Co pokazuje serologiczne badanie krwi? Środki diagnostyczne są najważniejszym etapem leczenia każdej choroby. Powodzenie leczenia zależy nie tylko od przepisanych leków, ale w dużej mierze od tego, jak prawidłowo postawiono diagnozę.

Ponadto diagnostyka może zapobiegać powikłaniom i chorobom współistniejącym. Za pomocą analizy serologicznej krwi pacjenta wykrywa się obecność przeciwciał i antygenów. Badanie pomaga wykryć wiele chorób, określić ich fazę i kontrolować przebieg leczenia.

Co to jest serologia?

Serologia to dział immunologii zajmujący się badaniem reakcji antygenów na przeciwciała. Ta dziedzina medycyny zajmuje się badaniem osocza krwi i jego właściwościami immunologicznymi.

Obecnie serologiczne badanie krwi na obecność przeciwciał jest niezawodnym sposobem wykrywania ludzkiego wirusa niedoboru odporności, zapalenia wątroby, brucelozy, chorób przenoszonych drogą płciową i innych chorób zagrażających życiu. Zastanówmy się, w jakich przypadkach jest to przepisywane.

Wskazania do wizyty

Serologiczne badanie krwi jest konieczne do identyfikacji czynnika sprawczego choroby w przypadku trudności w postawieniu diagnozy.

Aby przeprowadzić tę reakcję, do osocza wstrzykuje się antygeny patogenów, a następnie asystent laboratoryjny bada trwający proces. Lub przeprowadzają reakcję odwrotną: przeciwciała są wstrzykiwane do zakażonej krwi w celu określenia specyficznej przynależności patogenu.

Szereg zastosowań

To badanie jest wykorzystywane w różnych gałęziach medycyny. Za pomocą tej reakcji wykrywane są określone komórki i przeciwciała wytwarzane przez organizm w celu zwalczania infekcji i wirusów.

Ponadto za pomocą metody serologicznej określa się grupę krwi osoby.

Podobny serologiczny test krwi jest stosowany w ginekologii do diagnozowania chorób przenoszonych drogą płciową. Ta metoda jest również praktykowana do kompleksowych badań kobiet w ciąży (wykrywanie toksoplazmozy, HIV, kiły itp.). Zdanie tego testu jest obowiązkowe przy rejestracji w klinice przedporodowej.

U dzieci badanie serologiczne stosuje się w celu potwierdzenia rozpoznania tzw. chorób „dziecięcych” (ospa wietrzna, odra, różyczka itp.) w przypadku, gdy objawy nie mają wyraźnych objawów i niemożliwe jest rozpoznanie choroby na podstawie analizowanie wskazań klinicznych.

Wykrywanie chorób wenerycznych

Dla wenerologów to badanie jest naprawdę niezbędne i pozwala bardzo dokładnie postawić diagnozę.

Przy niewyraźnym obrazie klinicznym serologiczne badanie krwi na kiłę, lambliozę, ureaplazmozę, chlamydię, opryszczkę i inne choroby pozwala szybko zidentyfikować obecność przeciwciał.

Choroby wirusowe i zakaźne

Analiza serologiczna jest aktywnie wykorzystywana przez gastroenterologów, hepatologów i specjalistów chorób zakaźnych do diagnozowania wirusowego zapalenia wątroby.

Rozszyfrowanie serologicznego badania krwi pozwala określić etap przebiegu choroby i odpowiedzieć na pytanie, ile hospitalizacji jest obecnie potrzebne. Jak prawidłowo się przygotować?

Przygotowanie do dostarczenia analizy

Serologiczne badania krwi są wykonywane zarówno w klinikach publicznych, jak i komercyjnych. Preferowane powinno być laboratorium wyposażone w nowoczesny sprzęt i wykwalifikowany personel.

Próbkami biologicznymi do badań mogą być ślina i kał, ale w większości przypadków wykorzystywana jest krew żylna pacjenta. Krew do badania serologicznego pobierana jest z żyły łokciowej w laboratorium. Przed przystąpieniem do badania należy skonsultować się z lekarzem w sprawie przygotowania do tego zabiegu.

Aby przygotować się do dostarczenia analizy do badania serologicznego należy przestrzegać kilku prostych zasad.

Krew jest pobierana w spokojnym stanie przed posiłkami, to znaczy na pusty żołądek. Wcześniej nie należy poddawać się innym badaniom, takim jak zdjęcia rentgenowskie, ultradźwięki itp.

Konieczne jest wykluczenie stosowania leków przeciwbakteryjnych i niektórych innych leków na kilka tygodni przed oddaniem krwi. Niektóre zalecenia w tym przypadku zależą od choroby, na którą wykonuje się test. Na przykład test zapalenia wątroby obejmuje unikanie tłustych potraw i alkoholu na 48 godzin przed zabiegiem.

Reakcja fluorescencji

Wśród odmian reakcji serologicznych jest reakcja fluorescencyjna. Technika ta wykorzystuje odczynnik, który podkreśla przeciwciała w surowicy krwi.

Ustawienie reakcji serologicznej typu bezpośredniego polega na wyznakowaniu specyficznych przeciwciał substancją fluorescencyjną. Ta reakcja jest najszybsza i przeprowadzana jest w jednym etapie.

Inną opcją przeprowadzenia takiej analizy jest pośrednia lub RNIF. Przeprowadzana jest w dwóch etapach. W pierwszym etapie przeciwciała nie są znakowane znacznikami fluorescencyjnymi, aw drugim kroku odpowiednio znakowane przeciwciała służą do wykrywania antygenów i przeciwciał. Luminescencja występuje dopiero po związaniu się z określonym przeciwciałem.

Co pokazuje serologiczne badanie krwi? Wynik całej procedury jest oceniany przez specjalne urządzenie, które analizuje siłę promieniowania, ujawnia kształt i rozmiar badanego obiektu. Czynniki sprawcze chorób zakaźnych są wykrywane z wynikiem, którego wiarygodność wynosi 90-95%, w zależności od rodzaju i stadium patologii.

Połączony test immunosorpcyjny

Te rodzaje serologii wykorzystują unikalne, stabilne odczynniki. Oznaczone substancje wydają się przyklejać do pożądanych przeciwciał. W rezultacie otrzymujemy wynik jakościowy lub ilościowy.

Jeśli nie zostaną znalezione żadne wyrażone markery, wynik zostanie uznany za negatywny. W przypadku wykrycia obecności przeciwciał w próbkach biologicznych podczas badania jakościowego wynik analizy uważa się za pozytywny. Analiza ilościowa komórek daje dokładniejszy wynik.

Analizując wskaźniki analizy (na przykład ilość wykrytych komórek), specjalista określa, czy choroba jest na początkowym etapie, w ostrym stadium, czy też przewlekła postać patologii się pogorszyła. W celu postawienia diagnozy lekarz bierze pod uwagę nie tylko dane z badania serologicznego, ale także obraz kliniczny choroby.

Cechy tego testu

Przeprowadzenie tej analizy nie zawsze jest w stanie dać 100% pewność, że dana choroba została wykryta. Zdarza się, że wyniki mogą być niejednoznaczne i wymagane są inne procedury.

Na przykład podczas testu na brucelozę surowicę bada się pod kątem samoretencji bez antygenu. Znacząco zwiększa to wiarygodność testów. Analiza brucelozy może być pozytywna lub negatywna, a także budzić wątpliwości.

W przypadku otrzymania wątpliwych wyników, które nie mają jednoznacznej interpretacji, zaleca się ponowne wykonanie analizy. Ponadto brucelozę można wykryć za pomocą posiewów krwi, badania szpiku kostnego i płynu mózgowo-rdzeniowego.

Zalety serologicznego badania krwi

Techniki diagnostyczne wykorzystujące testy serologiczne są szeroko stosowane we współczesnej praktyce medycznej. Jest to szczególnie często wykonywane przy określaniu patologii wirusowych i zakaźnych.

Te same testy są stosowane w badaniach przesiewowych i badaniach lekarskich w celu zapobiegania epidemiologicznemu rozprzestrzenianiu się infekcji.

Zalety metody obejmują:

• Wysoki poziom pewności.
• Szybka reakcja i wyniki. Wyniki RSC są znane w ciągu 24 godzin. W szczególnej sytuacji, w warunkach szpitalnych, analiza będzie gotowa w ciągu kilku godzin.
• Monitorowanie rozwoju choroby i skuteczności terapii.
• Niski koszt i dostępność dla pacjentów.

Wady metody

Jednak badania serologiczne mają również swoje wady.

Należy do nich fakt, że analiza powinna uwzględniać okres inkubacji choroby, aby uzyskać bardziej wiarygodny obraz.

Na przykład określenie opryszczki pospolitej pierwszego lub drugiego typu jest możliwe dopiero po 14 dniach od momentu zakażenia. Analizę na obecność wirusa niedoboru odporności przeprowadza się po 30 dniach, po 90 dniach i sześciu miesiącach od kontaktu z osobą zakażoną.

Oczywiście na wiarygodność wyników może mieć wpływ również czynnik ludzki: zaniedbanie zasad przygotowania do pobrania krwi lub błąd popełniony przez asystenta laboratoryjnego podczas reakcji.

Według statystyk błędny wynik można uzyskać w 5% przypadków. Doświadczony lekarz, badając pacjenta, po przestudiowaniu obrazu klinicznego, w większości przypadków może obliczyć popełniony błąd.

Analiza kiły jest jedną z najczęstszych wśród testów laboratoryjnych. Testy na kiłę są szeroko stosowane podczas badań profilaktycznych. Za pomocą mikroskopii wykrywa się czynnik sprawczy kiły -. Za pomocą reakcji serologicznych potwierdza się rozpoznanie kiły, ustala się rozpoznanie kiły utajonej, monitoruje się skuteczność leczenia i określa się wskaźnik wyleczenia pacjentów.

Rozpoznanie kiły ustala się na podstawie danych klinicznych, wykrycia czynników sprawczych kiły w próbkach materiału i potwierdzenia rozpoznania metodami badań serologicznych. Objawy kiły są liczne i różnorodne, dlatego chorobę wykrywają lekarze różnych specjalności. Diagnozę różnicową kiły pierwotnej przeprowadza się przy wielu chorobach.

Ryż. 1. Na zdjęciu podstawową manifestacją kiły jest twarda chancre.

Przeciwciała na blady treponema i diagnostyka serologiczna

Po zakażeniu kiłą w ciele pacjenta powstają przeciwciała. Diagnostyka serologiczna pomaga lekarzowi zbadać dynamikę powstawania przeciwciał w organizmie pacjenta z kiłą w początkowych stadiach choroby, w okresie leczenia i po jego zakończeniu, rozwiązać problem nawrotu choroby u pacjenta lub reinfekcji (reinfekcji), do diagnozowania kiły w masowych stanach chorobowych.

Przeciwciała na blady treponema IgM

Przeciwciała IgM powstają jako pierwsze po zakażeniu. Zaczynają być wykrywane za pomocą reakcji serologicznych od drugiego tygodnia po zakażeniu. W 6-9 tygodniu choroby ich liczba staje się maksymalna. Jeśli pacjent nie był leczony, przeciwciała znikają po sześciu miesiącach. Przeciwciała IgM znikają po 1-2 miesiącach. po, po 3 - 6 miesiącach. - po leczeniu kiły późnej. Jeśli zostanie zarejestrowany ich wzrost, oznacza to lub wskazuje na ponowną infekcję. Cząsteczki IgM są duże i nie przechodzą przez łożysko do płodu.

Przeciwciała na blady treponema IgG

Przeciwciała immunoglobuliny IgG pojawiają się pod koniec pierwszego miesiąca (w 4 tygodniu) od momentu zakażenia. Ich miano jest wyższe niż miano IgM. IgG utrzymują się dość długo po leczeniu.

Niespecyficzne przeciwciała

Istnieje wiele reakcji serologicznych. Wynika to z wielości antygenowej bladego treponema. W surowicy krwi chorego w różnych stadiach kiły, oprócz specyficznych, powstają pewne niespecyficzne przeciwciała - aglutyniny, wiązania dopełniacza, immobilizyny, przeciwciała powodujące fluorescencję immunologiczną, precypityny itp. Reakcje serologiczne do wykrywania nie -specyficzne przeciwciała mają względną specyficzność, dlatego aby uniknąć błędów diagnostycznych, należy stosować nie jedną, ale kompleks reakcji serologicznych (CSR).

Fałszywie pozytywne testy na kiłę

Charakterystyczną cechą testów niekrętkowych jest wytwarzanie fałszywie dodatnich reakcji. Przeciwciała reaginowe, które są wytwarzane w ludzkiej krwi przeciwko antygenowi kardiolipiny, są rejestrowane nie tylko w kile, ale także w innych chorobach: kolagenozie, zapaleniu wątroby, chorobach nerek, tyreotoksykozie, nowotworach, chorobach zakaźnych (trąd, gruźlica, bruceloza, malaria, dur brzuszny) )., szkarlatyna), podczas ciąży i menstruacji, podczas przyjmowania tłustych potraw i alkoholu. Należy zauważyć, że wraz z wiekiem wzrasta liczba reakcji fałszywie dodatnich.

Ryż. 2. Zdjęcie przedstawia kiłę pierwotną u kobiet.

Diagnostyka laboratoryjna kiły za pomocą testów serologicznych

Testy serologiczne na kiłę dzielą się na krętkowe i niekrętkowe.

1. Testy niekrętkowe

Antygen kardiolipinowy jest stosowany jako antygen w tej grupie testów. Antygeny lipidowe czynników sprawczych kiły są najliczniejsze. Stanowią 1/3 suchej masy komórki. Za pomocą testów niekrętkowych wykrywa się przeciwciała reaginowe, które są wytwarzane przeciwko antygenowi kardiolipiny. Ta grupa obejmuje reakcję wiązania dopełniacza (RSKcard), reakcję mikroprecypitacji (RMP), szybkie oznaczanie odczynników w osoczu (RPR) itp. Za pomocą testów niekrętkowych przeprowadza się podstawowe badania przesiewowe w kierunku kiły (badanie grup populacji), a możliwość uzyskania wyników w wariancie ilościowym pozwala na wykorzystanie tych testów do monitorowania skuteczności leczenia. Pozytywne wyniki testów niekrętkowych należy potwierdzić testami krętkowymi. Charakterystyczną cechą testów niekrętkowych jest wytwarzanie fałszywie dodatnich reakcji.

2. Testy krętkowe

Testy krętkowe wykorzystują antygeny pochodzenia krętkowego wyizolowane z kultury treponema pallidum. Z ich pomocą potwierdzają się pozytywne wyniki badań pozakrętkowych. Do tej grupy należą: RSKtrep - reakcja wiązania dopełniacza, RIF - reakcja immunofluorescencyjna i jej modyfikacje, RIT, RIBT - reakcja unieruchomienia bladego krętka, RPHA - reakcja biernej hemaglutynacji, ELISA - test immunoenzymatyczny.

3. Testy na kiłę przy użyciu rekombinowanych antygenów

Antygeny do tej grupy testów pozyskiwane są metodą inżynierii genetycznej i wykorzystywane w reakcjach - TPHA i ELISA, w analizach immunoblottingowych (IB) oraz immunochromatograficznych.

Ryż. 3. Do rozpoznania kiły służy zestaw testów serologicznych.

Rozpoznanie kiły za pomocą testów niekrętkowych

Aby wykryć kiłę, stosuje się testy niekrętkowe lub kompleks reakcji serologicznych (CSR). Diagnostyka serologiczna będzie stosowana od 5 tygodnia od momentu zakażenia lub od 2-3 tygodni od początku. Przeciwciała są wykrywane u prawie wszystkich pacjentów ze świeżą pierwotną. Odczyny serologiczne są dodatnie u 70-80% pacjentów, w 50-60% przypadków u pacjentów z trzeciorzędową kiłą utajoną.

Reakcje serologiczne przy użyciu testów niekrętkowych mogą dawać wyniki fałszywie dodatnie.

Ryż. 4. Pobieranie krwi do badania w kierunku kiły.

Reakcja wiązania dopełniacza (karta RSK, KSK z KA, reakcja Wassermana)

Reakcja Wassermana (RW, РВ), wynaleziona przez A. Wassermana ponad 100 lat temu, dziś przeszła wiele zmian, jednak jako hołd dla tradycji zachowała swoją nazwę do chwili obecnej. Odczyn wiązania dopełniacza z użyciem antygenu kardiolipiny ma na celu nie tylko wykrycie przeciwciał, ale wykonywany jest również w wersji ilościowej – z różnymi rozcieńczeniami surowicy, co umożliwia monitorowanie skuteczności leczenia. Negatywną stroną tego typu badań jest niska czułość i specyficzność, uzyskiwanie wyników fałszywie dodatnich.

Istota reakcji Wassermana jest następująca: antygeny użyte do sformułowania reakcji Wassermana, w przypadku obecności przeciwciał przeciwko czynnikom sprawczym kiły w ludzkiej krwi, za pomocą komplementu, wiążą się z nimi i wytrącić. Intensywność reakcji wskazuje znak (+). Reakcja może być ujemna (-) - brak osadu, wątpliwa (mały osad lub +), słabo dodatnia (++), dodatnia (+++) i ostro dodatnia (++++).

Bardziej czuła jest zmodyfikowana reakcja Wassermanna - reakcja Kolmera. Z jego pomocą wykrywa się przeciwciała w surowicach, gdzie reakcja Wassermana dała wynik negatywny.

Przy ostrych reakcjach dodatnich przeprowadza się ilościowe oznaczanie odczynników, dla których stosuje się surowicę w rozcieńczeniach od 1:10 do 1: 320, co umożliwia wykorzystanie tego typu badań do monitorowania skuteczności leczenia. Na przykład spadek miana przeciwciał i ich późniejsza seronegatywność (uzyskanie wyników ujemnych) wskazuje na pomyślne wyleczenie choroby.

Ryż. 5. Badanie krwi na kiłę - reakcja Wassermana.

Mikroreakcja strącania (MPR)

Mikroreakcja strącająca jest wykorzystywana do masowych badań określonych grup populacji, diagnostyki kiły i kontroli skuteczności leczenia. Do przeprowadzenia tego typu badań wymagana jest niewielka ilość badanego materiału. Mikroreakcja wytrącania opiera się na reakcji immunologicznej antygen-przeciwciało. W przypadku obecności przeciwciał w surowicy krwi pacjenta, kompleks antygen-przeciwciało wytrąca się z utworzeniem płatków. Reakcję prowadzi się w studzienkach specjalnej szklanej płytki. Ocenia się ją na podstawie intensywności wytrąconego osadu i wielkości płatków w (+) jako reakcji Wassermana. Podczas badania kobiet w ciąży, dawców i monitorowania skuteczności leczenia nie stosuje się. VDRL i RPR to rodzaje mikroreakcji.

Ryż. 6. Widok reakcji wytrącania w kropli na szkle.

Ryż. 7. Badanie krwi w kierunku kiły - reakcja mikroprecypitacji.

Ryż. 8. Zestaw do szybkiego oznaczania reagin w osoczu (Test na kiłę RPR).

Wszystkie dodatnie testy uzyskane podczas nieswoistych reakcji serologicznych wymagają potwierdzenia reakcjami swoistymi – testami krętkowymi.

Rozpoznanie kiły za pomocą testów krętkowych

Podczas przeprowadzania testów krętkowych stosuje się antygeny pochodzenia krętkowego. Ich wadą jest brak możliwości wykorzystania ich do kontroli skuteczności leczenia, uzyskiwania wyników dodatnich w krętkach i krętkach niewenerycznych oraz uzyskiwania wyników fałszywie dodatnich w chorobach onkologicznych, trądzie i niektórych patologiach endokrynologicznych. Testy takie jak RPHA, ELISA i RIF pozostają pozytywne przez wiele lat po wyleczeniu kiły, aw niektórych przypadkach do końca życia.

RIBT i RIF są najbardziej swoistymi ze wszystkich testów serologicznych stosowanych do diagnozowania kiły. Pozwalają rozróżnić reakcje fałszywie dodatnie, zidentyfikować późne formy kiły, które występują przy reakcjach negatywnych. Za pomocą RIBT rozpoznawane są reakcje fałszywie dodatnie u kobiet w ciąży, gdy konieczne jest rozwiązanie problemu zakażenia dziecka.

Reakcja unieruchomienia Treponema pallidum (RIBT, RIT)

Istota reakcji polega na tym, że przeciwciała w surowicy krwi pacjenta unieruchamiają blady treponema. Reakcję z unieruchomieniem do 20% patogenów uważa się za negatywną, słabo pozytywną - 21 - 50%, pozytywną - 50 - 100%. RIBT czasami daje wyniki fałszywie dodatnie. Badanie jest złożone i czasochłonne, jednak jest niezbędne w diagnostyce różnicowej utajonych postaci choroby oraz fałszywie dodatnich wyników odczynów serologicznych, w tym u kobiet w ciąży. RIBT daje 100% dodatni wynik w kile wtórnej, wczesnej i późnej, w 94 - 100% przypadków - w innych postaciach kiły.

Reakcja immunofluorescencyjna (RIF)

Istota reakcji polega na tym, że blade krętki (antygeny) w połączeniu z przeciwciałami znakowanymi fluorochromami emitują żółto-zieloną poświatę w mikroskopie fluorescencyjnym. Wynik oceniany jest znakiem (+). Za pomocą RIF wykrywa się immunoglobuliny klasy A. Reakcja immunofluorescencyjna staje się dodatnia wcześniej niż reakcja Wassermana. Zawsze jest dodatni w kile wtórnej i utajonej, w 95-100% przypadków jest dodatni w kile trzeciorzędowej i wrodzonej. Technika przeprowadzania tego typu badań jest prostsza niż w przypadku RIBT, ale nie można zastąpić RIF RIBT, ponieważ ta reakcja jest gorsza od RIBT pod względem specyficzności. RIF-10 (modyfikacja RIF) jest bardziej czuły, RIF-200 i RIF-abs są bardziej specyficzne.

Ryż. 9. Badanie krwi w kierunku kiły - reakcja immunofluorescencyjna (RIF).

Test adhezji immunologicznej Treponema pallidum (TRIPBT)

Istota reakcji polega na tym, że blade krętki uczulone surowicą pacjenta w obecności dopełniacza przylegają do powierzchni erytrocytów. Otrzymane kompleksy wytrącają się podczas wirowania. Czułość i swoistość tego testu są zbliżone do RIF i RIBT.

Test immunoenzymatyczny na kiłę (ELISA)

Za pomocą testu ELISA oznacza się immunoglobuliny klasy M i G. Metoda IgM - ELISA może być stosowana jako test przesiewowy i potwierdzający. Czułość i swoistość ELISA są podobne do RIF. W przypadku kiły test ELISA daje pozytywny wynik od trzeciego miesiąca infekcji i pozostaje pozytywny przez dość długi czas (czasami do końca życia).

Ryż. 10. Analizator ELISA.

Reakcja pasywnej (pośredniej) hemaglutynacji (RPHA)

TPHA opiera się na zdolności erytrocytów, na których adsorbowane są antygeny Treponema pallidum, do sklejania się (hemaglutynacji) w obecności surowicy pacjenta. RPHA służy do diagnozowania wszystkich postaci kiły, w tym utajonej. Podczas stosowania antygenu wysokiej jakości ten typ reakcji serologicznej przewyższa wszystkie inne testy swoistością i czułością.

Ryż. 11. RPHA służy do diagnozowania wszystkich postaci kiły.

Ryż. 12. Analiza w kierunku kiły - reakcja biernej (pośredniej) hemaglutynacji (schemat).

Ryż. 13. Pojawienie się odwróconej parasolki, zajmującej całe dno probówki, wskazuje na pozytywną reakcję. W przypadku, gdy erytrocyty osadzają się w kolumnie („guziku”) pośrodku dna probówki, mówią o reakcji negatywnej.

Ryż. 14. Test RPGA w warunkach laboratoryjnych.

Diagnostyka mikrobiologiczna

Wraz z diagnostyką serologiczną ważną rolę odgrywa metoda wykrywania bladych krętków (diagnostyka mikrobiologiczna), zwłaszcza w okresie kiły seronegatywnej, kiedy we krwi nie ma jeszcze przeciwciał, ale już pojawiają się pierwsze objawy świeżej kiły pierwotnej ( twardy kaszel).

Materiał biologiczny do badań to wydzielina z powierzchni owrzodzeń twardych (chancres), zawartość kiły krostkowej, grudki sączące i erozyjne, punkciki zakażonych węzłów chłonnych, płyn mózgowo-rdzeniowy i płyn owodniowy oraz krew do PCR.

Najlepszą metodą wykrywania czynników sprawczych kiły jest badanie materiału biologicznego w ciemnym polu mikroskopu. Ta technika pozwala zobaczyć bladą treponemę w stanie żywym, zbadać jej cechy budowy i ruchu, odróżnić patogenne patogeny od saprofitów.

Ryż. 15. Analiza w kierunku kiły - mikroskopia ciemnego pola.

Ryż. 16. Podczas badania suchych rozmazów stosuje się barwienie Romanowskiego-Giemsy. Jasne treponemy stają się różowe, wszystkie inne rodzaje krętków stają się fioletowe.

Wykrycie bladych krętków pod mikroskopem ciemnego pola jest bezwzględnym kryterium ostatecznego rozpoznania kiły.

Ryż. 17. Do wykrywania bakterii stosuje się reakcję immunofluorescencyjną (RIF) - test krętkowy. Specyficzny kompleks antygen-przeciwciało, w połączeniu ze specyficzną surowicą znakowaną fluorochromem, w świetle mikroskopu fluorescencyjnego nadaje bakteriom zielonkawą poświatę.

Ryż. 18. Czynniki sprawcze kiły są wyraźnie widoczne w rozmazach przygotowanych metodą Levaditi (impregnacja srebrem). Jasnociemne treponemy na tle żółtego zabarwienia komórek zainfekowanych tkanek.

Ryż. 20. Na zdjęciu kolonia bladego treponemy. Uzyskanie kultury bakterii jest trudne. Praktycznie nie rosną na sztucznych pożywkach. Na podłożach zawierających surowicę końską i króliczą kolonie pojawiają się w 3-9 dniu.

PCR na kiłę

Skuteczna i obiecująca jest dziś technika reakcji łańcuchowej polimerazy. PCR w kierunku kiły pozwala uzyskać wynik w ciągu kilku godzin, aw materiale pobranym do diagnostyki może znajdować się co najmniej kilka patogenów.

Ryż. 21. PCR na kiłę pozwala wykryć DNA lub jego fragmenty bladego krętka.

Czułość tej metody badawczej zależy od obecności bladych krętków w materiale biologicznym i sięga 98,6%. Swoistość tego testu w dużej mierze zależy od właściwego doboru celu amplifikacji podczas diagnostyki i sięga 100%.

Jednocześnie, ze względu na niedostatecznie zbadane cechy porównawcze czułości i swoistości bezpośrednich metod diagnozowania kiły i PCR, ta metoda badania w Federacji Rosyjskiej do diagnozowania choroby nie została jeszcze zatwierdzona.

PCR na kiłę można przeprowadzić tylko w niektórych przypadkach, jako dodatkową metodę diagnozowania kiły wrodzonej, kiły nerwowej, jeśli trudno jest zdiagnozować kiłę metodami serologicznymi u pacjentów z HIV.

Ryż. 22. Wykrycie DNA treponema pallidum metodą PCR wskazuje na obecność żywych bakterii lub pozostałości bakterii martwych, ale zawierających dodatkowe kopie poszczególnych odcinków chromosomalnego DNA zdolne do tworzenia dodatkowych kopii.

Badanie serologiczne, inaczej analiza serologiczna, to badanie materiałów biologicznych w laboratorium. Analiza ta pozwala na stwierdzenie obecności bakterii chorobotwórczych w badanym organizmie lub w produktach, które przechodzą kontrolę kontrolną.

Serologiczne metody diagnostyczne

Badanie surowic lub innych obiektów biologicznych (mleka, żółci, śliny, wymazów z błony śluzowej jelit, a także kopromateriałów) daje dość wiarygodne wyobrażenie o reakcji organizmu na wprowadzenie czynnika zakaźnego. Należy zauważyć, że zastosowanie metod badań serologicznych ma nie tylko wartość diagnostyczną, ale dostarcza rzetelnych informacji o stopniu ochrony organizmu, stanie odporności populacji oraz krążeniu różnych typów rotawirusów w badanym regionie. Wyniki badań serologicznych mogą również dostarczać informacji do optymalizacji składu antygenowego leków profilaktycznych oraz służyć do oceny skuteczności immunologicznej szczepionek.

Należy jednak zauważyć, że konieczność badania par surowic krwi pobieranych w odstępach 1,5-2 tygodni oraz dostępność ekspresowych metod diagnostycznych zmniejszają wartość diagnostyczną reakcji serologicznych.

Dlatego tradycyjne testy serologiczne – odczyn wiązania dopełniacza (CFR) i odczyn hamowania hemaglutynacji (HIT) mają obecnie ograniczone zastosowanie. Niemniej jednak prostota tych metod, dostępność i taniość odczynników sprawiają, że nadal znajdują one zastosowanie w praktyce laboratoryjnej. Ustawienie RSK i RTGA odbywa się zgodnie z ogólnie przyjętymi metodami.

Przykładem wykorzystania RSK do badania odporności poszczepiennej jest praca K. Midkhana (1989). W badaniu surowic od 116 dzieci w wieku 5 miesięcy wiarygodne serokonwersje według RSK odnotowano w 44% przypadków, a według wyników testu neutralizacji (PH) i testu immunoenzymatycznego (ELISA) – w 83 i 96%, odpowiednio.

Badania odporności

W celu zbadania odporności populacji za pomocą CSC zbadaliśmy 1246 surowic pacjentów z OKZ w wieku od kilku miesięcy do 80 lat i starszych. Wykazano, że średnie geometryczne mian przeciwciał wiążących dopełniacz były najwyższe w grupach wiekowych 2-4 i powyżej 60 lat, co potwierdza nasze wcześniejsze dane o największej częstości zakażenia rotawirusem wśród osób z tych grup wiekowych.

Test na rotawirusy

RTGA jest stosowany w badaniu zakażenia rotawirusem częściej niż RSK iz reguły w połączeniu z innymi testami laboratoryjnymi. Tak więc Andrade J.P. i in. wykorzystał RTGA, immunoblot, ELISA block do badania przeciwciał przeciwko białkom strukturalnym rotawirusa VP2, VP4, VP6 i VP7. Według autorów u dzieci w wieku od 2 do 4 lat przeciwciała antyhemaglutynujące przeciwko rotawirusom stwierdzono u 70-80%.

W zależności od poziomu przeciwciał na określone białka, według RTGA, autorzy wyodrębnili 4 grupy osobników. Grupy I i II (60%) obejmowały dzieci z wysokimi poziomami przeciwciał przeciwko VP4 i VP7 i zostały sklasyfikowane jako „odporne”. Grupa III (4%) obejmuje osoby z niskim poziomem przeciwciał przeciwko VP7 i VP6, tzw. „częściowo uodpornione”. Dzieci grupy IV (36%), u których według RTGA nie wykryto przeciwciał, zostały określone jako „nieodporne” i stanowiły grupę ryzyka, gdyż wśród nich możliwy jest rozwój ciężkiego zakażenia rotawirusem. Należy zauważyć, że w tej obserwacji wskaźniki czułości RTGA i bloku ELISA były dość porównywalne.

RTGA był wielokrotnie używany do badania białka strukturalnego VP4. Badania wykazały, że jego aktywność hemaglutynacji jest specyficznie hamowana przez surowice odpornościowe, potwierdzając w ten sposób, że VP4 jest hemaglutyniną rotawirusów. Podobne dane opublikował wcześniej M. Ezekiel (1995).

Z przedstawionych prac wynika zatem, że RSK i RTGA są nadal stosowane w badaniu zakażenia rotawirusem, jednak metody te mają charakter pomocniczy i powinny być powielane innymi badaniami.

Testy neutralizacji

Reakcja neutralizacji opiera się na zdolności ludzkich lub zwierzęcych surowic odpornościowych do neutralizowania namnażania się wirusa, a tym samym do zapobiegania manifestacjom związanym z tym zjawiskiem. W zależności od modelu biologicznego objawami tymi mogą być: rozwój choroby o określonej klinice, reprodukcja i izolacja wirusa, wytwarzanie specyficznych przeciwciał, a także pojawienie się efektu cytopatycznego lub tworzenie się pęcherzyków podczas stosowania Hodowlę komórkową.

Modele makrobiologiczne są obecnie stosowane głównie w weterynarii, wykrywanie wirusów u ludzi w większości przypadków odbywa się na hodowlach komórkowych, zarówno pierwotnych, jak i przetoczonych. Metody PH są podzielone na dwie grupy zgodnie z głównym schematem ustawień. W jednej grupie metod nierozcieńczoną surowicę łączy się z seryjnymi rozcieńczeniami wirusa, w drugiej rozcieńczenia surowicy bada się ze stałą dawką wirusa. Aby zainicjować reakcję neutralizacji, preferowany jest patogen, który powoduje wyraźny efekt cytopatyczny lub jest intensywnie rozmnażany w modelu biologicznym.

Jednak rotawirusy mają niestety łagodne działanie cytopatyczne, co przekonująco wykazali badacze pod kierunkiem B. Webera (1992). Badanie 121 próbek kału od dzieci z OKI klasyczną metodą izolacji wirusa na komórkach MA-104 pod kontrolą CPP wykazało jedynie 4 przypadki dodatnie (3,3%), natomiast zastosowanie nowoczesnych metod wykrywania rotawirusów (ELISA, PCR , EF w PAAG) pozwoliły podnieść ten wskaźnik do 54,4%. Dlatego, aby zwiększyć czułość PH, wymagane są dodatkowe techniki metodologiczne, które pomogą zwizualizować redukcję wirusa, które są wykorzystywane jako: znacznik radioaktywny lub immunofluorescencyjny, tworzenie płytek, barwienie immunoperoksydazą itp. Należy zauważyć, że sama zasada oznaczania poziomu przeciwciał neutralizujących wirusy jest identyczny z klasyczną metodą PH, różniąc się od niej jedynie sposobem rozdzielczości, czyli wizualizacją aktywności neutralizującej wirusy surowicy. W tym przypadku aktywność surowicy zależy od jej zdolności do tłumienia przejawów zakaźnych właściwości wirusa.

Obecnie w większości badań wykorzystuje się dwie metody pomiaru ilości przeciwciał neutralizujących wirusy przeciwko rotawirusom. Jedna z nich polega na zliczeniu liczby pojedynczych komórek zakażonych wirusem (metoda Plaq), które specyficznie wiążą się z przeciwciałami skoniugowanymi fluorescencyjnie. W innym teście poziom neutralizacji wirusa ocenia się na podstawie zmniejszenia produkcji antygenu wirusowego w teście immunologicznym enzymu. Badanie porównawcze obu metod wykazało liniową zależność między wskaźnikami ELISA a liczbą jednostek tworzących łysinki dla każdego prototypowego szczepu serotypu rotawirusa: Wa, DS-1, P, VA-70. Uzyskane dane ułatwiają określenie rozcieńczenia surowicy, które zapewnia neutralizację 60% wirusa zakaźnego (miano przeciwciał neutralizujących). Okazało się, że miana przeciwciał przy badaniu materiałów obiema metodami są takie same i oba testy nie różnią się powtarzalnością wyników. Pewną zaletą metody wykorzystującej przeciwciała znakowane fluoresceiną zdaniem autorów jest większa obiektywność wyników (automatyczna rejestracja) i mniejsza pracochłonność.

Do pomiaru miana przeciwciał neutralizujących wirusy stosuje się również zmodyfikowane PH poprzez blokowanie testu ELISA przeciwciałami monoklonalnymi.

• badanie intensywności produkcji przeciwciał neutralizujących wirusy (VNA) podczas naturalnej infekcji i szczepienia;
• tworzenie VNA do różnych białek strukturalnych rotawirusów;
• ocena roli surowic krwi VNA i przeciwciał wydzielniczych ze śliny i błony śluzowej jelit w ochronie przed naturalną infekcją (Ward R. i in., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

Podsumowując, należy podkreślić, że reakcja neutralizacji w różnych jej odmianach jest nadal szeroko stosowana zarówno w badaniach eksperymentalnych, jak i klinicznych, a dzięki wysokiej czułości i specyficzności stanowi standard dla wszystkich innych metod serologicznych.

Analiza opadów

Testy precypitacyjne opierają się na oddziaływaniu surowicy z antygenami wirusowymi za pomocą procesów osmotycznych lub pod wpływem pola elektrycznego w podłożu żelowym lub innym nośniku. Jedną z takich metod jest reakcja licznika immunoelektroforezy (VIEF). Autorzy zbadali surowice krwi zdrowych i chorych osób dorosłych i dzieci z biegunką rotawirusową oraz swoiste preparaty immunoglobulin na obecność przeciwciał przeciwko rotawirusowi ludzkiemu metodą VIEF w 7% agarozie z dodatkiem 4% glikolu polietylenowego. Okazało się, że przeciwciała przeciwko RV krążą dość szeroko i stwierdzono je u chorych dorosłych i dzieci odpowiednio u 90,2-87,7% oraz u 78,4% zdrowych dzieci w wieku poniżej 1 roku. Wszystkie 32 serie immunoglobulin zawierały przeciwciała przeciwko RV w mianach 1:4-1:128. Zdaniem autorów metoda nadaje się do badania odporności populacji.

radioimmunoprecypitacja

Inną techniką wytrącania jest radioimmunoprecypitacja. Autorzy wykorzystali tę metodę do zbadania odpowiedzi immunologicznej na białka strukturalne i niestrukturalne w pierwotnym zakażeniu rotawirusem i wykazali, że odpowiedź immunologiczna była bardziej wyraźna na VP4 niż na VP7.

Podczas badania surowiczej i wydzielniczej odpowiedzi immunologicznej na zastosowanie czterowalentnej reasortantowej szczepionki u noworodków. W tym celu zastosowano technikę testu radioimmunologicznego wraz z testami ELISA i PH. Wykazano, że odpowiedź immunologiczna w surowicy zależy od dawki wstrzykniętego antygenu; jeśli chodzi o wykrywanie przeciwciał w ślinie, autorzy tłumaczą ich pojawienie się spożywaniem mleka matki.

Reakcja radioimmunoprecypitacji jest również wykorzystywana w drobnych pracach badawczych. Tak więc J. Tosser wykorzystał tę metodę do badania topologii białka VP6 w strukturze genomu i zasugerował, że VP 6 bierze udział w tworzeniu wewnętrznych kanałów kapsydu.

Inni badacze w 1994 roku również wykorzystali metodę radioimmunoprecypitacji do badania zmian immunologicznych w zakażeniu rotawirusem. Autorzy wykazali, że w okresie ostrym rejestrowane są głównie IgA przeciwko VP2 i VP6, natomiast w okresie rekonwalescencji zmniejsza się intensywność wytwarzania przeciwciał wydzielniczych (IgA) nie tylko przeciwko VP2, ale także innym białkom strukturalnym i niestrukturalnym. . Później podobne dane uzyskano metodą radioimmunoprecypitacji. Autorzy wykazali, że oprócz VP4 i VP7, w proces immunologiczny zaangażowane są również VP2, VP6 i NSP2.

Zatem immunoprecypitację zastosowano diagnostycznie do badania odpowiedzi immunologicznej w naturalnym zakażeniu rotawirusem.

W ostatnich latach immunoprecypitację zastąpiono metodą radioimmunoprecypitacji, która jest wykorzystywana do oceny odporności poszczepiennej i poinfekcyjnej w zakażeniu RV oraz do drobnych postępów badawczych.

metody hybrydyzacji

Metoda immunoblot jest szeroko stosowana do oznaczania przeciwciał przeciwko rotawirusom. Przykładem zastosowania techniki Western-blot w diagnostyce zakażenia rotawirusem jest praca H. Ushijimy (1989), który za pomocą immunoblottingu scharakteryzował specyficzność przeciwciał przeciwko białkom strukturalnym RV u 21 dzieci z OKZ, a także poziom koproprzeciwciał IgA i IgG przeciwko tym białkom u dzieci niezakażonych. Autorzy postawili hipotezę, że immunoblotting może umożliwić ustalenie rozpoznania choroby na pojedynczej próbce koproprzeciwciał bez badania sparowanych surowic krwi. Możliwość zastosowania techniki Western blot do określenia poziomu przeciwciał przeciwko VP1, VP2, VP4, VP6 i VP7 została zademonstrowana przez Pavlov I. i wsp. (1991). Autorzy zbadali surowice krwi ludzi i zwierząt na obecność przeciwciał przeciwko szczepom rotawirusów SA-11, DS-1, Wan Ito i doszli do wniosku, że metoda Western blot może być z powodzeniem stosowana do oceny odporności w praktyce klinicznej.

Uważa się, że immunoblot może być wykorzystany do potwierdzenia rozpoznania zakażenia rotawirusem bez użycia sparowanych surowic dla jednej próbki koproprzeciwciał.

Wraz z RTHA i ELISA, immunoblot został użyty do zbadania odporności stadnej. Znaleziono grupę osobników nieodpornych na VP2, VP4, VP6 i VP7, która reprezentuje grupę ryzyka, przede wszystkim wymagającą ochrony za pomocą czynnej i biernej immunizacji (Andrade J.P. i in., 1996).

Zastosowanie immunoblotu w badaniu zmian serologicznych w procesie naturalnej infekcji RV odnotowują również Begue R. i in. (1998). Autorzy potwierdzili, że przeciwciała przeciwko VP2 i VP6 są najczęściej zaangażowane w odpowiedź immunologiczną na infekcję, a przeciwciała przeciwko VP7 i VP4 są rzadziej zaangażowane.

Analiza immunofluorescencyjna

Pośrednia metoda immunofluorescencyjna przy użyciu znakowanych fluorochromem surowic antygatunkowych jest stosowana do miareczkowania surowic testowych na komórkach zakażonych rotawirusami. Reakcja opiera się na specyficznym oddziaływaniu znakowanych przeciwciał i homologicznego antygenu, podczas gdy kompleks antygen-przeciwciało można łatwo wykryć za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego.

Korzystając z tej metody, autorzy przeprowadzili badanie serologiczne dwóch grup Indian południowoamerykańskich i stwierdzili wysoki odsetek osób seropozytywnych w obu grupach: odpowiednio 67,8 i 77,4% w teście ELISA oraz 45,5 i 56,7% w IFM.

W innym badaniu dotyczącym oznaczania poziomu przeciwciał RV grupy C we krwi pępowinowej za pomocą IFM wykazano, że u 30% kobiet w wieku rozrodczym wykryto te przeciwciała, co wskazuje na przebytą infekcję.

Test ELISA jest obecnie stosowany, obok PH, w diagnostyce serologicznej zakażenia rotawirusem niezwykle szeroko. Ta metoda, oparta na wykorzystaniu przeciwciał lub antygenów znakowanych enzymem, jest najbardziej odpowiednia i obiecująca w diagnostyce serologicznej zakażenia rotawirusem ze względu na łatwość wdrożenia i ekonomiczność. Metoda umożliwia prowadzenie masowych badań seroepidemicznych populacji, ocenę skuteczności immunologicznej i epidemiologicznej szczepionek, badanie ochronnej roli przeciwciał różnych klas w różnych płynach biologicznych organizmu człowieka, a także serologiczną diagnostykę zakażenia rotawirusem .

Liczne badania z użyciem testu ELISA przeprowadził R. Azeredo (1989), który wykazał, że liczba pacjentów z OKZ o ustalonej etiologii rotawirusowej była znacznie niższa niż poziom ich zakażenia według wyników badania serologicznego. Dane te wykazały, że wiele klinicznych przypadków zakażenia rotawirusem nie jest diagnozowanych na podstawie wykrycia RV w kale. Dalsze badania dotyczące rozpowszechnienia zakażenia rotawirusem potwierdziły to przypuszczenie. Prowadząc badania seroepidemiologiczne stwierdzono, że 50-70% populacji miało wysoki poziom przeciwciał, co świadczy o powszechnym krążeniu RV w populacji ludzkiej.

Jeszcze większe możliwości otwiera test ELISA w określaniu dynamiki poziomu przeciwciał należących do różnych klas immunoglobulin. Tak więc, według autorów metodologii w 1989 r., Twierdzą oni, że podczas procesu szczepienia zaobserwowano znaczny wzrost przeciwciał przeciwko RV we krwi w 83-96%. Przeciwciała antyrotawirusowe klasy IgA i IgG były równie dobrze wykrywane metodą ELISA i PH przy redukcji osocza – odpowiednio 67,6 i 70,0%. Serokonwersję przeciwciał klasy IgM wykryto odpowiednio u 53 i 44% dzieci metodą ELISA i RSC. Na podstawie wyników analizy intensywności produkcji przeciwciał różnych klas autorzy stwierdzili, że najskuteczniejszą, najprostszą i najszybszą metodą wykrywania serokonwersji po szczepieniu jest metoda oznaczania przeciwciał IgA metodą ELISA.

Wniosek ten został również potwierdzony w pracy R. Bishopa (1996), który wskazał, że na podstawie wyników ankiety 68 par matka-dziecko z rozpoznanym zakażeniem RV wykazano, że wykrywanie przeciwciał IgA metodą ELISA w materiał kałowy jest najbardziej czułym markerem zakażenia, zarówno wyrażonego klinicznie, jak i bezobjawowego. Podobne wyniki w badaniu dzieci z ciężką biegunką RV uzyskał J. Kolomina w 1998 roku.

Jednak do badania intensywności serokonwersji konieczne jest badanie par surowic, co znacznie wydłuża proces diagnostyczny. Jednocześnie dobrze wiadomo, że pojawienie się przeciwciał klasy IgM świadczy o rozpoczęciu procesu zakaźnego. Według naszych danych, uzyskanych podczas badania pacjentów z zakażeniem rotawirusem metodą ELISA i RSK, okazało się, że zgodnie z wynikami testu ELISA wszyscy badani mieli we krwi przeciwciała IgM przeciwko RV, podczas gdy według RSK tylko 77% (R

W ostatnich latach, wraz z uświadomieniem sobie możliwości oznaczania przeciwciał specyficznych dla danego genu i serotypu, test ELISA stał się prawdziwie uniwersalną metodą badania zakażenia rotawirusem, którą stosuje się:

• podczas badania produkcji przeciwciał klas IgA, M, G do poszczególnych strukturalnych i niestrukturalnych białek RV;
• w ocenie skuteczności immunologicznej różnych typów szczepionek: atenuowanych, adaptowanych do zimna, opartych na DNA, reasortowanych;
• podczas badania produkcji przeciwciał w różnych płynach biologicznych organizmu w warunkach naturalnej infekcji i podczas immunizacji.

Zatem, jak wynika z przedstawionych danych, immunologiczne aspekty zakażenia rotawirusem są badane przy użyciu szerokiej gamy metod laboratoryjnych. W rezultacie wybór optymalnej metody badawczej, biorąc pod uwagę jej rozdzielczość, koszty ekonomiczne i czasowe, jest dość skomplikowany i zależy od zadań stojących przed badaczami, a także wyposażenia laboratorium. A jednak z różnorodności metod, naszym zdaniem, należy wyróżnić dwie - reakcję neutralizacji w hodowli komórkowej oraz immunoenzymatyczną - dającą badanie przeciwciał przeciwko różnym klasom immunoglobulin. Możliwość ekspresowej diagnostyki zakażenia rotawirusem przesądza o szczególnej obietnicy tych metod do zastosowania w szerokiej praktyce.

BADANIA SEROLOGICZNE(łac. surowica surowica + grecka doktryna logosu) - metody immunologii, które badają specyficzne właściwości krwi ludzkiej lub zwierzęcej w celu wykrycia antygenów lub przeciwciał za pomocą reakcji serologicznych.

początek S. i. umieścić pod koniec ubiegłego wieku, po odkryciu, że połączeniu antygenu z przeciwciałem (patrz Antygen - reakcja przeciwciała) towarzyszy szereg zjawisk dostępnych do obserwacji wizualnej - aglutynacja (patrz), wytrącanie (patrz) lub liza. Istniała możliwość swoistego rozpoznania antygenów (patrz) lub przeciwciał (patrz), jeśli znany jest jeden z tych składników.

W 1897 roku F. Vidal poinformował, że surowica krwi pacjentów z durem brzusznym selektywnie aglutynuje bakterie duru brzusznego i dlatego tę reakcję (patrz reakcja Vidala) można zastosować w laboratorium. rozpoznanie duru brzusznego. W tym samym roku wykazano, że przesącze kultur bakterii dżumy, duru brzusznego i cholery w połączeniu z odpowiednimi surowicami odpornościowymi tworzą płatki lub osady.

Reakcja wytrącania okazała się odpowiednia do wykrywania dowolnych antygenów białkowych. W latach 1900-1901. K. Landsteiner stwierdził, że w ludzkich erytrocytach występują dwa różne antygeny (A i B), aw surowicy krwi dwie aglutyniny (a i P), co przyczyniło się do wykorzystania reakcji hemaglutynacji do oznaczania grup krwi (zob.).

Reakcja aglutynacji do oznaczania grupy krwi i czynnika Rh jest wykorzystywana w praktyce położniczej, przy transfuzjach krwi i przeszczepianiu tkanek. Przeciwciała przeciwko czynnikowi Rh (patrz) są przeciwciałami niekompletnymi, nie są zdolne do bezpośredniej reakcji z erytrocytami Rh-dodatnimi, dlatego do ich wykrycia należy zastosować reakcję Coombsa (patrz reakcja Coombsa), opartą na wykrywaniu niekompletnych przeciwciał za pomocą antyglobuliny sera. Do erytrocytów o znanej swoistości dodaje się surowicę testową, a następnie surowicę antyglobulinową przeciwko IgG (pośrednia reakcja Coombsa). Fragmenty Fab niekompletnych przeciwciał badanej surowicy przyczepiają się do erytrocytów, a przeciwciała przeciwko IgG przyczepiają się do wolnych fragmentów Fc tych przeciwciał i następuje aglutynacja erytrocytów. W diagnostyce niedokrwistości hemolitycznej wykorzystuje się bezpośrednią reakcję Coombsa.W organizmie takich pacjentów krwinki czerwone łączą się z krążącymi we krwi przeciwciałami przeciwko czynnikowi Rh. Aby je zidentyfikować, do erytrocytów pobranych od pacjenta dodaje się przeciwciała przeciwko IgG. Pojawienie się aglutynacji erytrocytów potwierdza rozpoznanie choroby.

Reakcja hamowania hemaglutynacji - RTGA (patrz: Hemaglutynacja) - opiera się na zjawisku zapobiegania (hamowania) hemaglutynacji erytrocytów przez wirusy przez surowicę odpornościową. Zjawisko hemaglutynacji wirusa nie jest serolem. reakcja i powstaje w wyniku połączenia wirusa z receptorami erytrocytów, jednakże HTA jest testem serologicznym służącym do wykrywania i oznaczania przeciwciał przeciwwirusowych. RTGA jest główną metodą serodiagnostyki grypy, odry, różyczki, świnki, kleszczowego zapalenia mózgu i innych infekcji wirusowych, których czynniki sprawcze mają właściwości hemaglutynujące.

Reakcja biernej lub pośredniej hemaglutynacji, wykorzystuje erytrocyty lub neutralne syntetyczne związki chemiczne (np. cząsteczki lateksu), na powierzchni których są absorbowane antygeny (bakteryjne, wirusowe, tkankowe) lub przeciwciała (patrz reakcja Boydena). Ich aglutynacja następuje po dodaniu odpowiednich surowic lub antygenów. Czerwone krwinki uczulone antygenami nazywane są antygenowymi erytrocytami diagnostycznymi i służą do wykrywania i miareczkowania przeciwciał. Erytrocyty uczulone przez przeciwciała nazywane są immunoglobulinowymi erytrocytami diagnostycznymi (patrz) i służą do wykrywania antygenów:

Bierna reakcja hemaglutynacji służy do diagnozowania chorób wywołanych przez bakterie (dur brzuszny i paratyfus, czerwonka, bruceloza, dżuma, cholera itp.), pierwotniaki (malaria) oraz wirusy (grypa, zakażenia adenowirusami, kleszczowe zapalenie mózgu, krymska gorączka krwotoczna, itp.). Reakcja pasywnej hemaglutynacji na wrażliwość nie jest gorsza od metody izolacji wirusa w chorobach arenowirusowych (patrz), w szczególności z limfocytarnym zapaleniem opon mózgowo-rdzeniowych. Wirusowy antygen limfocytowego zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych jest wykrywany u nosicieli wirusa (myszy domowych) w biernej reakcji hemaglutynacji z zawiesiną wyekstrahowanych narządów rozcieńczonych dziesiątki tysięcy razy. W przypadku salmonellozy bakterie wykrywa się w reakcji pasywnej hemaglutynacji w stężeniu do kilkuset ciał drobnoustrojów w 1 g kału, bakterie czerwonki w produktach spożywczych wykrywa się, gdy zawartość 1 g materiału wynosi co najmniej 500 ciał drobnoustrojów.

Bierna reakcja hemaglutynacji jest stosowana w diagnostyce i profilaktyce wirusowego zapalenia wątroby typu B. W Związku Radzieckim w celu wykrycia antygenu HBs (patrz antygen australijski) we krwi pacjentów z ostrym wirusowym zapaleniem wątroby typu B wytwarza się diagnostykę, czyli erytrocyty kurze uczulone kozią immunoglobuliną przeciwko antygenowi HBs. Kroplę Diagnostum łączy się z równą objętością surowicy krwi badanych osób i jeśli jest w niej obecny antygen HBs, następuje aglutynacja. Reakcja jest w stanie wychwycić do 1,5 ng/ml antygenu HBs. Do wykrywania przeciwciał HBs wykorzystuje się erytrocyty z zaadsorbowanym na nich antygenem HBs, wyizolowane z krwi pacjentów. Reakcja biernej hemaglutynacji wykorzystywana jest również do wykrywania nadwrażliwości pacjenta na leki i hormony, np. penicylinę czy insulinę. W tym przypadku erytrocyty grupy krwi 0 osoby są uczulane substancją leczniczą, a następnie wykorzystywane do wykrywania aglutynin z nią w surowicy krwi pacjenta.

Reakcja biernej hemaglutynacji służy do wykrywania gonadotropiny w moczu w celu ustalenia ciąży (patrz Gonadotropina kosmówkowa). W tym celu standardową surowicę dla tego hormonu inkubuje się z badanym moczem. Przy kolejnym dodaniu erytrocytów z zaadsorbowanym na nich hormonem aglutynacja nie zachodzi (odpowiedź pozytywna), ponieważ hormon zawarty w moczu zneutralizował przeciwciała aglutynujące.

Reakcje oparte na zjawisku opadu

Służą do wykrywania szerokiej gamy antygenów i przeciwciał. Najprostszym przykładem reakcji jakościowej jest tworzenie się nieprzezroczystego pasma precypitacji na granicy osadzania się antygenu na przeciwciele w probówce. Powszechnie stosuje się różne typy reakcji wytrącania w półpłynnych agarach lub żelach agarozowych (metoda podwójnej immunodyfuzji Ouchterlona, ​​metoda immunodyfuzji radialnej, immunoelektroforeza), na żyto są zarówno jakościowe, jak i ilościowe (patrz Immunodyfuzja, Immunoelektroforeza).

W celu ustawienia podwójnej immunodyfuzji na szklaną płytkę wylewa się warstwę stopionego żelu i po stwardnieniu wycina się otwory o średnicy 1,5-3 mm. Antygeny testowe umieszcza się w zagłębieniach ułożonych w okrąg, a surowicę odpornościową o znanej specyficzności umieszcza się w zagłębieniu środkowym. Dyfundując ku sobie, homologiczne surowice i antygeny tworzą osad. W przypadku immunodyfuzji radialnej (zgodnie z metodą Manciniego) do agaru wprowadza się surowicę odpornościową. Antygen umieszczony w dołkach dyfunduje przez agar, aw wyniku wytrącenia surowicą odpornościową wokół dołków tworzą się nieprzezroczyste pierścienie, których zewnętrzna średnica jest proporcjonalna do stężenia antygenu. Modyfikację tej reakcji wykorzystuje się w diagnostyce grypy do rozpoznawania przeciwciał IgM i IgG (patrz Immunoglobuliny). Antygen grypy wprowadza się do agaru, a surowicę krwi do studzienek. Następnie płytki traktuje się surowicami odpornościowymi przeciwko przeciwciałom IgM lub IgG, co pomaga zidentyfikować reakcję odpowiednich przeciwciał z antygenami. Metoda pozwala jednocześnie określić miana przeciwciał i ich przynależność do określonej klasy immunoglobulin.

Rodzajem immunoelektroforezy jest radioimmunoforeza. W tym przypadku, po elektroforetycznym rozdzieleniu antygenów, rowek wycięty równolegle do ruchu antygenów w żelu jest najpierw wypełniany surowicą odpornościową znakowaną radioaktywnym jodem przeciwko antygenom, które mają być oznaczane, a następnie surowicą odpornościową przeciwko Przeciwciała IgG, które wytrącają utworzone kompleksy przeciwciała z antygenem. Wszystkie niezwiązane odczynniki są wypłukiwane, a kompleks antygen-przeciwciało jest wykrywany przez autoradiografię (patrz).

Reakcje dopełniacza. Reakcje z udziałem dopełniacza (patrz) opierają się na zdolności podskładnika dopełniacza Cl (Clq), a następnie innych składników dopełniacza do łączenia się z kompleksami immunologicznymi.

Reakcja wiązania dopełniacza umożliwia miareczkowanie antygenów lub przeciwciał zgodnie ze stopniem wiązania dopełniacza przez kompleks antygen-przeciwciało. Reakcja ta składa się z dwóch faz: interakcji antygenu z badaną surowicą krwi (układ testowy) oraz interakcji surowicy hemolitycznej z erytrocytami owiec (układ wskaźnikowy). Przy pozytywnej reakcji w układzie testowym następuje wiązanie dopełniacza, a następnie po dodaniu erytrocytów uczulonych przeciwciałami nie obserwuje się hemolizy (patrz Reakcja wiązania dopełniacza). Reakcja jest szeroko stosowana w serodiagnostyce kiły trzewnej (patrz reakcja Wassermana) i infekcji wirusowych (patrz Badania wirusologiczne).

Cytoliza. Przeciwciała przeciwko strukturom komórkowym mogą przy udziale dopełniacza rozpuszczać komórki niosące te struktury. Lizę krwinek czerwonych można łatwo ocenić na podstawie stopnia i intensywności uwalniania hemoglobiny. Lizę komórek jądrowych szacuje się przez zliczenie procentu martwych komórek, które nie barwią się błękitem metylenowym. Często stosuje się również radioaktywny chrom, który wcześniej był związany chemicznie z komórkami. Liczbę zniszczonych komórek określa się na podstawie ilości niezwiązanego chromu uwolnionego podczas lizy komórek.

W żelu może zachodzić reakcja radialnej hemolizy erytrocytów. Zawiesinę erytrocytów owczych umieszcza się w żelu agarozowym, dodając tam dopełniacz; studzienki wykonuje się w warstwie zamrożonej na szkle i dodaje się do nich surowicę hemolityczną. Wokół dołków utworzy się strefa hemolizy w wyniku promieniowej dyfuzji przeciwciał. Promień strefy hemolizy jest wprost proporcjonalny do miana surowicy. Jeśli jakikolwiek antygen zostanie zaadsorbowany na erytrocytach, na przykład hemaglutynina glikoproteinowa wirusa grypy, różyczki lub kleszczowego zapalenia mózgu, wówczas można odtworzyć zjawisko hemolizy przez surowice odpornościowe na te wirusy. Reakcja radialnej hemolizy w żelu znalazła zastosowanie w diagnostyce infekcji wirusowych ze względu na łatwość oceny stopnia zaawansowania, niewrażliwość na inhibitory surowicy oraz możliwość miareczkowania surowicy krwi w zależności od średnicy strefy hemolizy bez uciekania się do seryjnych rozcieńczeń.

adhezja immunologiczna. Erytrocyty, płytki krwi i inne komórki krwi mają na swojej powierzchni receptory dla trzeciego składnika dopełniacza (C3). Jeśli do antygenu (bakterii, wirusów itp.) doda się odpowiednią surowicę odpornościową i dopełniacz, to tworzy się kompleks antygen-przeciwciało, pokryty składnikiem C3 dopełniacza. Po zmieszaniu z płytkami krwi, ze względu na składnik C3 dopełniacza, kompleks antygen-przeciwciało osadza się na komórkach i powoduje ich aglutynację (patrz Adhezja immunologiczna). Ta reakcja jest wykorzystywana do określenia antygenów układu HLA (patrz Odporność na przeszczepy) oraz w badaniu wielu infekcji wirusowych (kleszczowe zapalenie mózgu, gorączka denga), żyto towarzyszy immunopatolowi. procesy i krążenie we krwi antygenów wirusowych w połączeniu z przeciwciałami.

Reakcja neutralizacji opiera się na zdolności przeciwciał do neutralizowania pewnych specyficznych funkcji wielkocząsteczkowych lub rozpuszczalnych antygenów, na przykład aktywności enzymów, toksyn bakteryjnych, patogenności wirusów. W bakteriologii reakcja ta służy do wykrywania antystreptolizyny, antystreptokinazy i antystafilolizyny. Reakcję neutralizacji toksyn można ocenić za pomocą biol. na przykład surowice przeciwtężcowe i przeciw jadu kiełbasianemu są miareczkowane (patrz Reakcja toksyna - antytoksyna). Mieszanina toksyny i antysurowicy podawana zwierzętom zapobiega ich śmierci. W wirusologii stosowane są różne warianty reakcji neutralizacji. Poprzez zmieszanie wirusów z odpowiednią surowicą odpornościową i wprowadzenie tej mieszaniny do zwierząt lub kultur komórkowych neutralizuje się patogenność wirusów.

Reakcje z wykorzystaniem oznaczeń chemicznych i fizycznych

Immunofluorescencja opracowana przez Koonsa (AN Coonsa) w 1942 roku polega na wykorzystaniu serolu. reakcje surowic znakowanych fluorochromem (patrz Immunofluorescencja). Surowica znakowana fluorochromem tworzy z antygenem kompleks antygen-przeciwciało, który staje się dostępny do obserwacji pod mikroskopem w promieniach ultrafioletowych wzbudzających poświatę fluorochromu. Bezpośrednia reakcja immunofluorescencyjna jest wykorzystywana do badania antygenów komórkowych, wykrywania wirusów w zakażonych komórkach oraz wykrywania bakterii i riketsji w rozmazach. Tak więc, do diagnozy wścieklizny, odciski fragmentów mózgu zwierząt podejrzanych o nosicielstwo wirusa są traktowane luminescencyjną surowicą przeciw wściekliźnie. Z wynikiem pozytywnym w protoplazmie komórek nerwowych obserwuje się grudki jasnozielonego koloru. Szybka diagnostyka grypy, paragrypy i zakażenia adenowirusem opiera się na wykrywaniu antygenów wirusa w komórkach odcisków błony śluzowej nosa.

Szerzej stosowana jest metoda immunofluorescencji pośredniej, oparta na wykrywaniu kompleksu antygen-przeciwciało za pomocą luminescencyjnej surowicy odpornościowej przeciwko przeciwciałom IgG i stosowana do wykrywania nie tylko antygenów, ale także miareczkowania przeciwciał. Metoda znalazła zastosowanie w serodiagnostyce opryszczki, cytomegalii, gorączki Lassa. W laboratorium zapas preparatów komórek zawierających antygen, na przykład zakażonych wirusem komórek VERO lub utrwalonych acetonem fibroblastów kurzych, należy przechowywać w temperaturze -20°C. Badaną surowicę krwi nakłada się na preparaty, preparat umieszcza się w termostacie o temperaturze f 37° w celu utworzenia kompleksów immunologicznych, a następnie, po wypłukaniu niezwiązanych odczynników, kompleksy te wykrywa się znakowaną surowicą luminescencyjną przeciwko ludzkim globulinom. Używając znakowanych surowic immunologicznych przeciwko przeciwciałom IgM lub IgG, możliwe jest rozróżnienie rodzaju przeciwciał i wykrycie wczesnej odpowiedzi immunologicznej na podstawie obecności przeciwciał IgM.

W enzymie - metodą immunologiczną stosuje się przeciwciała skoniugowane z enzymami, hl. arr. peroksydaza chrzanowa lub fosfataza alkaliczna. Aby wykryć połączenie znakowanej surowicy z antygenem, dodaje się substrat, który jest rozkładany przez enzym związany z surowicą z pojawieniem się wybarwienia na kolor żółto-brązowy (peroksydaza) lub żółto-zielony (fosfataza). Stosowane są również enzymy rozkładające nie tylko substrat chromogenny, ale również lumogeniczny. W takim przypadku przy pozytywnej reakcji pojawia się blask. Podobnie jak immunofluorescencja, test immunoenzymatyczny służy do wykrywania antygenów w komórkach lub do miareczkowania przeciwciał na komórkach zawierających antygen.

Najpopularniejszym typem metody enzymatyczno-immunologicznej jest immunosorpcja. Na stałym nośniku Krym może być celuloza, poliakryloamid, dekstran i różne tworzywa sztuczne adsorbujące antygen. Częściej jako nośnik służy powierzchnia dołków mikropaneli. Do studzienek z zaadsorbowanym antygenem dodaje się badaną surowicę krwi, następnie antysurowicę znakowaną enzymem i substratem. Pozytywne wyniki są brane pod uwagę przez zmianę koloru ośrodka płynnego. W celu wykrycia antygenów przeciwciała są adsorbowane na nośniku, następnie materiał testowy jest wprowadzany do dołków i wykrywana jest reakcja z antybakteryjną surowicą wyznakowaną enzymem.

Metoda radioimmunologiczna opiera się na wykorzystaniu znakowania radioizotopowego antygenów lub przeciwciał. Został pierwotnie opracowany jako specyficzna metoda pomiaru poziomu hormonów krążących we krwi. Układem testowym był znakowany izotopowo hormon (antygen) i surowica odpornościowa wobec niego. Jeśli do takiej antysurowicy zostanie dodany materiał zawierający żądany hormon, to zwiąże on część przeciwciał, a następnie wprowadzenie wyznakowanego hormonu miareczkowego zmniejszy jego ilość z przeciwciałami w porównaniu z kontrolą. Wynik ocenia się przez porównanie krzywych związanego i niezwiązanego znacznika radioaktywnego. Ten rodzaj metody nazywa się reakcją konkurencyjną. Istnieją inne modyfikacje metody radioimmunologicznej. Metoda radioimmunologiczna jest najbardziej czułą metodą oznaczania antygenów i przeciwciał stosowaną do oznaczania hormonów, leków i antybiotyków, do diagnozowania chorób bakteryjnych, wirusowych, riketsjowych, pierwotniakowych, do badania białek krwi, antygenów tkankowych.

Charakterystyka porównawcza i wykorzystanie serologicznych metod badawczych w praktyce lekarskiej

metody S. i. stale doskonalony w kierunku zwiększonej czułości i uniwersalności zastosowania. Początkowo serol. diagnozę oparto na wykryciu przeciwciał. Wraz z nadejściem połowy XX w Reakcje immunofluorescencji i pasywnej hemaglutynacji, które mają większą czułość, umożliwiły wykrycie nie tylko przeciwciał, ale także antygenu bezpośrednio w materiale pobranym od pacjentów. Metody enzymatyczno-immunologiczne i radioimmunologiczne, w czułości o 2-3 rzędy wielkości większej niż immunofluorescencja i bierna hemaglutynacja, zbliżają się do metod biol. wykrywanie bakterii i wirusów. Zakres ich zastosowania do wykrywania zarówno antygenów, jak i przeciwciał jest teoretycznie nieograniczony.

Serodiagnostyka inf. opiera się na pojawieniu się przeciwciał przeciwko wyizolowanemu lub podejrzewanemu patogenowi, niezależnie od tego, czy patogen został wykryty w ostrej fazie choroby. Zbadaj pary surowic pobranych na początku choroby i 2-3 tygodnie. później. Znaczący diagnostycznie jest wzrost przeciwciał w drugiej surowicy krwi co najmniej 4-krotnie w porównaniu z pierwszą. Istotne jest również, przez jaką klasę immunoglobulin reprezentują przeciwciała. Przeciwciała IgM stwierdza się pod koniec ostrego okresu choroby i we wczesnym okresie rekonwalescencji. Przeciwciała IgG pojawiają się w późniejszych stadiach rekonwalescencji i krążą przez długi czas. Jeśli u kobiety w pierwszym trymestrze ciąży wykryto przeciwciała IgM przeciwko wirusowi różyczki, stanowi to podstawę do przerwania ciąży, ponieważ w tym okresie płód jest szczególnie wrażliwy na wirusa. W różnych inf. chorób selektywnie stosują najbardziej specyficzne i wygodne metody.

S. i. szeroko stosowane w epidemiologii. Systematyczne pobieranie i badanie próbek krwi różnych grup ludności pozwala zrozumieć kontakty populacji ze źródłem aktywatorów inf. choroby. Badanie poziomu odporności zbiorowej pozwala identyfikować grupy podwyższonego ryzyka i planować działania szczepień, badać geograficzne rozmieszczenie zakażeń. S. i. różne grupy wiekowe populacji pozwoliły na przykład retrospektywnie zidentyfikować krążenie różnych wariantów wirusa grypy w określonych okresach czasu.

S. i. mają ogromne znaczenie w badaniu chorób dziedzicznych (patrz) i chorób autoimmunologicznych, którym towarzyszy pojawienie się przeciwciał specyficznych dla tkanek i narządów, które niszczą odpowiednie komórki docelowe, a także w onkologii do wykrywania antygenów nowotworowych. Zatem immunodiagnostyka raka wątroby opiera się na oznaczaniu alfa-fetoproteiny i innych antygenów embrionalnych w surowicy krwi pacjentów metodami immunodyfuzji i radioimmunologicznymi.

Znaczący postęp nauki w badaniu drobnej struktury antygenowej antygenów komórkowych, antygenów bakterii i wirusów osiąga się dzięki zastosowaniu w serolu. reakcje przeciwciał monoklonalnych, do żyta można otrzymać oddzielne determinanty antygenowe.

Bibliografia: Metody badań w immunologii, wyd. I. Lefkovits i B. Pernis, przeł. z angielskiego, M., 1981; Przewodnik po immunologii, wyd. O. E. Vyazova i Sh. X. Khodzhaev. Moskwa, 1973. Wytyczne klinicznej diagnostyki laboratoryjnej, wyd. W. W. Mienszykow, Moskwa, 1982. Immunologia, wyd. przez J.-F. Bach, NY, 1978.

S. Ja. Gajdamowicz.

Metoda badań serologicznych.

Reakcje antygen-przeciwciało

Cechy interakcji przeciwciała z antygenem są podstawą reakcji diagnostycznych w laboratoriach.

Reakcja w in vitro między antygenem a przeciwciałem zawiera:

konkretny

niespecyficzna faza.

W specfaza fizyczna następuje szybkie specyficzne wiązanie miejsca aktywnego przeciwciała z determinantą antygenu.

Potem przychodzi niespecyficzna faza - wolniej, co daje o sobie znać widoczne zjawiska fizyczne np. tworzenie się płatków (zjawisko aglutynacji) lub osadu w postaci zmętnienia. Faza ta wymaga spełnienia określonych warunków (elektrolity, optymalne pH pożywki).

W tym celu aplikuj metody serologiczne (od łac. serum - surowica i logo - doktryna), czyli metody badania przeciwciał i antygenów z wykorzystaniem reakcji antygen-przeciwciało oznaczanych w surowicy krwi i innych płynach oraz tkankach ciała.

Kiedy drobnoustrój jest izolowany od pacjenta, patogen jest identyfikowany poprzez badanie jego właściwości antygenowych przy użyciu immunologicznych surowic diagnostycznych, tj. surowic krwi hiperimmunizowanych zwierząt zawierających specyficzne przeciwciała. Ten tzw serologicznyidentyfikacja mikroorganizmy.

Reakcje aglutynacji

Reakcja aglutynacji- RA(od łac. aglutinaród - wiązanie) - prosta reakcja, w której przeciwciała wiążą antygeny korpuskularne (bakterie, erytrocyty lub inne komórki, nierozpuszczalne cząstki z zaadsorbowanymi na nich antygenami, a także agregaty makrocząsteczkowe). Występuje w obecności elektrolitów, np. po dodaniu izotonicznego roztworu chlorku sodu.

Różnorodny opcje reakcjiaglutynacja:

rozmieszczony,

orientacyjny,

pośrednie itp.

Reakcja aglutynacji objawia się tworzeniem płatków lub osad (komórki „sklejone” przez przeciwciała posiadające dwa lub więcej centrów wiązania antygenu).

Ra jest używany do:

1) wykrywanie przeciwciał ból w surowicy krwitak na przykład z brucelozą (reakcje Wrighta, Heddelsona), durem brzusznym i durem rzekomym (reakcja Vidala) i innymi chorobami zakaźnymi;

definicje patogenów , odizolowany od pacjenta;

oznaczanie grup krwi przy użyciu przeciwciał monoklonalnych przeciwko alloantygenom erytrocytów.

Aby określić przeciwciała pacjenta położyćprzedłużona reakcja aglutynacji: dodawać do rozcieńczeń surowicy krwi pacjenta diagnostyka(zawiesina zabitych drobnoustrojów) i po kilku godzinach inkubacji w temperaturze 37°C notuje się największe rozcieńczenie surowicy (miano surowicy), przy którym następuje aglutynacja, czyli wytrąca się osad.

Charakter i szybkość aglutynacji zależą od rodzaju antygenu i przeciwciał. Przykładem są cechy interakcji diagnostycznych (antygenów O i K) ze specyficznymi przeciwciałami. Reakcja aglutynacji z O-diagnostyka(bakterie zabijane przez ciepło, zachowując termostabilność antygen O) występuje w postaci drobnoziarnistej aglutynacji. Reakcja aglutynacji z H-diagnosticum (bakterie zabijane przez formalinę, zachowujące nietrwały termicznie antygen wiciowy H) jest gruboziarnista i przebiega szybciej.

Jeśli konieczne jest określenie patogenu wyizolowanego od pacjenta, umieść orientacja reakcja aglutynacji, przy użyciu przeciwciał diagnostycznych (surowica aglutynująca), tj. przeprowadza się serotypowanie patogenu. Przybliżona reakcja jest przeprowadzana na szklanym szkiełku. Do kropli diagnostycznej surowicy aglutynującej w rozcieńczeniu 1:10 lub 1:20 dodać czystą hodowlę patogenu wyizolowanego od pacjenta. W pobliżu umieszcza się kontrolę: zamiast surowicy aplikuje się kroplę roztworu chlorku sodu. Kiedy w kropli z surowicą i drobnoustrojami pojawi się kłaczkowaty osad, wkładają rozszerzony reakcja aglutynacji w probówkach ze wzrastającymi rozcieńczeniami surowicy aglutynującej, do których dodaje się 2-3 krople zawiesiny patogenu. Aglutynacja jest uwzględniana przez ilość osadu i stopień klarowania cieczy. Reakcja jest brana pod uwagępozytywny, jeśli aglutynacja zostanie stwierdzona w rozcieńczeniu zbliżonym do miana surowicy diagnostycznej. Jednocześnie uwzględnia się kontrole: surowica rozcieńczona izotonicznym roztworem chlorku sodu powinna być przezroczysta, zawiesina drobnoustrojów w tym samym roztworze powinna być jednolicie mętna, bez osadu.

Ta sama diagnostyczna surowica aglutynująca może aglutynować różne spokrewnione bakterie, co utrudnia ich identyfikację. Dlatego ciesz się adsorbowana surowica aglutynującausta, z których przeciwciała reagujące krzyżowo zostały usunięte przez adsorpcję przez spokrewnione z nimi bakterie. W takich surowicach pozostają przeciwciała specyficzne tylko dla tej bakterii. Otrzymywanie w ten sposób monoreceptorowych diagnostycznych surowic aglutynujących zaproponował A. Castellani (1902).

Reakcja pośredniego (pasywnego) hemaglutinaród (RNGA, RPGA) oparte na używanybadania erytrocytów(lub lateks) z adsorberemantygeny skąpane na ich powierzchni lubprzeciwciała, których interakcja z odpowiednimi przeciwciała lub antygenów w surowicy krwi pacjentów powoduje klejerytrocyty kurczą się i opadają na dno probówki lub komórki w postaci zapiekanego osadu.

Z negatywną reakcją erytrocyty osadzają się w postaci „guzika”. Zazwyczaj przeciwciała są wykrywane w RNGA za pomocą antygenowego erytrocytów diagnostycznych, czyli erytrocytów z zaadsorbowanymi na nich antygenami. Czasami stosuje się przeciwciała erytrocytów diagnostycznych, na których adsorbowane są przeciwciała. Na przykład toksynę botulinową można wykryć dodając do niej przeciwciało botulinum diagnosticum erytrocytów (reakcja ta nazywana jest reakcja zwrotnapośrednia hemaglutynacja -RONGA). RNHA służy do diagnozowania chorób zakaźnych, oznaczania hormonu gonadotropowego w moczu po ustaleniu ciąży, wykrywania nadwrażliwości na leki, hormony iw niektórych innych przypadkach.

Reakcja koaglutynacji. Komórki patogenu są określane przy użyciu gronkowców, wstępnie traktowanych immunologiczną surowicą diagnostyczną. Gronkowce zawierające białko ALE, posiadające powinowactwo do fragmentu Fc immunoglobulin, niespecyficznie adsorbują przeciwciała przeciwdrobnoustrojowe, które następnie oddziałują z aktywnymi centrami z odpowiednimi drobnoustrojami wyizolowanymi od pacjentów. W wyniku koaglutynacji powstają płatki, składające się z gronkowców, diagnostycznych przeciwciał surowicy i oznaczanego drobnoustroju.

Reakcja hamowania hemaglutynacji(RTGA) w oparciu o blokadę tłumienie plTygeny wirusów przeciwciał surowicy odpornościowej, w wyniku czego wirusy tracą zdolność do aglutynacji krwinek czerwonych. RTHA służy do diagnozowania wielu chorób wirusowych, których czynniki sprawcze (grypa, odra, różyczka, kleszczowe zapalenie mózgu itp.) mogą aglutynować erytrocyty różnych zwierząt.

Test aglutynacyjny do oznaczania przeciwciał anty-Rhesus (test pośredniCoombsa) stosowany u pacjentów z hemolizą wewnątrznaczyniową. U niektórych z tych pacjentów stwierdza się przeciwciała anty-Rhesus, które są niekompletne, monowalentne. Oddziałują specyficznie z erytrocytami Rh-dodatnimi, ale nie powodują ich aglutynacji. Obecność takich niekompletnych przeciwciał określa się w pośredniej reakcji Coombsa. W tym celu do układu przeciwciał anty-Rh + Rh-dodatnich erytrocytów dodaje się surowicę antyglobulinową (przeciwciała przeciwko ludzkim immunoglobulinom), co powoduje aglutynację erytrocytów. Wykorzystując reakcję Coombsa diagnozuje się stany patologiczne związane z wewnątrznaczyniową lizą erytrocytów pochodzenia immunologicznego, na przykład chorobę hemolityczną noworodka: erytrocyty Rh-dodatniego płodu łączą się z niekompletnymi przeciwciałami przeciwko krążącemu we krwi czynnikowi Rh, który przekroczył łożysko od matki Rh-ujemnej.