celach w zalecany sposób.

Za pomocą dwóch lub trzech krótkich, ostrych ruchów w jednym kierunku zeskroby ze spojówki są pobierane za pomocą specjalnej sterylnej szpatułki. Podczas manipulacji oko musi być otwarte.

Należy uważać, aby nie dotykać rzęs podczas pobierania próbki.

Przygotować co najmniej 2 rozmazy z każdego oka, nakładając materiał na czysty, odtłuszczony szkiełko ruchami okrężnymi na obszarze o średnicy 1 cm.

Rozmazy są utrwalane przez 5 minut w 95% alkoholu metylowym, który znajduje się w specjalnym, szczelnie zamkniętym pojemniku.

Od razu probówki z wacikami i szklanki z rozmazami są przenoszone do laboratorium.

6.3.2. bakteryjne zapalenie rogówki. Dzień wcześniej, na 6-8 godzin (noc), wszystkie leki i zabiegi są odwoływane u pacjentów w szpitalu.

Pobierz 2 próbki ze spojówki, jak opisano w 6.3.1, ponieważ wyniki hodowli mogą być przydatne w określeniu źródła zanieczyszczenia rogówki (jedna próbka jest używana w przypadku podejrzenia infekcji grzybiczej).

W przypadku podejrzenia infekcji wirusowej wysięk spojówkowy i materiał uzyskany przez skrobanie umieszcza się w specjalnej pożywce transportowej dla wirusów.

Przeprowadza się znieczulenie, jak wskazano w punkcie 6.3.1.

Zebrać 3-5 zeskrobin metodą opisaną w pkt 6.3.1.

Pobrany materiał umieszcza się w małej (5 ml) sterylnej jednorazowej probówce z nakrętką lub sterylnej szklanej probówce z gumowym korkiem, wypełnionej pożywką.

Przygotować 2-3 rozmazy na szkiełku podstawowym, a po wyschnięciu utrwalić jak opisano w paragrafie 6.3.1.

Od razu cały materiał jest wysyłany do laboratorium.

6.3.3. Bakteryjne zapalenie wnętrza gałki ocznej. Próbka płynu szklistego (1-2 ml) jest pobierana przez aspirację cienkoigłową i pobierana podczas witrektomii.

Następnie wykonaj następujące czynności:

Po wyjęciu igły ze strzykawki zawartość umieszcza się w jednorazowym sterylnym pojemniku z zakrętką lub probówce szczelnie zamkniętej gumowym korkiem;

próbkę materiału można pozostawić w strzykawce, usuwając powietrze i wyjmując igłę, zamknąć strzykawkę sterylnym gumowym korkiem;

pobrać próbkę ze spojówki, jak opisano w pkt 6.3.1;

cały materiał od razu wysłane do laboratorium.

6.3.4. Przedprzegrodowe zapalenie tkanki łącznej. Skórę traktuje się 70% alkoholem etylowym i 1-2% roztworem jodu lub jodoformem lub innym dostępnym środkiem dezynfekującym zatwierdzonym do stosowania w zalecany sposób.

W przypadku braku otwartej rany przebija się górną lub dolną powiekę w celu zebrania materiału.

W przypadku otwartej rany próbkę materiału ropnego pobiera się strzykawką z igłą.

Przygotuj rozmazy na szkiełku podstawowym, jak opisano w paragrafie 6.3.1.

Zebrany materiał przenosi się do pojemnika transportowego z pożywkami dla beztlenowców lub zostawiając go w strzykawce, która po usunięciu z niego powietrza i wyjęciu igły zamykana jest korkiem.

Zebrany materiał i rozmazy od razu wysłane do laboratorium.

6.3.5. Orbitalne zapalenie tkanki łącznej. Pobrać aspirację ze strefy zgodnie z metodą opisaną wcześniej w pkt 6.3.2.

Pobrać próbkę ze spojówki i przygotować rozmazy na szkiełku, jak w paragrafie 6.3.1.

Do dostawy do laboratorium należy użyć materiałów opisanych w punkcie 6.3.3.

Pobrać próbki krwi od pacjenta zgodnie z metodą opisaną w paragrafie 6.1. Próbki krwi, cały pobrany materiał trafia do laboratorium.

6.3.6. Zapalenie gruczołu łzowego (zapalenie gruczołu łzowego).

Zawartość ropną pobiera się za pomocą wymazówki, jak w pkt 6.3.1.

Nie należy stosować metody aspiracji igłą, aby nie naruszyć integralności gruczołu łzowego.

Sonda z wymazówką i szkiełka z rozmazami są przenoszone do laboratorium.

6.3.7. Zapalenie worka łzowego (zapalenie pęcherza moczowego). Pobierz próbkę ze spojówki, jak w paragrafie 6.3.1.

Masować i uciskać worek łzowy w celu pobrania próbki wysięku do posiewu i przygotowania rozmazów lub inną metodą pobrać wysięk strzykawką i igłą.

Pobraną próbkę wysięku umieścić w pojemnikach transportowych zgodnie z wcześniejszym opisem i dostarczyć do laboratorium.

6.3.8. Zapalenie kanalików. Naciśnij wnętrze powieki, aby uzyskać ropę.

Dalsze prace prowadzone są zgodnie z metodami opisanymi wcześniej w tym rozdziale.

Jeśli w organizacji medycznej i profilaktycznej istnieje wyspecjalizowany dział (klinika), wszystkie uprawy są wykonywane przy łóżku pacjenta na pożywkach uzyskanych w laboratorium. Zaszczepiony materiał wraz z przygotowanymi rozmazami trafia do laboratorium.

6.4. Testy na procesy infekcyjne i zapalne ucha

6.4.1. W przypadku uszkodzenia ucha zewnętrznego skórę traktuje się 70% alkoholem, a następnie przemywa sterylną solą fizjologiczną. Wydzielinę z ogniska pobiera się na sterylną, jednorazową wymazówkę z sondą bulwy lub probówek z podłożem transportowym lub na wymazówkę osadzoną w sterylnej szklanej probówce, zamkniętej korkiem, ze specjalnym podłożem lub bez. Wymaz jest umieszczany w probówce i dostarczany do laboratorium.

6.4.2. W przypadku uszkodzenia ucha środkowego i wewnętrznego zbierane są nakłucia i inny materiał uzyskany podczas operacji. Punkty dostarczane są do laboratorium w zamkniętej strzykawce z usuniętym wcześniej powietrzem. Próbki tkanek - w pojemniku transportowym ze środowiskiem beztlenowym zatwierdzonym do użytku do tych celów w Federacji Rosyjskiej zgodnie z ustaloną procedurą lub w sterylnym pojemniku jednorazowym z zakrętką. Możliwe jest użycie sterylnej szklanej probówki zamkniętej sterylnym gumowym korkiem.

6.4.3. Tympanocentezę błony bębenkowej wykonuje się w celu diagnostyki mikrobiologicznej infekcji ucha środkowego tylko w przypadkach, gdy pacjent nie reaguje na wcześniejszą terapię lub w przypadku nieżytowego nieżytowego zapalenia ucha środkowego nawet przy braku wysięku w wystającej krwi (wysiew z nosogardzieli jest dodatni w przypadku mniej niż 90% przypadków).

Aby uzyskać próbkę, kanał zewnętrzny jest czyszczony wacikiem zwilżonym 70% etanolem, a następnie traktowany sterylną solą fizjologiczną.

Za pomocą strzykawki pobiera się płyn z jamy bębenkowej. Próbka dostarczana jest do laboratorium w sterylnym jednorazowym pojemniku z nakrętką lub w zamkniętej strzykawce z wcześniej usuniętym powietrzem.

Jeśli błona bębenkowa jest uszkodzona, materiał jest pobierany za pomocą wacika za pomocą lusterka. Wacik umieszcza się w sterylnej jednorazowej probówce (bulwie) lub pojemniku z pożywką transportową (dopuszcza się użycie sterylnej probówki szklanej z pożywką lub bez) i w takiej formie dostarcza się do laboratorium.

6.5. Testy na procesy infekcyjne i zapalne dróg oddechowych

6.5.1. górne drogi oddechowe. W przypadku podejrzenia błonicy, krztuśca, chlamydii, mykoplazmozy, legionellozy, rzeżączki, pracownicy laboratorium są informowani przed dostarczeniem próbki, aby przygotować się do analizy tego typu materiału.

6.5.1.1. Próbkę z błon śluzowych przednich części jamy nosowej pobiera się za pomocą jednej sterylnej sondy do wymazówki zamontowanej w sterylnej jednorazowej probówce (rurki) lub specjalnie osadzonej w sterylnej szklanej rurce:

wyjąć wacik z probówki, włożyć do prawego nozdrza i obrócić materiał ze skrzydełek nosa i górnego rogu otworu nosowego;

powtórz manipulację dla lewego nozdrza;

wymaz jest umieszczany w probówce i dostarczany do laboratorium.

Uzyskane w ten sposób próbki są przydatne do określenia nosicielstwa gronkowca złocistego u pracowników medycznych, obecności patogenów zakażeń szpitalnych, a także do scharakteryzowania zaburzeń dysbiotycznych błon śluzowych górnych dróg oddechowych podczas kompleksowego badania klinicznego i immunomikrobiologicznego pacjentów prowadzone w laboratoriach naukowych i praktycznych.

Jeśli w jamie nosowej znajdują się ogniska zapalne lub owrzodzenia, materiał z ognisk (ognisk) pobiera się osobną wymazówką.

6.5.1.2. Aspiraty z nosogardzieli są pobierane w celu określenia nosicielstwa paciorkowców ropotwórczych, meningokoków, patogenów błonicy i kokluszu, a także podczas prowadzenia badań epidemiologicznych oporności na środki przeciwdrobnoustrojowe S. pneumoniae i H. influenzae:

materiał ssący z nosogardzieli;

przenieść materiał do sterylnego jednorazowego pojemnika z zakrętką lub specjalnej sterylnej probówki z przepuszczającym gaz korkiem z celulozy lub gazy bawełnianej, uważając, aby nie zamoczyć go próbką materiału klinicznego.

6.5.1.3. Wymaz z nosogardzieli. Materiał zbierany jest w celu ustalenia nosicielstwa meningokoków i rozpoznania krztuśca.

Ostrożnie, ruchami obrotowymi wzdłuż dolnego kanału nosowego, sonda-tampon z bawełny, wiskozy lub alginianu wapnia naprzemiennie wprowadza się do nosogardzieli do nosogardła. Jednocześnie skrzydełka nosa są dociskane do wymazu i przegrody nosowej w celu bliższego kontaktu z błoną śluzową.

Wymaz jest umieszczany w sterylnej probówce i dostarczany do laboratorium.

6.5.1.4. Płukanie nosa służy do określenia obecności nie tylko infekcji bakteryjnej, ale także głównie wirusowej.

Ostrzeż pacjenta, aby nie połykał podczas zabiegu.

Głowę pacjenta układa się do góry do tyłu pod kątem około 70°, do każdego nozdrza wstrzykuje się 5 ml sterylnego roztworu soli fizjologicznej, pacjent powinien przebywać w tej pozycji przez 3-5 sekund.

Aby zebrać materiał, głowę pacjenta opuszcza się do przodu tak, że płyn wylewa się z nozdrzy do sterylnego jednorazowego pojemnika lub płyn jest zasysany przez wprowadzenie gumowego drenażu do każdego nozdrza.

Umieścić równą objętość popłuczyn w pojemniku z pożywką transportującą wirusy lub dostarczyć tę porcję w sterylnym jednorazowym pojemniku.

6.5.1.5. Nakłucie zatoki. Za pomocą techniki aspiracji strzykawkowej specjalnie przeszkolony doświadczony lekarz lub otolaryngolog pobiera materiał z zatok szczękowych czołowych lub innych. Zawartość strzykawki umieszcza się w pojemniku z pożywką transportową dla beztlenowców lub w sterylnej probówce z pożywką tioglikolową. Materiał można pozostawić w strzykawce i po zamknięciu sterylnym gumowym korkiem dostarczyć do laboratorium.

6.5.1.6. Pobranie próbki z błony śluzowej gardła (gardła).

Niedopuszczalne jest pobieranie materiału z gardła (gardła) ze stanem zapalnym nagłośni, ponieważ zabieg może prowadzić do poważnej niedrożności dróg oddechowych.

Podczas pobierania próbek z błony śluzowej gardła (gardła) nie dotykaj wymazówką śluzówki policzków, języka, dziąseł, ust i nie pobieraj śliny, ponieważ ten materiał charakteryzuje błony śluzowe jamy ustnej, czyli , górny odcinek przewodu pokarmowego.

Wymaz z gardła (gardła) pobiera się na pusty żołądek lub 3-4 godziny po posiłku. Przed pobraniem próbki pacjent powinien wypłukać usta ciepłą przegotowaną wodą.

W celu pobrania próbki używa się sterylnej szpatułki lub wacika: wacik wiskozowy pobierany jest ze sterylnej jednorazowej probówki (probówki) lub wacik przygotowany w laboratorium, osadzony w sterylnej szklanej probówce. Preferowane jest użycie sondy z wymazówką z główką wiskozową, ponieważ wiskoza wchłania mniej płynów, a więcej materiału komórkowego.

Jedną ręką naciska się język pacjenta sterylną szpatułką.

Drugą ręką pobiera się materiał, naprzemiennie lecząc prawy migdałek, prawy łuk podniebienny, lewy migdałek, lewy łuk podniebienny, języczek tamponem, na poziomie języczka dotyka się tylnej ściany gardła tampon.

Uzyskane w ten sposób próbki są przydatne do określenia obecności czynnika sprawczego zakażenia szpitalnego, a także do scharakteryzowania zaburzeń dysbiotycznych błon śluzowych górnych dróg oddechowych podczas kompleksowego badania klinicznego i immunomikrobiologicznego pacjentów prowadzonego w laboratoriach naukowych i praktycznych .

W obecności ognisk zapalnych lub owrzodzeń na błonie śluzowej zwracają szczególną uwagę na pobranie próbek i dodatkowo pobierają materiał z ognisk (ognisk) osobnym wymazem.

Wymaz jest umieszczany w sterylnej jednorazowej lub szklanej probówce i dostarczany do laboratorium.

6.5.1.7. W przypadku podejrzenia błonicy, pracownicy laboratorium są informowani, wskazując diagnozę na skierowaniu.

W przypadku patologicznego procesu oddechowego materiał pobiera się jednocześnie z błon śluzowych nosogardzieli i gardła zgodnie z wcześniej przedstawionymi metodami.

W przypadku podejrzenia skórnej postaci błonicy materiał pobierany jest ze skóry, a także z błon śluzowych gardła (gardła) i nosogardzieli, a wszystkie próbki są dostarczane do laboratorium.

6.5.2. dolne drogi oddechowe. Diagnostyka mikrobiologiczna procesów zapalnych w dolnych drogach oddechowych stwarza poważne trudności, ponieważ. podczas pobierania próbka może być zanieczyszczona drobnoustrojami zasiedlającymi górne drogi oddechowe. Ta nisza ekologiczna jest dość obficie zasiedlona drobnoustrojami oportunistycznymi, zwłaszcza w obecności dysbakteriozy (jakościowej – skład gatunkowy i/lub ilościowy – stężenie gatunków obecnych w CFU/ml w grupie osobników osłabionej i/lub z obniżoną odpornością).

Z tego powodu próbki materiału z dolnych dróg oddechowych pobierane są szczególnie starannie, aby uzyskać prawidłową informację o czynniku (środkach) etiologicznym. Przy zastosowaniu metod inwazyjnych do pobrania próbki (jeśli nie nastąpi to podczas zabiegu chirurgicznego) stosowane narzędzia przechodzą przez górne drogi oddechowe i istnieje realna możliwość zasiedlenia głębszych loci mikroorganizmami - mieszkańcami górnych dróg oddechowych.

6.5.2.1. Plwocina.

Luźno oddzielona (wykrztusiona) plwocina- Najlepiej rano.

Przed pobraniem próbki pacjent powinien w miarę możliwości umyć zęby oraz przepłukać usta i gardło ciepłą przegotowaną wodą, jeśli pacjent nie jest w stanie zrobić tego sam, to toaleta jego jamy ustnej jest wykonywana przez pracowników medycznych .

Ostrzeż pacjenta, aby nie zbierał śliny ani wydzieliny z nosogardzieli do pojemnika.

Próbkę plwociny uzyskaną w wyniku głębokiego kaszlu pobiera się do specjalnego sterylnego jednorazowego pojemnika z zakrętką lub do specjalnie przygotowanego sterylnego szklanego słoika.

Próbka plwociny jest wysyłana do laboratorium.

Indukowana plwocina (zalecana przede wszystkim w przypadku podejrzenia Mycobacterium tuberculosis i Pneumocystis yiroveci)- Najlepiej rano.

Przed pobraniem próbki pacjent w miarę możliwości powinien umyć zęby oraz przepłukać usta i gardło ciepłą, przegotowaną wodą; jeśli pacjent nie jest w stanie zrobić tego sam, to toaleta jego jamy ustnej jest wykonywana przez personel medyczny.

Przed zabiegiem należy zwilżyć czystą szczoteczkę ciepłą przegotowaną wodą i przetrzeć nią błonę śluzową policzków, języka i dziąseł.

Aktywnie płukać usta pacjenta ciepłą przegotowaną wodą.

Za pomocą inhalatora podać pacjentowi do połknięcia 20-30 ml 3-10% sterylnej soli fizjologicznej.

Pobrać indukowaną plwocinę do specjalnego sterylnego jednorazowego pojemnika z zakrętką lub do odpowiednio przygotowanego sterylnego szklanego słoika.

Wyślij próbkę do laboratorium.

Równolegle z próbką plwociny należy przesłać do laboratorium próbkę z gardła (gardłową), pobraną po toalecie jamy ustnej i bezpośrednio przed pobraniem plwociny swobodnie oddzielonej (wykrztuśnej) lub indukowanej.

6.5.2.2. Aspiraty do tracheostomii i tchawicy. Tracheostomia jest kolonizowana przez drobnoustroje już 24 godziny po intubacji chorego, przez co wyniki badań hodowli mają niewielkie znaczenie kliniczne. Biorąc pod uwagę powyższe, wyniki posiewów od zaintubowanych pacjentów powinny być stale porównywane z objawami klinicznymi (np. gorączka lub nacieki rentgenowskie).

Próbki popłuczyn oskrzelowych lub popłuczyn oskrzelowo-pęcherzykowych są pobierane, jeśli to możliwe, przed pobraniem próbek zeskrobań lub biopsji. Zasada jest podyktowana koniecznością unikania nadmiaru krwi w powstałym płynie, ponieważ. krew może zmieniać stężenie komórkowych i niekomórkowych składników próbki i wpływać na wynik analizy mikrobiologicznej.

Próbka aspiratu jest pobierana w sterylnym jednorazowym pojemniku z nakrętką lub w sterylnym szklanym pojemniku prawidłowo zamocowanym lub w sterylnej jednorazowej szklanej probówce z korkiem lub dostarczana do laboratorium w zamkniętej strzykawce z usuniętym powietrzem.

6.5.2.3. Próbki uzyskane za pomocą bronchoskopu. Płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe (próbka z wyboru), popłuczyny oskrzelowe (niska czułość w diagnostyce zapalenia płuc), zeskroby z oskrzeli (większe znaczenie niż popłuczyny), próbki z biopsji przeztchawiczej są pobierane przez wprowadzenie bronchoskopu przez nos lub przez usta do niezaintubowanego pacjenta lub przez rurkę dotchawiczą u zaintubowanego pacjenta.

Aby uzyskać próbkę z płukania oskrzeli lub z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego:

wstrzykuje się strzykawką przez kanał biopsyjny bronchoskopu w oddzielnych porcjach sterylnej niebakteriostatycznej (oficjalnej) soli fizjologicznej (całkowita objętość od 5-20 do 100 ml);

przed wprowadzeniem kolejnej porcji soli fizjologicznej należy ostrożnie zaaspirować włożoną częścią strzykawki do sterylnego jednorazowego pojemnika z nakrętką lub do sterylnej jednorazowej lub szklanej probówki z korkiem lub pozostawić w zamkniętej strzykawce, po usunięciu powietrza z to (zwykle 50-70% wstrzykniętej soli fizjologicznej jest płukane);

każda odessana porcja jest zbierana w osobnej misce;

pod koniec procedury próbki uzyskane z tego samego obszaru są łączone. Próbki z różnych miejsc (np. prawy górny płat płuca i prawy dolny płat płuca) należy łączyć razem tylko po konsultacji z lekarzem prowadzącym;

w kierunku wskazać całkowitą objętość wstrzykniętej soli fizjologicznej.

Aby uzyskać próbkę zeskrobywania oskrzeli:

przez kanał biopsyjny bronchoskopu wprowadza się podwójny cewnik teleskopowy z końcem dystalnym potraktowanym glikolem polietylenowym (lub innym odpowiednim odczynnikiem), aby zapobiec zanieczyszczeniu próbki;

materiał zebrać w sterylnym jednorazowym pojemniku z nakrętką lub w pojemniku transportowym ze środkiem beztlenowym lub w sterylnej probówce z podłożem tioglikolowym, szczelnie zamkniętej sterylnym gumowym korkiem;

dostarczyć materiał do laboratorium.

Aby uzyskać biopsję przezoskrzelową, pobiera się próbkę przez kanał biopsyjny bronchoskopu i umieszczając ją w sterylnym jednorazowym pojemniku z zakrętką z niewielką ilością (1-2 ml) niebakteriostatycznego (oficjalnego) roztworu soli fizjologicznej lub w probówce ze środowiskiem tioglikolowym szczelnie zamkniętym gumowym korkiem, przesyłany do laboratoriów

6.5.2.4. Próbki aspiratów płucnych. Aby pobrać próbkę, igłę wprowadza się przez mostek do nacieku płucnego pod kontrolą tomografu komputerowego. Materiał jest odsysany z ogniska zapalenia. Jeśli jest duży naciek lub jest ich kilka, konieczne jest pobranie kilku próbek z odpowiednich ognisk lub kilku próbek z jednej dużej zmiany. Materiał jest przenoszony do laboratorium w pojemniku transportowym z pożywką dla beztlenowców lub w szklanej probówce z pożywką tioglikolową lub w zakręcanym pojemniku jednorazowym.

6.5.2.5. Próbki z biopsji płuc. Jeśli to możliwe, pobiera się kawałki tkanki o wielkości 1-3 cm.Jeśli zmiana jest duża lub jest ich kilka, pobiera się kilka próbek. Próbkę umieszcza się w sterylnym jednorazowym pojemniku z zakrętką lub w pojemniku transportowym z pożywką beztlenową lub w pojemniku (probówce) z pożywką tioglikolową, zamykanym jałowym gumowym korkiem.

6.6. Testy na procesy infekcyjne i zapalne układu moczowo-płciowego

6.6.1. Próbki moczu.

6.6.1.1. Ogólne zasady pobierania próbek:

nie wolno zbierać moczu z pościeli lub z pisuaru;

do analizy moczu podczas naturalnego oddawania moczu użyj średniej porcji porannej;

przed pobraniem próbki należy dokładnie wypłukać zewnętrzne narządy płciowe i odbyt ciepłą przegotowaną wodą; szczególną uwagę należy zwrócić na obróbkę ujścia cewki moczowej u mężczyzn (przedsionek pochwy - u kobiet), aby podczas zabiegu próbka nie była dalej zanieczyszczona drobnoustrojami;

nie wolno używać środków dezynfekujących do przetwarzania, ponieważ. jeśli dostaną się do próbki, mogą hamować wzrost mikroorganizmów;

próbka jest przekazywana do laboratorium nie później niż 2 godziny od momentu pobrania;

do pobierania i dostarczania próbek do laboratorium używa się sterylnych jednorazowych pojemników z nakrętką lub probówkami (można używać sterylnych specjalnie zamocowanych szklanych probówek z przepuszczalnym dla gazu korkiem z celulozy lub bawełnianej gazy, ale należy zachować szczególną ostrożność, aby namoczyć korek);

dostarczenie do laboratorium próbek aspiratów uzyskanych techniką nadłonowego nakłucia pęcherza odbywa się w pojemniku transportowym ze specjalnym podłożem dla beztlenowców lub w zamkniętej strzykawce bez igły;

w przypadku podejrzenia infekcji wirusowej próbki są dostarczane do laboratorium w sterylnym jednorazowym pojemniku umieszczonym na roztopionym lodzie (suchy lód nie jest dozwolony!);

każda procedura pobierania próbki za pomocą cewnika (zwłaszcza u kobiet) jest przeprowadzana z zachowaniem zasad aseptyki, aby zapobiec dodatkowemu skażeniu pacjenta podczas wprowadzania cewnika;

do badań mikrobiologicznych nie wolno używać próbki z dobowego m

6.6.1.2. Pobieranie próbek moczu od kobiet podczas naturalnego oddawania moczu.

Użyj środkowej części, ponieważ. pierwszy odbiór moczu powinien usunąć komensale ewentualnie z cewki moczowej. Próbka pobrana w kolejnych przejściach powinna być wolna od zanieczyszczeń. Wiarygodność pozytywnych wyników takiego materiału wynosi 80% przy pobieraniu jednej próbki, 90% przy pobieraniu dwóch kolejnych próbek i 100% przy trzech, jeśli wszystkie próbki dają takie same wyniki.

Pracownik służby zdrowia pobierający próbkę powinien umyć ręce wodą z mydłem, spłukać wodą i wysuszyć. Jeśli próbka jest pobierana przez samego pacjenta, wyjaśnia się mu szczegółowo, jak to się robi, biorąc pod uwagę przygotowanie opisane powyżej, i ostrzega o tym, co może się stać, jeśli złamie zasady:

dokładnie umyć otwór cewki moczowej i obszar przedsionka pochwy, a także krocze i odbyt wodą z mydłem lub mydłem w płynie, spłukać ciepłą przegotowaną wodą, osuszyć sterylną gazą;

otwór pochwy należy zamknąć sterylnym wacikiem;

podczas oddawania moczu trzymaj zewnętrzne wargi sromowe w pewnej odległości od siebie;

opróżnij niewielką ilość moczu do specjalnego pojemnika w celu usunięcia bez zatrzymywania oddawania moczu;

zebrać średnią porcję moczu (10-20 ml) do specjalnego jednorazowego pojemnika z zakrętką lub sterylnego szklanego pojemnika specjalnie przygotowanego w laboratorium.

6.6.1.3. Pobieranie próbek moczu od mężczyzn podczas naturalnego oddawania moczu.

U mężczyzn do badania mikrobiologicznego potrzebna jest jedna porcja moczu, ponieważ. są znacznie mniej podatne na skażenie niż kobiety.

Osoba pobierająca próbkę powinna umyć ręce mydłem, spłukać wodą i wysuszyć. Jeśli pacjent sam pobiera próbki, należy mu szczegółowo wyjaśnić, jak to się robi, biorąc pod uwagę następujące przygotowanie i ostrzec o tym, co może się stać, jeśli zasady zostaną naruszone:
[e-mail chroniony], rozwiążemy to.

Doboru materiału klinicznego dokonuje personel medyczny zgodnie z zasadami reżimu przeciwepidemicznego, wyłącznie za pomocą sterylnych instrumentów jednorazowych (strzykawek, odpowiednich sond, cytoszczoteczek itp.), w jednorazowych rękawiczkach.

Pobrać możliwie najdokładniej materiał z wybranego miejsca za pomocą odpowiednich aplikatorów – sond, szczoteczek do cytoterapii (aby zapewnić adekwatność próbki klinicznej).

Utrwalić uzyskany materiał (DNA/RNA mikroorganizmów) stosując niezawodne podłoża transportowe i konserwanty dostarczone przez laboratorium PCR. Pożywka do transportu i przechowywania materiału klinicznego zapewnia stabilność RNA i DNA w temperaturze pokojowej do 28 dni.

Pobrany materiał umieścić w wakuetach z EDTA (krew), w jednorazowych, chemicznie czystych probówkach Eppendorfa (rozmazy, płyn mózgowo-rdzeniowy, biopsja itp.). Głównym warunkiem pobierania materiału jest zapobieganie przedostawaniu się DNaz i rybonukleaz do próbki, ponieważ rybonukleazy i DNazy to enzymy do degradacji RNA i DNA. Są niezwykle stabilne w środowisku, wytrzymują długotrwałe gotowanie. Głównym źródłem nukleaz jest skóra, cząsteczki kurzu. Plastikowe probówki i końcówki powinny być oznaczone jako „DNAzy, RNazy-wolne” (wolne od nukleaz).

Natychmiast po pobraniu szczelnie zamknąć probówki, fiolki z materiałem klinicznym, nie dotykając ich wewnętrznej powierzchni i wewnętrznej powierzchni pokrywek.

Podczas pracy z materiałem klinicznym, podczas otwierania probówek, fiolek nie należy wykonywać gwałtownych ruchów oraz unikać rozpryskiwania i rozpryskiwania, które mogą prowadzić do zanieczyszczenia próbek i powierzchni roboczych.

Aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego, przechowuj i transportuj próbki w osobnej plastikowej torbie lub stojaku. Jeśli wymagane jest przeniesienie próbki, należy użyć automatycznych mikropipet z wymiennymi jednorazowymi końcówkami z barierą aerozolową.

Przed transportem do laboratorium PCR wybrany biomateriał powinien być przechowywany w temperaturze 2–4 °C nie dłużej niż 48 godzin. Konieczne jest skrócenie czasu od pobrania próbki do analizy PCR. Transport próbek odbywa się w workach chłodniczych, pojemnikach termicznych, termosach z workami termicznymi, lodzie lub suchym lodzie.

Krew, osocze, surowica

Zaleca się pobieranie krwi przy użyciu systemów próżniowych. Wprowadzenie takich systemów umożliwia standaryzację manipulacji z użyciem krwi, pozytywnie wpływa na wszystkie etapy badań laboratoryjnych i generalnie przenosi pracę laboratorium na inny, wyższy poziom jakości. Ich stosowanie gwarantuje ochronę personelu przed infekcją, skraca czas poświęcany na procedurę pobierania krwi, znacznie mniej towarzyszy hemolizie, pozwala zachować sterylność próbek krwi i hermetycznie je transportować.

Zaleca się wykonanie nakłucia na pusty żołądek z żyły łokciowej do specjalnej rurki próżniowej z antykoagulantem, po czym rurkę kilkakrotnie obraca się w celu wymieszania. Probówki z krwią są przechowywane w lodówce w temperaturze +4 °С - +8 °С. Maksymalny okres przechowywania krwi to 1 dzień (nie zamrażać!). W przypadku konieczności długotrwałego przechowywania należy pobrać 1 ml surowicy lub osocza krwi i przechowywać w temperaturze -16o -20oC nie dłużej niż 2 tygodnie.

Charakterystyka systemów próżniowych stosowanych do diagnostyki PCR:

Wakuety z EDTA (6%) - wykorzystywane do badań jakościowych i ilościowych. Antykoagulant EDTA dobrze wiąże kwasy nukleinowe komórek.

Do badań jakościowych i ilościowych stosuje się wakuety z cytrynianem sodu (3,8%). Nie nadaje się do transportu długoterminowego, ponieważ cytrynian jest dobrą pożywką dla mikroflory obcej.

Wakuety bez antykoagulantów (surowica krwi) - stosowane do badań jakościowych. Stosowanie surowicy krwi do badań ilościowych jest niepożądane, ponieważ. część czynnika zakaźnego osiada w skrzepie krwi, podczas gdy możliwość oznaczenia jego ilościowej zawartości we krwi jest zmniejszona.

Wakuety z heparyną kategorycznie nie nadają się do reakcji PCR. Heparyna jest polianionem, podobnie jak DNA, więc konkuruje z DNA w reakcji PCR.

Przykład standardowej procedury operacyjnej przyjmowania biomateriału do laboratorium medycznego.

NAZWA INSTYTUCJI
Rodzaj dokumentu	Standardowa procedura operacyjna (SOP)
	Wpis do Ujednoliconego Rejestru Dokumentacji Laboratoryjnej	SOP-PA-01-2014
	instancja
	Całkowita liczba stron
	wprowadzić w życie
	Ważność
Nazwa dokumentu	Zasady akceptacji i rejestracji biomateriału w laboratorium.

		Stanowisko
Zaprojektowany przez:
W kratę:
Zgoda:

Tytuł biegowy:

	Nazwa
	Obszar zastosowań
	Organizacja procesu transportu biomateriału kurierem
	Akceptacja biomateriału w laboratorium
	Transfer biomateriału i skierowań do odpowiednich działów laboratoria
	Rejestracja formularzy zamówień przez operatorów.
	Załącznik nr 1 Schemat blokowy
	Załącznik nr 2 Rodzaje niezgodności i ich eliminacja
	Załącznik nr 3 Maszyna do pomiaru temperatury w lodówce
	Załącznik nr 4 Formularz-kierunek
	Załącznik nr 5 Arkusz zapoznawczy dla pracowników z SOP

1 obszar zastosowania

Ta standardowa procedura operacyjna (zwana dalej SOP) określa procedurę przyjmowania, rejestracji biomateriału wchodzącego do laboratorium z sali zabiegowej NAZWA INSTYTUCJI i innych obsługiwanych przez laboratorium instytucji oraz identyfikowania niezgodności i ich usuwania.

Niniejsza SOP jest przeznaczona dla asystenta i operatora laboratorium.

1. Wytyczne „Organizacja etapu przedanalitycznego w centralizacji laboratoryjnych badań krwi” (Zatwierdzone na ogólnorosyjskiej konferencji naukowej i praktycznej „Prawdziwe kliniczne diagnostyczne usługi laboratoryjne: stopień zgodności ze standardami medycyny laboratoryjnej, jakość, koszt i cena” (Moskwa , 2-4 października 2012 )
2. GOST R 53079.4─2008. „Technologie laboratoriów medycznych. Zapewnienie jakości klinicznych badań laboratoryjnych. Część 4. Zasady prowadzenia etapu przedanalitycznego. Został wprowadzony w życie 1 stycznia 2010 roku.
3. ISO 15189:2012 Laboratoria medyczne. Wymagania dotyczące jakości i kompetencji"

3. Organizacja procesu transportu biomateriału przez kuriera i odpowiedzialność kuriera.

3.1. Temperatura w lodówce, która jest wskazana na wyświetlaczu w przedziale pasażerskim samochodu, jest odnotowywana przez kuriera w dzienniku „Dziennik rozliczania reżimu temperatur w lodówkach samochodów”, a także w tym dzienniku kurier wskazuje swoje imię i nazwisko, tablicę rejestracyjną samochodu oraz godzinę odjazdu samochodu dla biomateriału bezpośrednio przed wyjazdem do instytucji. Magazyn ten znajduje się w biurze pod numerem ___. (Zdjęcie czujnika temperatury oraz zdjęcie metryki znajduje się w załączniku nr 3).

3.2. Kurier po przybyciu do placówki zdrowia trafia do rejestru tej placówki, gdzie odbiera pojemniki z różnymi biomateriałami. Każdy pojemnik jest oznaczony nazwą instytucji oraz rodzajem biomateriału (krew, mocz, kał, preparaty szklane z wacikami, zeskroby). Kurier umieszcza pojemniki w pozycji poziomej w lodówce maszyny, jak pokazano na zdjęciu.

3.3. Kurier odpowiada za integralność pojemników, ich bezpieczeństwo, za zapewnienie odpowiedniej temperatury w lodówce samochodu (+4 - +8 °C), a także za bezpieczeństwo biomateriału dostarczanego z placówek do laboratorium . Podczas podróży kurier monitoruje temperaturę w lodówce samochodu, która jest wyświetlana na wyświetlaczu zainstalowanym w samochodzie.

4. Akceptacja biomateriału w laboratorium.

4.1 Temperatura, która jest wskazana na wyświetlaczu w lodówce samochodu w momencie wyjmowania pojemników, kurier notuje w czasopiśmie „Dziennik reżimu temperaturowego w lodówkach samochodów” w odpowiedniej kolumnie do numeru stanu samochodu. A także w tym samym dzienniku kierowca wskazuje czas przybycia samochodu z biomateriałem z instytucji.

4.2. Kurier przekazuje oznakowane pojemniki z próbkami krwi, rozmazami i zeskrobkami do ratownika medycznego w sali nr ___.

4.3. Kurier przekazuje oznaczone pojemniki z moczem i kałem asystentowi paramedyczno-laboratoryjnemu w gabinecie nr ___.

4.4. W gabinecie nr ___ ratownik otwiera wieko pojemnika i wyjmuje probówki z krwią, preparaty z rozmazami i zeskrobinami, teczki ze wskazówkami do badań.

4.5. Sanitariusz sortuje probówki z krwią oddzielnie na stojaki, zgodnie z rodzajem probówek (biochemiczne, hematologiczne i koagulologiczne) oraz nazwami instytucji wskazanych na stojakach.

4.6. W sali nr ____ laborant pobiera próbki z pojemnika z moczem, kałem i skierowaniami.

5. Przekazanie biomateriału i skierowań do odpowiednich działów laboratorium.

5.1 W gabinecie nr ____ asystentka paramedyczno-laboratoryjna umieszcza stojaki z probówkami do badań biochemicznych, immunologicznych, koagulologicznych do pojemników oznaczonych „do przenoszenia biomateriału” i przenosi je do pomieszczenia nr ___ w celu odwirowania.

5.2 Asystent laboratorium paramedycznego dzwoni do oddziałów hematologii i PCR w celu pobrania biomateriału przez asystentów laboratorium paramedycznego z poszczególnych oddziałów z sali nr ___

5.3. Asystent ratownika laboratoryjnego wysyła wskazówki na badania z pokoju nr ___ do operatorów w pokoju nr ____ w celu rejestracji.

5.4 W gabinecie nr ___ ratownik-laboratorium przekazuje wskazówki operatorom, którzy rejestrują formularze w tym samym gabinecie.

6. Rejestracja formularzy zamówień przez operatorów.

6.1. Prowadzący w biurze nr ___, po otrzymaniu skierowań od asystenta laboratorium z biura nr ___, rejestrują je w laboratoryjnym systemie informacyjnym.

Procedura rejestracji:

Operator odczytuje kod kreskowy za pomocą skanera naklejonego na formularzu - kierunek;

Następnie operator wprowadza do LIS dane paszportowe pacjenta: imię i nazwisko, datę urodzenia, adres zamieszkania oraz inne dane: źródło zamówienia (obowiązkowe ubezpieczenie zdrowotne, VHI, kasa, badanie lekarskie), numer instytucji, oddział, pełna nazwa lekarz zlecający badanie, diagnoza, kod MES (standard medyczny - ekonomiczny).

Następnie operator wprowadza do LIS te wskaźniki, które przepisał lekarz prowadzący, i zapisuje wygenerowane zamówienie w LIS. Forma-kierunek przedstawia załącznik nr 4.

Wniosek nr 2

W rodzaje niezgodności i ich eliminacja

Rodzaj niezgodności	Opis działań	Wykonawca	Odpowiedzialny
Naruszenie integralności pojemnika	Zgłoś to starszemu asystentowi laboratorium	asystent labolatoryjny	Starszy asystent
Brak skierowań na badania w kontenerze	Asystent paramedyczno-laboratoryjny zgłasza to starszemu asystentowi laboratoryjnemu, który musi skontaktować się telefonicznie ze starszym lekarzem. Siostra tej instytucji	asystent labolatoryjny	Starszy asystent
Wyciek materiału biologicznego do pojemnika	1. Zgłoś to starszemu asystentowi laboratorium 2. Ostrożnie wyjmij całą zawartość z pojemnika 3. Zdezynfekuj sam pojemnik oraz całą zawartość pojemnika, która miała kontakt z rozlanym biomateriałem.	asystent labolatoryjny	Starszy asystent
Uszkodzony kierunek formy (rozdarty, rozlana zawartość pojemnika itp.)	1. Asystent ratownika laboratoryjnego, jeśli wskazówka jest czytelna, przenosi wszystkie informacje do nowej postaci. 2. W przypadku nieczytelnych wskazówek ratownik - asystent laboratoryjny informuje starszego asystenta laboratorium, który kontaktuje się ze starszymi miodem. Siostra instytucji.	asystent labolatoryjny	Starszy asystent
Zepsute slajdy w pojemniku	Asystent paramedyczno-laboratoryjny zgłasza to starszemu asystentowi laboratoryjnemu, który musi skontaktować się telefonicznie ze starszym lekarzem. Siostra tej instytucji i zgłoś tę rozbieżność	asystent labolatoryjny	Starszy asystent

Brak kodu kreskowego na rurze	1. Paramedyczno-laboratoryjny informuje o tym starszego laboranta laboratorium, który musi skontaktować się telefonicznie ze starszym lekarzem. Siostra tej instytucji i zgłosić tę niezgodność. 2. Rozbieżność ta jest wpisywana przez asystenta paramedyczno-laboratoryjnego do rejestru „Rejestracja małżeństwa”	asystent labolatoryjny	Starszy asystent
Formularz-kierunek, wydany w złej formie	1. Asystent ratownika laboratoryjnego zgłasza to starszemu asystentowi laboratorium, który musi skontaktować się telefonicznie ze starszym lekarzem. Siostra tej instytucji 2. Asystent ratownika laboratoryjnego wpisuje tę rozbieżność do rejestru „Rejestracja małżeństwa” 3. Następnego dnia asystent medyczny-asystent laboratoryjny przesyła skierowanie do placówki, z której przyszło, aby lekarz przepisał skierowanie na czytelną formę.	asystent labolatoryjny	Starszy asystent

Wniosek nr 3

czujnik temperatury lodówki maszyny

W tym załączniku przydatne jest również dostarczenie formularza dziennika, który kierowca musi wypełnić.

W kolejnych załącznikach podany jest wzór skierowania itp.

Zasady pobierania próbek krwi w celu określenia mutacji w ludzkich genach Diagnostyka PCR

Krew do diagnostyki PCR. Krew pobiera się na pusty żołądek z żyły łokciowej jednorazową igłą (średnica 0,8-1,1 mm) do jednorazowej strzykawki o objętości 2-5 ml i przenosi do probówki z EDTA lub specjalnym systemem próżniowym „ typu Veccuette” (z EDTA z liliową nakrętką), tuba zamykana jest korkiem i przewraca się kilka razy (do mieszania z antykoagulantem).

Probówkę z krwią przechowuje się w lodówce w temperaturze +4°C do czasu badania. — +8°С. Maksymalny okres trwałości: Krew pobrana do probówki EDTA określić mutacje w genachBRCA1/2, można przechowywać w+4°С — +8°С 2 dni.

Zasady pobierania krwi do oznaczenia PCR - badania infekcji

W celu uzyskania osocza krew pobiera się na pusty żołądek lub 3 godziny po posiłku z żyły łokciowej jednorazową igłą (średnica 0,8-1,1 mm) do specjalnego systemu próżniowego (czapki liliowe - 6% EDTA). Probówkę zamyka się pokrywką i delikatnie kilkakrotnie odwraca się do góry nogami, aby krew w probówce została dokładnie wymieszana z antykoagulantem (w przeciwnym razie krew ulegnie skrzepnięciu i izolacja DNA/RNA stanie się niemożliwa).

Heparyny nie należy stosować jako antykoagulantu!

Warunki przechowywania i transportu materiałów i wstępnie obrobionych próbek

Próbki krwi pełnej: - w temperaturze 20-25ºС - w ciągu 2 godzin; - w temperaturze 2-8ºС - w ciągu 6 godzin od momentu pobrania materiału do ilościowego oznaczenia kwasów nukleinowych; w ciągu 12 godzin - do jakościowego oznaczania kwasów nukleinowych;

Nie zamrażaj próbek krwi pełnej!

Pobieranie próbek materiału do infekcji PCR HPV

Do badań nad HPV potrzebna jest wystarczająca liczba komórek nabłonkowych, ponieważ. wirus jest czynnikiem wewnątrzkomórkowym. Dopuszczalna jest umiarkowana obecność zanieczyszczeń w postaci śluzu szyjkowego i krwi. W niektórych przypadkach możliwe jest pobranie materiału za pomocą uniwersalnej sondy ginekologicznej, jednak w tym przypadku objętość wyładowania skrobakowego będzie mniejsza, a liczba komórek może być niewystarczająca.

Śluz i wydzielinę z pochwy usuwa się z powierzchni szyjki macicy za pomocą sterylnego gazika, część roboczą cytoszczotki wprowadza się do kanału szyjki macicy i wykonuje dwa lub trzy pełne obroty zgodnie z ruchem wskazówek zegara. Cytoszczotkę wyjmuje się, a jej część roboczą zawierającą pobrany materiał umieszcza się w probówce z medium transportowym. Część roboczą cytoszczotki odłamuje się nie więcej niż 1 cm plastikowej podstawy cytoszczotki i pozostawia w probówce z medium transportowym.

Jeżeli nie można odłamać części roboczej cytoszczotki lub sondy uniwersalnej, materiał kliniczny należy jak najdokładniej wypłukać z ich części roboczej do probówki z medium transportowym, dociskając ją do wewnętrznej strony probówki i obracając ją 5-10 razy zgodnie z ruchem wskazówek zegara i przeciwnie do ruchu wskazówek zegara.

Niedopuszczalne jest używanie nożyczek wielorazowych do przecinania części roboczej cytoszczotki lub sondy uniwersalnej – może to prowadzić do zanieczyszczenia krzyżowego materiałem klinicznym i w efekcie do uzyskania wyników fałszywie dodatnich.

Probówki z materiałem biologicznym przechowuje się w zamrażarce w temperaturze -16°C do czasu badania.

Pobieranie próbek materiału do diagnostyki PCR u mężczyzn

skrobanie (rozmaz). Materiał pobierany jest uniwersalną sondą z cewki moczowej. W razie potrzeby materiał do badań pobierany jest z wrzodów narządów płciowych (badanie dla HSV-II). Część roboczą sondy zawierającą badany materiał odcinamy lub odłamujemy i umieszczamy w jednorazowej probówce Eppendorfa z roztworem konserwującym lub dokładnie mieszamy ruchem obrotowym, pozostały płyn na sondzie dociskamy do ścianek probówki , wyjmij sondę (wrzuć ją do pojemnika z roztworem dezynfekującym).

Probówki z materiałem biologicznym przechowuje się w zamrażarce w temperaturze -18°C do czasu badania.

Sperma. Zebrane w jednorazowej suchej probówce typu „Eppendorf”. Maksymalny okres przechowywania to 1 dzień w lodówce w temperaturze +4°C - +8°C; w temperaturze -18°С - -20°С nie dłużej niż 2 tygodnie.

sok prostaty . Po masażu gruczołu krokowego sok w ilości 0,5-1 ml pobiera się do jednorazowej suchej probówki typu Eppendorf. Jeśli nie można uzyskać soku, zaraz po masażu pierwsza porcja moczu (zawierająca sok prostaty) jest pobierana w ilości 10 ml.

Maksymalny okres przechowywania to 1 dzień w lodówce w temperaturze +4°C - +8°C; w temperaturze -18°С - -20°С nie dłużej niż 2 tygodnie.

Prowadzenie badań PCR jest dozwolone w oparciu o istniejące laboratoria, pod warunkiem zorganizowania w laboratorium niezależnych lub wydzielonych obszarów roboczych w ramach innych pomieszczeń funkcjonalnych, odpowiadających etapom analizy PCR.

Laboratorium PCR powinno obejmować następujący minimalny zestaw obszarów roboczych:

• odbiór, rejestracja, analiza i pierwotna obróbka materiału;
• izolacja DNA/RNA;
• przygotowanie mieszanin reakcyjnych i PCR;
• wykrywanie produktów amplifikacji metodą elektroforezy lub HyFA.

Należy zauważyć, że w przypadku stosowania metody nie ma potrzeby wykrywania produktów amplifikacji za pomocą elektroforezy. Dlatego nie można przydzielić obszaru roboczego w laboratorium do elektroforezy.

W laboratoriach PCR konieczne jest również zapewnienie obecności pomieszczeń pomocniczych: archiwum (dla dokumentów księgowych), pomieszczenia socjalnego, gabinetu kierownika, szatni dla pracowników, jadalni, pomieszczeń sanitarnych (toaleta), pomieszczeń gospodarczych (magazyn).

Idealnie powinno być dostępne pomieszczenie autoklawu do odkażania materiału testowego. Może być udostępniany innym wydziałom instytucji, z zastrzeżeniem wymogów bioasekuracji.

Przesłanki do wykonywania prac na etapach analizy PCR powinny być opakowane (pudełka z preboxami). W obszarze odbioru, rejestracji, analizy i pierwotnej obróbki materiału przeprowadzić odbiór materiału, przygotowanie próbki (sortowanie, znakowanie, wirowanie itp.), przechowywanie i pierwotną dezaktywację pozostałości biomateriału środkami dezynfekcyjnymi. Obszar odbioru, rejestracji, analizy i pierwotnej obróbki materiału znajduje się w pomieszczeniu odbioru materiału lub w oddzielnym pomieszczeniu boksowanym. Tutaj możesz również otrzymywać i przetwarzać próbki do badań innymi metodami (na przykład immunologicznymi), pod warunkiem przydzielenia oddzielnego wyposażonego stanowiska do analizy PCR.

Strefa ekstrakcji DNA/RNA umieszczone w oddzielnym pomieszczeniu. Organizując laboratorium PCR w oparciu o istniejące laboratorium, dozwolone jest izolowanie DNA / RNA w pomieszczeniach, w których prowadzone są inne rodzaje badań, z wyjątkiem prac związanych z inżynierią genetyczną. W takim przypadku w pomieszczeniu, w którym znajduje się skrzynka PCR lub skrzynka bezpieczeństwa biologicznego, organizowana jest przestrzeń robocza do ekstrakcji DNA/RNA. Żadne inne prace w polu PCR do ekstrakcji DNA/RNA nie są dozwolone!

W obszarze przygotowania mieszanin reakcyjnych i PCR przygotować mieszaninę PCR, dodać wyizolowane preparaty DNA/RNA lub cDNA do probówki do PCR, odwrotną transkrypcję RNA i amplifikację DNA lub cDNA. Pomieszczenie do przygotowania mieszanin reakcyjnych i PCR powinno być oddzielne. Przygotowanie mieszanin reakcyjnych do PCR odbywa się w skrzynce do PCR.

W razie potrzeby etap izolacji DNA/RNA można połączyć w tym samym pomieszczeniu z etapem przygotowania mieszanin reakcyjnych i PCR, jeśli posiada oddzielne skrzynki do PCR - do przygotowania mieszanin reakcyjnych do PCR oraz do izolacji DNA/RNA.

Strefa wykrywania produktów amplifikacji umieścić w osobnym pomieszczeniu, w miarę możliwości wyposażonym w pudełko do PCR. W przypadku konieczności jednoczesnego stosowania metody elektroforezy i metody analizy hybrydyzacyjnej do wykrywania produktów amplifikacji należy wydzielić osobny obszar roboczy w pomieszczeniu detekcji do analizy hybrydyzacyjnej. W takim przypadku sprzęt i akcesoria dla każdego typu detekcji są oznaczone dla każdej strefy. Do analizy hybrydyzacyjnej nie wolno używać pipet i szalek przeznaczonych do elektroforezy.

Decyzje planistyczne i rozmieszczenie sprzętu powinny zapewnić przepływ ruchu badanego materiału. Wymiana powietrza między pomieszczeniem do wykrywania produktów wzmacniających a innymi pomieszczeniami powinna być całkowicie wykluczona.

Laboratorium PCR będzie wyposażone w instalacje wodno-kanalizacyjne, elektryczne i grzewcze. Wszystkie pomieszczenia laboratorium PCR są wyposażone w wystarczające oświetlenie naturalne i sztuczne.

Podczas budowy nowych lub przebudowy istniejących laboratoriów PCR pomieszczenia wyposaża się w wentylację nawiewno-wywiewną lub wywiewną. Różnicę ciśnienia powietrza w pomieszczeniach laboratorium PCR osiąga się z powodu różnic w kursie wymiany powietrza w nich. Kurs wymiany powietrza musi odpowiadać wartościom podanym w tabeli:

W razie potrzeby w laboratorium PCR można zainstalować klimatyzatory.

Wystrój wnętrz lokali realizowany jest zgodnie z ich przeznaczeniem użytkowym. Powierzchnie ścian, podłóg i sufitów w pomieszczeniach laboratoryjnych powinny być gładkie, bez pęknięć, łatwe w obróbce, odporne na detergenty i środki dezynfekujące. Podłogi nie mogą być śliskie. Meble laboratoryjne powinny mieć powłokę odporną na detergenty i środki dezynfekujące. Powierzchnia stołów nie powinna mieć pęknięć i szwów. Pomieszczenia laboratoryjne muszą być nieprzepuszczalne dla gryzoni i owadów. Laboratorium PCR wyposażone jest w sprzęt gaśniczy.