IMMUNOMICROBIOLOGICAL STUDIES

Ang mga immunological na pamamaraan ay ginagamit upang malutas ang maraming mga problema:

1. Pagtatasa ng estado ng immune system ng tao (immune status) upang matukoy ang quantitative at functional na mga katangian ng mga cell ng immune system at ang kanilang mga produkto.

2. Pagpapasiya ng komposisyon at katangian ng mga tisyu ng tao: mga pangkat ng dugo, Rh factor, mga antigen ng paglipat.

3. Diagnosis ng mga nakakahawang sakit at paglaban sa kanila sa pamamagitan ng pagtuklas at pagpapasiya ng mga titer ng antibody (serodiagnosis), pagtuklas ng mga antigens ng mga pathogens sa katawan, pagpapasiya ng mga reaksyon ng cellular sa mga antigen na ito.

4. Seroidentification ng mga kultura ng bakterya at mga virus na nakahiwalay sa mga organismo ng tao at hayop.

5. Pagtuklas sa katawan ng tao at sa kapaligiran ng anumang mga sangkap na may mga antigenic o haptic na katangian (mga hormone, enzyme, lason, droga, droga, atbp.).

6. Pagkilala sa mga kondisyon ng immunopathological, allergy, paglipat at mga reaksyon ng antitumor.

Ang proseso ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng antigen at antibody sa mga serological na reaksyon ay nagpapatuloy sa dalawang yugto:

1) tiyak- ang yugto ng pakikipag-ugnayan, kung saan nangyayari ang komplementaryong koneksyon ng mga aktibong sentro ng antibodies (paratopes) at antigen epitopes. Ang bahaging ito ay karaniwang tumatagal ng ilang segundo o minuto;

2) hindi tiyak- ang yugto ng paghahayag, na nailalarawan sa pamamagitan ng mga panlabas na palatandaan ng pagbuo ng mga immune complex. Ang yugtong ito ay maaaring umunlad mula sa ilang minuto hanggang ilang oras.

Ang pinakamainam na partikular na pakikipag-ugnayan ng mga antibodies sa antigen ay nangyayari sa isang isotonic solution na may pH na malapit sa neutral. Ang reaksyon ng antigen-antibody sa in vitro system ay maaaring sinamahan ng ilang mga phenomena.

aglutinasyon,

ulan,

lysis.

Ang mga panlabas na pagpapakita ng reaksyon ay nakasalalay sa mga katangian ng physicochemical ng antigen (laki ng butil, pisikal na estado), ang klase at uri ng mga antibodies (kumpleto at hindi kumpleto), pati na rin ang mga eksperimentong kondisyon (katamtamang pagkakapare-pareho, konsentrasyon ng asin, pH, temperatura ).

Tinitiyak ng polyvalence ng antigens at antibodies ang hitsura ng mga pinagsama-samang nakikita ng mata. Nangyayari ito alinsunod sa teorya ng pagbuo ng network, ayon sa kung saan ang iba pang mga molekula ng antibodies at antigen ay sunud-sunod na nakakabit sa nagreresultang antigen-antibody complex. Bilang resulta, nabuo ang mga istruktura ng network, na nagiging mga pinagsama-samang namuo. Ang kalikasan at kalubhaan ng reaksyon ay nakasalalay sa dami ng ratio ng mga antigen at antibodies. Ang mga reaksyon ay pinakamatindi kapag ang mga reactant ay nasa katumbas na ratio.

Ang isang kinakailangang kondisyon para sa pagbuo ng isang sala-sala (mga network) ay ang pagkakaroon ng higit sa tatlong antigenic determinants para sa bawat molekula ng antigen at dalawang aktibong sentro para sa bawat molekula ng antibody. Ang mga molekula ng antigen ay mga lattice node, at ang mga molekula ng antibody ay mga link na nagkokonekta. Ang lugar ng pinakamainam na ratios (equivalence zone) ng antigen at antibody concentrations, kapag ang mga libreng antigen o libreng antibodies ay hindi nakita sa supernatant pagkatapos ng pagbuo ng isang precipitate.

Ang mga aggregate na may kakayahang umulan ay nabuo kapag ang mga antigen ay pinagsama sa kumpletong antibodies. Ang mga hindi kumpletong antibodies (monovalent) ay hindi nagiging sanhi ng pagbuo ng mga istruktura ng network at malalaking aggregate. Upang makita ang gayong mga antibodies, ginagamit ang mga espesyal na pamamaraan batay sa paggamit ng mga antiglobulin (reaksyon ng Coombs).

Ang mga serological na reaksyon, dahil sa kanilang mataas na pagtitiyak at pagiging sensitibo, ay ginagamit upang makita at mabilang ang mga antigen at antibodies. Ang bilang ng mga immunoreagent sa mga reaksyon ay ipinahayag ng titer - ang maximum na pagbabanto ng suwero o antigen, kung saan ang isang reaksyon ay sinusunod pa rin.

Ang mga serological na reaksyon sa microbiological at immunological laboratories ay ginagamit para sa dalawang layunin:

1) para sa seroidentification ng mga microorganism, toxins, antigen sa pangkalahatan gamit ang isang kilalang antibody (immune diagnostic serum),

2) para sa serodiagnosis - pagpapasiya ng likas na katangian ng antibody sa serum ng dugo ng pasyente sa bacterial, viral, mas madalas iba pang mga nakakahawang sakit gamit ang isang kilalang antigen (diagnosticum).

Ang kilalang immune diagnostic sera ay kinakailangan upang matukoy ang generic, species, at uri ng isang antigen. Nakukuha ang mga ito sa pamamagitan ng paulit-ulit na pangangasiwa sa mga hayop (madalas na kuneho) sa pagtaas ng dosis ng mga napatay o nabubuhay na mikroorganismo, ang kanilang mga produkto ng pagkabulok, neutralisado o katutubong mga lason. Pagkatapos ng isang tiyak na cycle ng pagbabakuna ng mga hayop, ang malawakang pagdaloy ng dugo o kabuuang pagdurugo ng hayop ay ginagawa. Ang dugo na nakolekta sa isang sterile na lalagyan ay unang inilagay sa isang thermostat sa temperatura na 37°C sa loob ng 4-6 na oras upang mapabilis ang pamumuo, pagkatapos ay sa isang glacier sa loob ng isang araw. Ang nakuha na transparent na serum ay na-aspirated sa isang sterile na lalagyan, ang mga preservative ay idinagdag, ang antibody titer ay tinutukoy, nasubok para sa sterility at ibinuhos sa mga ampoules.

Ay ginamit hindi na-adsorbed at na-adsorbed diagnostic sera. Ang non-adsorbed sera ay may mataas na titer ng antibody, ngunit may kakayahang gumawa ng mga reaksyon ng grupo (cross).

Ang adsorbed sera ay nailalarawan sa pamamagitan ng isang mahigpit na pagtitiyak ng pagkilos (sila ay tumutugon lamang sa isang homologous antigen). Ang serum na naglalaman ng mga antibodies sa isang partikular na antigen ay tinatawag monoreceptor.

Gumagawa din sila ng sera na may label na fluorochromes, enzymes, radioisotopes, na ginagawang posible na makita ang kahit na mga bakas ng isang antigen na may mataas na antas ng katumpakan.

Bilang mga antigen (diagnosticum) sa mga serological na reaksyon, mga pagsususpinde ng nabubuhay o napatay na bakterya, ang kanilang mga produkto ng cleavage, toxins, at mga virus ay ginagamit. Sa ilang mga kaso, ginagamit ang mga extract o mga antigen na nakahiwalay sa kemikal mula sa mga microorganism at tissue ng hayop.

Ang lahat ng immunomicrobiological na pamamaraan ay maaaring nahahati sa 3 grupo:

1) batay sa direktang pakikipag-ugnayan ng antigen sa antibody(phenomena ng agglutination, precipitation, hemagglutination, immobilization, atbp.);

2) batay sa mediated antigen-antibody interaction(mga reaksyon ng hindi direktang hemagglutination, coagglutination, latex agglutination, coal agglomeration, bentonite agglutination, complement fixation, atbp.);

3) gamit may label na antibodies o antigens(paraan ng fluorescent antibodies, enzyme immunoassay at radioimmunoassay at iba pang mga pamamaraan).

REAKSYON NG AGLUTINATION

Ang mga antigen sa anyo ng mga particle (microbial cells, erythrocytes at iba pang corpuscular antigens) ay nakikibahagi sa mga reaksyong ito, na dumidikit sa mga antibodies at namuo.

Para sa pag-set up ng isang agglutination reaksyon(RA) ay nangangailangan ng tatlong bahagi: 1) antigen (agglutinogen);

2) antibody (aglutinin)

3) electrolyte (isotonic sodium chloride solution).

Tinatayang agglutination reaction (RA)

Ang tinatayang, o lamellar, RA ay inilalagay sa isang glass slide sa temperatura ng silid. Upang gawin ito, ang isang patak ng suwero sa isang pagbabanto ng 1:10 - 1:20 at isang control drop ng isotonic sodium chloride solution ay inilapat nang hiwalay sa baso na may Pasteur pipette. Ang mga kolonya o isang pang-araw-araw na kultura ng bakterya (isang patak ng diagnosticum) ay ipinakilala sa parehong mga bacteriological loop at lubusang pinaghalo. Isinasaalang-alang ang mga reaksyon sa loob ng ilang minuto nang biswal, kung minsan ay may magnifying glass (x5). Sa isang positibong RA sa isang patak na may serum, ang hitsura ng malaki at maliit na mga natuklap ay nabanggit, na may negatibong RA, ang serum ay nananatiling pantay na maulap.

Pinahabang reaksyon ng agglutination upang matukoy ang titer ng mga tiyak na antibodies sa isang pasyente.

Ang pinalawak na RA para sa serodiagnosis ay inilalagay sa serum ng mga pasyente. Diluted din ito ng isotonic sodium chloride solution mula 1:50 - 1:100 hanggang 1:800 o 1:1600. Dahil ang mas mababang titer ng serum ay maaaring maglaman ng mga normal na agglutinin na naroroon sa mga malulusog na tao o mga pasyente na may ibang diagnosis (diagnostic titer ). Bilang isang antigen sa reaksyong ito, ginagamit ang mga diagnosticum - kilalang mga suspensyon, bilang panuntunan, ng napatay na bakterya.

Ang 1 ml ng isotonic sodium chloride solution ay paunang ibinuhos sa mga agglutination tubes. Ang 1 ml ng serum na diluted 1:100 ay idinagdag sa una sa kanila, at pagkatapos ng paghahalo nito, 1 ml ay inilipat sa pangalawa, mula sa pangalawa hanggang sa pangatlo, atbp. Sa nagresultang dalawang beses na dilution ng sera (mula 1:100 hanggang 1:1600 o higit pa), 1-2 patak ng isang suspensyon ng bakterya na naglalaman ng 3 bilyong microbial body bawat 1 ml ay idinagdag. Ang mga tubo ay inalog at inilagay sa isang thermostat sa 37°C sa loob ng 2 oras, pagkatapos ay pinananatili sa temperatura ng silid sa loob ng isang araw.

Ang accounting para sa reaksyon ng pinalawak na agglutination ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagsusuri sa bawat test tube nang sunud-sunod, simula sa mga control, na may banayad na pag-alog. Dapat ay walang agglutination sa control tubes. Ang intensity ng reaksyon ng agglutination ay minarkahan ng mga sumusunod na palatandaan: ++++ - kumpletong agglutination (mga natuklap ng agglutinate sa isang ganap na transparent na likido); +++ - hindi kumpletong agglutination (mga natuklap sa isang bahagyang opalescent na likido); ++ - bahagyang agglutination (ang mga natuklap ay malinaw na nakikita, ang likido ay bahagyang maulap); + - mahina, nagdududa na agglutination - ang likido ay napakalabo, ang mga natuklap sa loob nito ay hindi gaanong nakikilala; - - kakulangan ng agglutination (ang likido ay pantay na labo).

Ang titer ng serum ay kinuha bilang huling pagbabanto nito, kung saan ang intensity ng agglutination ay tinatantya ng hindi bababa sa dalawang plus (++)

Reaksyon ng aglutinasyon (mula sa lat. aglutinasyon- bonding) - bonding ng corpuscles (bacteria, erythrocytes, etc.) na may antibodies sa presensya ng electrolytes.

Reaksyon ng aglutinasyon nagpapakita ng sarili sa anyo ng mga natuklap o sediment, na binubuo ng mga corpuscles (halimbawa, bakterya), "nakadikit" ng mga antibodies (Larawan 7.37). Ang reaksyon ng agglutination ay ginagamit upang: matukoy ang pathogen na nakahiwalay sa pasyente; pagpapasiya ng mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente; pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo.

kanin. 7.37 a, b. Agglutination reaksyon saIgM-antibodies (a) atIgG-antibodies (b)

1. Pagpapasiya ng pathogen na nakahiwalay sa pasyente Tinatayang reaksyon ng agglutination sa salamin (Larawan 7.38). Ang isang suspensyon ng bakterya na nakahiwalay mula sa pasyente ay idinagdag sa isang patak ng agglutinating serum (dilution 1:20). Isang patumpik-tumpik na namuo ang mga form.

kanin. 7.38.

Isang pinahabang reaksyon ng agglutination na may pathogen na nakahiwalay sa isang pasyente (Larawan 7.39). Ang isang suspensyon ng bakterya na nakahiwalay mula sa pasyente ay idinagdag sa mga dilution ng agglutinating serum.

kanin. 52

2. Pagpapasiya ng antibodies sa serum ng dugo ng pasyente
Isang pinahabang reaksyon ng agglutination sa serum ng dugo ng pasyente (Larawan 7.39). Ang Diagnosticum ay idinagdag sa mga dilution ng serum ng pasyente.
- Ang aglutinasyon sa O-diagnosticum (bacteria na pinatay sa pamamagitan ng pag-init, pagpapanatili ng 0-antigen) ay nangyayari sa anyo ng fine-grained agglutination.
- Ang aglutinasyon sa H-diagnosticum (bacteria na pinatay ng formalin, pinapanatili ang flagellar H-antigen) ay magaspang na butil at nagpapatuloy nang mas mabilis.
3. Pagsusuri ng aglutinasyon para sa pagtukoy ng mga pangkat ng dugo Ang reaksyon ng agglutination para sa pagtukoy ng mga pangkat ng dugo ay ginagamit upang maitatag ang ABO system (Talahanayan b) sa pamamagitan ng pagsasama-sama ng mga erythrocyte na may immune serum antibodies laban sa mga antigen ng mga pangkat ng dugo A (I), B (III). Ang mga kontrol ay: serum na hindi naglalaman ng mga antibodies, i.e. serum AB (IV) mga pangkat ng dugo; antigens na nakapaloob sa mga erythrocytes ng mga pangkat A (II), B (III). Ang negatibong kontrol ay hindi naglalaman ng mga antigens, ibig sabihin, ang pangkat O (I) erythrocytes ay ginagamit.

Talahanayan 7.6. Pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo ng ABO

Resulta ng reaksyon		pangkat
		pag-aari
		sinaliksik dugo
erythrocytes na may	suwero (plasma)
pamantayan	na may pamantayan
sera

sa microbiology

"Reaksyon ng Agglutination at mga uri nito (RA)"

Plano:

1. Panimula………………………………………………………………………………………………..3

2. RA sa salamin…………………………………………………………………………………….4

3. Test-tube PA…………………………………………………………………………………….5

4. Literatura na ginamit……………………………………………………………………..7

1. Panimula.

Ang pakikipag-ugnayan ng microbial antigen at antibodies ay mahigpit na tiyak at nakadirekta sa katawan ng hayop upang neutralisahin ang pathogen at ang mga lason nito. Ang pakikipag-ugnayan ng antigen at antibodies sa vitro sa ilalim ng ilang mga kundisyon ay sinamahan ng nakikitang mga phenomena (agglutination, precipitation, immune lysis), na nagpapahintulot sa paggamit ng mga reaksyon ng AG-AT, na tinatawag na serological (mula sa Latin na serum-serum), para sa mga praktikal na layunin. Ang mga biofactories ay gumagawa ng mga antigen at immune sera (antibodies) ng isang kilalang tiyak na direksyon (diagnostic). Sa tulong ng naturang sera sa mga serological na reaksyon, posible na makilala ang isang hindi kilalang microorganism o, gamit ang isang kilalang antigen, upang makita ang mga antibodies sa katawan na synthesize bilang tugon sa pagpapakilala ng isang pathogen, at sa gayon ay gumawa ng diagnosis (serological diagnosis) . Bilang karagdagan, ang mga serological na reaksyon ay maaaring gamitin upang masuri ang intensity ng immune response pagkatapos ng pagbabakuna o isang nakakahawang sakit.

Ang mga reaksyon ng aglutinasyon, tulad ng hindi direktang agglutination at Coombs, ay batay sa in vitro na interaksyon ng corpuscular antigens na may mga antibodies at ang kakayahan ng mga nagresultang complex na mag-precipitate. Bilang corpuscular antigens, bacterial cells o soluble antigens na kinuha mula sa mga microorganism at adsorbed sa corpuscles of carriers: erythrocytes, latex particles, atbp.

Ang mga antigenic determinants ng corpuscular antigens ay partikular na nakikipag-ugnayan sa mga homologous antibodies (tiyak, hindi nakikitang yugto ng reaksyon), at pagkatapos ay ang mga antigen-antibody complex ay bumubuo ng malaki, nakikita ng mata ng mga conglomerates na namuo - agglutinate (hindi tiyak, nakikitang yugto ng reaksyon) . Sa mga non-flagelated form ng microbes (Brucella), ang mga butil na agglutinant ay nabuo, sa flagella (Escherichia, Salmonella) - malaking-koton, na tumira sa ilalim ng test tube sa anyo ng isang baligtad na payong at madaling masira kapag inalog. . Ang mga antigen at antibodies ay nakikipag-ugnayan lamang sa pagkakaroon ng isang electrolyte (sa 0.8% sodium chloride solution). Ang kurso ng reaksyon ay apektado ng konsentrasyon ng asin sa electrolyte, ang bilang ng mga microbial cells sa suspensyon, serum concentration, pH, temperatura, at iba pang mga kadahilanan.

Reaksyon ng aglutinasyon (ra).

Makilala ang tiyak na agglutination, ang kuyog ay batay sa pakikipag-ugnayan ng antigen Sa homologous antibody , na nakapaloob sa katawan ng hayop, ang Krom ay ipinakilala ang antigen na ito (immunoagglutination); non-specific (kemikal), na nagmumula sa mga pagbabago sa pH ng kapaligiran, ang konsentrasyon ng mga electrolyte; spontaneous, ang to-ruyu ay sinusunod kapag ang bacteria (na nasa R-form) ay nasuspinde sa saline at kapag pinainit, na nauugnay sa pagbabago sa colloidal state ng bacterial cell. Antigen , Ang kasangkot sa RA ay tinatawag na agglutinogen, ang antibody ay tinatawag na agglutinin, ang nagresultang precipitate ay tinatawag na agglutinate. Sa pagbuo ng agglutinate, mahalaga ang quantitative ratio ng antigen at antibodies (pinakamainam na phenomenon). Sa labis o kakulangan ng mga antibodies, ang A.

Ang agglutination reaction (RA) ay isa sa mga unang immunological na reaksyon na ginagamit sa microbiological practice. Sa unang pagkakataon (1895) ginamit ni F. Vidal ang RA para sa pagsusuri ng typhoid fever. Nang maglaon (1897), ginamit ni A. Wright ang parehong reaksyon upang masuri ang brucellosis sa mga tao. Natagpuan din ng RA ang aplikasyon sa diagnosis ng pullorosis ng mga manok, leptospirosis, nakakahawang pagpapalaglag ng mga mares, pati na rin para sa pag-type ng mga hindi kilalang kultura ng microbes ayon sa kilalang agglutinating serum. Ang RA ay lubhang sensitibo; maaari itong makakita ng 0.01 µg ng antibody protein nitrogen sa 1 ml.

Maraming mga variant ng reaksyon ng agglutination ang nabuo, na naiiba sa pagpapatupad ng pamamaraan at ang layunin ng pag-aaral.

2. Ra sa salamin.

Sa variant na ito ng RA, parehong serum at antigen ay maaaring masuri, ngunit ang variant na ito ay kadalasang ginagamit para sa pagtukoy ng mga microorganism.

1. Upang matukoy ang microorganism (m / o), isang patak ng kilalang agglutinating serum, tulad ng salmoneliosis, at isang patak ng saline solution (control) ay inilapat nang hiwalay sa isang defatted glass slide. Pagkatapos, gamit ang isang bacteriological loop, ang bacterial mass ng pinag-aralan na kultura ay kinuha mula sa kolonya sa isang Petri dish o mula sa ibabaw ng slanted MPA sa isang test tube at sinuspinde nang hiwalay sa immune serum at physiological saline hanggang sa makuha ang isang homogenous na suspensyon. . Ang resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng 2 ... 4 na minuto.

Accounting para sa mga resulta: dapat walang pagbabago sa control sample. Sa isang tiyak na pagsusulatan ng kultura ng bakterya sa immune serum, lumilitaw ang mga natuklap ng agglutinate (positibong resulta), sa kawalan ng kababalaghan ng agglutination, napagpasyahan na ang pinag-aralan na kultura ng bakterya ay hindi tumutugma sa immune serum.

2. Ang pagtuklas ng mga antibodies sa pinag-aralan na blood serum ay isasaalang-alang gamit ang halimbawa ng rose-bengal test na ginamit sa serodiagnosis ng brucellosis. Ang 0.3 ml ng pinag-aralan na serum ng dugo ng hayop at 0.03 ml ng brucella antigen (mga selulang brucella na nabahiran ng pink na Bengal) ay inilalapat sa isang glass slide. Ang mga sangkap ay lubusan na halo-halong sa pamamagitan ng pag-alog ng baso at ang resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng 4 na minuto.

Mga resulta ng accounting: na may positibong reaksyon, lumilitaw ang mga pink na flakes ng agglutinate. Ang isang serological na reaksyon ng ganitong uri ay inuri bilang husay, dahil maaari itong magamit upang makita ang mga antibodies sa pathogen sa serum ng dugo ng hayop, ngunit imposibleng masuri ang kanilang dami ng nilalaman.

Reaksyon ng aglutinasyon.

Ang reaksyon ng agglutination ay ang pagdirikit at pag-ulan ng microbial o iba pang mga selula (erythrocytes) sa ilalim ng pagkilos ng mga antibodies sa pagkakaroon ng isang electrolyte. Ang nakikitang epekto ng reaksyon (agglutination phenomenon) ay ang pagbuo ng isang precipitate, na tinatawag na agglutinate.

Ang reaksyong ito ay ginagamit para sa serodiagnosis at seroidentification. Ginagamit ang RA para sa serodiagnosis (pagtuklas ng mga antibodies sa serum ng dugo ng mga pasyente) tipus at paratyphoid(Reaksyon ni Vidal), brucellosis(Wright reaksyon), tularemia at leptospirosis. Ginagamit ang RA para sa seroidentification (pagtukoy sa uri ng pathogen na nakahiwalay sa pasyente) kung kailan impeksyon sa bituka, ubo, kolera at iba pa.

Mga bahagimga reaksyon:

1. A antigen (agglutinogen) - ang mga ito ay buo (hindi nawasak) microbial o iba pang mga cell ( corpuscular, hindi matutunaw na antigen). Mga aglutinogen- ito ay isang suspensyon buhay o pinatay microbial cells o anumang iba pang mga cell. Ang mga antigen ay maaaring hindi kilala o kilala. Ang hindi kilalang agglutinogen ay isang microbial culture na nakahiwalay sa katawan ng pasyente na kailangang matukoy. kilalang antigen. diagnosticum- diagnostic na gamot - pagsususpinde sa mga patay mikrobyo kilalang species sa pisyolohikal na solusyon. Itong suspension malabo (malabo)), dahil Ang mga microbial cell ay hindi natutunaw, ngunit nananatiling buo. Ang isang kilalang agglutinogen ay gagamitin upang makita ang hindi kilalang antibodies sa serum ng pasyente.

2. Antibody (aglutinin)- matatagpuan sa serum ng dugo. Ang mga antibodies ay maaari ding hindi kilala o kilala. Ang mga hindi kilalang antibodies na tutukuyin ay matatagpuan sa serum ng dugo maysakit na tao. Ang mga kilalang antibodies ay matatagpuan sa immune diagnostic sera, na tinatawag na agglutinating sera. Ginagamit ang mga ito para sa seroidentification, i.e. upang matukoy ang hindi kilalang antigen - isang uri ng microbial culture.

3. Electrolyte- 0.9% na solusyon ng sodium chloride.

Mga paraan ng pagtatakda ng RA.

1. Tinatayang (plate) RA- isinasagawa sa salamin. Maglagay ng 2 patak ng serum at 1 patak ng isotonic solution sa isang glass slide. Ang isang microbial culture ay ipinakilala sa isa sa mga patak ng serum at sa isang patak ng isotonic solution na may isang loop at halo-halong. Patak ng isotonic solution may mikrobyo – kontrol ng antigen, isang patak mga serum na walang mikrobyo – kontrol ng antibody, isang patak suwero na may mikrobyo – isang karanasan. Kung ang serum ay naglalaman ng mga antibodies na naaayon sa mga microbial antigens na halo-halong kasama nito, kung gayon ang mga antibodies at antigens ay partikular na magbubuklod sa isa't isa at pagkatapos ng 1-3 minuto ang mga agglutinate na natuklap ay lilitaw sa eksperimentong patak. Ang antigen control ay dapat na maulap at ang antibody control ay dapat na malinaw. Ang accounting para sa mga resulta ng reaksyon ay isinasagawa sa pamamagitan ng paglitaw ng mga natuklap ng agglutinate . Kung ang mga natuklap ay nahuhulog, ang reaksyon ay positibo, i.e. ang isang antigen ay tumutugma sa isang antibody, at ang isang antigen ay maaaring gamitin upang makilala ang isang antibody, o vice versa. Kung mananatili ang labo, negatibo ang reaksyon.

2. Pinahabang reaksyon ng agglutination - isinasagawa sa mga test tube. Una, ang 2-tiklop na pagbabanto ng serum ng dugo ng isang taong may sakit ay inihanda mula 1:50 hanggang 1:1600. Ang 1 ml ng isotonic sodium chloride solution ay ibinuhos sa 6 na tubo. 1 ml ng serum ng dugo ng pasyente sa isang pagbabanto ng 1:50 ay idinagdag sa unang test tube, halo-halong at isang pagbabanto ng 1:100 ay nakuha, pagkatapos ay 1 ml ng isang pagbabanto ng 1:100 ay inilipat sa pangalawang test tube at ang pagbabanto ng 1:200 ay nakuha, atbp. Dalawang test tube ang natitira upang kontrolin ang antigen at serum. Tanging serum diluted 1:50 ay idinagdag sa serum control, tanging ang antigen ay idinagdag sa antigen control. Ang 0.1 ml ng antigen - diagnosticum (O- o H-) ay idinagdag sa lahat ng iba pang mga tubo at lahat ng mga tubo ay inilalagay sa isang thermostat sa 37°C sa loob ng 18-20 oras. Ang accounting para sa mga resulta ng reaksyon ay isinasagawa ayon sa likas na katangian, dami ng namuo (agglutinate) na nabuo at ang antas ng labo. Ang accounting ay isinasagawa lamang sa mga sumusunod na resulta sa mga kontrol: serum control - transparent, antigen control - maulap. Ang mga O-antibodies ay nagbibigay ng pinong butil na precipitate. H-antibodies - magaspang na butil. Ayon sa huling test tube, kung saan nakikita pa rin ang agglutination reaction, itinakda diagnostic titer.

Kapag ang serodiagnosing ng mga sakit, mahalaga hindi lamang upang makita ang mga tiyak na antibodies sa isang tiyak na pathogen, kundi pati na rin upang makilala ang kanilang numero, i.e. magtatag ng naturang antibody titer kapag maaari nating pag-usapan ang pagkakaroon ng isang sakit na dulot ng pathogen na ito. Ang titer na ito ay tinatawag na diagnostic titer. Halimbawa, upang masuri ang typhoid fever, kinakailangan upang makita ang isang antibody titer na 1:400, ngunit hindi kukulangin. Ang mas tumpak na mga resulta ay nakuha sa pamamagitan ng pag-detect ng pagtaas ng mga antibodies sa ipinares na sera. Ang serum ng pasyente ay kinukuha sa simula ng sakit at pagkatapos ng 3-5 o higit pang mga araw. Kung ang titer ng antibody ay tumaas ng hindi bababa sa 4 na beses, maaari nating pag-usapan ang kasalukuyang sakit.