Gen mühəndisliyi ilə interferonun alınması. İnsan immun interferonunun alınması üsulu. Mikotoksinlər və antibiotiklər
10267 0
Somatotropinin və digər insan hormonlarının biosintezi
İnsan böyümə hormonu və ya somatotropin insan beynində ön hipofiz vəzində sintez olunur. O, ilk dəfə cəsəd materialından təcrid olunmuş və 1963-cü ildə təmizlənmişdir. Böyümə hormonunun çatışmazlığı ilə hipofiz cırtdanlığı inkişaf edir, tezliyi hər milyon adama 7-10 hal kimi qiymətləndirilir.Hormon növə xasdır, yəni insulindən fərqli olaraq heyvanların böyümə hormonları insan orqanizmində heç bir fəaliyyət göstərmir. Buna görə də hipofiz cırtdanlığının yeganə müalicəsi meyitlərdən təcrid olunmuş hipofiz hormonudur. Tədqiqatlar göstərir ki, somatotropinin bir il ərzində 1 kq bədən çəkisi üçün 10 mq dozada əzələdaxili yeridilməsi ilə həftədə üç enjeksiyon ildə təxminən 8-18 sm artım verir.
Dörd-beş yaş arası xəstə uşaqlar, davamlı müalicə ilə, yetkinlik yaşına (14-16 yaş) qədər böyüyürlər. Bir meyitdən 4-6 mq somatotropinin alına biləcəyini nəzərə alsaq, o zaman bu xəstəliyin təbii somatotropinlə müalicəsinin tamamilə ümidsiz olduğunu başa düşə bilərik. Dərmanın olmaması ilə yanaşı, kadavra materialından təcrid olunmuş hormonun heterojenliyi ilə bağlı digər problemlər də var idi.
Hipofiz bezinin yavaş-yavaş inkişaf edən viruslarla yoluxması təhlükəsi də var idi. Bu cür virusların qeyri-adi uzun inkubasiya dövrü var, buna görə də dərman qəbul edən uşaqlar uzun illər tibbi nəzarətə ehtiyac duydular.
Xüsusi hazırlanmış bakteriya hüceyrələrində sintez edilən insan böyümə hormonu aşkar üstünlüklərə malikdir: böyük miqdarda mövcuddur, onun preparatları biokimyəvi cəhətdən təmizdir və viral çirklənmədən azaddır.
Escherichia coli əsasında xüsusi hazırlanmış bakteriyalar tərəfindən somatotropinin (191 amin turşusu qalığından ibarət) biosintezi Genentech şirkəti tərəfindən həyata keçirilib. mRNT üçün DNT sintezi zamanı bakterial hüceyrələrdə parçalanmayan somatotropin prekursorunu kodlaşdıran gen əldə edildiyindən, biz aşağıdakı kimi hərəkət etdik: 1-ci mərhələdə mRNT-nin ikiqat zəncirli DNT surəti. klonlaşdırıldı və məhdudlaşdırıcı endonükleazlarla həzm yolu ilə ilk 23 amin turşusu istisna olmaqla, hormonun bütün amin turşusu ardıcıllığını kodlayan ardıcıllıq əldə edildi. Sonra 1-dən 23-ə qədər amin turşularına uyğun olan sintetik polinükleotidin klonlanması. Sonra, iki fraqment birlikdə birləşdirildi və E. coli plazmidinə "tənzim olundu", bundan sonra bakteriya hüceyrələri bu hormonu sintez etməyə başladı.
1980-ci ilə qədər dərman və toksiklik testlərinin klinik sınaqları tamamlandı və yetkinlik yaşına yaxın olan uşaqlar üzərində kütləvi eksperimentlərə başlandı. Nəticələr ümidverici idi və 1982-ci ildən sintetik böyümə hormonu sənaye miqyasında istehsal olunmağa başladı.
Başqa bir hormon, β-endorfin, 31 amin turşulu beyin opiatı, gen mühəndisliyi ilə hazırlanmış E. coli hüceyrələrində sintez edilmişdir. 1980-ci ildə avstraliyalı alim Şayn və amerikalı alimlər Fettes, Lan və Baxter E.ooli hüceyrələrində β-endorfini kodlayan DNT-ni uğurla klonladılar və bu polipeptidi β-qalaktosidaza fermenti ilə birləşmə zülalı kimi əldə etdilər. Birinci mərhələdə onlar β-endorfini kodlayan mRNT-nin tərs transkripsiyası nəticəsində əldə edilən DNT fraqmentini klonladılar və daha sonra onu β-qalaktosidaza geninin arxasındakı E.coli plazmidinə daxil edərək, β-dən ibarət hibrid zülal əldə etdilər. galaktosidaza və - endorfin; daha sonra, β-qalaktosidaza fermentativ olaraq parçalandı və bioloji aktiv β-endorfin əldə edildi.
İnterferonların alınması
Gen mühəndisliyinin digər diqqətəlayiq nailiyyəti interferonun sintezidir.İnterferon ilk dəfə 1957-ci ildə London yaxınlığındakı Milli Tibbi Araşdırmalar İnstitutunda əldə edilmişdir. Bu, viruslar orqanizmə daxil olduqda heyvan və insan hüceyrələri tərəfindən çox az miqdarda ayrılan və onlarla mübarizə məqsədi daşıyan zülaldır. İlk tədqiqatlar qrip, hepatit və hətta xərçəngin müalicəsində interferonun yüksək bioloji aktivliyini aşkar etdi (anormal hüceyrələrin çoxalmasını boğur).
İnterferon, somatotropin kimi, növ spesifikliyinə malikdir: heyvan interferonları insan orqanizmində qeyri-aktivdir və hətta ondan rədd edilir.
İnsan orqanizmi bir neçə növ interferon istehsal edir: leykosit (a), fibroblast (P) və immun (y) (T-limfositik).
Təbii interferonlar insan qanından son dərəcə aşağı məhsuldarlıqla alınır: 1978-ci ildə Helsinkidəki Mərkəzi Sağlamlıq Laboratoriyasında (o dövrdə leykosit interferon istehsalında dünya lideri idi) 50 min litr sudan 0,1 q təmiz interferon alınmışdır. qan.
İnterferonların alınması prosesi mədəniyyətlərdə yetişdirilən və interferon əmələ gətirən bütün növ hüceyrələr üçün əsasən eyni idi. Qan hüceyrələri Sendai virusu ilə yoluxmuş və 24 saatdan sonra supersentrifuqada süzülmüşdür. Supernatantda xromatoqrafik təmizlənməyə məruz qalmış xam interferon preparatı var idi.
Dərmanın qiyməti çox yüksək idi - 400 q interferon 2,2 milyard dollara başa gəldi. Bununla belə, onun farmakoloji istifadəsinin (o cümlədən dörd növ xərçəngə qarşı) vəd edilməsi onu ilk növbədə gen mühəndisliyinin köməyi ilə əldə etməyin yeni yollarını axtarmağı zəruri etdi.
1980-ci ilin yanvarında insan interferonu gen mühəndisliyi ilə yaradılmış E.coli hüceyrələrində əldə edilmişdir. Bu üsulların ilkin çətinliyi, interferon mRNT-nin hətta virus infeksiyası ilə stimullaşdırılan leykositlərdə də az olması və məhsuldarlığın çox aşağı olması idi: hər bakteriya hüceyrəsinə 1-2 interferon molekulu olduğu bildirildi.
1981-ci ildə Genentech şirkəti y-interferonu kodlayan rekombinant DNT dizaynını hazırlamağa və onu bakteriyaların, mayaların və hətta məməlilərin hüceyrələrinin genomuna daxil etməyə müvəffəq oldu və onlar yüksək məhsuldarlıqla - 1 litr maya hüceyrə kulturası ilə interferonu sintez edə bildilər. 1 milyon vahid interferon (interferon vahidi mədəniyyətdəki hüceyrələrin 50% -ni virusla infeksiyadan qoruyan belə bir məbləğə uyğundur). Proses aşağıdakı kimi aparıldı: tədqiqatçılar insan limfositlərindən mRNT molekullarının qarışığını təcrid etdilər, müvafiq DNT nüsxələrinin molekullarını əldə etdilər və onları E.coli hüceyrələrinə daxil etdilər. Sonra interferon istehsal edən bakteriyalar seçildi.
İmmunogen preparatların və peyvəndlərin alınması
Genetik mühəndisliyin başqa bir tətbiq sahəsi yeni effektiv, təhlükəsiz və ucuz vaksinlərin istehsalı ilə bağlıdır.Peyvəndlər tibbin ən mühüm nailiyyətlərindən biridir və onların istifadəsi həm də iqtisadi baxımdan son dərəcə effektivdir. Son illərdə vaksinlərin hazırlanmasına xüsusi diqqət yetirilir. Bu onunla əlaqədardır ki, indiyədək bir çox ümumi və ya təhlükəli yoluxucu xəstəliklərin qarşısını almaq üçün yüksək effektli vaksinlər əldə etmək mümkün olmayıb.
Əvvəllər yoluxucu hesab edilməyən xəstəliklərin inkişafında patogen mikroorqanizmlərin rolu müəyyən edildikdən sonra peyvəndlərə maraq artdı. Məsələn, qastrit, mədə və duodenal xoralar, qaraciyərin bədxassəli yenitörəmələri (hepatit B və C virusları).
Buna görə də son 10-15 ildə bir çox ölkələrin hökumətləri prinsipial olaraq yeni vaksinlərin intensiv inkişafı və istehsalına yönəlmiş tədbirlər görməyə başladılar.
Bu gün istifadə olunan peyvəndlər hazırlanma üsullarından asılı olaraq aşağıdakı növlərə bölünə bilər:
- canlı zəiflədilmiş peyvəndlər;
- təsirsizləşdirilmiş vaksinlər;
- tərkibində mikroorqanizmlərin təmizlənmiş komponentləri (zülallar və ya polisaxaridlər) olan vaksinlər;
- gen mühəndisliyi ilə alınmış mikroorqanizmlərin komponentlərini ehtiva edən rekombinant vaksinlər
Rekombinant DNT texnologiyası həmçinin patogenin virulent zülallarını kodlayan genlərin yönəldilmiş mutasiyası ilə zəifləməyə nail olan canlı zəifləmiş vaksinlərin yeni növünü yaratmaq üçün də istifadə olunur. Eyni texnologiya, immunogen zülalları kodlayan genləri insanlara yeridilmiş canlı qeyri-patogen viruslara və ya bakteriyalara (vektorlara) daxil etməklə canlı rekombinant vaksinlərin istehsalı üçün də istifadə olunur.
DNT vaksinlərindən istifadə prinsipi ondan ibarətdir ki, xəstənin orqanizminə patogen mikroorqanizmin immunogen zülallarını kodlayan genləri ehtiva edən DNT molekulu daxil edilir. DNT vaksinləri başqa cür gen və ya genetik adlanır.
DNT vaksinlərini əldə etmək üçün mikroorqanizmin immunogen zülalının istehsalını kodlayan gen bakterial plazmidə daxil edilir. Peyvənd zülalını kodlayan genlə yanaşı, zülal sintezini təmin etmək üçün insanlar da daxil olmaqla, eukaryotik hüceyrələrdə bu genin ifadəsi (“işə keçmək”) üçün zəruri olan genetik elementlər plazmidə daxil edilir. Belə plazmid çoxlu sayda nüsxə əldə etmək üçün bakteriya hüceyrələrinin mədəniyyətinə daxil edilir.
Sonra plazmid DNT bakteriyalardan təcrid olunur, digər DNT molekullarından və çirklərdən təmizlənir. Təmizlənmiş DNT molekulu vaksin rolunu oynayır. DNT peyvəndinin tətbiqi peyvənd edilmiş orqanizmin hüceyrələri tərəfindən xarici zülalların sintezini təmin edir, bu da müvafiq patogenə qarşı immunitetin sonrakı inkişafına səbəb olur. Eyni zamanda, müvafiq geni ehtiva edən plazmidlər insan xromosomlarının DNT-sinə inteqrasiya etmir.
DNT vaksinləri adi peyvəndlərə nisbətən bir sıra üstünlüklərə malikdir:
- viral zülalların yerli molekuluna antikorların istehsalına töhfə vermək;
- sitotoksik T-limfositlərin istehsalına töhfə vermək;
- T-limfositlərin müxtəlif subpopulyasiyalarına selektiv təsir göstərə bilər;
- uzunmüddətli toxunulmazlığın formalaşmasına töhfə vermək;
- infeksiya riskini aradan qaldırın.
L.V. Timoşenko, M.V. Çubik
İnterferonlar viral infeksiyaya və ya digər patogenlərə cavab olaraq hüceyrələr tərəfindən istehsal olunan və ifraz olunan 15.000-21.000 dalton molekulyar çəkisi olan zülal molekullarıdır.
İnterferonlar (IFN) - təsir biomexanizmi eyni vaxtda antiviral təsir göstərən bir qrup avtogen qlikoproteinlər - hüceyrə genlərinin aktivləşdirilməsi, viral DNT (RNT) sintezini maneə törədən və immunomodulyatora malik olan zülalların sintezi ilə nəticələnir. təsir - hüceyrə membranlarında antigenlərin ifadəsini artırmaq və sitotoksik T hüceyrələrinin və təbii qatil hüceyrələrinin fəaliyyətini artırmaq qabiliyyəti.
IFN-lər iki növə bölünür. Virus replikasiyasının inhibitorları kimi çıxış edən və əsasən antiviral təsirə malik olan birinci növə 22 müxtəlif IFN-α və bir alt tip IFN-β daxildir. İmmunomodulyator fəaliyyət göstərən ikinci növə IFN-γ daxildir.
IFN-nin immunoloji cəhətdən fərqlənən üç sinfi var: IFN-α, IFN-β, IFN-γ.
Təbii olaraq yaranan İFN-ə müvafiq olaraq stimullaşdırılmış insan monositləri və B-limfositləri tərəfindən sintez edilən limfoblastoid və leykosit İFN (IFN-α) daxildir, sonra onlar çıxarılır və təmizlənir; İnsan fibroblast mədəniyyətindən əldə edilən fibroblastik İFN (IFN-β) və T-limfositik İFN (IFN-γ).
Süni şəkildə sintez edilmiş IFN-ə rekombinant molekulyar texnologiya ilə əldə edilmiş yüksək təmizlənmiş IFN-α-nın tək alt növü olan rekombinant IFN-α daxildir.
Viruslar və digər induktorlar tərəfindən törədilən insan leykositlərindən insan leykosit interferonunun istehsalı üçün məlum üsullar.
İnterferonların istehsalı üçün bu üsulların əsas çatışmazlığı son məhsulun hepatit B və C virusu, immun çatışmazlığı virusu və s. kimi insan virusları ilə çirklənmə ehtimalıdır.
Hazırda mikrobioloji sintez yolu ilə interferonun alınması üsulu daha perspektivli hesab olunur ki, bu da nisbətən ucuz xammaldan daha yüksək məhsulla hədəf məhsulu əldə etməyə imkan verir. Bu halda istifadə olunan yanaşmalar struktur genin bakterial ifadə üçün optimal variantlarını, həmçinin onun ifadəsini idarə edən tənzimləyici elementləri yaratmağa imkan verir.
İlkin mikroorqanizmlər kimi Pichia pastoris, Pseudomonas putida və Escherichia coli suşlarının müxtəlif dizaynlarından istifadə olunur.
P. pastorisin interferon istehsalçısı kimi istifadə edilməsinin dezavantajı bu növ maya üçün son dərəcə çətin fermentasiya şərtləri, biosintez zamanı induktorun, xüsusən də metanolun konsentrasiyasını ciddi şəkildə saxlamaq ehtiyacıdır.
Ps ştammlarının istifadəsinin dezavantajı. putida aşağı ifadə səviyyəsində fermentasiya prosesinin mürəkkəbliyidir (1 litr mədəniyyət mühitinə 10 mq interferon). Escherichia coli suşlarının istifadəsi daha məhsuldardır.
Çoxlu sayda plazmidlər və interferon ifadə edən E. coli ştammları məlumdur: E. coli ştammları Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 və ya Z-pBR 322(Pstl)/HclN SN35 plazmidləri olan ATCC 31633 və 31644 ştammları AHL6 (SU 1764515), E. coli ştammı pINF-AP2 (SU 1312961), E. coli ştammı pINF-F-Pa (AU 1312962), p280/21FN plazmidli E. coli ştammı SG 20050 (Kravchenko et al.Vganor. kimya, 1987, cild 13, № 9, səh. 1186-1193), pINF14 plazmidli E. coli SG 20050 ştammı (SU 1703691), pINF16 plazmidi olan E. coli SG 20050 ştammı (RU0420 və s.) Bu suşların istifadəsinə əsaslanan texnologiyaların dezavantajı onların qeyri-sabitliyi, həmçinin interferon ifadəsinin qeyri-kafi səviyyədə olmasıdır.
İstifadə olunan suşların xüsusiyyətləri ilə yanaşı, prosesin səmərəliliyi əsasən interferonun izolyasiyası və təmizlənməsi üçün istifadə olunan texnologiyadan asılıdır.
Ps hüceyrələrinin yetişdirilməsini əhatə edən interferon istehsalı üçün məlum bir üsul. çürük, biokütlənin məhv edilməsi, polietileniminlə müalicə, ammonium sulfat fraksiyalaşdırılması, fenilsiloxrom C-80-də hidrofobik xromatoqrafiya, lizatın pH fraksiyalanması, onun konsentrasiyası və diafiltrasiya, DE-52 sellülozasında ion mübadiləsi xromatoqrafiyası, xromatın qradiyenti xromatoqrafiyası, nəticədə CM sellülozunda eluent -52, filtr kasetindən keçməklə konsentrasiya və Sephadex G-100 (SU 1640996) üzərində gel filtrasiyası. Bu metodun dezavantajı, mürəkkəb çoxmərhələli fermentasiya ilə yanaşı, son məhsulun əldə edilməsində çox mərhələli prosesdir.
İnterferon istehsalı üçün E. coli SG 20050/pIF16 ştammının LB bulyonunda termostatlı çalkalayıcıda kolbalarda becərilməsi, biokütlənin sentrifuqalanması, bufer məhlulu ilə yuyulması və hüceyrələri məhv etmək üçün sonikasiyadan ibarət bir üsul da məlumdur. Nəticədə lizat sentrifuqalanır, buferdə 3 M karbamid ilə yuyulur, buferdə guanidin xloriddə həll edilir, sonikasiya edilir, sentrifuqalanır, oksidləşdirici sulfitoliz, 8 M karbamidə qarşı dializ, renaturasiya və CM-52-də son iki mərhələli xromatoqrafiya aparılır. -50 (RU 2054041).
Bu metodun çatışmazlıqları izolyasiya və təmizləmə prosesinin əsas mərhələlərinin nisbətən aşağı məhsuldarlığıdır. Xüsusilə, bu, interferonun məhsuldarlığında qeyri-sabitliyə, həmçinin interferonun sənaye istehsalı üçün bu üsuldan istifadənin qeyri-mümkünlüyünə səbəb olan məhsulun ultrasəs emalı, dializ və oksidləşdirici sulfitolizə aiddir.
Ən yaxın analoq (prototip) kimi insan leykosit interferonunun alınması üsulu göstərilə bilər ki, bu da rekombinant E. coli ştamının becərilməsi, yaranan biokütlənin -70 ° C-dən çox olmayan temperaturda dondurulması, əriməsi, mikroorqanizm hüceyrələrinin məhv edilməsindən ibarətdir. lizozim, DNaz lizatına daxil etməklə DNT və RNT-nin çıxarılması və interferonun təcrid olunmuş həll olunmayan formasının yuyucu vasitələrlə bufer məhlulu ilə yuyulması, interferonun çöküntüsünün guanidin hidroxlorid məhlulunda həll edilməsi, renaturasiya və birdəfəlik təmizlənməsi. - mübadilə xromatoqrafiyası. İstehsalçı olaraq, üç promotoru olan rekombinant pSS5 plazmidindən istifadə etməklə əldə edilmiş E. coli SS5 ştammı və təqdim edilmiş nukleotid əvəzediciləri ilə alfa-interferon geni istifadə olunur.
Bu plazmidi ehtiva edən E. coli SS5 ştammı tərəfindən interferonun ifadəsi üç promotor tərəfindən idarə olunur: Plac, Pt7 və Ptrp. İnterferonun ifadə səviyyəsi 1 litr hüceyrə süspansiyonu üçün təxminən 800 mq təşkil edir.
Bu metodun dezavantajı hüceyrələrin, mikroorqanizmin DNT və RNT-nin fermentativ məhv edilməsinin və interferonun bir mərhələli xromatoqrafik təmizlənməsinin istifadəsinin aşağı istehsal qabiliyyətidir. Bu, interferonun təcrid prosesinin qeyri-sabitliyinə səbəb olur, keyfiyyətinin azalmasına səbəb olur və interferonun sənaye istehsalı üçün yuxarıda göstərilən sxemdən istifadə imkanlarını məhdudlaşdırır.
Bu plazmidin və ona əsaslanan ştamın çatışmazlıqları E. coli BL21 (DE3) ştammında güclü tənzimlənməmiş T7 faq promotorunun plazmiddə istifadəsidir ki, burada T7 RNT polimeraza geni lak operon promotorunun altındadır və hansı həmişə "axır". Nəticədə interferonun sintezi hüceyrədə davamlı olaraq baş verir ki, bu da plazmidin dissosiasiyasına və ştamın hüceyrələrinin həyat qabiliyyətinin azalmasına və nəticədə interferonun məhsuldarlığının azalmasına səbəb olur.
Böyük miqdarda IFN əldə etmək üçün cücə embrion hüceyrələrinin altı günlük bir qatlı kulturalarından və ya müəyyən bir virus növü ilə yoluxmuş mədəni insan qan leykositlərindən istifadə olunur. Başqa sözlə desək, IFN əldə etmək üçün xüsusi virus-hüceyrə sistemi yaradılır.
IFN-nin biosintezindən məsul olan gen insan hüceyrəsindən təcrid olunub. Ekzogen insan İFN rekombinant DNT texnologiyasından istifadə etməklə əldə edilir. IFN-lərin cDNA-nın təcrid edilməsi proseduru aşağıdakı kimidir:
1) mRNT insan leykositlərindən təcrid olunur, ölçüsünə görə fraksiyalaşdırılır, əks transkripsiya aparılır və dəyişdirilmiş plazmidin yerinə daxil edilir.
2) Nəticədə məhsul E.coli-yə çevrilir; əldə edilən klonlar müəyyən edilən qruplara bölünür.
3) IFN - mRNA ilə hibridləşdirilmiş klonların hər bir qrupu.
4) Tərkibində cDNA və xRNA olan hibridlərdən mRNA təcrid olunur, zülal sintezi sistemində tərcümə olunur.
5) Tərcümə nəticəsində yaranan hər bir qarışığın interferon antiviral aktivliyini təyin edin. İnterferon fəaliyyəti göstərən qruplar IFN - mRNA ilə hibridləşdirilmiş cDNA klonu ehtiva edir; tam uzunluqlu IFN - insan cDNA-sını ehtiva edən klonu yenidən müəyyən edin.
2. İnterferonların təsir mexanizmləri
IFN-lər limfokinlər və immunomodulyatorlar kimi bəzi fəaliyyət növləri nümayiş etdirirlər. Əsasən hüceyrədə virus replikasiyasının inhibitorları kimi fəaliyyət göstərən I tip IFN-lər virusların istehsalını maneə törədən, viral mRNT-nin tərcüməsini və sintezini pozan ev sahibi hüceyrələrin ribosomları tərəfindən hüceyrə fermentlərinin istehsalını stimullaşdırmaqla öz təsirini həyata keçirirlər. viral zülallar.
IFN əksər heyvan növləri tərəfindən istehsal olunur, lakin onların fəaliyyətinin təzahürü növə xasdır, yəni. onlar yalnız istehsal olunduqları heyvan növlərində fəaliyyət göstərirlər.
IFN üç fermentin induksiyasına səbəb olur:
peptid zəncirinin qurulmasının ilkin mərhələsini pozan protein kinaz;
viral RNT-ni məhv edən RNaz-ı aktivləşdirən oliqoizoadenilat sintetaza;
tRNT-nin terminal nukleotidlərini məhv edən fosfodiesteraza, peptid uzanmasının pozulmasına səbəb olur.
IFN-nin antiviral və immunomodulyator təsirini nəzərə alaraq, NPO Biomed viral və bakterial etiologiyalı disbakteriozun, kandidozun müalicəsində IFNn1 və probiotiklərlə süpozituarları təklif etmiş və uğurla sınaqdan keçirmişdir; endometrit, kolpit, vaginit və ginekoloji herpesin müalicəsi üçün ginekoloji praktikada.
3. İnsan INF-nin terapevtik tətbiqi
İnterferon preparatlarının iki nəsli var. Birinci nəsil donorların qanından əldə edildiyi təbii mənşəli ilə xarakterizə olunur. Ondan quru insan leykosit interferonu əldə edilir, bu da burun keçidlərinə inhalyasiya və damcılama üçün istifadə olunur. Onlar həmçinin süpozituarlarda interferon, təmizlənmiş konsentratlaşdırılmış quru interferon və leykinferon istehsal edirlər.
İnterferona əsaslanan preparatların əldə edilməsinin bu üsulu olduqca bahalı və əlçatmazdır, buna görə də 20-ci əsrin sonlarında gen mühəndisliyi ilə ikinci nəsil interferon preparatları yaradıldı.
Beləliklə, tərkibində rekombinant insan interferonu olan alfa-interferon olan Viferon, Interal və digər dərmanları hazırlamaq mümkün oldu.
Unikal xassələrinə görə interferon preparatları bütün tənəffüs xəstəliklərinin, əksər xərçəng xəstəliklərinin müalicəsində və profilaktikasında, bir çox virus xəstəliklərinin və qripin müalicəsində istifadə olunur. İnterferon preparatları hepatit B və C-nin müalicəsində geniş istifadə olunur: interferon virusun inkişafını məhdudlaşdırır, sirrozun yaranmasının qarşısını alır və ölümü aradan qaldırır.
Bəzi interferon preparatları dəri döküntüləri, allergiya və hematopoietik sistemin xəstəlikləri kimi yan təsirlərə malikdir.
İnterferonun uzun müddət istifadəsi ilə bədəndə interferona qarşı antikorlar istehsal olunur ki, bu da onu viruslarla mübarizə apara bilmir. Bu hadisələrin səbəbi interferona əsaslanan preparatlarda albuminin olmasıdır.
Albumin qandan alınır, ona görə də qanla keçən hepatit və digər xəstəliklərə yoluxma riski (minimum olsa da) var.
|
Dərmanın adı |
INF alt növü |
Necə əldə etmək olar |
farmakoloji təsir göstərir |
İstifadəyə göstərişlər |
||||
|
İnterferon |
Virusların təsiri altında donor qan leykositlərinin mədəniyyətində biosintez |
Antiviral, immunomodulyator, antiproliferativ |
Viral xəstəliklər, leykemiya, bədxassəli melanoma, böyrək xərçəngi, karsinoid sindrom |
|||||
|
Kilidləmə |
Paramikovirusların təsiri altında donor qan leykositlərinin mədəniyyətində biosintez |
Bir sıra virusların fəaliyyətini boğur |
Viral göz xəstəlikləri, hepatit |
Rekombinant |
Antiviral, immunomodulyator, şiş hüceyrələrinin geniş spektrinin yayılmasını maneə törədir |
Kəskin və təkrarlanan viral göz infeksiyasının epitel forması; onkoloji xəstəliklər |
||
|
İnterferon alfa-2a |
Rekombinant. 165 amin turşusu olan zülal |
Antiviral, antitümör fəaliyyət |
Leykemik retikuloendoteloz, Kaposi sarkoması, böyrək xərçəngi, sidik kisəsi xərçəngi, melanoma, herpes zoster |
|||||
|
Reaferon |
İnsan leykosit IFNα2 geni daxil edilən genetik aparatına Pseudomonas bakteriya ştammı tərəfindən istehsal olunan rekombinant İFN. İnsan leykosit IFN α2 ilə eynidir. |
Viral, şiş xəstəlikləri |
||||||
|
İnterferon alfa - n1 |
Yüksək təmizlənmiş insan INF |
Antiviral |
Xroniki aktiv yoluxucu hepatit B |
|||||
|
Inreferon beta |
Metabolik proseslərin inhibitorlarının iştirakı ilə bir stimulyator tərəfindən insan fibroblastlarının super istehsalı |
Antiviral, immunomodulyator, antitümör fəaliyyət |
Oftalmologiya, ginekologiya və urologiya, dermatologiya, hepatologiya, onkologiyada xroniki virus infeksiyaları |
|||||
|
İnterferon qamması |
Rekombinant |
Antiviral, immunomodulyator, antitümör fəaliyyət |
Xroniki qranulomatoz xəstəliklər |
1. www.antibiotic.ru/ab/brviri.shtml
2. www.interferon.su/php/content.php?id=71
3. www.pharmvestnik.ru
4. Müvəqqəti farmakopeya məqaləsi 42U-23/60-439-97. İnterferon insan rekombinant alfa-iki.
5. Qavrikov A.V. Rekombinant insan interferonlarının maddələrinin biotexnoloji istehsalının optimallaşdırılması.- M., 2003,
6. Glick B., Pasternak J. Molecular biotechnology / B. Glick, J. Pasternak. - M., Mir, 2002.
7. SSRİ Dövlət Farmakopeyası. XI nəşr, buraxılış 1.- S. 175.
8. Dərman vasitələrinin dövlət reyestri / Ed. A.V. Katlinsky və başqaları - M., 2002.
9. Naroditsky B.S. İnterferonların molekulyar biotexnologiyası. // "İnterferon - 50 il" elmi-praktik konfransın toplusu. - M., 2007, s. 17-23
10. Əczaçılıq biotexnologiyasının əsasları: Dərslik / T.P. Prişçep, V.S. Çuçalin, K.L. Zaikov, L.K. Mixalev. - Rostov-na-Donu.: Feniks; Tomsk: NTL nəşriyyatı, 2006.
11. Frolov A.F., Vovk A.D., Dyadyun S.T. Viral hepatit B-də rekombinant alfa-iki-interferonun effektivliyi //Tibbi biznes.- Kiyev, 1990.- No. 9.- S. 105-108.
İnterferonlar- viral infeksiyaya və digər stimullara cavab olaraq hüceyrələr tərəfindən istehsal olunan qlikoproteinlər. Onlar virusun digər hüceyrələrdə çoxalmasını maneə törədir və immun sisteminin hüceyrələrinin qarşılıqlı təsirində iştirak edirlər. İnterferonların iki seroloji qrupu var: tip I - IFN-α və IFN-β; II tip - IFN-.γ Tip I interferonlar antiviral və antitümör təsir göstərir, II tip interferon isə spesifik immun cavabı və qeyri-spesifik müqaviməti tənzimləyir.
α-interferon (leykosit) viruslar və digər agentlərlə müalicə olunan leykositlər tərəfindən istehsal olunur. β-interferon (fibroblast) virusla müalicə olunan fibroblastlar tərəfindən istehsal olunur.
Tip I IFN sağlam hüceyrələrə bağlanır və onları viruslardan qoruyur. I tip IFN-nin antiviral təsiri həm də amin turşularının sintezinə müdaxilə edərək hüceyrə proliferasiyasını maneə törədə bilməsi ilə bağlı ola bilər.
IFN-γ T-limfositlər və NK tərəfindən istehsal olunur. T- və B-limfositlərin, monositlərin / makrofaqların və neytrofillərin fəaliyyətini stimullaşdırır. Aktivləşdirilmiş makrofaqların, keratinositlərin, hepatositlərin, sümük iliyi hüceyrələrinin, endoteliyositlərin apoptozunu induksiya edir və periferik monositlərin və herpeslə yoluxmuş neyronların apoptozunu boğur.
Genetik olaraq hazırlanmış leykosit interferon prokaryotik sistemlərdə (E. coli) istehsal olunur. Leykosit interferon istehsalı üçün biotexnologiya aşağıdakı mərhələləri əhatə edir: 1) leykosit kütləsinin interferon induktorları ilə müalicəsi; 2) müalicə olunan hüceyrələrdən mRNT qarışığının təcrid edilməsi; 3) əks transkriptazadan istifadə edərək ümumi tamamlayıcı DNT əldə etmək; 4) cDNT-nin Escherichia coli plazmidinə daxil edilməsi və onun klonlaşdırılması; 5) interferon genləri olan klonların seçilməsi; 6) genin uğurlu transkripsiyası üçün güclü promotorun plazmidinə daxil edilməsi; 7) interferon geninin ifadəsi, yəni. müvafiq zülalın sintezi; 8) prokaryotik hüceyrələrin məhv edilməsi və yaxınlıq xromatoqrafiyasından istifadə edərək interferonun təmizlənməsi.
İnterferonlar müraciət edin bir sıra viral infeksiyaların qarşısının alınması və müalicəsi üçün. Onların təsiri dərmanın dozası ilə müəyyən edilir, lakin yüksək dozada interferon zəhərli təsir göstərir. İnterferonlar qrip və digər kəskin respirator xəstəliklər üçün geniş istifadə olunur. Dərman xəstəliyin erkən mərhələlərində təsirli olur, yerli tətbiq olunur. İnterferonlar hepatit B, herpes, həmçinin bədxassəli yenitörəmələrdə terapevtik təsir göstərir.
İnterferon immun sisteminin mühüm qoruyucu zülallarından biridir. Bu, virusların müdaxiləsini, yəni bir virusa yoluxmuş heyvanların və ya hüceyrə mədəniyyətlərinin başqa bir virusla yoluxmaya həssas olmadığı fenomenini öyrənərkən aşkar edilmişdir. Məlum olub ki, müdaxilə qoruyucu antiviral xüsusiyyətə malik olan nəticədə yaranan zülalla bağlıdır. Bu protein interferon adlandırıldı.
İnterferon immun sisteminin hüceyrələri və birləşdirici toxuma tərəfindən sintez edilən qlikoprotein zülalları ailəsidir. Hansı hüceyrələrin interferonu sintez etməsindən asılı olaraq, üç növ var: α, β və γ-interferonlar.
Alfa interferon leykositlər tərəfindən istehsal olunur və buna leykosit deyilir; beta interferon fibroblastik adlanır, çünki fibroblastlar tərəfindən sintez olunur - birləşdirici toxuma hüceyrələri və qamma interferon- immun, çünki aktivləşdirilmiş T-limfositlər, makrofaqlar, təbii qatillər, yəni immun hüceyrələr tərəfindən istehsal olunur.
İnterferon bədəndə daim sintez olunur və qanda onun konsentrasiyası təxminən 2 IU / ml səviyyəsində saxlanılır (1 beynəlxalq vahid - ME hüceyrə mədəniyyətini virusun 1 CPD 50-dən qoruyan interferonun miqdarıdır). İnterferonun istehsalı viruslarla yoluxduqda, həmçinin RNT, DNT, kompleks polimerlər kimi interferon induktorlarına məruz qaldıqda kəskin şəkildə artır. Belə interferon induktorları deyilir interferonogenlər.
Antiviral təsirə əlavə olaraq, interferon şiş hüceyrələrinin proliferasiyasını (çoxalmasını) ləngidir, həmçinin immunomodulyator fəaliyyətini gecikdirir, faqositozu, təbii öldürücüləri stimullaşdırır, B hüceyrələri tərəfindən antikor əmələ gəlməsini tənzimləyir, əsas histouyğunluğun ifadəsini aktivləşdirir. kompleks.
Fəaliyyət mexanizmi interferon kompleksdir. İnterferon hüceyrədən kənar virusa birbaşa təsir göstərmir, xüsusi hüceyrə reseptorları ilə birləşir və protein sintezi mərhələsində hüceyrə daxilində virusun çoxalma prosesinə təsir göstərir.
İnterferonun istifadəsi. İnterferonun təsiri nə qədər təsirli olarsa, o qədər tez sintez olunmağa və ya xaricdən bədənə daxil olmağa başlayır. Buna görə də bir çox virus infeksiyalarında, məsələn, qripdə profilaktik məqsədlər üçün, həmçinin xroniki virus infeksiyalarında, məsələn, parenteral hepatit (B, C, D), herpes, dağınıq skleroz və s. müalicə məqsədi ilə istifadə olunur.İnterferon müsbət verir. bədxassəli şişlərin və immun çatışmazlığı ilə əlaqəli xəstəliklərin müalicəsi ilə nəticələnir.
İnterferonlar növlərə xasdır, yəni insan interferonu heyvanlar üçün daha az effektivdir və əksinə. Ancaq bu növün spesifikliyi nisbidir.
İnterferon qəbulu. İnterferon iki yolla əldə edilir: a) insan leykositlərini və ya limfositlərini təhlükəsiz virusla yoluxdurmaqla, nəticədə yoluxmuş hüceyrələr interferonu sintez edir, sonra o, təcrid olunur və ondan interferon preparatları hazırlanır; b) gen mühəndisliyi ilə - sənaye şəraitində interferon istehsal etməyə qadir olan rekombinant bakteriya ştammları yetişdirilməklə. Adətən, Pseudomonas, Escherichia coli-nin rekombinant ştammları, onların DNT-sinə daxil edilmiş interferon genləri ilə istifadə olunur. Gen mühəndisliyi ilə əldə edilən interferon rekombinant adlanır. Ölkəmizdə rekombinant interferon "Reaferon" rəsmi adını aldı. Bu dərmanın istehsalı leykosit dərmanından çox daha effektiv və ucuzdur.
Rekombinant interferon viral infeksiyalar, neoplazmalar və immun çatışmazlıqlar üçün profilaktik və terapevtik vasitə kimi tibbdə geniş tətbiq tapmışdır.
Kif göbələkləri antibiotik istehsalçılarıdır. Fermentasiya zamanı hüceyrə quruluşunun və inkişaf dövrünün xüsusiyyətləri. Göbələklər tərəfindən istehsal olunan antibiotiklər.
Biotexnologiya (Bykov 2009) s.28-40.
Kalıp göbələkləri, və ya kif- iri, adi gözlə asanlıqla görünən, meyvəli cisimləri olmayan budaqlanan miseliyalar əmələ gətirən müxtəlif göbələklər (əsasən ziqo- və askomisetlər).
Göbələklərin ailələri və növləri
- Penicillium spp.
- Aspergillus
- Moniliaceae
- Dematiaceae
- Fusarium
- Akremonium
- Scytalidium dimidiatum (Nattrassia magniferae)
- Onychocola canadensis
Təbiətdə paylanması
Kif göbələkləri hər yerdə yayılmışdır. Əsasən, geniş koloniyalar isti, rütubətli yerlərdə, qida mühitində böyüyür.
Gərginləşdirmək(ondan. Stammen, sözün əsl mənasında - meydana gəlmək) - müəyyən bir zamanda və müəyyən bir yerdə təcrid olunmuş virusların, bakteriyaların, digər mikroorqanizmlərin və ya hüceyrə mədəniyyətinin təmiz kulturası. Bir çox mikroorqanizmlər cinsi prosesin iştirakı olmadan mitoz (bölünmə) yolu ilə çoxaldıqları üçün mahiyyət etibarilə belə mikroorqanizmlərin növləri genetik və morfoloji cəhətdən ilkin hüceyrə ilə eyni olan klonal xətlərdən ibarətdir. Ştamm taksonomik kateqoriya deyil, bütün orqanizmlərdə ən aşağı takson bir növdür, eyni ştamm eyni mənbədən başqa bir zamanda ikinci dəfə təcrid edilə bilməz.
Mikroorqanizmin müəyyən bir növə təyin edilməsi kifayət qədər geniş xüsusiyyətlər əsasında baş verir, məsələn, nuklein turşusunun növü və viruslarda kapsidin quruluşu; müəyyən karbohidrogenlər və istehsal olunan metabolik məhsulların növü, həmçinin bakteriyalarda qorunan genom ardıcıllığı üzərində böyümək qabiliyyəti. Növlər daxilində lövhələrin (virusun mənfi "koloniyaları") və ya mikroorqanizmlərin koloniyalarının ölçüsü və forması, ferment istehsal səviyyəsi, plazmidlərin mövcudluğu, virulentlik və s.
Dünyada ştammların adları üçün universal tanınmış nomenklatura yoxdur və istifadə edilən adlar olduqca ixtiyaridir. Bir qayda olaraq, onlar növ adından sonra yazılan fərdi hərf və rəqəmlərdən ibarətdir. Məsələn, Escherichia coli-nin ən məşhur suşlarından biri - E. coli K-12.
Kif göbələkləri insanlar tərəfindən geniş istifadə olunur.
- göbələk suşları Aspergillus nigerşəkərli maddələrdən limon turşusu istehsalı üçün istifadə olunur
- Ştammlar Botrytis cinerea("Soylu çürük") bəzi şərabların (şeri) yetişməsində iştirak edir.
- Xüsusi növ pendirlərin (Roquefort, Camembert) istehsalı üçün digər qəlib növləri (sözdə "nəcib qəlib") istifadə olunur.
- Çox vaxt kif yeməli göbələklərin meyvə orqanlarını yoluxdurur və onları yığım üçün yararsız edir. Ancaq bəzən bu cür göbələklər göbələk ovunun xüsusi obyektinə çevrilir, "lobster göbələkləri" haqqında məqaləyə baxın. Hypomyces lactifluorum.
Göbələklərdən zərər
İnsan təhlükəsi
Mikotoksinlər və antibiotiklər
Bir çox kif göbələkləri ikincil metabolitlər - antibiotiklər və mikotoksinlər istehsal edir, digər canlı orqanizmlərə depressiv və ya zəhərli təsir göstərir. Aşağıdakı maddələr ən yaxşı məlumdur
- Mikotoksinlər:
- Aflatoksin
- Antibiotiklər:
- Penisilin
- Sefalosporinlər
- Siklosporin
Bir çox antibiotik toksikliyə yaxın konsentrasiyalarda istifadə olunmağa məcburdur. Beləliklə, antibiotiklər gentamisin, streptomisin, dihidrostreptomisin, kanamisin və başqaları nefro- və ototoksik təsir göstərə bilər.
patogenlər
Bəzi göbələklər heyvanlarda və insanlarda xəstəliklərə səbəb ola bilər - aspergilloz, onikomikoz və başqaları.
Kalıplar və kənd təsərrüfatı
Bəzi kif göbələkləri məhsuldarlığı əhəmiyyətli dərəcədə azaldaraq kənd təsərrüfatı heyvanlarının sağlamlığına mənfi təsir göstərə bilər.
Göbələklər taxıl, yem, saman və ot ehtiyatlarını yoluxdurur. Bəzən məhsullar göbələk metabolitlərinin toksikliyinə görə yararsız hala düşür.
Samanda küf göbələklərinin güclü inkişafı ilə, ot tayalarının özünü qızdırması və hətta alovlanması mümkündür.
Müqavimət mexanizmləri
- Mikroorqanizmdə antibiotikin təsir etdiyi struktur olmaya bilər (məsələn, Mycoplasma cinsinin bakteriyaları (lat. Mikoplazma) hüceyrə divarı olmadığı üçün penisillinə qarşı həssasdırlar);
- Mikroorqanizm antibiotiki keçirməz (hüceyrə divarı əlavə membranla qorunduğu üçün qram-mənfi bakteriyaların çoxu penisilin G-yə qarşı immunitetlidir);
- Mikroorqanizm antibiotiki qeyri-aktiv formaya çevirə bilir (bir çox stafilokokklar (lat. Stafilokokk) əksər penisilinlərin β-laktam halqasını parçalayan β-laktamaz fermentini ehtiva edir)
- Gen mutasiyalarına görə mikroorqanizmin metabolizmi elə dəyişdirilə bilər ki, antibiotikin blokladığı reaksiyalar orqanizmin həyatı üçün artıq kritik əhəmiyyət kəsb etmir;
- Mikroorqanizm antibiotiki hüceyrədən çıxara bilir. mənbə göstərilməyib 85 gün] .
Ərizə
antibiotiklər(digər yunan ἀντί - anti - qarşı, βίος - bios - həyat) - canlı hüceyrələrin, əksər hallarda prokaryotik və ya protozoaların böyüməsini maneə törədən təbii və ya yarı sintetik mənşəli maddələr.
GOST 21507-81 (ST SEV 1740-79) uyğun olaraq
Antibiotik - mikrob, heyvan və ya bitki mənşəli, mikroorqanizmlərin böyüməsini maneə törədə bilən və ya onların ölümünə səbəb olan bir maddə.
Təbii mənşəli antibiotiklər ən çox aktinomisetlər tərəfindən, daha az isə qeyri-miseliyalı bakteriyalar tərəfindən istehsal olunur.
Bəzi antibiotiklər bakteriyaların böyüməsinə və çoxalmasına güclü inhibitor təsir göstərir və eyni zamanda makroorqanizm hüceyrələrinə nisbətən az və ya heç bir zərər vermir və buna görə də dərman kimi istifadə olunur.
Bəzi antibiotiklər xərçəngin müalicəsində sitotoksik (antineoplastik) dərman kimi istifadə olunur.
Antibiotiklər viruslara təsir etmir və buna görə də virusların yaratdığı xəstəliklərin müalicəsində faydasızdır (məsələn, qrip, hepatit A, B, C, suçiçəyi, herpes, məxmərək, qızılca).
Terminologiya
Təbii analoqu olmayan və antibiotiklərə bənzər bakteriya artımına supressiv təsir göstərən tam sintetik preparatlar ənənəvi olaraq antibiotiklər deyil, antibakterial kimyaterapiya dərmanları adlanır. Xüsusilə, antibakterial kimyaterapiya dərmanları arasında yalnız sulfanilamidlər məlum olanda, bütün antibakterial dərmanlar sinfindən "antibiotiklər və sulfanilamidlər" kimi danışmaq adət idi. Bununla birlikdə, son onilliklərdə bir çox çox güclü antibakterial kimyaterapiya dərmanlarının, xüsusən də ftorxinolonların ixtirası ilə əlaqədar olaraq, fəaliyyətdə "ənənəvi" antibiotiklərə yaxınlaşan və ya onları aşaraq, "antibiotik" anlayışı bulanıqlaşmağa və genişlənməyə başladı və indi tez-tez istifadə edilmir. yalnız təbii və yarı sintetik birləşmələrə, həm də bir çox güclü antibakterial kimyaterapiya dərmanlarına münasibətdə.
Genetik olaraq yaradılmış mikroorqanizm hüceyrələrində insan interferonlarının müxtəlif siniflərinin sintezi. Plazmidə daxil edilmiş genlərin ifadəsi.
Sitokinlər hüceyrələrarası qarşılıqlı təsirlərin polipeptid vasitəçiləri qrupudur, onlar əsasən patogenlərin daxil olmasına və toxuma bütövlüyünün pozulmasına qarşı orqanizmin müdafiə reaksiyalarının formalaşmasında və tənzimlənməsində, həmçinin bir sıra normal fizioloji funksiyaların tənzimlənməsində iştirak edirlər. Sitokinlər homeostazı qorumaq üçün sinir və endokrin sistemlərlə birlikdə mövcud olan yeni müstəqil tənzimləmə sisteminə təcrid edilə bilər və hər üç sistem bir-biri ilə sıx bağlıdır və bir-birindən asılıdır.
Sitokinlərin öyrənilməsinin tarixi 1940-cı illərdən başlamışdır. Məhz o zaman kaxektinin ilk təsirləri təsvir edilmişdir - qan serumunda mövcud olan və kaxeksiyaya və ya kilo verməyə qadir olan bir amil. Sonradan bu vasitəçi təcrid olundu və şiş nekrozu faktoru (TNF) ilə eyni olduğu göstərildi. Son iki onillikdə əksər sitokinlərin genləri klonlaşdırılıb və təbii molekulların bioloji xüsusiyyətlərini tamamilə təkrarlayan rekombinant analoqlar əldə edilib. İndi sitokinlər ailəsinə aid 200-dən çox fərdi maddə məlumdur.
Sitokinlərə interferonlar, koloniya stimullaşdırıcı amillər (CSF), kemokinlər, transformasiya edən böyümə faktorları daxildir; şiş nekrozu faktoru; müəyyən edilmiş tarixi seriya nömrələri olan interleykinlər və bəzi digər endogen vasitəçilər. Seriya nömrələri 1-dən başlayan interleykinlər ümumi funksiya ilə əlaqəli sitokinlərin bir alt qrupuna aid deyil. Onlar, öz növbəsində, proinflamatuar sitokinlərə, limfositlərin böyümə və differensiasiya amillərinə və fərdi tənzimləyici sitokinlərə bölünə bilər.
Sitokinlərin təsnifatı onların biokimyəvi və bioloji xüsusiyyətlərinə görə, həmçinin sitokinlərin öz bioloji funksiyalarını yerinə yetirdiyi reseptorların növlərinə görə aparıla bilər. Aşağıda birləşmiş struktur və funksional təsnifat verilmişdir, burada bütün sitokinlər ilk növbədə onların bioloji aktivliyi, həmçinin sitokin molekullarının və onların reseptorlarının yuxarıda göstərilən struktur xüsusiyyətləri nəzərə alınmaqla qruplara bölünür [Simbirtsev A.S., 2004].
Sitokinlərin təsnifatı
1. I tip interferonlar (IFN a, b, d, k, w, t, IL-28, IL-29 (IFN l));
2. Koloniyanı stimullaşdıran amillər, hematopoietinlər:
– Kök hüceyrə faktoru;
– gp140 liqandlar (IL-3, IL-5, GM-CSF);
- Eritropoetin, trombopoietin.
3. Şiş nekrozu faktoru ailəsi (TNF, limfotoksinlər α və β);
4. İnterleykin-1 və fibroblast böyümə faktorunun (FGF) super ailəsi:
- FRF ailəsi
– IL-1 ailəsi (IL-1α, IL-1β, IL-33 və s.).
5. İnterleykin-6 ailəsi (IL-6, IL-11, IL-31).
6. İnterleykin-10 ailəsi (IL-10,19,20,22,24,26)
7. İnterleykin-12 ailəsi (IL-12,23,27)
8. T-köməkçi klonların sitokinləri və limfositlərin tənzimləyici funksiyaları (IL-2, IL-4-5, IL-7, IL-9, IL-10, IL-13, IL-15, IL-21, IFNg)
9. İnterleykin 17 ailəsi (IL-17A, B, C, D, E, F)
10. Kimyakinlər.
11. Artım faktorları:
– Sinir böyümə faktoru, trombosit böyümə faktoru və transformasiya edən böyümə faktorlarının super ailəsi
– Epidermal böyümə faktoru ailəsi (ERF, TRFα və s.);
– İnsulinə bənzər böyümə faktorları ailəsi (IGF-I, IGF-II).
Sitokinlər sinir və endokrin tənzimləmə ilə birlikdə mövcud olan və ilk növbədə patogenlərin yeridilməsi və toxuma bütövlüyünün pozulması zamanı immun homeostazın saxlanması ilə əlaqəli olan bədənin əsas funksiyalarının tənzimlənməsinin yeni müstəqil sisteminə təcrid edilə bilər. İmmunitet sistemi daxilində sitokinlər qeyri-spesifik müdafiə faktorları ilə spesifik toxunulmazlıq arasında ikitərəfli əlaqə yaradır.
Klinik praktikada sitokinlərin istifadəsinin üç əsas sahəsi var:
1. orqanizmin müdafiə reaksiyalarını aktivləşdirmək, immunomodulyasiya etmək və ya endogen sitokinlərin çatışmazlığını kompensasiya etmək üçün sitokin terapiyası;
2. sitokinlərin və onların reseptorlarının bioloji fəaliyyətinin bloklanmasına yönəlmiş antisitokin immunosupressiv terapiya;
3. antitümör toxunulmazlığını artırmaq və ya sitokin sistemindəki genetik qüsurları düzəltmək üçün sitokin gen terapiyası.
Sitokinlər klinik praktikada həm sistemli, həm də yerli istifadə üçün istifadə olunur. Sistemli administrasiya immunitetin daha effektiv aktivləşdirilməsi üçün bir neçə orqanda sitokinlərin təsirini təmin etmək və ya bədənin müxtəlif yerlərində yerləşən hədəf hüceyrələri aktivləşdirmək lazım olduğu hallarda özünü doğruldur. İnterferonlar (IFN) qrupundan olan sitokinlər, ilk növbədə, alfa-IFN və beta-IFN və daha az dərəcədə qamma-IFN hazırda ən böyük klinik istifadəni tapmışdır.
İnterferonlar eukaryotik hüceyrələr tərəfindən onlara bir sıra bioloji agentlərin - interferonogenlərin (RNT genomik virusları, ikiqat zəncirli RNT, müxtəlif polianionlar, bakterial LPS) daxil edilməsinə cavab olaraq istehsal olunan antiviral təsiri olan zülallar qrupudur.
IFN həm hüceyrə, həm də sistem səviyyəsində özünü göstərən müxtəlif təsirlərə səbəb olur. IFN üç əsas təsirin olması ilə xarakterizə olunur - qeyri-spesifik antiviral, antitümör və immunomodulyator. İnterferonlar bir çox virusun çoxalmasını maneə törətmək qabiliyyətinə malikdir. İnterferonun antiviral təsiri virus RNT-nin hüceyrənin ribosomları ilə əlaqəsinin yatırılmasına əsaslanır ki, bu da virusun hüceyrədə çoxalmasının mümkünsüzlüyünə səbəb olur.
1970-ci illərdə bütün İFN-lər 2 növə bölünürdü: viruslar (leykositlər və fibroblastlar) tərəfindən törədilənlər birinci növə, mutagenlər (immun) tərəfindən törədilənlər isə ikinci növə bölünürdülər. Hazırda bu təsnifat öz mənasını itirib. 1980-ci ildə Ümumdünya Səhiyyə Təşkilatının ekspertlər komitəsi bütün insan İFN-lərinin 3 sinfə bölündüyü bir təsnifat qəbul etdi və istifadə üçün tövsiyə etdi. Onlar müxtəlif genlər tərəfindən kodlanır və molekullarının qurulduğu hər bir sinif üçün xarakterik olan amin turşularının ardıcıllığına malikdir. Əgər rekombinant IFN variantları varsa, onlar adətən Roma hərfləri ilə işarələnirlər.
Cədvəl 11 - İnsan interferonlarının təsnifatı
Hal-hazırda İFN haqqında əldə edilən bütün biliklər bu problemin nəzəri və praktiki (tibbi və əczaçılıq) aspektlərini özündə birləşdirən “interfenologiya” elminə ümumiləşdirilə bilər. Son onillikdə interfenologiyada 4 əsas hadisə baş vermişdir (prof. F. İ. Erşov, 1996-cı ildə vurğulamışdır):
“İnterferon sistemi” anlayışı formalaşdırılır və onun immun sistemlər və neyroendokrin sistemlə birbaşa və əks əlaqəsi aşkarlanır;
IFN-ct genlərinin çoxluğu (insan hüceyrələrində 20-dən çox) aşkar edilmişdir;
Müasir texnoloji üsulların köməyi ilə mövcud İFN preparatları təkmilləşdirilmiş və yeni nəsil İFN preparatları yaradılmış, orijinal İFN induktorları sınaqdan keçirilmişdir;
Viral və qeyri-viral xəstəliklərdə İFN və onların induktorlarının kliniki istifadəsinə göstərişlər və əks göstərişlər müəyyən edilmişdir.
İnterferonogenezin induktoru kimi Nyukasl xəstəliyi virusunun və ya Sendai virusunun peyvənd ştamından istifadə olunur. Virusların əvvəlcədən becərilməsi inkişaf edən 9-11 gündə aparılır. toyuq embrionları. Əsas texnoloji əməliyyatlar: ovoskopiya, rədd edilməsi, toyuq embrionlarının inkubasiyası, allantoik boşluğa infeksion süspansiyonun daxil edilməsi, ardınca 48-72 saat inkubasiya və ölü toyuq embrionlarından yoluxmuş mayenin büzülməsi. Virus ehtiva edən allantoik maye sentrifuqa edilir
Hazır məhsulun keyfiyyətini təyin edən çox mühüm əməliyyat leykokonsentratdan eritrosit çirklərinin çıxarılmasıdır (mərhələ 1). Leykokonsentratda eritrositlərin mövcudluğunun ən tam aradan qaldırılması onların fizioloji konsentrasiyada ammonium xlorid məhlulu ilə seçici parçalanmasıdır.
Cədvəl 12 - İFN-a-nın biosintezinin texnoloji sxemi
| Texnoloji mərhələ | Şərtlər |
| 1. Leykositlərin izolyasiyası | Leykomasanın dekstrat ilə fraksiyalaşdırılması |
| nom və polivinil spirti ilə | |
| üfürən hemoliz. Bu 3 istehsal edir | |
| qat. Üst 2 təbəqə sentrifuqalanır | |
| çöküntünün dönməsi və resuspenziyası | |
| qida mühiti. | |
| 2. Astarlama (aktivləşdirmə | Leykositlər 10-20 milyon/ml mühitdə No 199 ilə |
| leykosit mübadiləsi) | 5% donor qan plazması, 3 ədəd/ml, |
| 2-10 saat, 37,5°С | 0,0015 U/ml insulin, 200 IU/ml yerli |
| IFN | |
| 3. Virus induktorunun tətbiqi | |
| 3.1.İnduksiya 1 saat, 37,5°С | Nyukasl xəstəliyi virusu (NDV), 5 dozada |
| 1 leykosit üçün RCC 50 | |
| 3.2.Udulmayanların ayrılması | sentrifuqa 600x d- 15 dəqiqə., |
| peyvənd edilmiş virus | induksiya edilmiş hüceyrələrin çöküntülərinin toplanması. |
| 4. Biosintez 18 saat, 37,5°С | Süspansiyon kulturası Leykositlər 6 milyon/ml 199 saylı mühitdə 5% qamma-qlobulin plazması, 5 ml natrium suksinat, pH 7,5-ə qədər natrium bikarbonat, antibiotiklər. IFN-a-nın çıxışı 1 min leykosit üçün 3-4 ME təşkil edir. |
| 5. İnterferon virusunun inaktivasiyası | Mühitin pH-nın 2.2-2.4-ə çatdırılması və yarımfabrikatın ən azı 7 gün müddətinə məruz qalması. |
| 6. İnterferonun təmizlənməsi | Mərhələli: aydınlaşdırıcı, ultrafiltrasiya, sterilizasiya filtrasiyası |
Leykositlərin becərilməsi mərhələsində (2-ci mərhələ) leykokonsentrat mədəni mayedə yenidən dayandırılır ki, bu da əsas komponentlərə əlavə olaraq bəzi qan serum zülallarını ehtiva edir, onsuz IFN biosintezi praktiki olaraq baş vermir. Həmçinin müəyyən edilmişdir ki, leykositlərin kultivasiyası zamanı, xüsusən suspenziyanın yüksək sıxlığında (10 7 hüceyrə/ml) onlarda metabolik proseslər aktivləşir ki, bu da turşulu məhsulların əmələ gəlməsi ilə müşayiət olunur. Bu baxımdan, astarlama və İFN biosintezi dövründə mühitin pH-nın optimal hədlərdə saxlanılması vacibdir. Mühitin pH səviyyəsini lazımi səviyyədə saxlamaq üçün mühitə tampon tutumlu müxtəlif maddələr əlavə edilir.
IFN istehsalı üçün optimal şərait (mərhələ 4) leykositlərin 37-37,5 ° C-də kultivasiyası ilə yaradılır. İnkubasiya temperaturunun 35°C və aşağıya endirilməsi və ya əksinə, 38°C və yuxarıya yüksəldilməsi İFN istehsalının əhəmiyyətli dərəcədə azalmasına səbəb olmuşdur.
IFN-a həm stasionar becərmə şəraitində, həm də daimi hüceyrə qarışığı olan kulturalarda istehsal oluna bilər. Güman edilir ki, dayandırılmış vəziyyətdə olan hüceyrələr IFN-a daha intensiv istehsal edir. Süspansiyon mədəniyyətlərində hüceyrələrin yaşaması üçün böyük əhəmiyyət kəsb edən damarların forması, maye təbəqənin hündürlüyü və havada kifayət qədər miqdarda oksigendir. IFN-a titrlərinin alınması üçün optimal şərait leykositlərin folqa ilə örtülmüş, yarısı hüceyrə suspenziyası ilə doldurulmuş, daim qarışdırmaqla, dairəvi dibli kolbalarda kultivasiya yolu ilə yaradılır. Leykositlərin kiçik dozalarda İFN-a ilə əvvəlcədən müalicəsi İFN məhsuldarlığının 3-10 dəfə artmasına səbəb oldu.
Yenidən dayandırıldıqdan sonra leykositlər allantoik (zərfsiz) Nyukasl və ya Sendai xəstəliyi virusları ilə induksiya olunur. 20 saat ərzində 37,5°C temperaturda inkubasiya edildikdən sonra, bu müddət ərzində kulturaların canlılığının və yüksək hüceyrə mübadiləsinin sabit pH-da saxlanması əsas əhəmiyyət kəsb edir, hüceyrələr 40 dəqiqə ərzində aşağı sürətli sentrifuqalama (2000 rpm) ilə ayrılır. Təsvir edilən prosedur nəticəsində əldə edilən preparatlarda interferonun aktivliyi 30-200.000 IU / ml təşkil edir.
Müasir biotexnologiyada gen mühəndisliyi metodlarından getdikcə daha çox istifadə olunur. Artıq dünyanın bir çox laboratoriyalarında bir sıra bioloji aktiv maddələrin əmələ gəlməsini kodlaşdıran genlər uğurla əldə edilir və mədəni bakterial və ya somatik hüceyrələrin genetik aparatına inteqrasiya olunur.
Biotexnoloji istehsal üçün funksional genlər əks transkripsiya ilə yenidən yaradılır və ya müvafiq xromosomların DNT-sindən təcrid olunmuş fərdi nukleotidlərdən sintez olunur.
İnsan IFN genlərinin bakteriya hüceyrələrinə köçürülməsi üzrə təcrübələr 1970-ci illərin sonlarında başlamışdır. Demək olar ki, eyni vaxtda 3 tədqiqat qrupunda: Weismannın rəhbərliyi ilə Sürix Universitetinin I Molekulyar Biologiya İnstitutunda, Tokioda Xərçəng Araşdırmaları İnstitutunun Biokimya şöbəsində T. Taniquçinin rəhbərliyi altında və ABŞ-da J. Geddelin rəhbərliyi altında "Genentex" şirkətinin filialı.
Tədqiqatçıların hər üç qrupu klonlaşdırma üçün interferon mRNT-nin tərs transkripsiyası metodundan istifadə ediblər. Nümunə olaraq Veysman qrupunun təcrübələrinin gedişatını nəzərdən keçirək.
α-IFN geninin klonlaşdırılması üçün başlanğıc material kimi Sendai virusunun induksiya etdiyi leykosit hüceyrələrindən alınmış 12 S poli(A) mRNA (adenilləşdirilmiş xəbərçi RNT) fraksiyasından istifadə edilmişdir. Messenger RNT əsasında onu tamamlayan 2 zəncirdən ibarət DNT əldə edilmişdir. Nəticədə yaranan ikiqat zəncirli DNT məhdudlaşdırıcı fermentlərlə həzm olundu və oliqo-dG-nin yapışqan ucunu əmələ gətirdi. Bənzər bir əməliyyat yapışqan oliqo-dC-ucunun meydana gəlməsi ilə plazmidlə aparıldı. pBR322 plazmasına α-IFN-in strukturu haqqında məlumatı ehtiva edən tamamlayıcı DNT daxil etmək üçün liqazlardan istifadə edilmişdir.
Bu plazmidin tərkibində iki antibiotikə qarşı müqaviməti təyin edən genlər var: tetrasiklin və ampisillinə. İnterferon DNT-nin daxil edilməsi ampisillinə qarşı müqavimətdən məsul olan geni təsirsiz hala gətirir, buna görə də hibrid plazmidlər almış hüceyrələrin ilkin seçimi tetrasiklin müqavimətinə əsaslanırdı.
İstənilən klonları seçmək üçün aşağıdakı üsuldan istifadə edilmişdir: müxtəlif klonlardan bir neçə plazmidin qarışığı, onlardan biri interferon DNT-ni ehtiva edə bilər, denatürasiya edilir və bərk dayağa bağlanır. IFN istehsal edən insan hüceyrələrindən əldə edilən RNT nümunələri bu DNT-yə hibridləşdirilir, filtrlər yuyulur, RNT denaturasiya şəraitində yuyulur və interferon mRNT-ni aşkar etmək üçün eluat Afrika yaşıl qurbağasının oositlərinə yeridilir. Hibridləşən klonlar arasında tam α-IFN geninin ölçüsünə uyğun olan əlavəyə malik olan Hif-2h adlı biri seçildi.
Belə bir əlavəni daşıyan hibrid plazmidləri olan E. coli hüceyrələri interferonun bioloji aktivliyi ilə polipeptidi sintez etməyə qadirdir.
İnterferon genlərinin klonlaşdırılması üzrə işlər həm yuxarıda adları çəkilən müəlliflər, həm də bir çox ölkələrdə tədqiqatçıların digər qrupları tərəfindən təkrarlanmış və inkişaf etdirilmişdir. SSRİ-də leykosit interferon geninin ilk uğurlu klonlaşdırılması 1982-ci ildə təsvir edilmişdir. akad. Ovchinnikov, 1983-cü ildə fibroblast - Yu.I. Kozlov, immun - 1985-ci ildə E.D. Sverdlov.
Hal-hazırda IFN genlərinin ifadəsi yalnız E. coli hüceyrələrində deyil, həm də digər qram-mənfi bakteriyaların (Pseudomonas) hüceyrələrində istehsal olunur - bu, Rusiyada IFN-nin sənaye istehsalının əsasını təşkil edir. Hal-hazırda bu məqsədlər üçün maya istifadəsinin ən təsirli olduğuna inanılır.
Saccharomyces cinsinin mayaları insanlar üçün patogen deyil, onların istifadəsində çoxəsrlik təcrübə var. Mayalar lizisə, avtolizə məruz qalmır, asanlıqla ayrılır və ucuz substratlardan istifadə edirlər. Maya biokütləsində qram-mənfi bakteriyaların hüceyrələri kimi zəhərli və pirojenik faktorlar yoxdur.
Çox vacib bir hal, həmçinin maya və ali eukariotların ifrazat mexanizmlərinin oxşarlığıdır ki, bu da klonlanmış preinterferon genlərinin düzgün emal nəticəsində yetkin İFN istehsal edə biləcəyini göstərir.
Rekombinant İFN-nin istehsalçısı olan hüceyrələrin kütləvi şəkildə becərilməsi texnologiyası işlənib hazırlanmışdır. Beləliklə, reaferonun yerli hazırlanması üçün ona daxildir:
1 l kultura mayesindən 5-7x103 ME məhsuldarlığı ilə 100 l fermentatorlarda reaferon istehsal edən bakteriya ştammının becərilməsi,
hədəf məhsulun 60-70% məhsuldarlığı ilə prosesi artırmağa imkan verən bir üsulla biokütlənin məhv edilməsi,
Reaferonun ion dəyişdiricidə ilkin təmizlənməsi; dərmanın son təmizlənməsi 5AC tipli IFN-a leykositinə monoklonal antikorları olan bir immunosorbent üzərində aparılır.
Rekombinant IFN-nin əsas istehsalçısı sitoplazmada olan bakteriya ştammlarıdır, IFN sintez olunur və bakterial zülalların ümumi kütləsinin yalnız bir faizini təşkil edir. Kifayət qədər yüksək hüceyrə konsentrasiyasının xüsusi fermentatorlarında yığıldıqdan sonra onlar fermentatordan çıxarılır və məhv edilir (lizid). Lizisin əsas üsulları bunlardır: osmotik şok, dondurma-əritmə, homogenləşdirmə, yuyucu vasitələrlə müalicə. Sonra, filtrasiya, sentrifuqa, ion mübadiləsi xromatoqrafiyası və gel xromatoqrafiyasının ardıcıl prosedurlarından istifadə edərək, IFN-nin ilkin təmizlənməsi baş verir, nəticədə şəffaf bakterial ekstrakt əldə edilir, IFN hələ də ümumi zülalın 1-2% -dən çoxunu təşkil etmir. İFN-ə monoklonal antikorlarla immunosorbent üzərində preparatın son təmizlənməsi.
IFN-yə monoklonal antikorlar daşıyıcı muncuqlara "tikilir" və xromatoqrafik sütuna yerləşdirilir. Daha sonra sütuna rekombinant İFN olan bakterial ekstrakt tətbiq olunur. Yalnız IFN antikorlara bağlanır, bütün bakterial toksinlər də daxil olmaqla ekstraktın digər komponentləri sərbəst şəkildə sütundan keçir və yuyulma məhlulu ilə çıxarılır. Sütundan çıxarmaq üçün antikorlar üzərində adsorbsiya edilmiş rekombinant IFN, bir az turşu reaksiyaya malik olan süzülmüş bufer məhlulu ilə sütundan keçirilir. Bu vəziyyətdə IFN molekulları ilə antikorlar arasındakı əlaqə pozulur. IFN Sefaroz hissəciklərinin səthindən tampon məhluluna keçir və çirkləndirici zülallardan təmizlənmiş təmiz maddə kimi toplana bilər.
Rekombinant İFN-lərin istifadəsinin sürətlə genişlənməsi və təbii preparatların istifadəsinin son zamanlar paralel olaraq azalması əsasən sonuncunun istehsalı üçün xammal çatışmazlığı (donor qanı), həmçinin qanla ötürülən virusların yayılması ilə əlaqədardır. xəstəliklər (HİV, hepatit C). Bununla əlaqədar olaraq, təbii İFN preparatlarının bəzi üstünlüklərinin olmasına baxmayaraq, klinikada praktiki olaraq yalnız rekombinant preparatlardan istifadə olunur.
IFN-a ailəsi təxminən 20 alt tipdən ibarətdir, buna görə də təbii preparatlar - İnsan lökosit interferonu, Egiferon, Velferon çoxkomponentlidir və bütün və ya ən azı alt növlərin əksəriyyətini ehtiva edir. Təbii İFN-lər antigenik xüsusiyyətlərə malik deyil və uzun müddət təkrar tətbiq edildikdə sensibilizasiyaya səbəb olmur. Bəzi rekombinant İFN-lər, əksinə, inyeksiya yolu ilə tətbiq edildikdə, neytrallaşdırıcı və ya bağlayıcı antikorların meydana gəlməsinə səbəb ola bilər.
Ən çox istifadə edilən sürətli (pegilə olunmayan) və pegilləşdirilmiş alfa və beta IFN-lər. Məsələn, zülal strukturunda nöqtə mutasiyaları olan təbii yarımtiplərin analoqları olan rekombinant IFN-a2a (Reaferon, Roferon, Pegasys), rekombinant IFN-a2b (Intron A, Realdiron, Peg-Intron) lis-his, arg-his. , müvafiq olaraq, fəaliyyətə az təsir göstərən, lakin sensibilizasiya baxımından əhəmiyyətli olan arg-arg. Beləliklə, insan populyasiyası üçün xarakterik olmayan IFN-a2a preparatları yüksək titrlərdə onların terapevtik potensialını azaldacaq həssaslaşma və antikorların əmələ gəlməsi riski yüksəkdir.
İmmun interferon (IFN qamma) viral, onkoloji və otoimmün xəstəliklərin müalicəsi üçün nəzərdə tutulmuş dərmanların tərkib hissəsi hesab edilə bilər. Onun əsasında xaricdə bir sıra preparatlar yaradılmışdır: Immuneron (ABŞ), Immunomax (Yaponiya), Imukin (Almaniya). Rusiyada eyni sorbentdə, lakin müxtəlif pH dəyərlərində iki ardıcıl xromatoqrafiyaya əsaslanan yüksək təmizlənmiş Deltaferon əldə etmək üçün səmərəli sxem hazırlanmışdır. Bu sxem rekombinant Deltaferonu yüksək polimer çirkləri ilə məqbul miqdarda preparativ miqdarda əldə etməyə imkan verir. Zülal molekulunda dəyişikliklər (molekulun 10 amin turşusu və 3 amin turşusu əvəzlənməsi ilə qısaldılması) tam uzunluqlu IFN-γ ilə müqayisədə antiviral aktivliyin 20 qat itkisinə səbəb oldu, lakin onun immunomodulyator xüsusiyyətlərinə təsir göstərmədi. Bu modifikasiya nəticəsində deltaferon proteolitik fermentlərə qarşı müqavimət inkişaf etdirdi. Deltaferonun eksperimental dozaj formaları işlənib hazırlanmışdır ki, bu da zülalın spesifik fəaliyyətini itirmədən öz doğma vəziyyətində saxlamağa imkan verir. Deltaferonun LF orijinal qamma-interferona xas olan immunomodulyator xüsusiyyətlərə malikdir.
Farmakoloji nöqteyi-nəzərdən İFN preparatları ilk növbədə immun sisteminin effektor hüceyrələrinin, ilk növbədə T-limfositlərin və monositlərin (makrofaqların) funksional fəaliyyətinə təsir edən immunomodulyatorlar kimi qəbul edilməlidir. IFN-nin təsiri altında antigenin immun tanınmasının effektivliyi artır və patogenin və ya antigenik olaraq dəyişdirilmiş hüceyrələrin aradan qaldırılmasına yönəlmiş faqositik və sitolitik funksiyalar artır. İnterferon bədəndə təxminən 2 həftə dövr edir, bu da onu profilaktik vasitə kimi istifadə edərkən nəzərə alınmalıdır.
Çoxillik təcrübə göstərir ki, İFN-nin burundaxili yeridilməsi müxtəlif qrip və paraqrip viruslarına qarşı aydın profilaktik effektivliyə malikdir. Qoruyucu təsir, inhalerlər və ya nebulizerlərdən istifadə edərək dərmanın gündəlik istifadəsi ilə ən çox ifadə edilir. Xəstəliyin ilk iki günü ərzində bir neçə burundaxili quraşdırma və ya dərman məhlulunun aerozol şəklində burun və ağızdan inhalyasiya yolu ilə tətbiqi intoksikasiya və qızdırma reaksiyalarının daha sürətli azalmasına səbəb oldu. Üst tənəffüs yollarında iltihabın şiddəti də daha sürətli azaldı. Son tədqiqatlar göstərdi ki, IFN şiş hüceyrələrinin yayılmasını maneə törədir, bu da onu şiş xəstəliklərinin müalicəsində təsirli edir. IFN-nin antitümör təsiri bədənin təbii müdafiə mexanizmlərinin, xüsusən də xərçəng hüceyrələrini öldürən və ya antikor əmələ gətirən limfositlərin stimullaşdırılması ilə izah edilə bilər.
Bu günə qədər IFN-dən istifadənin effektiv olduğu bir sıra xəstəliklər müəyyən edilmişdir. Viral infeksiyalardan bunlar SARS, qrip, ensefalit, viral hepatit, gözlərin herpetik lezyonları (konjonktivit, keratokonyunktivit), selikli qişalar və gözlərdir. Klinisyenlərin fikrincə, dərinin və selikli qişaların herpetik zədələnmələri zamanı preparatın yerli tətbiqinə üstünlük verilməlidir. IFN ikincili virus infeksiyalarının qarşısının alınması vasitəsi kimi orqan transplantasiyasında tətbiq tapmışdır. Qısa təhlil, IFN-nin viral etiologiyanın müxtəlif xəstəliklərinin inkişafına müsbət təsir göstərə biləcəyi qənaətinə gəlməyə imkan verir. Onun effektivliyi ən çox kəskin infeksiyalarda, xəstəliyin ilkin mərhələlərində özünü göstərir. Klinik istifadədə dərmanın minimum istehlakını təmin edən yerli idarəetməyə üstünlük verilməlidir. Bundan əlavə, yerli tətbiq yüksək dozada IFN-nin sistemli tətbiqi ilə müşahidə olunan mənfi təsirlərin qarşısını alır.
Hər bir dozaj formasının immunobioloji və farmakoloji xüsusiyyətlərinə görə öz tətbiq sahəsi var. Bu müddəa aşağıdakı redaksiyada verilir:
IFN preparatları aralıq kurslarda uzunmüddətli təkrar istifadə ilə sensibilizasiya fenomenlərinə səbəb olmamalıdır. Müxtəlif dozaj formalarının hazırlanması üçün İFN-nin biosintezi vahid texnoloji sxemə əsasən həyata keçirilə bilər, lakin İFN-nin təmizlənməsi üsulları və onun meyarları terapiyanın məqsədlərinə cavab verməlidir. Enjekte edilə bilən dozaj formalarında insanlar üçün antigen olan çirklər olmamalıdır. Yerli istifadə üçün hazırlıqlarda onların səviyyəsi sensibilizasiya həddindən aşağı olmalıdır.
Nəzəri olaraq, IFN-a-nın təbii preparatlarında 3 əsas antigen qrupu ola bilər:
virus-induktorun və toyuq allantoik mayesinin antigenləri;
qan qrupunu və Rh-mənsubiyyətini təyin edən eritrosit antigenləri;
leykosit HLA antigenləri.
IFN əldə etmək üçün biotexnologiya bu antigenlərin dozaj formalarına daxil olma ehtimalını məhdudlaşdıran əməliyyatları əhatə etməlidir. Texnoloji cəhətdən ən çətin vəzifə I qrup antigenlərin çıxarılmasıdır, çünki onlar induksiya mərhələsində çox miqdarda süspansiyona daxil olurlar.
Təbii IFN-a preparatları, təmizlənmə üsullarından asılı olaraq, iki qrupa bölünə bilər - yerli və konsentrat. Zülal tərkibinə görə, yerli tipli preparatlar praktiki olaraq orijinal yarımfabrikatlardan fərqlənmir, aşağı spesifik aktivliklə xarakterizə olunur - 1 mq protein üçün 1-104 IU-a qədər, lakin interferonogenez zamanı istehsal olunan bütün sitokinləri saxlayır. onların təbii nisbəti. Buna görə də, onlar immunobioloji fəaliyyət üçün yüksək potensiala malikdirlər.
Konsentratlaşdırılmış preparatların alınması üçün biotexnologiyaya kimyəvi təmizləmə daxildir ki, bu da sitokinlərin itirilməsi səbəbindən immunobioloji fəaliyyət potensialının azalmasına səbəb olur. Bununla belə, bu hazırlıqlar praktik sağlamlıq baxımından da dəyərlidir. Məsələn, yüksək konsentrasiyalı insan leykosit IFN - inyeksiya üçün CLI - yüksək birdəfəlik dozaların (kəskin mərhələdə limfoblastik leykemiya) tətbiq edilməsinin zəruri olduğu hallarda, eləcə də həddən artıq lokallaşdırılmış viral və onkoloji lezyonların müalicəsində hələ də əvəzolunmazdır. qan-beyin baryeri. Konsentrat tipə, həmçinin viral göz lezyonlarının yerli müalicəsi üçün uğurla istifadə edilən interlok daxildir.
Üçüncü qrup reaferon və realdon ilə təmsil olunan rekombinant İFN-lərdən ibarətdir. Patologiyanın bir çox formalarında yerli preparatlar (intranazal damcılar, məlhəm, rektal süpozituar, göz filmləri və s.) inyeksiyadan daha təsirli olur. Məsələn, aktiv xroniki HBV-də tərkibində cəmi 100.000 IU İFN-a olan rektal süpozituarların istifadəsi 3 IU dozada yüksək konsentrasiyalı preparatın əzələdaxili yeridilməsi ilə eyni nəticələr verir. Rektal süpozituarlardan istifadə edərkən dərmanın istehlakı və müalicə dəyəri on dəfə azalır.
IFN-nin müasir rekombinant preparatları:
Reaferon(insan rekombinant IFN-a2) NPO Vector, Novosibirsk tərəfindən istehsal edilmişdir.
onun genetik aparatında insan IFN-a2 geninin daxil edilmiş rekombinant plazmidi olan Pseudomonas sporogenosa bakteriya ştammının becərilməsi ilə əldə edilmişdir.
İntramüsküler, subkonyunktival və yerli istifadə üçün nəzərdə tutulub.
Ampulalarda liyofilləşdirilmiş toz şəklində istehsal olunur.
İntron A(insan rekombinant IFN-a2b) Schering Plow - ABŞ-dan.
Dərman bu insan zülalını kodlayan gen mühəndisliyi geni olan bakterial E. coli istifadə edərək rekombinant DNT texnologiyası ilə əldə edilib.
Fəaliyyət spesifikasiyası 2*108 IU/mq protein.
Böyük dozada zülalın tətbiqi temperaturun artması, baş ağrısının görünüşü, mədə-bağırsaq traktının pozulması (ürəkbulanma, bəzən hepatitin kəskinləşməsi) ilə müşayiət olunur və ürək-damar sisteminin işində pozğunluqlar baş verir.
İFN sisteminin ontogenezinin tədqiqi əsasında yeni yerli preparat Viferon süpozituarları, o cümlədən rekombinant İFN-a və antioksidant preparatları hazırlanmışdır. Viferon yenidoğulmuşlarda viral və bakterial xəstəliklərin müalicəsində özünü sübut etdi: intrauterin herpes, xlamidiya, SARS, kandidoz
pegilləşdirilmiş interferonlar
Antiviral terapiya pegylated peptid preparatlarının perspektivli istifadəsinin əsas sahələrindən biridir. Biotexnoloji preparatların pegilyasiyası konsepsiyasının istifadəsinin parlaq nümunəsi pegilləşdirilmiş interferonların (peg-IFN) yaradılmasıdır. Klinik praktikada hazırda alfa-interferonun pegilləşdirilmiş analoqları - PEG-interferon-alfa 2b (Pegintron; Shering Plough) və PEG-interferon-alfa 2a (Pegasys; Hoffmann La Roche) istifadə olunur.
Bunu müəyyən etdi interferonlar sintez olunur hüceyrədə əvvəlcə polipeptid zəncirinin N-terminusunda siqnal peptidini ehtiva edən prekursorlar şəklində, sonra ayrılır və nəticədə tam bioloji aktivliyə malik yetkin interferon əmələ gəlir. Bakteriyalarda yetkin bir zülal yaratmaq üçün siqnal peptidini parçalaya bilən fermentlər yoxdur. Kimə Bakteriyalar yetkin interferonu sintez edir, genin yalnız onu kodlayan hissəsi plazmidə daxil edilməli və genin siqnal peptidini kodlayan hissəsi çıxarılmalıdır. Prosedur tələb edir aşağıdakı şərtlərə uyğunluq:
İnterferon genində üç Sau 3A1 parçalanma yeri olmalıdır, onlardan biri siqnal hissəsinə bitişikdir.
Bu fermentlə genin natamam parçalanması yetkin interferonu kodlayan nukleotid ardıcıllığını ehtiva edən bir gen fraqmentini təcrid etməyə imkan verir.
Sisteini kodlayan ATG üçlüyü siqnal hissəsi ilə birlikdə ferment tərəfindən parçalanır.
Tam genin polinükleotid ardıcıllığını bərpa etmək üçün tərkibində bu üçlüyü, eləcə də ona bitişik ATG üçlüyü, protein sintezinin başlanğıc nöqtəsini ehtiva edən DNT fraqmenti kimyəvi yolla sintez edilmişdir.
Bu fraqment yetkin genin təcrid olunmuş hissəsinə yapışdırılıb və nəticədə tam yetkin interferon geninin bərpası baş verib.
Yenidən qurulmuş gen plazmidə elə bir şəkildə daxil edildi ki, o, mRNT sintezinin başlanğıcını təmin edən DNT promotor bölgəsinə bitişik oldu.
-dən çıxarışlar E. Coli, belə bir plazmid ehtiva edir , antiviral aktivliyə malik idi.
Gen mühəndisliyi ilə sintez edilmiş interferon təcrid olunmuş, təmizlənmiş və fiziki-kimyəvi xüsusiyyətlərinə görə donor qanından alınan interferonunkinə yaxın olduğu ortaya çıxdı. əldə etməyi bacardı bakteriya qadir sintez etmək təxminən 10 11 bakteriya hüceyrəsi olan 1 litr bakterial suspenziya üçün 5 mq-a qədər interferon, bu da 1 litr donor qanından çıxarıla bilən interferonun miqdarından 5000 dəfə çoxdur.
Hazırda interferon genləri maya və qlikozilləşmə qabiliyyətinə malik ali eukaryotik hüceyrələrə klonlaşdırılıb.
1991-ci ildə ABŞ-da ilk dəfə olaraq insan leykosit interferonunu sintez etmək üçün gen mühəndisliyi maya hüceyrələrindən istifadə edilmişdir. Saccharomyces cerevisiae. Nəticədə LeIF geninin effektiv ifadəsi və bakteriyaların maya hüceyrələri ilə əvəzlənməsi interferon istehsalını 10 dəfə artırmağa imkan verdi.
1994-cü ildə Rusiyada tam gen sintezi həyata keçirildi α- Və təxminən 600 N ölçüsündə. N. M. Kolosovun rəhbərliyi altında Bioüzvi Kimya İnstitutunda n (nukleotid nöqtələri).
Gen mühəndisliyi texnologiyalarından istifadə edərək interferonların alınması və müxtəlif virus xəstəliklərinin, o cümlədən xərçəngin müalicəsində tətbiqi sahəsində əldə edilən uğurlara baxmayaraq, onların biosintezi və digər maddələrlə qarşılıqlı əlaqə mexanizmlərinin deşifrə edilməsi ilə bağlı hələ də həllini gözləyən bir çox məsələlər var. .
İnterferonun bioloji təsirinin sxemi Şəkil 8.34-də göstərilmişdir.
düyü. 8.34. İnterferonun təsir mexanizmi
İnterferonun təsir mexanizmi aşağıdakılara endirilə bilər əsas mərhələləri:
1. Hüceyrə reseptorlarına bağlanaraq, interferonlar müvafiq genlərin transkripsiyasını başlatmaqla 5 "-oliqoadenilan sintetaza və zülal kinaz fermentlərinin sintezinə başlayırlar;
2. Hər iki ferment bir çox virusların replikasiya məhsulu olan ikizəncirli DNT-nin iştirakı ilə öz aktivliyini göstərir;
3. 5"-oliqoadenilansintetaza fermenti hüceyrə ribonukleazını aktivləşdirən 2" 5"-oliqoadenilatların (ATP-dən) sintezini katalizləyir;
4. Protein kinaz fosforilləşdirir və bununla da İF 2 translyasiya başlanması faktorunu aktivləşdirir. Bu hadisələr nəticəsində yoluxmuş hüceyrədə zülal biosintezi və virusun reproduksiyası (mRNT və rRNT deqradasiyası) ləngiyir ki, bu da onun lizisinə səbəb olur.