Ano ang ipinapakita ng isang serological blood test? Ang mga hakbang sa diagnostic ay ang pinakamahalagang yugto sa paggamot ng anumang sakit. Ang tagumpay ng paggamot ay nakasalalay hindi lamang sa mga iniresetang gamot, ngunit higit sa lahat sa kung paano tama ang pagsusuri ay ginawa.

Bilang karagdagan, ang mga diagnostic ay maaaring maiwasan ang mga komplikasyon at comorbidities. Sa tulong ng isang serological analysis ng dugo ng pasyente, ang pagkakaroon ng mga antibodies at antigens ay napansin. Ang pag-aaral ay nakakatulong upang makahanap ng maraming sakit, matukoy ang kanilang yugto at kontrolin ang kurso ng paggamot.

Ano ang serology?

Ang serology ay ang sangay ng immunology na nag-aaral ng mga reaksyon ng antigens sa antibodies. Ang sangay ng gamot na ito ay tumatalakay sa pag-aaral ng plasma ng dugo at mga katangian ng immunological nito.

Ngayon, ang isang serological blood test para sa mga antibodies ay isang maaasahang paraan upang makita ang human immunodeficiency virus, hepatitis, brucellosis, STD at iba pang mga sakit na nagbabanta sa buhay. Alamin natin kung anong mga kaso ang inireseta.

Mga indikasyon para sa appointment

Ang isang serological na pagsusuri sa dugo ay kinakailangan upang matukoy ang causative agent ng sakit sa kaso ng kahirapan sa paggawa ng diagnosis.

Upang maisakatuparan ang reaksyong ito, ang mga antigen ng mga pathogen ay iniksyon sa plasma, at pagkatapos ay pinag-aaralan ng katulong sa laboratoryo ang patuloy na proseso. O nagsasagawa sila ng isang baligtad na reaksyon: ang mga antibodies ay iniksyon sa nahawaang dugo upang matukoy ang partikular na kaugnayan ng pathogen.

Saklaw ng aplikasyon

Ang pag-aaral na ito ay ginagamit sa iba't ibang sangay ng medisina. Sa tulong ng reaksyong ito, ang mga partikular na selula at antibodies na ginawa ng katawan ay natutukoy upang labanan ang mga impeksiyon at mga virus.

Bilang karagdagan, gamit ang serological na pamamaraan, tinutukoy ang pangkat ng dugo ng isang tao.

Ang isang katulad na serological blood test ay ginagamit sa ginekolohiya upang masuri ang mga sakit na nakukuha sa pakikipagtalik. Ang pamamaraang ito ay ginagawa din para sa komprehensibong pagsusuri ng mga buntis na kababaihan (detection ng toxoplasmosis, HIV, syphilis, atbp.). Ang pagpasa sa pagsusulit na ito ay sapilitan kapag nagparehistro sa antenatal clinic.

Sa mga bata, ang isang serological test ay ginagamit upang kumpirmahin ang diagnosis ng mga tinatawag na "mga bata" na sakit (chickenpox, tigdas, rubella, atbp.) Kung sakaling ang mga sintomas ay walang binibigkas na mga pagpapakita at imposibleng makilala ang sakit sa pamamagitan ng pagsusuri ng mga klinikal na indikasyon.

Pagtuklas ng mga sakit sa venereal

Para sa mga venereologist, ang pagsubok na ito ay tunay na kailangan at nagbibigay-daan sa iyo upang makagawa ng diagnosis nang napakatumpak.

Sa isang malabong klinikal na larawan, ang isang serological blood test para sa syphilis, giardiasis, ureaplasmosis, chlamydia, herpes at iba pang mga sakit ay nagbibigay-daan sa iyo upang mabilis na makilala ang pagkakaroon ng mga antibodies.

Viral at nakakahawang sakit

Ang serological analysis ay aktibong ginagamit ng mga gastroenterologist, hepatologist at mga espesyalista sa nakakahawang sakit upang masuri ang viral hepatitis.

Ang pag-decipher ng isang serological blood test ay ginagawang posible upang matukoy ang yugto ng kurso ng sakit at sagutin ang tanong kung gaano karaming ospital ang kailangan sa sandaling ito. Paano maghanda nang maayos?

Paghahanda para sa paghahatid ng pagsusuri

Ang mga pagsusuri sa serological na dugo ay ginagawa sa parehong pampubliko at komersyal na mga klinika. Ang kagustuhan ay dapat ibigay sa isang laboratoryo na may modernong kagamitan at mga kwalipikadong tauhan.

Ang mga biological sample para sa pananaliksik ay maaaring laway at dumi, ngunit sa karamihan ng mga kaso ang venous blood ng pasyente ay ginagamit. Ang dugo para sa isang serological test ay kinuha mula sa cubital vein sa isang laboratoryo. Bago kumuha ng pagsusulit, dapat kang kumunsulta sa iyong doktor tungkol sa paghahanda para sa pamamaraang ito.

Upang maghanda para sa paghahatid ng isang pagsusuri para sa isang serological na pag-aaral, kailangan mong sundin ang ilang simpleng mga patakaran.

Ang dugo ay kinuha sa isang kalmado na estado bago kumain, iyon ay, sa walang laman na tiyan. Bago ito, hindi ka dapat sumailalim sa iba pang pag-aaral, tulad ng x-ray, ultrasound, atbp.

Kinakailangang ibukod ang paggamit ng antibacterial at ilang iba pang gamot ilang linggo bago mag-donate ng dugo. Ang ilang mga rekomendasyon sa kasong ito ay nakasalalay sa sakit kung saan ginagawa ang pagsusuri. Halimbawa, ang isang pagsusuri sa hepatitis ay kinabibilangan ng pag-iwas sa matatabang pagkain at alkohol 48 oras bago ang pamamaraan.

Reaksyon ng fluorescence

Kabilang sa mga varieties ng serological reaksyon mayroong isang fluorescence reaksyon. Ang pamamaraan na ito ay gumagamit ng isang reagent na nagha-highlight ng mga antibodies sa serum ng dugo.

Ang pagtatakda ng direktang uri ng serological na reaksyon ay kinabibilangan ng pag-label ng mga partikular na antibodies na may fluorescent substance. Ang reaksyong ito ay ang pinakamabilis at isinasagawa sa isang hakbang.

Ang isa pang opsyon para sa pagsasagawa ng naturang pagsusuri ay tinatawag na hindi direkta, o RNIF. Ito ay isinasagawa sa dalawang yugto. Sa unang hakbang, ang mga antibodies ay hindi nilagyan ng label na fluorescent, at sa pangalawang hakbang, ang mga antibodies na may naaangkop na label ay ginagamit upang makita ang mga antigen at antibodies. Ang luminescence ay nangyayari lamang pagkatapos na nagbubuklod sa isang tiyak na antibody ay nangyayari.

Ano ang ipinapakita ng isang serological blood test? Ang resulta ng buong pamamaraan ay sinusuri ng isang espesyal na aparato na sinusuri ang lakas ng radiation, ipinapakita ang hugis at sukat ng bagay na pinag-aaralan. Ang mga causative agent ng mga nakakahawang sakit ay napansin na may isang resulta, ang pagiging maaasahan ng kung saan ay 90-95%, depende sa uri at yugto ng patolohiya.

Naka-link na immunosorbent assay

Ang mga uri ng serology na ito ay gumagamit ng natatangi, matatag na reagents. Ang mga minarkahang sangkap ay tila dumidikit sa ninanais na mga antibodies. Bilang resulta, nakakakuha tayo ng isang husay o dami ng resulta.

Kung walang nakitang mga ipinahayag na marker, ituturing na negatibo ang resulta. Kung ang pagkakaroon ng mga antibodies sa mga biological sample sa panahon ng isang husay na pag-aaral ay nakita, kung gayon ang resulta ng pagsusuri ay itinuturing na positibo. Kapag nagbibilang ng mga cell, ang pagsusuri ay nagbibigay ng mas tumpak na resulta.

Pag-aaral ng mga tagapagpahiwatig ng pagsusuri (halimbawa, ang dami ng mga nakitang selula), tinutukoy ng espesyalista kung ang sakit ay nasa paunang yugto, sa talamak na yugto, o kung ang talamak na anyo ng patolohiya ay lumala. Upang makagawa ng diagnosis, isinasaalang-alang ng doktor hindi lamang ang data ng serological na pag-aaral, kundi pati na rin ang klinikal na larawan ng sakit.

Mga tampok ng pagsubok na ito

Ang pagsasagawa ng pagsusuring ito ay hindi palaging makapagbibigay ng 100% na katiyakan na ang isang partikular na sakit ay nakita. Ito ay nangyayari na ang mga resulta ay maaaring hindi maliwanag at iba pang mga pamamaraan ay kinakailangan.

Halimbawa, sa panahon ng pagsusuri para sa brucellosis, sinusuri ang serum para sa pagpapanatili sa sarili nang walang antigen. Ito ay makabuluhang pinatataas ang pagiging maaasahan ng pagsubok. Ang pagsusuri para sa brucellosis ay maaaring maging positibo o negatibo, at magdulot din ng pagdududa.

Kung nakatanggap ka ng mga kahina-hinalang resulta na walang malinaw na interpretasyon, inirerekumenda na ulitin ang pagsusuri. Bilang karagdagan, ang brucellosis ay maaaring makita ng mga kultura ng dugo, na sinusuri ang utak ng buto at cerebrospinal fluid.

Mga kalamangan ng isang serological blood test

Ang mga pamamaraan ng diagnostic gamit ang mga serological test ay malawakang ginagamit sa modernong medikal na kasanayan. Ito ay kadalasang ginagawa kapag tinutukoy ang mga viral at nakakahawang pathologies.

Ang parehong mga pagsusuri ay ginagamit sa geographic na screening at medikal na pagsusuri upang maiwasan ang epidemiological na pagkalat ng impeksyon.

Ang mga pakinabang ng pamamaraan ay kinabibilangan ng:

• Mataas na antas ng kumpiyansa.
• Mabilis na tugon at mga resulta. Ang mga resulta ng RSC ay malalaman sa loob ng 24 na oras. Sa isang espesyal na sitwasyon, sa isang setting ng ospital, ang pagsusuri ay magiging handa sa loob ng ilang oras.
• Pagsubaybay sa pag-unlad ng sakit at ang pagiging epektibo ng therapy.
• Mababang gastos at kakayahang magamit para sa mga pasyente.

Kahinaan ng pamamaraan

Gayunpaman, ang mga pag-aaral ng serological ay mayroon ding mga kakulangan.

Kabilang dito ang katotohanan na ang pagsusuri ay dapat isaalang-alang ang panahon ng pagpapapisa ng itlog ng sakit upang makakuha ng isang mas maaasahang larawan.

Halimbawa, ang pagpapasiya ng herpes simplex ng una o pangalawang uri ay posible lamang pagkatapos ng 14 na araw mula sa sandali ng impeksiyon. Ang pagsusuri para sa pagkakaroon ng immunodeficiency virus ay isinasagawa pagkatapos ng 30 araw, pagkatapos ng 90 araw at anim na buwan pagkatapos makipag-ugnayan sa isang taong nahawahan.

Siyempre, ang pagiging maaasahan ng mga resulta ay maaari ding maimpluwensyahan ng kadahilanan ng tao: kapabayaan ang mga patakaran para sa paghahanda para sa sampling ng dugo o isang pagkakamali na ginawa ng katulong sa laboratoryo sa panahon ng reaksyon.

Ayon sa mga istatistika, ang isang maling resulta ay maaaring makuha sa 5% ng mga kaso. Ang isang nakaranasang doktor, kapag sinusuri ang isang pasyente, na pinag-aralan ang klinikal na larawan, sa karamihan ng mga kaso ay maaaring kalkulahin ang pagkakamaling nagawa.

Ang pagsusuri para sa syphilis ay isa sa pinakakaraniwan sa mga pagsubok sa laboratoryo. Ang mga pagsusuri para sa syphilis ay malawakang ginagamit sa panahon ng preventive examinations. Sa tulong ng microscopy, ang causative agent ng syphilis ay napansin -. Sa tulong ng mga serological na reaksyon, ang diagnosis ng syphilis ay nakumpirma, ang diagnosis ng latent syphilis ay itinatag, ang pagiging epektibo ng paggamot ay sinusubaybayan, at ang rate ng pagpapagaling ng mga pasyente ay tinutukoy.

Ang diagnosis ng syphilis ay itinatag batay sa klinikal na data, ang pagtuklas ng mga causative agent ng syphilis sa mga sample ng materyal at pagkumpirma ng diagnosis sa pamamagitan ng mga pamamaraan ng serological na pananaliksik. Ang mga pagpapakita ng syphilis ay marami at magkakaibang, kaya ang sakit ay napansin ng mga doktor ng iba't ibang mga specialty. Ang pagkakaiba-iba ng diagnosis ng pangunahing syphilis ay isinasagawa sa isang bilang ng mga sakit.

kanin. 1. Sa larawan, ang pangunahing pagpapakita ng syphilis ay isang matigas na chancre.

Antibodies sa maputlang treponema at serological diagnosis

Kapag nahawaan ng syphilis, ang mga antibodies ay nabuo sa katawan ng pasyente. Ang serological diagnosis ay tumutulong sa doktor na pag-aralan ang dinamika ng pagbuo ng mga antibodies sa katawan ng isang pasyente na may syphilis sa mga unang yugto ng sakit, sa panahon ng paggamot at pagkatapos nito, upang malutas ang isyu ng pagbabalik ng sakit. sa isang pasyente o re-infection (reinfection), upang masuri ang syphilis sa ilalim ng malawakang kondisyong medikal.

Antibodies sa maputlang treponema IgM

Ang mga IgM antibodies ay ang unang ginawa pagkatapos ng impeksyon. Nagsisimula silang matukoy gamit ang mga serological na reaksyon mula sa ikalawang linggo pagkatapos ng impeksiyon. Sa 6-9 na linggo ng sakit, ang kanilang bilang ay nagiging maximum. Kung ang pasyente ay hindi ginagamot, ang mga antibodies ay mawawala pagkatapos ng anim na buwan. Ang IgM antibodies ay nawawala pagkatapos ng 1-2 buwan. pagkatapos, pagkatapos ng 3 - 6 na buwan. - pagkatapos ng paggamot ng late syphilis. Kung ang kanilang paglaki ay naitala, pagkatapos ito ay nagsisilbi o nagpapahiwatig ng muling impeksyon. Ang mga molekula ng IgM ay malaki at hindi dumadaan sa inunan patungo sa fetus.

Antibodies sa maputlang treponema IgG

Ang mga antibodies na immunoglobulin IgG ay lilitaw sa katapusan ng unang buwan (sa ika-4 na linggo) mula sa sandali ng impeksyon. Ang kanilang titer ay mas mataas kaysa sa IgM titer. Ang IgG ay nananatili pagkatapos ng paggamot sa loob ng mahabang panahon.

Nonspecific antibodies

Mayroong maraming mga serological reaksyon. Ito ay dahil sa antigenic multiplicity ng maputlang treponema. Sa serum ng dugo ng isang taong may sakit sa iba't ibang yugto ng syphilis, bilang karagdagan sa mga tiyak, ang ilang mga di-tiyak na antibodies ay nabuo - agglutinins, complement-fixing, immobilins, antibodies na nagdudulot ng immune fluorescence, precipitin, atbp. Serological reactions to detect non -Ang mga partikular na antibodies ay may kamag-anak na pagtitiyak, samakatuwid, upang maiwasan ang mga error sa diagnostic, dapat kang gumamit ng hindi isa, ngunit isang kumplikadong mga reaksyon ng serological (CSR).

Mga maling positibong pagsusuri para sa syphilis

Ang isang natatanging tampok ng mga pagsubok na hindi treponemal ay ang paggawa ng mga maling positibong reaksyon. Ang mga reagin antibodies, na ginawa sa dugo ng tao laban sa cardiolipin antigen, ay nakarehistro hindi lamang sa syphilis, kundi pati na rin sa iba pang mga sakit: collagenosis, hepatitis, sakit sa bato, thyrotoxicosis, kanser, mga nakakahawang sakit (leprosy, tuberculosis, brucellosis, malaria, typhus ), scarlet fever), sa panahon ng pagbubuntis at regla, kapag umiinom ng matatabang pagkain at alkohol. Nabanggit na sa edad ay tumataas ang bilang ng mga maling positibong reaksyon.

kanin. 2. Ang larawan ay nagpapakita ng pangunahing syphilis sa mga kababaihan.

Laboratory diagnosis ng syphilis gamit ang serological test

Ang mga serological na pagsusuri para sa syphilis ay nahahati sa treponemal at non-treponemal.

1. Mga pagsubok na hindi treponemal

Ang cardiolipin antigen ay ginagamit bilang isang antigen sa grupong ito ng mga pagsubok. Ang lipid antigens ng mga causative agent ng syphilis ay ang pinakamarami. Binubuo nila ang 1/3 ng tuyong masa ng cell. Sa tulong ng mga non-treponemal na pagsusuri, ang mga reagin antibodies ay nakita na ginawa laban sa cardiolipin antigen. Kasama sa grupong ito ang complement fixation reaction (RSKcard), ang microprecipitation reaction (RMP), ang mabilis na pagtukoy ng plasma reagins (RPR), atbp. Gamit ang mga non-treponemal test, isinasagawa ang pangunahing screening para sa syphilis (pagsusuri ng mga pangkat ng populasyon), at ang posibilidad na makakuha ng mga resulta sa isang quantitative variant ay nagbibigay-daan sa iyong gamitin ang mga pagsusuring ito upang subaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot. Ang mga positibong resulta sa mga pagsusuring hindi treponemal ay dapat kumpirmahin ng mga pagsusuri sa treponemal. Ang isang natatanging tampok ng mga pagsubok na hindi treponemal ay ang paggawa ng mga maling positibong reaksyon.

2. Mga pagsubok sa treponemal

Ang mga pagsusuri sa treponemal ay gumagamit ng mga antigen na pinagmulan ng treponemal na nakahiwalay sa kultura ng treponema pallidum. Sa kanilang tulong, ang mga positibong resulta ng mga pagsusuri na hindi treponemal ay nakumpirma. Kasama sa grupo ang: RSKtrep - complement fixation reaction, RIF - immunofluorescence reaction at mga pagbabago nito, RIT, RIBT - pale treponema immobilization reaction, RPHA - passive hemagglutination reaction, ELISA - enzyme immunoassay.

3. Mga pagsusuri para sa syphilis gamit ang mga recombinant antigens

Ang mga antigen para sa pangkat na ito ng mga pagsubok ay nakuha sa pamamagitan ng genetic engineering at ginagamit sa mga reaksyon - TPHA at ELISA, sa immunoblotting (IB) na pagsusuri at immunochromatographic analysis.

kanin. 3. Ang isang hanay ng mga serological test ay ginagamit upang masuri ang syphilis.

Diagnosis ng syphilis gamit ang mga pagsusuring hindi treponemal

Upang makita ang syphilis, ginagamit ang mga non-treponemal na pagsusuri o isang complex ng serological reactions (CSR). Ang mga serological diagnostic ay ilalapat mula sa ika-5 linggo mula sa sandali ng impeksyon o mula 2-3 linggo pagkatapos ng simula. Ang mga antibodies ay nakita sa halos lahat ng mga pasyente na may sariwang pangunahing,. Ang mga reaksyon ng serological ay positibo sa 70 - 80% ng mga pasyente na may, sa 50 - 60% ng mga kaso sa mga pasyente na may tertiary latent syphilis.

Ang mga serological na reaksyon gamit ang mga non-treponemal na pagsusuri ay maaaring magbigay ng mga maling positibong resulta.

kanin. 4. Pag-sample ng dugo para sa pagsusuri para sa syphilis.

Complement fixation reaction (RSK card, KSK na may KA, reaksyon ng Wasserman)

Ang reaksyon ng Wasserman (RW, РВ), na naimbento ni A. Wasserman higit sa 100 taon na ang nakalilipas, ngayon ay sumailalim sa maraming pagbabago, gayunpaman, bilang isang pagkilala sa tradisyon, pinanatili nito ang pangalan nito hanggang sa kasalukuyan. Ang complement fixation test gamit ang cardiolipin antigen ay inilaan hindi lamang upang makita ang mga antibodies, ngunit ginagawa din sa isang dami na bersyon - na may iba't ibang mga dilution ng serum, na ginagawang posible na gamitin ito upang masubaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot. Ang mababang sensitivity at specificity, ang pagkuha ng mga maling positibong resulta ay ang mga negatibong aspeto ng ganitong uri ng pag-aaral.

Ang kakanyahan ng reaksyon ng Wasserman ay ang mga sumusunod: ang mga antigen na ginagamit sa pagbabalangkas ng reaksyon ng Wasserman, sa kaso ng pagkakaroon ng mga antibodies sa mga causative agent ng syphilis sa dugo ng tao, sa pamamagitan ng isang papuri, nagbubuklod sa kanila. at namuo. Ang intensity ng reaksyon ay ipinahiwatig ng sign (+). Ang reaksyon ay maaaring negatibo (-) - walang sediment, nagdududa (maliit na sediment o +), mahina positibo (++), positibo (+++) at biglang positibo (++++).

Mas sensitibo ang binagong reaksyon ng Wassermann - ang reaksyon ng Kolmer. Sa tulong nito, ang mga antibodies ay nakita sa sera, kung saan ang reaksyon ng Wasserman ay nagbigay ng negatibong resulta.

Sa matinding positibong reaksyon, ang isang dami ng pagpapasiya ng mga reagin ay isinasagawa, kung saan ang serum ay ginagamit sa mga dilution mula 1:10 hanggang 1: 320, na ginagawang posible na gamitin ang ganitong uri ng pag-aaral upang masubaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot. Halimbawa, ang pagbaba sa titer ng antibody at ang kanilang kasunod na seronegativity (pagkuha ng mga negatibong resulta) ay nagpapahiwatig ng isang matagumpay na lunas para sa sakit.

kanin. 5. Pagsusuri ng dugo para sa syphilis - reaksyon ni Wasserman.

Precipitation microreaction (MPR)

Ginagamit ang precipitation microreaction para sa mass examinations ng ilang partikular na grupo ng populasyon, diagnosis ng syphilis at kontrol sa bisa ng paggamot. Upang maisagawa ang ganitong uri ng pag-aaral, kinakailangan ang isang maliit na halaga ng materyal na pinag-aaralan. Ang microreaction ng precipitation ay batay sa immunological antigen-antibody reaction. Sa kaso ng pagkakaroon ng mga antibodies sa serum ng dugo ng paksa, ang antigen-antibody complex ay namuo sa pagbuo ng mga natuklap. Ang reaksyon ay isinasagawa sa mga balon ng isang espesyal na glass plate. Ito ay tinatantya ng intensity ng precipitated precipitate at ang laki ng mga flakes sa (+) bilang reaksyon ng Wasserman. Kapag sinusuri ang mga buntis na kababaihan, ang mga donor at upang subaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot ay hindi ginagamit. Ang VDRL at RPR ay mga uri ng microreactions.

kanin. 6. Tingnan ang reaksyon ng pag-ulan sa isang patak sa salamin.

kanin. 7. Pagsusuri ng dugo para sa syphilis - reaksyon ng microprecipitation.

kanin. 8. Isang kit para sa mabilis na pagtukoy ng plasma reains (Pagsusuri para sa syphilis RPR).

Ang lahat ng mga positibong pagsusuri na nakuha sa mga hindi tiyak na serological na reaksyon ay nangangailangan ng kumpirmasyon sa pamamagitan ng mga tiyak na reaksyon - mga pagsusuri sa treponemal.

Diagnosis ng syphilis gamit ang treponemal test

Kapag nagsasagawa ng mga pagsusuri sa treponemal, ginagamit ang mga antigen ng pinagmulan ng treponemal. Ang kanilang negatibong panig ay ang imposibilidad ng paggamit sa kanila upang makontrol ang pagiging epektibo ng paggamot, makakuha ng mga positibong resulta sa spirochetosis at non-venereal treponematoses, at makakuha ng maling positibong resulta sa mga sakit na oncological, leprosy, at ilang endocrine pathology. Ang mga pagsusuri tulad ng RPHA, ELISA at RIF ay nananatiling positibo sa loob ng maraming taon pagkatapos ng lunas para sa syphilis, at sa ilang mga kaso habang buhay.

Ang RIBT at RIF ay ang pinakaspesipiko sa lahat ng serological test na ginagamit upang masuri ang syphilis. Pinapayagan ka nilang makilala sa pagitan ng mga maling positibong reaksyon, upang makilala ang mga huling anyo ng syphilis na nangyayari sa mga negatibong reaksyon. Sa tulong ng RIBT, ang mga maling positibong reaksyon sa mga buntis na kababaihan ay kinikilala kapag kinakailangan upang malutas ang isyu ng impeksyon ng bata.

Treponema pallidum immobilization reaction (RIBT, RIT)

Ang kakanyahan ng reaksyon ay ang mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente ay nagpapawalang-bisa sa maputlang treponema. Ang isang reaksyon na may immobilization ng hanggang 20% ​​ng mga pathogen ay itinuturing na negatibo, mahina positibo - 21 - 50%, positibo - 50 - 100%. Minsan nagbibigay ang RIBT ng mga maling positibong resulta. Ang pagsubok ay kumplikado at matagal, gayunpaman, ay kailangang-kailangan para sa differential diagnosis ng mga nakatagong anyo ng sakit at maling-positibong mga resulta ng mga serological na reaksyon, kabilang ang sa mga buntis na kababaihan. Ang RIBT ay nagbibigay ng 100% positibong resulta sa pangalawa, maaga at huli na syphilis, sa 94 - 100% ng mga kaso - sa iba pang mga anyo ng syphilis.

Immunofluorescence reaction (RIF)

Ang kakanyahan ng reaksyon ay ang maputlang treponemas (antigens), na sinamahan ng mga antibodies na may label na fluorochromes, ay naglalabas ng dilaw-berdeng glow sa isang fluorescent microscope. Ang resulta ay sinusuri gamit ang isang (+) sign. Sa tulong ng RIF, natukoy ang mga immunoglobulin ng class A. Ang reaksyon ng immunofluorescence ay nagiging positibo nang mas maaga kaysa sa reaksyon ng Wasserman. Ito ay palaging positibo sa pangalawang at tago na syphilis, sa 95-100% ng mga kaso ito ay positibo sa tertiary at congenital syphilis. Ang pamamaraan para sa pagsasagawa ng ganitong uri ng pag-aaral ay mas simple kaysa sa RIBT, ngunit imposibleng palitan ang RIF ng RIBT, dahil ang reaksyong ito ay mas mababa sa RIBT sa pagtitiyak. Ang RIF-10 (RIF modification) ay mas sensitibo, ang RIF-200 at RIF-abs ay mas tiyak.

kanin. 9. Pagsusuri ng dugo para sa syphilis - immunofluorescence reaction (RIF).

Treponema pallidum immune adhesion test (TRIPBT)

Ang kakanyahan ng reaksyon ay ang maputlang treponema na na-sensitized ng suwero ng pasyente sa pagkakaroon ng pandagdag ay sumunod sa ibabaw ng mga erythrocytes. Ang mga complex na nakuha ay namuo sa panahon ng centrifugation. Ang sensitivity ng pagsubok at pagtitiyak na ito ay malapit sa RIF at RIBT.

Enzyme-linked immunosorbent assay para sa syphilis (ELISA)

Sa tulong ng ELISA, natutukoy ang mga immunoglobulin ng class M at G. Ang paraan ng IgM - ELISA ay maaaring gamitin bilang isang screening at confirmatory test. Ang pagiging sensitibo at pagtitiyak ng ELISA ay katulad ng RIF. Sa syphilis, ang ELISA ay nagbibigay ng mga positibong resulta mula sa ikatlong buwan ng impeksyon at nananatiling positibo sa loob ng mahabang panahon (minsan habang buhay).

kanin. 10. ELISA analyzer.

Ang reaksyon ng passive (indirect) hemagglutination (RPHA)

Ang TPHA ay batay sa kakayahan ng mga erythrocytes, kung saan ang treponema pallidum antigens ay adsorbed, upang magkadikit (hemagglutination) sa presensya ng suwero ng pasyente. Ginagamit ang RPHA upang masuri ang lahat ng anyo ng syphilis, kabilang ang nakatago. Kapag gumagamit ng mataas na kalidad na antigen, ang ganitong uri ng serological na reaksyon ay lumalampas sa lahat ng iba pang mga pagsubok sa pagiging tiyak at pagiging sensitibo.

kanin. 11. Ginagamit ang RPHA upang masuri ang lahat ng uri ng syphilis.

kanin. 12. Pagsusuri para sa syphilis - reaksyon ng passive (indirect) hemagglutination (scheme).

kanin. 13. Ang hitsura ng isang baligtad na payong, na sumasakop sa buong ilalim ng test tube, ay nagpapahiwatig ng isang positibong reaksyon. Sa kaso kapag ang mga erythrocytes ay tumira sa isang haligi ("button") sa gitna ng ilalim ng test tube, nagsasalita sila ng isang negatibong reaksyon.

kanin. 14. Pagsusuri ng RPGA sa mga kondisyon ng laboratoryo.

Microbiological diagnostics

Kasama ng serological diagnostics, ang paraan ng pag-detect ng maputlang treponemas (microbiological diagnostics) ay gumaganap ng isang mahalagang papel, lalo na sa panahon ng seronegative syphilis, kapag wala pang mga antibodies sa dugo, ngunit mayroon nang mga unang pagpapakita ng sariwang pangunahing syphilis ( mahirap na chancre).

Ang biological na materyal para sa pag-aaral ay ang paglabas mula sa ibabaw ng matitigas na ulser (chancres), ang mga nilalaman ng pustular syphilides, pag-iyak at erosive papules, punctates ng mga nahawaang lymph node, cerebrospinal fluid at amniotic fluid, at dugo para sa PCR.

Ang pinakamahusay na paraan para sa pag-detect ng mga causative agent ng syphilis ay ang pag-aaral ng biological na materyal sa madilim na larangan ng isang mikroskopyo. Ang pamamaraan na ito ay nagbibigay-daan sa iyo upang makita ang maputlang treponema sa isang buhay na estado, upang pag-aralan ang mga tampok nito ng istraktura at paggalaw, upang makilala ang mga pathogenic pathogens mula sa saprophytes.

kanin. 15. Pagsusuri para sa syphilis - dark-field microscopy.

kanin. 16. Kapag nag-aaral ng mga dry smear, ginagamit ang Romanovsky-Giemsa staining. Ang maputlang treponema ay nagiging kulay rosas, ang lahat ng iba pang uri ng spirochetes ay nagiging lila.

Ang pagtuklas ng maputlang treponema sa pamamagitan ng dark field microscopy ay isang ganap na pamantayan para sa panghuling pagsusuri ng syphilis.

kanin. 17. Upang makita ang bakterya, isang immunofluorescence reaction (RIF) ang ginagamit - isang treponemal test. Ang isang partikular na antigen-antibody complex, kapag pinagsama sa isang partikular na serum na may label na fluorochrome, sa liwanag ng isang fluorescent microscope, ay nagbibigay sa bakterya ng isang maberdeng glow.

kanin. 18. Ang mga sanhi ng ahente ng syphilis ay malinaw na nakikita sa mga pahid na inihanda ayon sa pamamaraan ng Levaditi (pilak na impregnation). Maputlang madilim na treponema laban sa background ng dilaw na kulay ng mga selula ng mga nahawaang tisyu.

kanin. 20. Ang larawan ay nagpapakita ng isang kolonya ng maputlang treponema. Ang pagkuha ng kultura ng bakterya ay mahirap. Halos hindi sila lumalaki sa artipisyal na nutrient media. Sa media na naglalaman ng serum ng kabayo at kuneho, lumilitaw ang mga kolonya sa ika-3 - ika-9 na araw.

PCR para sa syphilis

Ang mabisa at maaasahan ngayon ay ang pamamaraan ng polymerase chain reaction. Pinapayagan ka ng PCR para sa syphilis na makakuha ng resulta sa loob ng ilang oras, at hindi bababa sa ilang mga pathogen ang maaaring naroroon sa materyal na nakolekta para sa diagnosis.

kanin. 21. Pinapayagan ka ng PCR para sa syphilis na makita ang DNA o ang mga fragment nito ng maputlang treponema.

Ang sensitivity ng paraan ng pananaliksik na ito ay nakasalalay sa pagkakaroon ng maputlang treponema sa biological na materyal at umabot sa 98.6%. Ang pagtitiyak ng pagsubok na ito ay higit na nakasalalay sa tamang pagpili ng target para sa amplification sa panahon ng mga diagnostic at umabot sa 100%.

Kasabay nito, dahil sa hindi sapat na pinag-aralan na mga katangian ng paghahambing ng sensitivity at pagtitiyak ng mga direktang pamamaraan para sa pag-diagnose ng syphilis at PCR, ang pamamaraang ito ng pagsusuri sa Russian Federation para sa pag-diagnose ng sakit ay hindi pa naaprubahan.

Ang PCR para sa syphilis ay pinapayagan na isagawa lamang sa ilang mga kaso, bilang isang karagdagang paraan para sa pag-diagnose ng congenital syphilis, neurosyphilis, kung mahirap i-diagnose ang syphilis gamit ang mga serological na pamamaraan sa mga pasyente ng HIV.

kanin. 22. Ang pagtuklas ng treponema pallidum DNA gamit ang PCR ay nagpapahiwatig ng alinman sa pagkakaroon ng mabubuhay na bakterya, o ang mga labi ng mga patay na bakterya, ngunit naglalaman ng mga karagdagang kopya ng mga indibidwal na seksyon ng chromosomal DNA na may kakayahang bumuo ng mga karagdagang kopya.

Serological na pagsusuri, o, sa madaling salita, serological analysis, ay ang pag-aaral ng mga biological na materyales sa laboratoryo. Ang pagsusuri na ito ay nagbibigay-daan sa iyo upang maitaguyod ang pagkakaroon ng mga pathogenic bacteria sa organismo na pinag-aaralan, o sa mga produkto na sumasailalim sa isang control check.

Mga pamamaraan ng serological diagnostic

Ang pag-aaral ng sera o iba pang mga biological na bagay (gatas, apdo, laway, swab ng bituka mucosa, pati na rin ang copromaterials) ay nagbibigay ng isang medyo maaasahang ideya ng tugon ng katawan sa pagpapakilala ng isang nakakahawang ahente. Dapat pansinin na ang paggamit ng mga pamamaraan ng serological na pananaliksik ay hindi lamang ng diagnostic na halaga, ngunit nagbibigay ng maaasahang impormasyon tungkol sa antas ng proteksyon ng katawan, ang estado ng kaligtasan sa sakit ng populasyon, at ang sirkulasyon ng iba't ibang uri ng rotavirus sa rehiyon na pinag-aaralan. Ang mga resulta ng serological survey ay maaari ding magbigay ng impormasyon para sa pag-optimize ng antigenic na komposisyon ng mga prophylactic na gamot at magamit upang masuri ang immunological efficacy ng mga bakuna.

Gayunpaman, dapat tandaan na ang pangangailangan na pag-aralan ang ipinares na sera ng dugo na kinuha sa pagitan ng 1.5-2 na linggo, at ang pagkakaroon ng mga express diagnostic na pamamaraan ay nagbabawas sa diagnostic na halaga ng mga serological na reaksyon.

Samakatuwid, ang mga tradisyonal na serological test - ang complement fixation test (CFR) at ang hemagglutination inhibition test (HIT), ay kasalukuyang limitado lamang ang paggamit. Gayunpaman, ang pagiging simple ng mga pamamaraang ito, ang pagkakaroon at pagiging mura ng mga reagents ay ginagawang naaangkop pa rin ang mga ito sa pagsasanay sa laboratoryo. Ang setting ng RSK at RTGA ay isinasagawa ayon sa karaniwang tinatanggap na mga pamamaraan.

Ang isang halimbawa ng paggamit ng RSK para sa pag-aaral ng post-vaccination immunity ay ang gawain ni K. Midkhan (1989). Kapag sinusuri ang sera mula sa 116 na bata na may edad na 5 buwan, ang maaasahang seroconversion, ayon sa RSK, ay nabanggit sa 44% ng mga kaso, at ayon sa mga resulta ng neutralization test (PH) at enzyme immunoassay (ELISA) - sa 83 at 96%, ayon sa pagkakabanggit.

Pananaliksik sa Imunidad

Upang mapag-aralan ang kaligtasan sa populasyon sa tulong ng CSC, sinuri namin ang 1246 sera ng mga pasyente na may OKZ na may edad mula sa ilang buwan hanggang 80 taon at mas matanda. Ipinakita na ang geometric mean titers ng complement-fixing antibodies ay ang pinakamataas sa mga pangkat ng edad na 2-4 at mas matanda sa 60 taon, na nagpapatunay sa aming naunang data sa pinakamataas na pagkalat ng impeksyon ng rotavirus sa mga indibidwal ng mga pangkat ng edad na ito.

Pagsusuri ng Rotavirus

Ginagamit ang RTGA sa pag-aaral ng impeksyon sa rotavirus nang mas madalas kaysa sa RSK, at, bilang panuntunan, kasama ng iba pang mga pagsubok sa laboratoryo. Kaya, Andrade J. P. et al. gumamit ng RTGA, immunoblot, ELISA block upang pag-aralan ang mga antibodies sa mga istrukturang protina ng rotavirus VP2, VP4, VP6 at VP7. Ayon sa mga may-akda, sa mga bata mula 2 hanggang 4 na taong gulang, ang mga antihemagglutinating antibodies sa rotavirus ay natagpuan sa 70-80%.

Depende sa antas ng antibodies sa ilang mga protina, ayon sa RTGA, kinilala ng mga may-akda ang 4 na grupo ng mga indibidwal. Kasama sa pangkat I at II (60%) ang mga bata na may mataas na antas ng antibodies sa VP4 at VP7 at inuri bilang "immune". Kasama sa Group III (4%) ang mga taong may mababang antas ng antibodies sa VP7 at VP6, ang tinatawag na "partially immune". Ang mga bata ng pangkat IV (36%), kung saan, ayon sa RTGA, ang mga antibodies ay hindi nakita, ay itinalaga bilang "hindi immune" at bumubuo ng isang grupo ng peligro, dahil sa kanila ang pag-unlad ng malubhang impeksyon sa rotavirus ay posible. Dapat pansinin na sa pagmamasid na ito, ang mga tagapagpahiwatig ng sensitivity ng RTGA at ang bloke ng ELISA ay medyo maihahambing.

Ang RTGA ay paulit-ulit na ginamit upang pag-aralan ang istrukturang protina na VP4. Ipinakita ng mga pag-aaral na ang aktibidad ng hemagglutination nito ay partikular na pinipigilan ng antisera, kaya kinukumpirma na ang VP4 ay ang hemagglutinin ng mga rotavirus. Ang katulad na datos ay nai-publish kanina ni M. Ezekiel (1995).

Kaya, ang ipinakita na mga gawa ay nagpapakita na ang RSK at RTGA ay ginagamit pa rin sa pag-aaral ng impeksyon sa rotavirus, gayunpaman, ang mga pamamaraang ito ay pantulong na kalikasan at dapat na doblehin ng iba pang mga pagsubok.

Mga pagsubok sa neutralisasyon

Ang reaksyon ng neutralisasyon ay batay sa kakayahan ng immune sera ng tao o hayop na i-neutralize ang pagpaparami ng virus at sa gayon ay maiwasan ang mga manifestations na nauugnay sa hindi pangkaraniwang bagay na ito. Depende sa biological na modelo, ang mga pagpapakita na ito ay maaaring: ang pag-unlad ng isang sakit na may isang tiyak na klinika, pagpaparami at paghihiwalay ng virus, ang paggawa ng mga tiyak na antibodies, pati na rin ang hitsura ng isang cytopathic na epekto o ang pagbuo ng mga blebs kapag gumagamit. kultura ng cell.

Ang mga macrobiological na modelo ay kasalukuyang ginagamit pangunahin sa beterinaryo na gamot, ang pagtuklas ng mga virus sa mga tao sa karamihan ng mga kaso ay isinasagawa sa kultura ng cell, parehong pangunahin at transfused. Ang mga pamamaraan ng PH ay nahahati sa dalawang pangkat ayon sa scheme ng pangunahing setting. Sa isang grupo ng mga pamamaraan, ang undiluted serum ay pinagsama sa mga serial dilution ng virus, sa kabilang banda, ang serum dilutions ay nasubok na may pare-parehong dosis ng virus. Upang mag-set up ng reaksyon ng neutralisasyon, mas gusto ang pathogen na nagdudulot ng malinaw na cytopathic effect o masinsinang ginawa sa isang biological na modelo.

Gayunpaman, ang mga rotavirus, sa kasamaang-palad, ay may banayad na cytopathic na epekto, na kung saan ay nakakumbinsi na ipinakita ng mga mananaliksik na pinamumunuan ni B. Weber (1992). Ang isang pag-aaral ng 121 na mga sample ng dumi mula sa mga batang may OKI gamit ang klasikal na paraan ng paghihiwalay ng virus sa mga cell ng MA-104 sa ilalim ng kontrol ng CPP ay nagsiwalat lamang ng 4 na positibong kaso (3.3%), habang ang paggamit ng mga modernong pamamaraan para sa pag-detect ng mga rotavirus (ELISA, PCR). , EF sa PAAG) ay pinahintulutan na itaas ang figure na ito sa 54.4%. Samakatuwid, upang mapataas ang sensitivity ng PH, ang mga karagdagang pamamaraan ng pamamaraan ay kinakailangan upang makatulong na mailarawan ang pagbawas ng virus, na ginagamit bilang: isang radioactive o immunofluorescent label, pagbuo ng plaka, immunoperoxidase staining, atbp. Dapat tandaan na ang mismong prinsipyo Ang pagtukoy ng antas ng mga antibodies sa pag-neutralize ng virus ay magkapareho sa klasikal na pamamaraan ng PH, na naiiba mula dito lamang sa paraan ng paglutas, iyon ay, sa visualization ng aktibidad ng pag-neutralize ng virus ng suwero. Sa kasong ito, ang aktibidad ng suwero ay tinutukoy ng kakayahang sugpuin ang mga pagpapakita ng mga nakakahawang katangian ng virus.

Sa kasalukuyan, ang karamihan sa mga pag-aaral ay gumagamit ng dalawang paraan upang sukatin ang dami ng mga antibodies na nagne-neutralize ng virus sa rotavirus. Ang isa sa mga ito ay batay sa pagbibilang ng bilang ng mga indibidwal na cell na nahawaan ng virus (paraan ng Plaq) na partikular na nagbubuklod sa mga fluorescent-conjugated antibodies. Sa isa pang pagsubok, ang antas ng neutralisasyon ng virus ay hinuhusgahan ng pagbaba sa produksyon ng viral antigen ng enzyme immunoassay. Ang isang paghahambing na pag-aaral ng parehong mga pamamaraan ay nagpakita ng isang linear na relasyon sa pagitan ng mga indeks ng ELISA at ang bilang ng mga yunit na bumubuo ng plaka para sa bawat prototype na strain ng rotavirus serotype: Wa, DS-1, P, VA-70. Ang data na nakuha ay nagpapadali sa pagtukoy ng serum dilution na nagbibigay ng neutralisasyon ng 60% ng nakakahawang virus (neutralizing antibody titer). Ito ay lumabas na ang mga titer ng antibody kapag ang mga materyales sa pagsubok sa pamamagitan ng parehong mga pamamaraan ay pareho at ang parehong mga pagsubok ay hindi naiiba sa muling paggawa ng mga resulta. Ang ilang bentahe ng paraan gamit ang mga antibodies na may label na fluorescein, ayon sa mga may-akda, ay nakasalalay sa higit na objectivity ng mga resulta (awtomatikong pagpaparehistro) at mas kaunting laboriousness.

Upang sukatin ang mga titer ng virus-neutralizing antibodies, ang binagong PH ay ginagamit din sa pamamagitan ng pagharang sa ELISA na may mga monoclonal antibodies.

• pag-aaral ng intensity ng paggawa ng mga virus-neutralizing antibodies (VNA) sa panahon ng natural na impeksyon at pagbabakuna;
• ang pagbuo ng VNA sa iba't ibang istrukturang protina ng mga rotavirus;
• sinusuri ang papel ng VNA blood sera at secretory antibodies ng laway at bituka mucosa sa pagprotekta laban sa natural na impeksyon (Ward R. et al., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

Sa konklusyon, dapat itong bigyang-diin na ang reaksyon ng neutralisasyon sa iba't ibang mga pagbabago nito ay malawak na ginagamit kapwa sa mga eksperimentong at klinikal na pag-aaral at, pagkakaroon ng mataas na sensitivity at pagtitiyak, nagsisilbing pamantayan para sa lahat ng iba pang mga pamamaraan ng serological.

Pagsusuri ng ulan

Ang mga pagsusuri sa pag-ulan ay batay sa pakikipag-ugnayan ng serum sa mga viral antigen gamit ang mga prosesong osmotic o sa ilalim ng impluwensya ng isang electric field sa isang medium ng gel o iba pang uri ng carrier. Ang isa sa mga pamamaraang ito ay ang reaksyon ng counter immunoelectrophoresis (VIEF). Sinuri ng mga may-akda ang sera ng dugo ng malusog at may sakit na mga matatanda at mga bata na may rotavirus na pagtatae, pati na rin ang mga tiyak na paghahanda ng immunoglobulin para sa pagkakaroon ng mga antibodies sa rotavirus ng tao sa pamamagitan ng VIEF na pamamaraan sa 7% agarose kasama ang pagdaragdag ng 4% polyethylene glycol. Lumalabas na ang mga antibodies sa RV ay kumalat nang malawak at natagpuan sa mga may sakit na matatanda at bata sa 90.2-87.7%, ayon sa pagkakabanggit, pati na rin sa 78.4% ng mga malulusog na bata sa ilalim ng edad na 1 taon. Lahat ng 32 immunoglobulin series ay naglalaman ng mga antibodies sa RV sa titer na 1:4-1:128. Ayon sa mga may-akda, ang pamamaraan ay angkop para sa pag-aaral ng kaligtasan sa populasyon.

radioimmunoprecipitation

Ang isa pang pamamaraan ng pag-ulan ay radioimmunoprecipitation. Ginamit ng mga may-akda ang pamamaraang ito upang pag-aralan ang immune response sa structural at non-structural proteins sa pangunahing impeksyon ng rotavirus at ipinakita na ang immune response ay mas malinaw sa VP4 kaysa sa VP7.

Kapag pinag-aaralan ang serum at secretory immunological na tugon sa paggamit ng tetravalent reassortant vaccine sa mga bagong silang Para dito, ginamit ang isang radioimmunoassay technique kasama ng ELISA at PH. Ipinakita na ang immune response sa suwero ay nakasalalay sa dosis ng iniksyon na antigen; para sa pagtuklas ng mga antibodies sa laway, ipinaliwanag ng mga may-akda ang kanilang hitsura sa pagkonsumo ng gatas ng ina.

Ang reaksyon ng radioimmunoprecipitation ay ginagamit din sa mahusay na gawaing pananaliksik. Kaya, ginamit ni J. Tosser ang pamamaraang ito upang pag-aralan ang topology ng protina ng VP6 sa istruktura ng genome at iminungkahi na ang VP 6 ay kasangkot sa pagbuo ng mga panloob na channel ng capsid.

Ang ibang mga mananaliksik noong 1994 ay gumamit din ng paraan ng radioimmunoprecipitation upang pag-aralan ang mga pagbabago sa immunological sa impeksyon ng rotavirus. Ipinakita ng mga may-akda na sa talamak na panahon, higit sa lahat ang IgA hanggang VP2 at VP6 ay nakarehistro, habang sa panahon ng convalescence, ang intensity ng paggawa ng secretory antibodies (IgA) hindi lamang sa VP2, kundi pati na rin sa iba pang istruktura at hindi istruktura na mga protina ay nabawasan. . Nang maglaon, nakuha ang mga katulad na data gamit ang paraan ng radioimmunoprecipitation. Ipinakita ng mga may-akda na, bilang karagdagan sa VP4 at VP7, VP2, VP6, at NSP2 ay kasangkot din sa proseso ng immunological.

Kaya, ang immunoprecipitation ay ginamit na diagnostic upang pag-aralan ang immune response sa natural na impeksyon ng rotavirus.

Sa mga nagdaang taon, ang immunoprecipitation ay pinalitan ng paraan ng radioimmunoprecipitation, na ginagamit upang masuri ang post-vaccination at post-infection immunity sa impeksyon sa RV at para sa mahusay na pag-unlad ng pananaliksik.

mga pamamaraan ng hybridization

Ang paraan ng immunoblot ay malawakang ginagamit upang matukoy ang mga antibodies sa mga rotavirus. Ang isang halimbawa ng paggamit ng Western-blot sa pagsusuri ng impeksyon sa rotavirus ay ang gawain ni H. Ushijima (1989), na, gamit ang immunoblotting, ay naglalarawan ng pagtitiyak ng mga antibodies sa mga protina ng istruktura ng RV sa 21 mga bata na may OKZ, pati na rin ang antas ng IgA at IgG na mga coproantibodies sa mga protinang ito.sa mga bata na hindi nahawahan. Ang mga may-akda ay nag-hypothesize na ang immunoblotting ay maaaring gawing posible upang maitaguyod ang diagnosis ng sakit sa isang solong sample ng mga coproantibodies nang hindi sinusuri ang ipinares na sera ng dugo. Ang posibilidad ng paggamit ng Western-blot upang matukoy ang antas ng mga antibodies sa VP1, VP2, VP4, VP6 at VP7 ay ipinakita ni Pavlov I. et al. (1991). Sinuri ng mga may-akda ang sera ng dugo ng mga tao at hayop para sa pagkakaroon ng mga antibodies sa rotavirus strains SA-11, DS-1, Wan Ito at napagpasyahan na ang Western blot ay maaaring matagumpay na magamit upang masuri ang kaligtasan sa sakit sa klinikal na kasanayan.

Ito ay pinaniniwalaan na ang immunoblot ay maaaring gamitin upang kumpirmahin ang diagnosis ng rotavirus infection nang hindi gumagamit ng ipinares na sera para sa isang sample ng coproantibodies.

Kasama ng RTHA at ELISA, ginamit ang immunoblot upang pag-aralan ang herd immunity. Ang isang grupo ng mga indibidwal na hindi immune sa VP2, VP4, VP6 at VP7 ay natagpuan, na kumakatawan sa isang panganib na grupo, pangunahing nangangailangan ng proteksyon sa pamamagitan ng aktibo at passive na pagbabakuna (Andrade J. P. et al., 1996).

Ang paggamit ng immunoblot sa pag-aaral ng mga pagbabago sa serological sa proseso ng natural na impeksyon sa RV ay nabanggit din ni Begue R. et al. (1998). Kinumpirma ng mga may-akda na ang mga antibodies sa VP2 at VP6 ay kadalasang kasangkot sa immune response sa impeksiyon, at ang mga antibodies sa VP7 at VP4 ay mas madalas na nasasangkot.

Pagsusuri ng immunofluorescence

Ang isang hindi direktang immunofluorescent na paraan gamit ang fluorochrome-labeled anti-species sera ay ginagamit upang titrate ang test sera sa mga cell na nahawaan ng mga rotavirus. Ang reaksyon ay batay sa partikular na pakikipag-ugnayan ng mga may label na antibodies at isang homologous na antigen, habang ang antigen-antibody complex ay madaling matukoy gamit ang isang fluorescent microscope.

Gamit ang pamamaraang ito, ang mga may-akda ay nagsagawa ng isang serological survey ng dalawang grupo ng mga South American Indian at natagpuan ang isang mataas na porsyento ng mga seropositive na indibidwal sa parehong grupo: 67.8 at 77.4% ng ELISA at 45.5 at 56.7% ng IFM, ayon sa pagkakabanggit.

Sa isa pang pag-aaral sa pagpapasiya ng antas ng mga antibodies sa RV group C sa pusod na dugo gamit ang IFM, ipinakita na 30% ng mga kababaihan ng edad ng panganganak ay nakita na may mga antibodies na ito, na nagpapahiwatig ng nakaraang impeksiyon.

Ang ELISA ay kasalukuyang ginagamit, kasama ang PH, sa serological diagnosis ng impeksyon sa rotavirus nang napakalawak. Ang pamamaraang ito, batay sa paggamit ng mga antibodies na may label na enzyme o antigens, ay pinakaangkop at promising para sa serological diagnosis ng impeksyon sa rotavirus dahil sa kadalian ng pagpapatupad at ekonomiya. Ginagawang posible ng pamamaraan na magsagawa ng mass seroepidemic survey ng populasyon, suriin ang immunological at epidemiological efficacy ng mga bakuna, pag-aralan ang proteksiyon na papel ng mga antibodies ng iba't ibang klase sa iba't ibang biological fluid ng katawan ng tao, at magsagawa din ng serological diagnosis ng impeksyon sa rotavirus. .

Maraming mga pag-aaral gamit ang ELISA ang isinagawa ni R. Azeredo (1989), na nagpakita na ang bilang ng mga pasyente na may OKZ ng itinatag na rotavirus etiology ay makabuluhang mas mababa kaysa sa antas ng kanilang impeksyon ayon sa mga resulta ng isang serological na pagsusuri. Nalaman ng mga datos na ito na maraming mga klinikal na kaso ng impeksyon sa rotavirus ay hindi nasuri sa pamamagitan ng pagtuklas ng RV sa mga dumi. Ang mga karagdagang pag-aaral sa paglaganap ng impeksyon sa rotavirus ay nakumpirma ang palagay na ito. Kapag nagsasagawa ng mga seroepidemiological survey, natagpuan na 50-70% ng populasyon ay may mataas na antas ng antibodies, na nagpapahiwatig ng malawakang sirkulasyon ng RV sa populasyon ng tao.

Ang mas malaking pagkakataon ay binuksan ng ELISA sa pagtukoy ng dinamika ng antas ng mga antibodies na kabilang sa iba't ibang klase ng mga immunoglobulin. Kaya, ayon sa mga may-akda ng pamamaraan noong 1989, inaangkin nila na sa panahon ng proseso ng pagbabakuna, isang makabuluhang pagtaas sa mga antibodies sa RV sa dugo ay naobserbahan sa 83-96%. Ang mga antirotavirus antibodies ng mga klase ng IgA at IgG ay pantay na natukoy ng ELISA at PH sa pamamagitan ng pagbawas ng plasma - 67.6 at 70.0%, ayon sa pagkakabanggit. Ang seroconversion ng IgM class antibodies ay nakita sa 53 at 44% ng mga bata ng ELISA at RSC, ayon sa pagkakabanggit. Batay sa mga resulta ng pagsusuri ng intensity ng paggawa ng mga antibodies ng iba't ibang klase, napagpasyahan ng mga may-akda na ang pinaka-epektibo, simple, at pinakamabilis na paraan para sa pag-detect ng mga seroconversion pagkatapos ng pagbabakuna ay ang paraan ng pag-detect ng IgA antibodies gamit ang ELISA.

Ang konklusyon na ito ay nakumpirma rin sa gawain ni R. Bishop (1996), na nagpahiwatig na, batay sa mga resulta ng isang survey ng 68 na pares ng ina-anak na nasuri na may impeksyon sa RV, ipinakita na ang pagtuklas ng IgA antibodies gamit ang ELISA sa Ang mga materyales sa dumi ay ang pinaka-sensitive na marker. parehong clinically expressed at asymptomatic infection. Ang mga katulad na resulta kapag sinusuri ang mga bata na may malubhang RV diarrhea ay nakuha ni J. Kolomina noong 1998.

Gayunpaman, upang pag-aralan ang intensity ng seroconversions, kinakailangan na pag-aralan ang ipinares na sera, na makabuluhang nagpapahaba sa proseso ng diagnostic. Kasabay nito, kilalang-kilala na ang hitsura ng mga antibodies ng klase ng IgM ay katibayan ng pagsisimula ng nakakahawang proseso. Ayon sa aming data, na nakuha sa pagsusuri ng mga pasyente na may impeksyon sa rotavirus ng ELISA at RSK, lumabas na, ayon sa mga resulta ng ELISA, ang lahat ng mga nasuri na tao ay naglalaman ng IgM antibodies sa RV sa kanilang dugo, habang ayon sa RSK, tanging 77% (R

Sa mga nagdaang taon, sa pagsasakatuparan ng posibilidad ng pagtukoy ng mga antibodies na partikular sa gene at serotype, ang ELISA ay naging isang tunay na unibersal na paraan para sa pag-aaral ng impeksyon sa rotavirus, na ginagamit:

• kapag pinag-aaralan ang paggawa ng mga antibodies ng mga klase na IgA, M, G sa mga indibidwal na istruktura at hindi istruktura na mga protina ng RV;
• sa pagtatasa ng immunological efficacy ng iba't ibang uri ng mga bakuna: attenuated, cold-adapted, DNA-based, reassortant;
• kapag pinag-aaralan ang paggawa ng mga antibodies sa iba't ibang biological na likido ng katawan sa ilalim ng mga kondisyon ng natural na impeksiyon at sa panahon ng pagbabakuna.

Kaya, tulad ng mga sumusunod mula sa ipinakita na data, ang mga immunological na aspeto ng impeksyon ng rotavirus ay pinag-aralan gamit ang isang malawak na hanay ng mga pamamaraan ng laboratoryo. Bilang isang resulta, ang pagpili ng pinakamainam na paraan ng pananaliksik, na isinasaalang-alang ang paglutas nito, pang-ekonomiya at mga gastos sa oras, ay medyo kumplikado at nakasalalay sa mga gawain na kinakaharap ng mga mananaliksik, pati na rin ang kagamitan ng laboratoryo. Gayunpaman, mula sa iba't ibang mga pamamaraan, sa aming opinyon, dalawa ang dapat itangi - ang reaksyon ng neutralisasyon sa cell culture at enzyme immunoassay - na nagbibigay ng pag-aaral ng mga antibodies sa iba't ibang klase ng immunoglobulins. Ang posibilidad ng express diagnostics ng impeksyon ng rotavirus ay tumutukoy sa partikular na pangako ng mga pamamaraang ito para magamit sa malawak na pagsasanay.

SEROLOHIKAL NA PAG-AARAL(lat. serum serum + Greek logos doctrine) - mga pamamaraan ng immunology na nag-aaral ng mga partikular na katangian ng dugo ng tao o hayop upang makita ang mga antigen o antibodies gamit ang mga serological na reaksyon.

panimula ni S. at. ilagay sa pagtatapos ng huling siglo, pagkatapos na natagpuan na ang koneksyon ng isang antigen na may isang antibody (tingnan ang Antigen - reaksyon ng antibody) ay sinamahan ng isang bilang ng mga phenomena na magagamit sa visual na pagmamasid - agglutination (tingnan), pag-ulan (tingnan) o lysis. May posibilidad ng tiyak na pagkilala sa mga antigen (tingnan) o antibodies (tingnan) kung kilala ang isa sa mga sangkap na ito.

Noong 1897, iniulat ni F. Vidal na ang serum ng dugo ng mga pasyenteng may typhoid fever ay pumipili ng pagsasama-sama ng typhoid bacteria at samakatuwid ang reaksyong ito (tingnan ang Vidal reaction) ay maaaring ilapat sa lab. diagnosis ng typhoid fever. Sa parehong taon, ipinakita na ang culture filtrates ng plague, typhoid at cholera bacteria, kapag pinagsama sa kaukulang immune sera, ay bumubuo ng mga natuklap o namuo.

Ang reaksyon ng pag-ulan ay napatunayang angkop para sa pagtuklas ng anumang mga antigen ng protina. Noong 1900-1901. Nalaman ni K. Landsteiner na sa mga erythrocytes ng tao mayroong dalawang magkaibang antigens (A at B), at sa sera ng dugo dalawang agglutinin (a at P), na nag-ambag sa paggamit ng reaksyon ng hemagglutination upang matukoy ang mga grupo ng dugo (tingnan).

Ang agglutination reaction para sa pagtukoy ng uri ng dugo at Rh factor ay ginagamit sa obstetric practice, na may mga pagsasalin ng dugo at tissue transplantation. Ang mga antibodies laban sa Rh factor (tingnan) ay hindi kumpletong mga antibodies, hindi sila may kakayahang direktang reaksyon sa Rh-positive erythrocytes, samakatuwid, upang makita ang mga ito, gamitin ang reaksyon ng Coombs (tingnan ang reaksyon ng Coombs), batay sa pagtuklas ng mga hindi kumpletong antibodies gamit ang antiglobulin sera. Sa mga erythrocytes na alam ang specificity, idinaragdag ang test serum, na sinusundan ng antiglobulin serum laban sa IgG (indirect Coombs reaction). Ang mga fab-fragment ng hindi kumpletong antibodies ng pinag-aralan na serum ng dugo ay nakakabit sa mga erythrocytes, at ang mga antibodies laban sa IgG ay nakakabit sa mga libreng Fc-fragment ng mga antibodies na ito, at nangyayari ang erythrocyte agglutination. Para sa diagnosis ng hemolytic anemia, ang direktang reaksyon ng Coombs ay ginagamit. Sa katawan ng mga naturang pasyente, ang mga pulang selula ng dugo ay pinagsama sa mga antibodies na umiikot sa dugo laban sa Rh factor. Upang makilala ang mga ito, ang mga antibodies laban sa IgG ay idinagdag sa mga erythrocytes na kinuha mula sa pasyente. Ang hitsura ng erythrocyte agglutination ay nagpapatunay sa diagnosis ng sakit.

Ang hemagglutination inhibition reaction - RTGA (tingnan ang Hemagglutination) - ay batay sa phenomenon ng pag-iwas (inhibition) ng hemagglutination ng erythrocytes ng mga virus ng immune serum. Ang phenomenon ng isang virus hemagglutination ay hindi serol. reaksyon at nangyayari bilang isang resulta ng koneksyon ng virus sa mga erythrocyte receptor, gayunpaman, ang HTA ay isang serological test na ginagamit upang makita at mag-titrate ng mga antiviral antibodies. Ang RTGA ay ang pangunahing paraan ng serodiagnosis ng trangkaso, tigdas, rubella, beke, tick-borne encephalitis at iba pang mga impeksyon sa viral, ang mga sanhi ng ahente na may mga katangian ng hemagglutinating.

Ang reaksyon ng passive, o indirect, hemagglutinations, Gumagamit ito ng mga erythrocytes o neutral na sintetikong kemikal (hal., latex particles), sa ibabaw kung saan ang mga antigens (bacterial, viral, tissue) o antibodies ay na-sorbed (tingnan ang Boyden reaction). Ang kanilang aglutinasyon ay nangyayari kapag ang naaangkop na sera o antigens ay idinagdag. Ang mga RBC na sensitized na may mga antigen ay tinatawag na antigenic erythrocyte diagnosticum at ginagamit upang makita at mag-titrate ng mga antibodies. Ang mga erythrocyte na na-sensitize ng mga antibodies ay tinatawag na immunoglobulin erythrocyte diagnosticums (tingnan) at ginagamit upang makita ang mga antigens:

Ang passive hemagglutination reaction ay ginagamit upang masuri ang mga sakit na dulot ng bacteria (typhoid at paratyphoid, dysentery, brucellosis, plague, cholera, atbp.), protozoa (malaria) at mga virus (influenza, adenovirus infections, tick-borne encephalitis, Crimean hemorrhagic fever, atbp.). Ang reaksyon ng passive hemagglutination sa sensitivity ay hindi mas mababa sa paraan ng paghihiwalay ng virus sa mga sakit na arenoviral (tingnan), lalo na sa lymphocytic choriomeningitis. Ang viral antigen ng lymphocytic choriomeningitis ay nakita sa mga carrier ng virus (house mice) sa isang passive hemagglutination reaction na may mga pagsususpinde ng mga na-extract na organo na natunaw ng libu-libong beses. Sa salmonellosis, ang bakterya ay napansin sa reaksyon ng passive hemagglutination sa isang konsentrasyon ng hanggang sa ilang daang microbial na katawan sa 1 g ng mga feces, ang dysentery bacteria sa mga produktong pagkain ay napansin kapag ang nilalaman ng 1 g ng materyal ay hindi bababa sa 500 microbial na katawan.

Ang passive hemagglutination reaction ay ginagamit sa pagsusuri at pag-iwas sa viral hepatitis B. Sa Unyong Sobyet, para makita ang HBs antigen (tingnan ang Australian antigen) sa dugo ng mga pasyenteng may talamak na hepatitis B, isang diagnosticum ang ginawa, na chicken erythrocytes. sensitized na may kambing immunoglobulin laban sa HBs antigen. Ang isang patak ng diagnosticum ay pinagsama sa isang pantay na dami ng serum ng dugo ng mga nasuri na tao, at kung ang HBs antigen ay naroroon sa loob nito, nangyayari ang agglutination. Ang reaksyon ay may kakayahang kumuha ng hanggang 1.5 ng/ml ng HBs antigen. Upang makita ang mga antibodies ng HBs, ang mga erythrocytes na may HBs antigen na naka-adsorbed sa kanila, na nakahiwalay sa dugo ng mga pasyente, ay ginagamit. Ang reaksyon ng passive hemagglutination ay ginagamit din upang makita ang hypersensitivity ng pasyente sa mga gamot at hormone, halimbawa, penicillin o insulin. Sa kasong ito, ang mga erythrocytes ng 0 na pangkat ng dugo ng isang tao ay na-sensitize sa isang panggamot na sangkap at pagkatapos ay ginagamit upang makita ang mga agglutinin dito sa serum ng dugo ng pasyente.

Ang reaksyon ng passive hemagglutination ay ginagamit upang makita ang gonadotropin sa ihi upang magtatag ng pagbubuntis (tingnan ang Chorionic gonadotropin). Upang gawin ito, ang karaniwang serum para sa hormon na ito ay pinatuburan ng ihi na pinag-aaralan. Sa kasunod na pagdaragdag ng mga erythrocytes na may hormone na na-adsorbed sa kanila, hindi nangyayari ang agglutination (positibong sagot), dahil ang hormone na nakapaloob sa ihi ay neutralisahin ang agglutinating antibodies.

Mga reaksyon batay sa kababalaghan ng pag-ulan

Ginagamit ang mga ito upang makita ang iba't ibang uri ng antigens at antibodies. Ang pinakasimpleng halimbawa ng isang qualitative na reaksyon ay ang pagbuo ng isang opaque precipitation band sa hangganan ng antigen deposition sa isang antibody sa isang test tube. Ang iba't ibang uri ng reaksyon ng pag-ulan sa semi-liquid agar o agarose gels ay malawakang ginagamit (Ouchterlon double immunodiffusion method, radial immunodiffusion method, immunoelectrophoresis), to-rye ay parehong qualitative at quantitative (tingnan ang Immunodiffusion, Immunoelectrophoresis).

Upang mag-set up ng double immunodiffusion, ang isang layer ng natunaw na gel ay ibinuhos sa isang glass plate at, pagkatapos ng hardening, ang mga butas na may diameter na 1.5-3 mm ay pinutol. Ang mga antigen ng pagsubok ay inilalagay sa mga balon na nakaayos sa isang bilog, at ang immune serum ng kilalang pagtitiyak ay inilalagay sa gitnang balon. Nagkakalat patungo sa isa't isa, ang homologous na sera at mga antigen ay bumubuo ng isang namuo. Sa radial immunodiffusion (ayon sa paraan ng Mancini), ang immune serum ay ipinakilala sa agar. Ang antigen na inilagay sa mga balon ay kumakalat sa pamamagitan ng agar, at bilang resulta ng pag-ulan na may immune serum, ang mga opaque na singsing ay nabuo sa paligid ng mga balon, ang panlabas na diameter nito ay proporsyonal sa konsentrasyon ng antigen. Ang isang pagbabago sa reaksyong ito ay ginagamit sa pagsusuri ng trangkaso para sa pagkilala sa mga antibodies ng IgM at IgG (tingnan ang Immunoglobulins). Ang antigen ng trangkaso ay ipinapasok sa agar, at serum ng dugo sa mga balon. Pagkatapos ang mga plato ay ginagamot ng immune sera laban sa IgM o IgG antibodies, na tumutulong upang matukoy ang reaksyon ng kaukulang antibodies na may antigens. Ang pamamaraan ay nagbibigay-daan sa iyo upang sabay na matukoy ang mga titer ng mga antibodies at ang kanilang pag-aari sa isang tiyak na klase ng mga immunoglobulin.

Ang isang uri ng immunoelectrophoresis ay radioimmunophoresis. Sa kasong ito, pagkatapos ng electrophoretic separation ng antigens, ang groove cut parallel sa paggalaw ng mga antigens sa gel ay unang punan ng immune serum na may label na radioactive iodine laban sa antigens na tutukuyin, at pagkatapos ay ang immune serum laban sa IgG antibodies, na nag-uudyok sa nabuong mga complex ng antibody na may antigen. Ang lahat ng mga hindi nakatali na reagents ay nahuhugasan, at ang antigen-antibody complex ay nakita ng autoradiography (tingnan).

Makadagdag sa mga reaksyon. Ang mga reaksyon na may partisipasyon ng isang complement (tingnan) ay batay sa kakayahan ng isang subcomponent ng isang complement ng Cl (Clq) at pagkatapos ay iba pang bahagi ng isang complement na sumali sa mga immune complex.

Ang complement fixation reaction ay nagpapahintulot sa iyo na mag-titrate ng mga antigen o antibodies ayon sa antas ng complement fixation ng antigen-antibody complex. Ang reaksyong ito ay binubuo ng dalawang yugto: ang pakikipag-ugnayan ng antigen sa test blood serum (test system) at ang pakikipag-ugnayan ng hemolytic serum na may sheep erythrocytes (indicator system). Sa isang positibong reaksyon sa sistema ng pagsubok, nangyayari ang pag-aayos ng pandagdag, at pagkatapos ay kapag nagdaragdag ng mga erythrocyte na sensitibo sa antibody, ang hemolysis ay hindi sinusunod (tingnan ang Reaksyon ng pag-aayos ng Complement). Ang reaksyon ay malawakang ginagamit para sa serodiagnosis ng visceral syphilis (tingnan ang reaksyon ng Wasserman) at mga impeksyon sa viral (tingnan ang Virological studies).

Cytolysis. Ang mga antibodies laban sa mga istruktura ng cellular ay maaaring, na may partisipasyon ng pandagdag, na matunaw ang mga selula na nagdadala ng mga istrukturang ito. Ang RBC lysis ay madaling masuri sa antas at intensity ng paglabas ng hemoglobin. Ang lysis ng mga nuclear cell ay tinatantya sa pamamagitan ng pagbibilang ng porsyento ng mga patay na selula na hindi nabahiran ng methylene blue. Madalas ding gumamit ng radioactive chromium, to-ry na dating kemikal na nauugnay sa mga cell. Ang bilang ng mga nasirang cell ay tinutukoy ng dami ng hindi nakatali na chromium na inilabas sa panahon ng cell lysis.

Ang reaksyon ng radial hemolysis ng erythrocytes ay maaaring mangyari sa gel. Ang isang suspensyon ng mga erythrocytes ng tupa ay inilalagay sa isang agarose gel, pagdaragdag ng isang pandagdag doon; ang mga balon ay ginawa sa isang layer na nagyelo sa salamin at ang hemolytic serum ay idinagdag sa kanila. Ang isang zone ng hemolysis ay bubuo sa paligid ng mga balon bilang resulta ng radial diffusion ng mga antibodies. Ang radius ng hemolysis zone ay direktang proporsyonal sa titer ng serum. Kung ang anumang antigen ay na-adsorbed sa erythrocytes, halimbawa, glycoprotein hemagglutinin ng influenza virus, rubella o tick-borne encephalitis, kung gayon ang phenomenon ng hemolysis ng immune sera sa mga virus na ito ay maaaring kopyahin. Ang reaksyon ng radial hemolysis sa gel ay natagpuan ang aplikasyon sa diagnosis ng mga impeksyon sa viral dahil sa kadalian ng pagtatanghal ng dula, insensitivity sa serum inhibitors, at ang kakayahang mag-titrate ng serum ng dugo ayon sa diameter ng hemolysis zone nang hindi gumagamit ng mga serial dilution.

immune adhesion. Ang mga erythrocytes, platelet at iba pang mga selula ng dugo ay may mga receptor para sa ikatlong bahagi ng komplemento (C3) sa kanilang ibabaw. Kung ang isang naaangkop na immune serum at pandagdag ay idinagdag sa isang antigen (bakterya, mga virus, atbp.), pagkatapos ay isang antigen-antibody complex ay nabuo, na sakop ng C3 na bahagi ng pandagdag. Kapag hinaluan ng mga platelet, dahil sa C3 component ng complement, ang antigen-antibody complex ay titira sa mga cell at magiging sanhi ng pagsasama-sama ng mga ito (tingnan ang Immune adhesion). Ang reaksyong ito ay ginagamit upang matukoy ang mga antigen ng HLA system (tingnan ang Transplantation Immunity) at sa pag-aaral ng isang bilang ng mga impeksyon sa viral (tick-borne encephalitis, dengue fever), ang to-rye ay sinamahan ng immunopatol. mga proseso at sirkulasyon sa dugo ng mga viral antigen kasama ng mga antibodies.

Ang reaksyon ng neutralisasyon ay batay sa kakayahan ng mga antibodies na i-neutralize ang ilang partikular na function ng macromolecular o soluble antigens, halimbawa, aktibidad ng enzyme, bacterial toxins, pathogenicity ng mga virus. Sa bacteriology, ang reaksyong ito ay ginagamit upang makita ang mga antistreptolysin, antistreptokinase, at antistaphylolysin. Ang reaksyon ng neutralisasyon ng mga lason ay maaaring masuri ng biol. epekto, halimbawa, ang anti-tetanus at anti-botulinum sera ay na-titrate (tingnan ang Toxin - antitoxin reaction). Ang pinaghalong lason at antiserum na ibinibigay sa mga hayop ay pumipigil sa kanilang kamatayan. Ang iba't ibang mga variant ng reaksyon ng neutralisasyon ay ginagamit sa virology. Sa pamamagitan ng paghahalo ng mga virus sa naaangkop na antiserum at pagpapakilala ng halo na ito sa mga hayop o mga kultura ng cell, ang pathogenicity ng mga virus ay neutralisado.

Mga reaksyon gamit ang kemikal at pisikal na mga label

Ang immunofluorescence na binuo ng Koons (AN Coons) noong 1942 ay binubuo sa paggamit para sa serol. mga reaksyon ng sera na may label na fluorochrome (tingnan ang Immunofluorescence). Ang serum na may label na fluorochrome ay bumubuo ng isang antigen-antibody complex na may antigen, na magagamit para sa pagmamasid sa ilalim ng mikroskopyo sa ultraviolet rays na nagpapasigla sa fluorochrome glow. Ang direktang reaksyon ng immunofluorescence ay ginagamit upang pag-aralan ang mga cellular antigens, tuklasin ang virus sa mga nahawaang selula, at tuklasin ang bacteria at rickettsia sa mga smear. Kaya, para sa diagnosis ng rabies, ang mga kopya ng mga piraso ng utak ng mga hayop na pinaghihinalaang nagdadala ng virus ay ginagamot ng luminescent anti-rabies serum. Sa isang positibong resulta, ang mga kumpol ng maliwanag na berdeng kulay ay sinusunod sa protoplasm ng mga selula ng nerbiyos. Ang mabilis na pagsusuri ng impeksyon sa trangkaso, parainfluenza at adenovirus ay batay sa pagtuklas ng mga antigen ng virus sa mga selula ng mga imprint mula sa mucosa ng ilong.

Ang paraan ng hindi direktang immunofluorescence ay mas malawak na ginagamit, batay sa pagtuklas ng isang antigen-antibody complex gamit ang luminescent immune serum laban sa IgG antibodies at ginagamit upang makita hindi lamang ang mga antigen, kundi pati na rin ang titration ng mga antibodies. Ang pamamaraan ay natagpuan ang application sa serodiagnosis ng herpes, cytomegalips, Lassa fever. Sa laboratoryo, ang isang stock ng mga paghahanda ng mga cell na naglalaman ng antigen, halimbawa, mga virus-infected na VERO cells o acetone-fixed chicken fibroblast, ay dapat panatilihin sa -20°C. Ang pinag-aralan na serum ng dugo ay naka-layer sa mga paghahanda, ang paghahanda ay inilalagay sa isang termostat sa f 37 ° upang bumuo ng mga immune complex, at pagkatapos, pagkatapos ng paghuhugas ng mga hindi nakagapos na reagents, ang mga complex na ito ay nakita na may label na luminescent serum laban sa mga globulin ng tao. Gamit ang may label na immune sera laban sa IgM o IgG antibodies, posibleng makilala ang uri ng antibodies at matukoy ang maagang immune response sa pamamagitan ng pagkakaroon ng IgM antibodies.

Sa isang enzyme - isang immunological na paraan ilapat ang mga antibodies conjugated na may enzymes, hl. arr. malunggay peroxidase o alkaline phosphatase. Upang makita ang koneksyon ng may label na serum na may isang antigen, isang substrate ay idinagdag, na nabubulok ng isang enzyme na nakakabit sa suwero na may hitsura ng paglamlam sa dilaw-kayumanggi (peroxidase) o dilaw-berde (phosphatase) na kulay. Ginagamit din ang mga enzyme na nabubulok hindi lamang ang chromogenic, kundi pati na rin ang lumogenic substrate. Sa kasong ito, na may positibong reaksyon, lumilitaw ang isang glow. Tulad ng immunofluorescence, ang enzyme immunoassay ay ginagamit upang makita ang mga antigen sa mga cell o upang mag-titrate ng mga antibodies sa mga cell na naglalaman ng antigen.

Ang pinakasikat na uri ng paraan ng enzyme-immunological ay immunosorption. Sa isang solidong carrier, ang Crimea ay maaaring maging selulusa, polyacrylamide, dextran at iba't ibang mga plastik, adsorb ang antigen. Mas madalas, ang ibabaw ng micropanels wells ay nagsisilbing carrier. Ang test blood serum ay idinaragdag sa mga balon na may sorbed antigen, pagkatapos ay ang antiserum na may label na enzyme at substrate. Ang mga positibong resulta ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng pagbabago sa kulay ng likidong daluyan. Upang makita ang mga antigen, ang mga antibodies ay ini-adsorbed sa carrier, pagkatapos ay ang materyal na pansubok ay ipinapasok sa mga balon at isang reaksyon ay nakita na may label na enzyme na antimicrobial serum.

Ang radioimmunological method ay batay sa paggamit ng radioisotope label ng antigens o antibodies. Ito ay orihinal na binuo bilang isang tiyak na paraan para sa pagsukat ng antas ng nagpapalipat-lipat na mga hormone sa dugo. Ang sistema ng pagsubok ay isang isotope-label na hormone (antigen) at antiserum dito. Kung ang isang materyal na naglalaman ng ninanais na hormone ay idinagdag sa naturang antiserum, pagkatapos ay magbubuklod ito sa bahagi ng mga antibodies, kasama ang kasunod na pagpapakilala ng may label na titrated hormone, ang isang pinababang halaga nito ay magbubuklod sa mga antibodies kumpara sa kontrol. Ang resulta ay sinusuri sa pamamagitan ng paghahambing ng mga kurba ng nakatali at hindi nakatali na radioactive na label. Ang ganitong paraan ay tinatawag na competitive reaction. Mayroong iba pang mga pagbabago sa pamamaraang radioimmunological. Ang radioimmunological na pamamaraan ay ang pinakasensitibong paraan para sa pagtukoy ng mga antigen at antibodies na ginagamit upang matukoy ang mga hormone, gamot at antibiotic, upang masuri ang bacterial, viral, rickettsial, protozoal na sakit, upang pag-aralan ang mga protina ng dugo, tissue antigens.

Mga paghahambing na katangian at paggamit ng mga pamamaraan ng serological na pananaliksik sa medikal na kasanayan

Mga pamamaraan ni S. at. patuloy na napabuti sa direksyon ng tumaas na sensitivity at versatility ng paggamit. Sa una ay serol. ang diagnosis ay batay sa pagtuklas ng mga antibodies. Sa pagdating ng kalagitnaan ng ika-20 siglo mga reaksyon ng immunofluorescence at passive hemagglutination, na may higit na sensitivity, naging posible na makita hindi lamang ang mga antibodies, kundi pati na rin ang antigen nang direkta sa materyal mula sa mga pasyente. Ang mga pamamaraan ng enzyme-immunological at radioimmunological, sa sensitivity ng 2-3 order ng magnitude na mas malaki kaysa sa immunofluorescence at passive hemagglutination, ay lumalapit sa mga pamamaraan ng biol. pagtuklas ng bakterya at mga virus. Ang saklaw ng kanilang aplikasyon para sa pagtuklas ng parehong antigens at antibodies ay theoretically unlimited.

Serodiagnosis inf. ang sakit ay batay sa paglitaw ng mga antibodies sa isang nakahiwalay o pinaghihinalaang pathogen, hindi alintana kung ang pathogen ay nakita sa talamak na yugto ng sakit. Suriin ang mga pares ng blood sera na kinuha sa simula ng sakit at 2-3 linggo. mamaya. Ang pagtaas ng mga antibodies sa pangalawang serum ng dugo ng hindi bababa sa 4 na beses kumpara sa una ay makabuluhang diagnostic. Mahalaga rin kung anong klase ng immunoglobulins antibodies ang kinakatawan. Ang IgM antibodies ay matatagpuan sa pagtatapos ng talamak na panahon ng sakit at sa isang maagang yugto ng paggaling. Lumilitaw ang mga antibodies ng IgG sa mga huling yugto ng paggaling at umiikot sa mahabang panahon. Kung ang isang babae sa unang trimester ng pagbubuntis ay natagpuan na mayroong IgM antibodies sa rubella virus, kung gayon ito ay nagsisilbing batayan para sa pagtatapos ng pagbubuntis, dahil sa panahong ito ang fetus ay lalong sensitibo sa virus. Sa magkaibang inf. piling ginagamit ng mga sakit ang pinaka tiyak at maginhawang pamamaraan.

S. i. malawakang ginagamit sa epidemiology. Ang sistematikong pagkolekta at pagsasaliksik ng mga sample ng dugo ng iba't ibang grupo ng populasyon ay nagbibigay-daan upang maunawaan ang mga contact ng populasyon na may pinagmulan ng mga activator inf. mga sakit. Ang pag-aaral ng antas ng kolektibong kaligtasan sa sakit ay nagpapahintulot sa iyo na makilala ang mga grupong may mataas na panganib at magplano ng mga aktibidad sa pagbabakuna, pag-aralan ang heograpikal na pamamahagi ng mga impeksyon. S. i. ginawang posible ng iba't ibang pangkat ng edad ng populasyon, halimbawa, upang matukoy nang retrospektibo ang sirkulasyon ng iba't ibang variant ng influenza virus sa ilang partikular na mga yugto ng panahon.

S. i. ay may malaking kahalagahan sa pag-aaral ng mga namamana na sakit (tingnan) at mga sakit sa autoimmune, na sinamahan ng paglitaw ng mga tissue-at organ-specific antibodies na sumisira sa kaukulang target na mga cell, pati na rin sa oncology para sa pagtuklas ng mga antigens ng tumor. Kaya, ang immunodiagnosis ng kanser sa atay ay batay sa pagpapasiya ng alpha-fetoprotein at iba pang mga embryonic antigens sa serum ng dugo ng mga pasyente sa pamamagitan ng immunodiffusion at radioimmunoassay na pamamaraan.

Malaking pag-unlad ng agham sa pag-aaral ng pinong antigenic na istraktura ng cellular antigens, antigens ng bacteria at virus ay naabot salamat sa application sa serol. mga reaksyon ng monoclonal antibodies, to-rye posible na makatanggap sa hiwalay na mga determinant ng antigen.

Bibliograpiya: Mga pamamaraan ng pananaliksik sa immunology, ed. I. Lefkovits at B. Pernis, trans. mula sa English, M., 1981; Gabay sa Immunology, ed. O. E. Vyazova at Sh. X. Khodzhaev. Moscow, 1973. Mga Alituntunin para sa mga diagnostic ng klinikal na laboratoryo, ed. V. V. Menshikov. Moscow, 1982. Immunology, ed. ni J.-F. Bach, N.Y., 1978.

S. Ya. Gaidamovich.

Paraan ng serological na pananaliksik.

Mga reaksyon ng antigen-antibody

Ang mga tampok ng pakikipag-ugnayan ng isang antibody na may isang antigen ay ang batayan ng mga diagnostic na reaksyon sa mga laboratoryo.

Reaksyon sa vitro sa pagitan ng antigen at antibody binubuo:

tiyak

di-tiyak na yugto.

AT specpisikal na yugto mayroong isang mabilis na tiyak na pagbubuklod ng aktibong site ng antibody sa determinant ng antigen.

Pagkatapos ay dumating di-tiyak na yugto - mas mabagal, na nagpapakita ng sarili nakikitang pisikal na phenomena, halimbawa, ang pagbuo ng mga natuklap (agglutination phenomenon) o namuo sa anyo ng labo. Ang yugtong ito ay nangangailangan ng ilang mga kundisyon (electrolytes, pinakamainam na pH ng daluyan).

Para sa layuning ito, mag-apply mga pamamaraan ng serological (mula sa lat. suwero - suwero at mga logo - doktrina), ibig sabihin, mga pamamaraan para sa pag-aaral ng mga antibodies at antigens gamit ang mga reaksiyong antigen-antibody na tinutukoy sa serum ng dugo at iba pang mga likido, pati na rin sa mga tisyu ng katawan.

Kapag ang isang mikrobyo ay nahiwalay sa isang pasyente, ang pathogen ay nakikilala sa pamamagitan ng pag-aaral ng mga antigenic na katangian nito gamit ang immune diagnostic sera, ibig sabihin, blood sera ng mga hyperimmunized na hayop na naglalaman ng mga partikular na antibodies. Ito ang tinatawag na serologicalpagkakakilanlan mga mikroorganismo.

Mga reaksyon ng aglutinasyon

Reaksyon ng aglutinasyon- RA(mula sa lat. agglutibansa - bonding) - isang simpleng reaksyon kung saan ang mga antibodies ay nagbubuklod sa mga corpuscular antigens (bacteria, erythrocytes o iba pang mga cell, hindi matutunaw na mga particle na may mga antigen na adsorbed sa kanila, pati na rin ang mga macromolecular aggregates). Ito ay nangyayari sa pagkakaroon ng mga electrolyte, halimbawa, kapag ang isotonic sodium chloride solution ay idinagdag.

Iba-iba mga pagpipilian sa reaksyonaglutinasyon:

ipinakalat,

nagpapakilala,

hindi direkta, atbp.

Reaksyon ng aglutinasyon ipinahayag sa pamamagitan ng pagbuo ng mga natuklap o sediment (mga cell na "nakadikit" ng mga antibodies na mayroong dalawa o higit pang antigen-binding centers).

Ginagamit ang Ra para sa:

1) pagtuklas ng antibodies sakit sa serum ng dugonyh, halimbawa, may brucellosis (Wright, Heddelson reactions), typhoid fever at paratyphoid fever (Vidal reaction) at iba pang mga nakakahawang sakit;

mga kahulugan ng pathogen , nakahiwalay sa pasyente;

pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo gamit ang monoclonal antibodies laban sa erythrocyte allo-antigens.

Upang matukoy ang mga antibodies ng pasyente ilagaypinahabang reaksyon ng agglutination: idagdag sa mga dilution ng serum ng dugo ng pasyente diagnosticum(suspensyon ng mga napatay na mikrobyo) at pagkatapos ng ilang oras ng pagpapapisa ng itlog sa 37 ° C, ang pinakamataas na serum dilution (serum titer) ay nabanggit, kung saan naganap ang agglutination, ibig sabihin, nabuo ang isang precipitate.

Ang kalikasan at rate ng agglutination ay depende sa uri ng antigen at antibodies. Ang isang halimbawa ay ang mga tampok ng pakikipag-ugnayan ng diagnosticums (O- at K-antigens) na may mga tiyak na antibodies. Agglutination reaksyon sa O-diagnosticum(bacteria na pinatay ng init, pinapanatili ang isang thermostable O antigen) ay nangyayari sa anyo ng fine-grained agglutination. Ang agglutination reaction na may H-diagnosticum (bacteria na pinatay ng formalin, pinapanatili ang heat-labile flagellar H-antigen) ay magaspang na butil at nagpapatuloy nang mas mabilis.

Kung kinakailangan upang matukoy ang pathogen na nakahiwalay sa pasyente, ilagay oryentasyon reaksyon ng aglutinasyon, gamit ang diagnostic antibodies (agglutinating serum), i.e., ang serotyping ng pathogen ay isinasagawa. Ang isang tinatayang reaksyon ay isinasagawa sa isang glass slide. Sa isang patak ng diagnostic agglutinating serum sa isang pagbabanto ng 1:10 o 1:20 magdagdag ng isang purong kultura ng pathogen na nakahiwalay sa pasyente. Ang isang kontrol ay inilalagay sa malapit: sa halip na serum, isang patak ng sodium chloride solution ang inilapat. Kapag lumilitaw ang isang flocculent sediment sa isang drop na may serum at microbes, inilalagay nila pinahaba reaksyon ng aglutinasyon sa mga test tube na may pagtaas ng mga dilution ng agglutinating serum, kung saan idinagdag ang 2-3 patak ng suspensyon ng pathogen. Ang aglutination ay isinasaalang-alang ng dami ng sediment at ang antas ng paglilinaw ng likido. Ang reaksyon ay isinasaalang-alangpositibo, kung ang agglutination ay nabanggit sa isang pagbabanto na malapit sa titer ng diagnostic serum. Kasabay nito, ang mga kontrol ay isinasaalang-alang: ang serum na diluted na may isotonic sodium chloride solution ay dapat na transparent, ang isang suspensyon ng microbes sa parehong solusyon ay dapat na pantay na labo, walang sediment.

Ang iba't ibang kaugnay na bakterya ay maaaring pagsama-samahin ng parehong diagnostic agglutinating serum, na nagpapahirap sa kanilang pagkakakilanlan. Samakatuwid, magsaya adsorbed agglutinating serummga bibig, mula sa kung saan ang mga cross-reactive antibodies ay tinanggal sa pamamagitan ng adsorption ng kanilang mga nauugnay na bakterya. Sa gayong sera, nananatili ang mga antibodies na partikular lamang sa bacterium na ito. Ang pagkuha sa ganitong paraan ng monoreceptor diagnostic agglutinating sera ay iminungkahi ni A. Castellani (1902).

Reaksyon ng hindi direktang (passive) hemagglutibansa (RNGA, RPGA) batay sa ginamitpananaliksik sa erythrocyte(o latex) may adsorbiroantigens bathed sa kanilang ibabaw oantibodies, na ang pakikipag-ugnayan sa katumbas antibodies o antigens sa serum ng dugo ng mga sanhi ng mga pasyente pandikitang mga erythrocytes ay lumiliit at bumabagsak sa ilalim ng tubo o mga cell sa anyo ng scalloped sediment.

Na may negatibong reaksyon erythrocytes tumira sa anyo ng isang "button". Karaniwan, ang mga antibodies ay nakikita sa RNGA gamit ang isang antigenic erythrocyte diagnosticum, na mga erythrocytes na may mga antigens na naka-adsorbed sa kanila. Minsan ginagamit ang antibody erythrocyte diagnosticums, kung saan ang mga antibodies ay na-adsorbed. Halimbawa, ang botulinum toxin ay maaaring matukoy sa pamamagitan ng pagdaragdag ng erythrocyte antibody botulinum diagnosticum dito (ang reaksyong ito ay tinatawag na reaksyon sa likodhindi direktang hematglutination -RONGA). Ginagamit ang RNHA upang masuri ang mga nakakahawang sakit, matukoy ang gonadotropic hormone sa ihi kapag naitatag na ang pagbubuntis, upang matukoy ang hypersensitivity sa mga gamot, hormone, at sa ilang iba pang mga kaso.

Reaksyon ng coagglutination. Ang mga cell ng pathogen ay tinutukoy gamit ang staphylococci, pre-treated na may immune diagnostic serum. Protein na naglalaman ng staphylococci PERO, pagkakaroon ng isang affinity para sa Fc fragment ng immunoglobulins, nonspecifically adsorb antimicrobial antibodies, na pagkatapos ay nakikipag-ugnayan sa mga aktibong sentro na may kaukulang microbes na nakahiwalay mula sa mga pasyente. Bilang resulta ng coagglutination, ang mga natuklap ay nabuo, na binubuo ng staphylococci, diagnostic serum antibodies at ang mikrobyo na tinutukoy.

Hemagglutination inhibition reaction(RTGA) batay sa blockade pagsupil envirus tigens antibodies ng immune serum, bilang isang resulta kung saan ang mga virus ay nawalan ng kakayahang mag-aglutinate ng mga pulang selula ng dugo. Ang RTHA ay ginagamit upang masuri ang maraming mga sakit na viral, ang mga sanhi ng ahente nito (influenza, tigdas, rubella, tick-borne encephalitis, atbp.) ay maaaring pagsama-samahin ang mga erythrocytes ng iba't ibang mga hayop.

Pagsusuri ng aglutinasyon para sa pagtukoy ng mga anti-Rhesus antibodies (hindi direktang pagsubokCoombs) ginagamit sa mga pasyente na may intravascular hemolysis. Sa ilan sa mga pasyenteng ito, ang mga anti-Rhesus antibodies ay matatagpuan, na hindi kumpleto, monovalent. Partikular na nakikipag-ugnayan ang mga ito sa Rh-positive erythrocytes, ngunit hindi nagiging sanhi ng kanilang aglutinasyon. Ang pagkakaroon ng naturang hindi kumpletong antibodies ay tinutukoy sa hindi direktang reaksyon ng Coombs. Upang gawin ito, ang antiglobulin serum (antibodies laban sa mga immunoglobulin ng tao) ay idinagdag sa sistema ng mga anti-Rh antibodies + Rh-positive erythrocytes, na nagiging sanhi ng agglutination ng mga erythrocytes. Gamit ang reaksyon ng Coombs, ang mga pathological na kondisyon na nauugnay sa intravascular lysis ng mga erythrocytes ng immune na pinagmulan ay nasuri, halimbawa, hemolytic disease ng bagong panganak: ang mga erythrocytes ng isang Rh-positive na fetus ay pinagsama sa hindi kumpletong antibodies sa Rh factor na nagpapalipat-lipat sa dugo, na tumawid ang inunan mula sa isang Rh-negative na ina.