Mga reaksyon ng aglutinasyon. Mga bahagi, mekanismo, paraan ng pagtatakda, aplikasyon. Ang reaksyon ng hindi direktang hemagglutination. Reaksyon ng Coombs. Reaksyon ng coagglutination. Hemagglutination inhibition reaction. Ang reaksyon ng hindi direktang hemagglutination Ano ang mas tumpak na rnga o rpga

Ang reaksyon ng indirect o passive hemagglutination (RNHA o RPHA) ay mas sensitibo at tiyak kaysa sa agglutination reaction. Ang reaksyong ito ay ginagamit din sa dalawang paraan.

1) Upang makita ang mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente, ginagamit ang mga erythrocyte diagnosticum, kung saan ang antigen ay na-adsorbed sa ibabaw ng mga erythrocytes na ginagamot sa tannin. Kaugnay ng reaksyong ito, mas madalas na ginagamit ang terminong RPGA.

Ang test serum ay diluted sa mga balon ng mga plastic plate at idinagdag ang erythrocyte diagnosticum. Sa isang positibong reaksyon, lumilitaw ang isang manipis na pelikula sa mga dingding ng balon sa anyo ng isang "lace umbrella", na may negatibong reaksyon, isang siksik na sediment ng mga erythrocytes sa anyo ng isang "button" ay lilitaw.

2) Upang makita ang mga toxin at bacterial antigens sa test material, ginagamit ang antibody erythrocyte diagnosticums, na nakuha sa pamamagitan ng adsorption ng antibodies sa erythrocytes. Kaugnay ng reaksyong ito, mas madalas na ginagamit ang terminong RNGA. Halimbawa, sa tulong ng antibody diagnosticums, ang antigen ng plague bacillus, diphtheria exotoxin, botulinum exotoxin ay nakita.

Reaksyon ng Coombs (aptiglobulin test)

Ang reaksyon ay ginagamit upang makita ang mga hindi kumpletong antibodies, halimbawa, mga antibodies sa Rh factor. Ang test serum ay idinagdag sa Rh + erythrocytes, kung saan ang pagkakaroon ng hindi kumpletong antibodies sa Rh factor ay inaasahan. Naka-attach sa mga erythrocytes, ang mga hindi kumpletong antibodies ay hindi nagiging sanhi ng agglutination, dahil mayroon lamang silang isang aktibong sentro. Pagkatapos ay idagdag ang antiglobulin serum na naglalaman ng mga antibodies sa mga globulin ng tao. Kapag pinagsama sa hindi kumpletong antibodies, ang antiglobulin serum ay nagiging sanhi ng erythrocyte agglutination.

reaksyon ng pag-ulan

Ang kakanyahan ng reaksyon ay ang pag-ulan (precipitation) ng antigen sa ilalim ng pagkilos ng mga tiyak na antibodies. Ang pagkakaroon ng isang electrolyte ay kinakailangan upang makakuha ng isang nakikitang reaksyon. Ang antigen sa reaksyon ng precipitation ay mga molekular na dispersed substance.

Reaksyon ng pag-ulan ng singsing inilagay sa makitid na namuong mga tubo. Ang immune serum ay ibinubuhos sa test tube, at ang materyal na pansubok ay maingat na inilalagay dito. Sa pagkakaroon ng isang antigen sa loob nito, ang isang opaque ring ng precipitate ay nabuo sa hangganan ng dalawang likido.

Ang reaksyon ay ginagamit sa forensic na gamot upang matukoy ang mga species ng mga protina sa mga spot ng dugo, sa tabod, atbp.; upang matukoy ang antigen sa diagnosis ng anthrax (reaksyon ng Ascoli), meningitis at iba pang mga impeksiyon; sa sanitary at hygienic na pag-aaral - upang magtatag ng palsipikasyon ng mga produktong pagkain. Ang immune precipitating sera ay nakukuha sa pamamagitan ng pagbabakuna sa mga hayop na may naaangkop na antigen. Halimbawa, nakukuha ang serum precipitating human protein sa pamamagitan ng pagbabakuna sa isang kuneho ng protina ng tao. Ang titer ng precipitating serum ay ang pinakamataas na dilution ng antigen kung saan ito tumutugon. Serum ay karaniwang ginagamit undiluted o diluted 1:5.

Reaksyon ng pag-ulan ng agar gel isinasagawa sa maraming paraan. Ito ay isang double immunodiffusion reaction, isang radial immunodiffusion reaction, isang immunoelectrophoresis reaction.

Dobleng reaksyon ng immunodiffusion(ayon kay Ouchterlony). Ang natunaw na agar gel ay ibinubuhos sa isang Petri dish at, pagkatapos ng solidification, ang mga balon ay pinutol dito. Ang antigen ay inilalagay sa ilang mga balon, ang immune sera ay inilalagay sa iba, na nagkakalat sa agar, bumubuo ng isang namuo sa anyo ng mga puting guhitan sa tagpuan.

Radial immunodiffusion reaksyon(ayon kay Mancini). Ang immune serum ay idinagdag sa tinunaw na agar gel, ibinuhos sa isang ulam. Matapos ang agarang solidifies, ang mga balon ay pinutol dito at ang mga antigen ay inilalagay sa kanila, na, na nagkakalat sa agar, ay bumubuo ng mga annular precipitation zone sa paligid ng mga balon. Kung mas mataas ang konsentrasyon ng antigen, mas malaki ang diameter ng singsing. Ang reaksyon ay ginagamit, halimbawa, upang matukoy ang iba't ibang klase ng mga immunoglobulin sa dugo. Ang mga immunoglobulin ng mga klase na IgG, IgM, IgA ay kumikilos bilang mga antigen sa reaksyong ito, at ang mga antibodies laban sa kanila ay nakapaloob sa tiyak na monoreceptor sera.

Immunoelectrophoresis. Ang electrophoresis ng mga antigen ng protina ay isinasagawa sa agar gel. Ang precipitating serum ay ipinakilala sa uka, na tumatakbo parallel sa direksyon ng paggalaw ng mga protina. Ang mga antigen at antibodies ay nagkakalat sa agar, at nabubuo ang mga linya ng pag-ulan sa kanilang tagpuan.

Mga reaksyon ng immune lysis

Ang isang antigen (erythrocytes o bacteria), na pinagsama sa mga tiyak na antibodies, ay bumubuo ng isang immune complex, kung saan ang complement (C1) ay nakakabit, at ang complement activation ay nangyayari sa kahabaan ng classical pathway. Ang activated complement lyses red blood cells (hemolysis) o bacteria (bacteriolysis). Ang reaksyon ng bacteriolysis ay ginagamit upang makilala ang Vibrio cholerae.

reaksyon ng hemolysis. Ang antigen sa reaksyon ay mga erythrocytes, ang mga antibodies (hemolysins) ay nakapaloob sa hemolytic serum. Ang mga hemolysin ay nakakabit sa mga erythrocytes, nangyayari ang pag-activate ng pandagdag, na nagli-lyses ng mga erythrocytes. Ang isang maulap na suspensyon ng mga erythrocytes ay nagiging isang transparent na maliwanag na pulang likido - "lacquer blood". Dahil ang reaksyon ng hemolysis ay nangyayari lamang sa pagkakaroon ng pandagdag, ginagamit ito bilang isang tagapagpahiwatig para sa pagtuklas ng pandagdag.

Lokal na hemolysis reaksyon sa gel(Jerne reaction) - isang variant ng hemolysis reaction. Nagsisilbi upang matukoy ang bilang ng mga antibody-forming cells (AFC) sa spleen at lymph nodes.

Ang natunaw na agar gel ay hinaluan ng isang suspensyon ng mga spleen cell at erythrocytes, at pagkatapos na ang agar ay tumigas, ang pandagdag ay idinagdag. Sa paligid ng bawat cell na gumagawa ng mga hemolysin, isang zone ng hemolysis ang nabuo. Tinutukoy ng bilang ng naturang mga zone ang bilang ng mga cell na gumagawa ng mga hemolysin.

Reaksyon ng direktang aglutinasyon ng mga microbes (RA). Sa reaksyong ito, direktang pinagsasama-sama ng mga antibodies (agglutinin) ang mga corpuscular antigens (agglutanogens). Kadalasan ang mga ito ay kinakatawan ng isang suspensyon ng inactivated microorganisms (microbial agglutination reaction). Ayon sa likas na katangian ng nagresultang agglutinate, ang butil at patumpik na agglutination ay nakikilala. Ang granular agglutination ay nangyayari kapag ang mga mikrobyo na naglalaman ng O-antigen ay magkakadikit. Ang mga bakterya na may flagella (H-antigen) ay nagsasama-sama upang bumuo ng malalaking mga natuklap.

Upang matukoy ang uri ng mga mikroorganismo, ginagamit ang karaniwang diagnostic agglutinating sera. Ang mga ito ay nakuha sa pamamagitan ng hyperimmunization ng mga hayop sa laboratoryo na may suspensyon ng bakterya. Ang titer ng naturang serum ay ang pinakamataas na pagbabanto nito, kung saan ang isang natatanging agglutination ng kaukulang antigen ay sinusunod. Gayunpaman, dahil sa pagiging kumplikado ng antigenic na istraktura ng bakterya, ang agglutinating sera ay naglalaman ng mga antibodies hindi lamang sa mga partikular na species, kundi pati na rin sa mga antigen ng grupo at maaaring magbigay ng agglutination ng grupo sa mga nauugnay na species ng bakterya. Ang mga titer ng serum antibody sa mga antigen na tukoy sa species ay palaging mas mataas kaysa sa mga antigen na nakapangkat. Upang alisin ang mga antibodies na partikular sa grupo, ang mga mikroorganismo na naglalaman ng mga antigen ng grupo ay sunud-sunod na idinaragdag sa serum (pamamaraang Castellani). Ang pamamaraang ito ay ginagamit upang makakuha ng adsorbed sera, na naglalaman ng mga antibodies sa isang partikular na uri ng mikrobyo.

Mga pamamaraan ng reaksyon ng aglutinasyon. Ang pinakakaraniwan ay lamellar (indicative) at naka-deploy na RA.

Ang Lamellar RA ay inilalagay sa salamin. Sa reaksyong ito, ginagamit ang mga serum na may bahagyang pagbabanto o undiluted. Ito ay ginagamit bilang isang pinabilis na paraan para sa pag-detect ng mga antibodies o pagkilala sa mga microorganism. Ang isang patak ng serum ay inilapat sa baso, kung saan ang isang hindi kilalang kultura ng bakterya ay ipinakilala na may isang loop, halo-halong, at pagkatapos ng 2-3 minuto, ang hitsura ng pinong butil o patumpik na agglutination ay sinusunod. Para sa kontrol, ang isang patak ng physiological solution ay ginagamit, kung saan ang labo ay sinusunod pagkatapos ng pagpapakilala ng bakterya. Kapag gumagamit ng non-adsorbed sera, ang reaksyon sa slide ay isang guideline lamang.

Ang pinalawak na RA ay isinasagawa sa mga test tube o plate well. Sa kasong ito, ang diagnostic serum ay diluted sa isang titer at pantay na halaga ng antigen ay idinagdag. Kung ang resulta ay positibo, ang isang maluwag na namuo sa anyo ng isang "payong" ay nabuo sa ilalim ng test tube; kung ang resulta ay negatibo, isang namuo sa anyo ng isang "button" ay nabuo. Dahil ang mga titer ng mga antibodies na partikular sa grupo sa serum ay mas mababa kaysa sa titer ng mga partikular na species, ang mga reaksyon ng grupo ay sinusunod lamang sa maliliit na pagbabanto ng serum. Kung ang agglutination ay nangyayari sa titer o sa kalahati ng serum titer, ito ay partikular sa species.

Upang matukoy ang mga antibodies sa serum ng pasyente (serological diagnosis), isang karaniwang microbial diagnosticum ang ginagamit, na naglalaman ng suspensyon ng mga kilalang microbes o kanilang mga antigen. Sa kasong ito, posible ring mag-install ng isang plato at naka-deploy na RA.

Reaksyon ng direktang agglutination ng mga cell. Upang matukoy ang mga pangkat ng dugo, ginagamit ang karaniwang sera ng dugo ng donor na naglalaman ng mga kilalang anti-A o anti-B na antibodies. Ang mga reaksyon ay inilalagay sa baso o mga plato. Sa pagkakaroon ng A (2nd blood group), B (3rd blood group) o parehong antigens (4th blood group) sa erythrocytes, ang katumbas na sera agglutinate erythrocytes. Ginagamit din ang pagsusuri sa pagiging tugma ng dugo, kapag ang dugo ay bumaba mula sa isang donor at ang isang tatanggap ay pinaghalo at tinasa ang aglutinasyon.

Sa mga klinika, ang reaksyon ng agglutination ng mga leukocytes, platelet at iba pang mga cell ay ginagamit upang makita ang mga autoantibodies, pati na rin upang matukoy ang mga antigen sa mga cell na ito.

Ang batayan ng reaksyon ng hemagglutination ay ang kababalaghan ng erythrocyte agglutination, na nangyayari sa ilalim ng impluwensya ng iba't ibang mga kadahilanan. Matukoy ang pagkakaiba sa pagitan ng direkta at hindi direktang hemagglutination.
Sa direktang reaksyon ng hemagglutination, ang mga erythrocyte ay magkakadikit kapag ang ilang mga antigen, tulad ng mga virus, ay na-adsorbed sa kanila.

Ang reaksyon ng hindi direktang (passive) hemagglutination (RNHA, RPHA) ay batay sa paggamit ng mga erythrocytes (o latex) na may mga antigen o antibodies na na-adsorbed sa kanilang ibabaw, ang pakikipag-ugnayan nito sa mga kaukulang antibodies o antigens ng serum ng dugo ng mga pasyente ay nagiging sanhi ng mga erythrocytes na magkadikit at mahulog sa ilalim ng tubo o cell sa anyo ng isang scalloped sediment.

Mga bahagi. Para sa produksyon ng RNHA, maaaring gamitin ang mga erythrocytes ng tupa, kabayo, kuneho, manok, daga, tao at iba pa, na inaani para magamit sa hinaharap, ginagamot sa formalin o glutaraldehyde. Ang kapasidad ng adsorption ng mga erythrocytes ay tumataas kapag ginagamot sila ng mga solusyon ng tannin o chromium chloride.

Ang polysaccharide antigens ng microorganisms, extracts ng bacterial vaccine, antigens ng mga virus at rickettsia, pati na rin ang iba pang mga substance ay maaaring magsilbi bilang antigens sa RNGA.

Ang mga erythrocyte na na-sensitize ng AG ay tinatawag na erythrocyte diagnosticums. Para sa paghahanda ng erythrocyte diagnosticum, ang ram erythrocytes, na may mataas na aktibidad ng adsorbing, ay kadalasang ginagamit.

Aplikasyon. Ginagamit ang RNHA upang masuri ang mga nakakahawang sakit, matukoy ang gonadotropic hormone sa ihi kapag naitatag ang pagbubuntis, upang matukoy ang hypersensitivity sa mga gamot, hormone, at sa ilang iba pang mga kaso.

Sa serological na pag-aaral, ang direktang hemagglutination inhibition reaction ay ginagamit, kapag ang virus na nakahiwalay mula sa pasyente ay neutralisado sa isang tiyak na immune serum, at pagkatapos ay pinagsama sa mga pulang selula ng dugo. Ang kawalan ng hemagglutination ay nagpapahiwatig ng pagsusulatan ng virus at ang immune serum na ginamit.

Ang isang hindi direktang reaksyon ng hemagglutination (passive hemagglutination) ay naoobserbahan kapag ang mga erythrocyte na paunang ginagamot (na-sensitize) na may iba't ibang antigens ay dinagdagan ng immune serum o serum ng pasyente na may naaangkop na antibodies. Mayroong isang tiyak na pagbubuklod ng mga erythrocytes, ang kanilang passive hemagglutination.

Ang reaksyon ng indirect, o passive, hemagglutination ay higit na mataas sa sensitivity at specificity sa iba pang serological na pamamaraan, at ginagamit ito sa diagnosis ng mga impeksyon na dulot ng bacteria, rickettsia, at protozoa.

Ang paraan ng pagtatakda ng reaksyon ng hindi direktang hemagglutination ay binubuo ng ilang yugto.

· Una, ang mga erythrocyte ay hinuhugasan ng isotonic sodium chloride solution, pagkatapos, kung kinakailangan (kapag gumagamit ng mga antigen na may likas na protina), ang mga ito ay ginagamot sa isang 1: 20,000 tannin solution at sensitized sa mga natutunaw na antigens.

Pagkatapos hugasan gamit ang isang buffered isotonic sodium chloride solution, ang erythrocyte antigen ay handa nang gamitin.

· Ang pinag-aralan na sera ay diluted na may isotonic sodium chloride solution sa mga test tube o mga espesyal na plastic plate na may mga butas, pagkatapos ay isang erythrocyte diagnosticum ay idinagdag sa bawat serum dilution.

· Ang mga resulta ng hindi direktang reaksyon ng hemagglutination ay isinasaalang-alang ng likas na katangian ng erythrocyte sediment na nabuo sa ilalim ng tubo.

· Ang resulta ng reaksyon ay itinuturing na positibo, kung saan ang mga erythrocyte ay pantay na sumasakop sa buong ilalim ng test tube. Sa isang negatibong reaksyon, ang mga erythrocytes sa anyo ng isang maliit na disk o "button" ay matatagpuan sa gitna ng ilalim ng test tube.

Pagkatapos ng 2 oras ng pagpapapisa ng itlog sa 37 ° C, ang mga resulta ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng pagsusuri sa hitsura ng erythrocyte sediment (nang walang nanginginig): na may negatibong reaksyon, lumilitaw ang isang precipitate sa anyo ng isang compact disc o isang singsing sa ibaba. ng balon, na may positibong reaksyon, isang katangian ng lacy erythrocyte sediment, isang manipis na pelikula na may hindi pantay na mga gilid

Reaksyon ng coagglutination.

Ang reaksyong ito ay batay sa natatanging katangian ng Staphylococcus aureus, na mayroong protina A sa cell wall nito, upang magbigkis sa Fc fragment ng IgG at IgM.

Kasabay nito, ang mga aktibong sentro ng antibodies ay nananatiling libre at maaaring makipag-ugnayan sa mga tiyak na determinant ng antigens. Ang isang patak ng 2% na suspensyon ng staphylococci na na-sensitize na may kaukulang antibodies ay inilalapat sa isang glass slide, at isang patak ng isang suspensyon ng pinag-aralan na bakterya ay idinagdag. Kapag ang antigen ay tumutugma sa mga antibodies, pagkatapos ng 30-60 segundo, ang isang malinaw na aglutinasyon ng staphylococci na puno ng mga antibodies ay nangyayari.

Mga kinakailangan para sa immune serum na ginagamit para sa sensitization ng staphylococcus cells at pagsasagawa ng sensitization process. Upang makakuha ng isang coagglutinating reagent, ang isang suspensyon ng staphylococci ay dapat tratuhin ng immune serum laban sa nais na antigen. Ang serum ay dapat kunin mula sa isang hayop na ang IgG ay may kaugnayan sa protina A. Ang pinakamataas na kaugnayan dito ay para sa mga immunoglobulin ng tao, baboy, aso at guinea pig, mas mababa para sa asno at kuneho, at ang tupa, kabayo, daga at daga ay nakikipag-ugnayan sa IgG. napakahina nito.

Bilang karagdagan sa mahigpit na pagtitiyak sa nais na antigen, ang serum na ginamit sa RKOA ay hindi dapat maglaman ng mga antibodies sa staphylococcus aureus upang maiwasan ang agglutination ng staphylococcal reagent dahil sa tiyak na epekto ng antigen at antibodies, na sa IgG - protina A system dapat hindi kasama. Ang kontrol ay isinasagawa sa pamamagitan ng paghahalo ng isang patak ng serum at isang 10% na suspensyon ng staphylococcal reagent sa baso. Kung pagkatapos ng 3-5 minuto ang mga natuklap ng agglutinate ay hindi nabuo, kung gayon ang suwero ay itinuturing na angkop para sa reaksyon.

Kung ang magagamit na sera sa antigen agglutinate staphylococcus aureus na ito, maaari silang ma-adsorbed ng isang suspensyon ng staphylococcal cells na walang protina A (halimbawa, Wood-46 strains). Sa ganitong paraan, inaalis ang mga antibodies na tumutugon sa staphylococcus dahil sa mga fragment ng Fab.

Kaya, ang serum na ginamit upang ihanda ang coagglutinating reagent ay dapat matugunan ang mga sumusunod na kinakailangan:

• nakuha mula sa isang producer ng hayop, na ang IgG ay may kaugnayan sa protina A;
• dapat na tiyak para sa antigen ng interes;
• maging walang anti-staphylococcal antibodies.

· Paghahanda ng diagnosticum. Ang inihandang 10% staphylococcal reagent ay pinagsama sa isang pantay na dami ng immune serum sa isang dating natukoy na pinakamainam na pagbabanto sa pagtatrabaho. Ang timpla ay inalog sa loob ng 60 minuto sa 40–42°C sa isang Schutgel apparatus sa 90 vibrations kada minuto. Pagkatapos, pagkatapos ng 15 minuto, ang mga ito ay hinuhugasan ng dalawang beses gamit ang PBS, muling sinuspinde sa isang 2% na suspensyon, at pinapanatili ng sodium mertiolate (1: 10,000).

Aralin 14

Paksa: Mga hindi direktang serological na reaksyon. Mga reaksyon ng indirect hemagglutination (RNHA), complement fixation (RSK).

Antibodies

Ang mga antibodies ay mga molekula ng protina na may kakayahang tiyak na pagbubuklod sa mga antigen. Ang mga antibodies ay gamma globulin. Ang isa pang pangalan para sa mga antibodies ay immunoglobulins. Sa mga mammal, mayroong 5 klase ng mga immunoglobulin na naiiba sa kanilang istraktura at ilang mga katangian: IgG, IgM, IgA, IgE, IgD.

Ang istraktura ng immunoglobulins. Ang IgG ay may pinaka "karaniwang" istraktura. Ang molekula ay binubuo ng 4 na kadena ng protina: dalawang magaan (L) at dalawang mabigat (H), na magkakaugnay ng mga bono ng disulfide. Ang site ng isang antibody na nagbubuklod sa isang antigen ay tinatawag na aktibong site ng antibody. Ang molekula ng IgG ay may 2 aktibong sentro. Binubuo ito ng mga bahagi ng N-terminal ng mabibigat at magaan na kadena. Ang rehiyon ng mabibigat na kadena na matatagpuan malapit sa mga bono ng disulfide ay tinatawag na rehiyon ng bisagra. Sa tulong ng papain enzyme, ang molekula ng IgG sa itaas ng rehiyon ng bisagra ay nahahati sa 3 fragment: 2 sa mga ito ay naglalaman ng light chain at bahagi ng heavy chain (Fab fragments); at ang ikatlong fragment ay binubuo lamang ng bahagi ng mabibigat na tanikala (Fc fragment). Salamat sa movable hinge region, maaaring baguhin ng mga fragment ng Fab ang kanilang relatibong posisyon sa kalawakan.

Ang mga sequence ng amino acid ng magaan at mabibigat na kadena ay nahahati sa pare-pareho (pare-pareho) at variable na mga rehiyon. Ang mga variable na rehiyon ay matatagpuan sa N-terminus ng magaan at mabibigat na kadena (VL at VH). Ang mga pare-parehong rehiyon ay matatagpuan sa C-terminus ng mga kadena (CL at CH). Sa magaan at mabibigat na kadena, ang mga sequence ng amino acid ay bumubuo ng ilang mga globular na istruktura na tinatawag na mga domain.

Ang aktibong site ng isang antibody ay nabuo ng mga variable na domain ng magaan at mabibigat na kadena at ito ay isang lukab ( paratope), na may tiyak na pagsasaayos at pamamahagi ng mga singil sa kuryente sa ibabaw nito. Ang laki, hugis at pamamahagi ng mga singil sa aktibong site ay tumutukoy sa pagiging tiyak nito, iyon ay, ang kakayahang magbigkis sa isang tiyak na antigenic determinant ( epitope), na may pantulong na istraktura.

Ang mga antigenic determinants ay mga lugar na nakausli sa ibabaw ng mga molekula ng antigen. Samakatuwid, ang pakikipag-ugnayan ng epitope-paratope ay nangyayari ayon sa prinsipyong "key-lock".

Ang lakas ng koneksyon sa pagitan ng aktibong sentro ng mga antibodies at ang antigenic determinant ay nailalarawan sa pamamagitan ng konsepto ng affinity. pagkakaugnay ay isang sukatan ng affinity ng aktibong site at ang antigenic determinant.

Ang mga immunoglobulin ng klase ng IgG ay nagkakaloob ng 75% ng kabuuang halaga ng mga serum immunoglobulin. Ang isang mahalagang katangian ng IgG ay ang kanilang kakayahang tumawid sa inunan. Kaya, ang maternal antibodies ay pumapasok sa katawan ng bata at pinoprotektahan siya mula sa impeksyon sa mga unang buwan ng buhay (natural na passive immunity).

Humigit-kumulang 10% ng kabuuang pool ng mga immunoglobulin ay kabilang sa klase ng IgM. Ang molekula ng IgM ay isang pentamer, iyon ay, binubuo ito ng 5 magkaparehong molekula, na katulad ng istraktura sa molekula ng IgG, ay may 10 aktibong sentro. Ang mga subunit ay pinagsama-sama ng disulfide bond. Ang molekula ng IgM ay may karagdagang J-chain na nagbubuklod sa mga subunit. Ang mga antibodies ng klase ng IgM ay hindi dumadaan sa placental barrier.

Ang mga antibodies ng klase ng IgA ay bumubuo ng 15-20% ng kabuuang nilalaman ng mga immunoglobulin. Ang molekula ng IgA ay binubuo ng 2 magaan at 2 mabibigat na kadena, ay may 2 aktibong sentro. Sa serum ng dugo, ang IgA ay naroroon sa isang monomeric na anyo, habang sa mga pagtatago ng mga mucous membrane, ang IgA ay ipinakita sa anyo ng mga dimer at tinatawag na secretory o sIgA, mayroon silang 4 na aktibong sentro. Ang mga C-terminal ng mabibigat na kadena sa molekula ng sIgA ay magkakaugnay ng isang J-chain at isang molekula ng protina na tinatawag na bahagi ng sekreto. Pinoprotektahan ng secretory component ang sIgA mula sa cleavage ng proteolytic enzymes, na matatagpuan sa malalaking dami sa pagtatago ng mga mucous membrane. Ang pangunahing tungkulin ng sIgA ay protektahan ang mga mucous membrane mula sa impeksyon. Ang IgA ay hindi tumatawid sa placental barrier. Ang mataas na konsentrasyon ng sIgA ay matatagpuan sa gatas ng suso ng kababaihan, lalo na sa mga unang araw ng paggagatas. Pinoprotektahan nila ang gastrointestinal tract ng bagong panganak mula sa impeksyon.

Ang mga IgD ay pangunahing matatagpuan sa lamad ng B-lymphocytes. Mayroon silang istraktura na katulad ng IgG, 2 aktibong sentro. Ang biological na papel ay hindi lubos na kilala.

IgE - ang konsentrasyon ng klase ng immunoglobulins na ito sa serum ng dugo ay napakababa. Ang mga molekula ng IgE ay pangunahing naayos sa ibabaw ng mga mast cell at basophil. Sa istraktura nito, ang IgE ay katulad ng IgG, mayroon itong 2 aktibong sentro. Ipinapalagay na ang IgE ay mahalaga sa pagbuo ng anthelmintic immunity. Ang IgE ay gumaganap ng isang pangunahing papel sa pathogenesis ng ilang mga allergic na sakit (bronchial asthma, hay fever) at anaphylactic shock.

Hindi direktang reaksyon ng hemagglutination

Sa hindi direktang serological reactions, ang complex ng antigens na may antibodies ay hindi nakikita ng mata. Sa ganitong mga kaso, ang mga antigen ay na-adsorbed sa mas malaking mga particle ng carrier (erythrocytes, latex particle), na nakakakuha ng isang antigenic erythrocyte diagnosticum. Ang kasunod na pagsasama-sama ng naturang mga particle na may mga tiyak na antibodies ay nagpapahintulot sa agglutinate (namuo) na makita sa mata. Ang reaksyon ng indirect (passive) hemagglutination (RIHA) ay nakakakita ng mga serum antibodies ng dugo gamit ang isang antigenic erythrocyte diagnosticum, na mga erythrocytes na may mga antigen na naka-adsorb sa kanila.

Ang mga erythrocytes na may mga antigen na naka-adsorb sa mga ito ay nakikipag-ugnayan sa kaukulang mga antibodies sa serum ng dugo, na nagiging sanhi ng pagdikit ng mga erythrocyte at nahuhulog sa ilalim ng tubo o cell sa anyo ng isang scalloped sediment. Sa isang negatibong reaksyon, ang mga erythrocyte ay tumira sa anyo ng isang pindutan.

Ang RNHA ay inilalagay sa mga plastic na tablet o sa mga test tube na may mga dilution ng serum ng dugo, kung saan idinagdag ang isang erythrocyte diagnosticum.

Minsan ginagamit ang isang antibody erythrocyte diagnosticum - mga erythrocytes kung saan na-adsorbed ang mga antibodies. Ang reaksyong ito ay tinatawag na RONGA - ang reverse indirect hemagglutination reaction.

Mga bahagi ng RNGA:

Serum ng dugo ng pasyente (dilution 1:25);

Erythrocyte diagnosticum (erythrocytes na puno ng antigen ng pinag-aralan na pathogen);

Hugasan ang solusyon.

pagtatanghal ng RNGA. Dalawang patak ng phosphate buffer solution ay idinagdag sa pitong balon ng plato para sa immunological na pag-aaral. Dalawang patak ng serum ng dugo ng pasyente ang idinagdag sa unang balon, pagkatapos ay 2 patak ang inililipat mula sa unang balon patungo sa pangalawang balon, mula sa pangalawa hanggang sa pangatlo, atbp. 2 patak ay inalis mula sa ikaanim na balon. Sa lahat ng pitong balon (6 na eksperimental at 1 kontrol) magdagdag ng 2 patak ng erythrocyte diagnosticum. Pagkatapos ng bawat operasyon, kinakailangang banlawan ang pipette sa solusyon sa paghuhugas. Ang mga plato ay naiwan sa temperatura ng silid sa loob ng 45 minuto, pagkatapos ay isinasaalang-alang ang mga resulta.

Makadagdag sa reaksyon ng fixation

Ang complement fixation reaction ay binubuo sa katotohanan na kapag ang isang antigen ay pinagsama sa isang antibody, ang isang immune complex ay nabuo, kung saan ang complement ay nakakabit sa pamamagitan ng Fc fragment ng antibody. Kung ang antigen-antibody complex ay hindi nabuo, kung gayon ang pandagdag ay nananatiling libre. Nakikita ang libreng pandagdag sa pamamagitan ng pagdaragdag sa pinaghalong isang hemolytic system na binubuo ng ram erythrocytes at mga antibodies laban sa kanila. Ang isang positibong reaksyon ay ang kawalan ng hemolysis bilang isang resulta ng pandagdag na nagbubuklod sa antigen + antibody complex. Ang isang negatibong reaksyon ay ang pagkakaroon ng hemolysis bilang isang resulta ng pandagdag na nagbubuklod sa erythrocyte + antierythrocyte antibody complex.

Mga bahagi ng RSK:

Malusog na suwero ng dugo;

Serum ng dugo ng pasyente (diluted 1:5);

Ang antigenic component ng reaksyon ay isang inactivated pathogen;

Makadagdag sa isang pagbabanto na naaayon sa gumaganang dosis. Ang pandagdag ay nakuha mula sa serum ng dugo ng guinea pig. Ang complement titer ay ang pinakamababang dosis nito, na sa pagkakaroon ng hemolytic serum ay nagiging sanhi ng kumpletong hemolysis ng mga erythrocytes. Ang gumaganang dosis ng pandagdag na ginamit sa setting ng CSC ay 30% higit pa sa titer nito;

Hemolytic system - isang suspensyon ng ram erythrocytes na ginagamot ng rabbit antibodies sa ram erythrocytes.

Solusyon sa paghuhugas.

Setting ng RSK. Inilagay ng RSK sa dalawang test tubes - eksperimental at kontrol. Ang 0.5 ml ng blood serum ng pasyente ay idinagdag sa test tube, 0.5 ml ng blood serum ng isang malusog na donor ay idinagdag sa control tube, 0.5 ml ng pathogen lysate at 0.5 ml ng pandagdag ay idinagdag sa parehong mga tubo. Pagkatapos ng bawat operasyon, kinakailangang banlawan ang pipette sa solusyon sa paghuhugas. Ang mga tubo ay inilalagay sa isang termostat sa temperatura na 37°C sa loob ng 30 minuto. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog, 1.0 ml ng hemolytic system ay idinagdag sa parehong mga tubo ng pagsubok. Ang mga tubo ay inalog at inilagay sa isang thermostat sa 37°C sa loob ng 30 minuto. Sa isang positibong reaksyon sa test tube, mayroong isang pagkaantala sa hemolysis (walang kulay na likido at erythrocyte sediment), sa control tube - hemolysis ng mga erythrocytes.

Panitikan upang maghanda para sa aralin:

1. Borisov microbiology, virology, immunology. M., 2002.

2. Medikal na microbiology, virology at immunology. Ed. . M., 2004.

3. Pozdeev microbiology. M., GEOTAR-MEDIA, 2005.

Ito ay batay sa katotohanan na ang mga erythrocytes, kung saan ang mga antigen ay pre-adsorbed, ay nakakakuha ng kakayahang mag-agglutinate sa pagkakaroon ng homologous sera (antibodies).

Sa kasong ito, ang mga erythrocytes ay gumaganap ng papel na ginagampanan ng mga carrier na may mga tiyak na determinant, ang agglutination na nangyayari bilang isang resulta ng reaksyon ng antigen + antibody.

Ang mga erythrocyte, sa ibabaw kung saan ang mga antigen ay mahigpit na nakakabit, ay tinatawag na erythrocyte antigenic diagnosticum, o mga erythrocyte na na-sensitize ng antigen.

Ang isa pang uri ng RNHA - ang mga antibodies ay na-adsorbed sa ibabaw ng mga erythrocytes at ang kanilang kasunod na agglutination ay nangyayari sa pagkakaroon ng isang homologous antigen. Sa kasong ito, ang mga naturang erythrocyte ay tinatawag na erythrocyte antibody diagnosticum, o mga erythrocyte na na-sensitize ng mga antibodies.

Sa batayan ng dalawang pangunahing pamamaraang metodolohikal na ito, maraming pagbabago ng RNGA ang binuo at ginagamit. Kaya, ang mga maliliit na karaniwang particle ng latex ay ginagamit bilang mga carrier. Sa kasong ito, ang reaksyon ay tinatawag na latex agglutination reaction (RLA) o Staphylococcus aureus ang ginagamit - ang coagglutination reaction, atbp. Karaniwan, ang mga erythrocyte diagnosticum ay inihahanda sa mga negosyo ng biological na industriya, at ang pangunahing karanasan sa RNGA ay nakatakda na sa diagnostic laboratories.

Ang paghahanda ng erythrocyte diagnosticum ay kinabibilangan ng mga sumusunod na hakbang:

• pag-aayos ng mga erythrocytes na may formaldehyde o glutaric o acrylic aldehydes. Ang mga naprosesong erythrocytes ay nakaimbak nang mahabang panahon. Mas madalas, ang mga erythrocytes ng tupa, tao, manok, atbp ay ginagamit para sa layuning ito;
• paggamot ng mga nakapirming erythrocytes na may solusyon sa tannin. Bilang resulta, ang mga erythrocyte ay nakakuha ng pag-aari ng hindi maibabalik na adsorbing na mga protina (mga virus at antibodies) sa kanilang ibabaw;
• sensitization ng tanized erythrocytes sa pamamagitan ng mga virus o antibodies.

Dapat pansinin na ang mga pamamaraan para sa paghahanda ng mga erythrocyte diagnosticum para sa mga impeksyon sa viral ay iba.

Ang pamamaraan para sa pag-set up ng RNHA para sa pag-detect at pagtukoy ng titer ng antibody ay ang mga sumusunod:

• sa magkakasunod na 2-tiklop na dilution ng serum magdagdag ng pantay na dosis ng erythrocytes na sensitized ng antigen;
• ang timpla ay naiwan sa loob ng 2-3 oras sa temperatura ng silid o para sa 16-18 na oras sa 4 °C;
• isaalang-alang ang mga resulta. Kung ang serum ay naglalaman ng mga antibodies sa virus kung saan ang mga erythrocyte ay na-sensitize, ang hemagglutination ay sinusunod, na sinusuri sa mga krus.

Kinukuha ang serum antibody titer bilang pinakamataas na dilution ng serum na nagbibigay pa rin ng hemagglutination ng hindi bababa sa dalawang crosses.

Ang RNGA ay sinamahan ng lahat ng nauugnay na kontrol. Kadalasan inilalagay nila ang reaksyon sa pamamagitan ng micromethod.

Binibigyang-daan ng RNHA ang paglutas ng mga sumusunod na gawaing diagnostic:

• tuklasin ang mga antibodies at matukoy ang kanilang titer sa serum ng dugo gamit ang isang kilalang erythrocyte antigenic diagnosticum;
• tuklasin at kilalanin ang isang hindi kilalang virus gamit ang isang kilalang erythrocyte antibody diagnosticum.

Mga kalamangan ng RNGA: mataas na sensitivity, kadalian ng diskarte sa pagtatakda at mabilis na pagtugon. Gayunpaman, mahalagang tandaan na may mga malalaking kahirapan sa paghahanda ng mga matatag na erythrocyte diagnosticums (malaking pag-asa sa kadalisayan ng mga sangkap na ginamit, ang pangangailangan upang piliin ang mode ng pag-aayos, tanization at sensitization ng mga erythrocytes para sa bawat uri ng virus) .

Nagbibigay ang site ng impormasyon ng sanggunian para sa mga layuning pang-impormasyon lamang. Ang diagnosis at paggamot ng mga sakit ay dapat isagawa sa ilalim ng pangangasiwa ng isang espesyalista. Ang lahat ng mga gamot ay may mga kontraindiksyon. Kinakailangan ang payo ng eksperto!

Serological pagsusuri ng dugo ay isang paraan ng pagsubok sa laboratoryo ng ilang antigens o antibodies ( mga tiyak na protina) sa serum ng pasyente batay sa immune response ng katawan. Ang pamamaraang ito ay ginagamit kapag mga diagnostic mga nakakahawang sakit upang makita ang pagkakaroon ng mga antibodies sa dugo ng pasyente sa isang tiyak na uri ng virus o bakterya, pati na rin upang matukoy ang uri ng dugo.

Materyal na pinag-aaralan

Una sa lahat, para sa pagsusuri ng serological, ginagamit ang biological na materyal na nakolekta mula sa pasyente:

• suwero ng dugo
• laway
• bagay ng dumi

Sa ilang mga kaso, ang materyal na nakahiwalay sa ilang mga bagay sa kapaligiran ay sinusuri:

• ang lupa

Paraan ng pagsusuri o pag-sample ng dugo

Ang pagsusuri na ito ay hindi nangangailangan ng espesyal na paghahanda ng pasyente. Ang sampling ng dugo ay isinasagawa sa umaga sa isang walang laman na tiyan at isinasagawa sa mga silid ng paggamot ng mga institusyong medikal, ayon sa pangkalahatang tinatanggap na mga pamamaraan ng hematological. Para sa serological testing, ang blood sampling ay isinasagawa sa pamamagitan ng dalawang paraan: ang venous blood ay kinukuha mula sa cubital vein ng pasyente, at ang capillary blood ay kinuha mula sa ring finger. Ang dugo ay inilalagay sa sterile sealed test tubes.

Mga tampok ng transportasyon ng dugo at imbakan ng serum

Kaagad pagkatapos ng sampling ng dugo, dinadala ito sa isang espesyal na laboratoryo, kung saan ang serum ay inihanda sa parehong araw. Ang imbakan ng serum ay pinapayagan nang hindi hihigit sa 4-6 na araw sa isang refrigerator sa temperatura na 2-4 degrees. Kung kinakailangan ang mas mahabang imbakan, ang serum ay nagyelo. Upang maiwasan ang paglabag sa kalidad ng suwero, pinapayagan itong i-freeze nang isang beses at, nang naaayon, lasaw ito. Sa pangmatagalang imbakan, ang mga antibodies ay nawawala ang kanilang mga katangian at nagiging bahagyang hindi aktibo, ang pinaka-sensitibo sa pagyeyelo ay ang mga immunoglobulin ng klase. M. Matapos matunaw ang suwero, kinakailangan na lubusan itong ihalo hanggang sa isang homogenous na masa, na tumutulong upang maibalik ang konsentrasyon ng mga antibodies na nilalaman sa serum na ito.

Ano ang ginagamit ng serology?

Ang mga pamamaraan ng diagnostic ng serological laboratoryo ay ginagamit upang makita ang mga sakit tulad ng echinococcosis, trichinosis, toxocariasis, opisthorchiasis, cysticercosis, toxoplasmosis, amoebiasis, giardiasis, upang matukoy ang pagiging epektibo ng kurso ng paggamot at, sa wakas, upang makita ang pag-ulit ng sakit pagkatapos na ganap na gumaling ang pasyente.

Mga pangunahing pamamaraan ng serological diagnostic

Immunofluorescence reaction (RIF)

Ang reaksyong ito ay isang hindi direktang bersyon ng isang serological na pag-aaral, iyon ay, ito ay isinasagawa sa dalawang yugto. Sa unang yugto, ang kinakailangang antibody ay nakita sa nagpapalipat-lipat na antigen-antibody complex gamit ang antiglobulin, na katulad ng istraktura sa mga immune serum na protina. Ang pagkakakilanlan ng nais na antibody ay posible rin kapag nag-aaral ng isang pre-prepared antigenic na paghahanda sa ilalim ng isang fluorescent microscope, nang walang paggamit ng mga antiglobulin.

Ang immunofluorescent reaction ay isang napakatagal na proseso na nangangailangan ng maraming oras at responsibilidad mula sa isang espesyalista. Ang reaksyon ay nagsisimula sa paghahanda ng mga solusyon, pagkatapos ay ang sera at ang kanilang mga control sample ay sasailalim sa titration ( isang proseso na nagbibigay-daan sa pagtukoy ng nilalaman ng isang partikular na substansiya sa pamamagitan ng unti-unting paghahalo ng solusyon sa pagsubok na may kontroladong dami ng reagent). Ang mga dating inihanda na dilution at ang kanilang mga control sample ay maingat na inilapat sa mga slide na may antigen. Pagkatapos ang mga paghahanda ay sumasailalim sa pagpapapisa ng itlog, na sinusundan ng kanilang paghuhugas at pagpapatuyo sa hangin. Ang isang manipis na layer ng antiserum ay inilalapat sa mga slide na naglalaman ng antigen, pagkatapos kung saan ang mga paghahanda ay muling incubated at ang buong nakaraang kadena ng mga aksyon ay paulit-ulit, na nagtatapos sa pagpapatayo ng paghahanda. Bilang resulta, ang paghahanda sa isang glass slide ay ginagamot sa gliserol at sinusuri sa ilalim ng isang fluorescent microscope.

Ang mga resulta ng reaksyon ay sinusuri sa isang apat na puntos na sukat, na kung saan ay nailalarawan sa intensity ng ibabaw ng dilaw-berdeng glow ng mga antigen cells:
+ napakahinang glow ng cell, kapansin-pansin lamang sa paligid nito
++ mahinang glow ng cell periphery, ngunit may malinaw na nakikitang berdeng tint
+++/++++ maliwanag na berdeng glow ng paligid ng cell
Ang reaction titer ay itinuturing na isang serum dilution kung saan hindi bababa sa 50% ng mga antigen cells ang nagpapakita ng malinaw na glow sa ibabaw, iyon ay, ang resulta ng reaksyon. +++ o ++++ . Ang halaga ng saklaw ng reaksyon ay mula 1/80 hanggang 1/100.

Ang intensity ng reaksyon ay depende sa bilang ng mga precipitated erythrocytes sa ilalim ng nabuo na mga balon:
– isang negatibong reaksyon, na kung saan ay nailalarawan sa pamamagitan ng pag-aalis ng mga erythrocytes sa ilalim ng mga balon sa anyo ng isang maliit na singsing na may makinis na mga gilid o "mga pindutan"
+ mababang intensity, ang reaksyon na ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng maliliit na solong deposito sa ilalim ng butas. Ang mga non-agglutinated erythrocytes ay bumubuo ng isang "maliit na singsing" sa gitna ng balon
++ katamtamang intensity, ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagbuo ng isang "malawak na siksik na singsing" ng mga di-agglutinated erythrocytes sa ilalim ng balon
+++ matinding reaksyon, ang mga agglutinated erythrocytes ay bumubuo ng tinatawag na "mga payong", sa gitna nito, ang mga singsing na nabuo ng mga naayos na hindi pinagsama-samang mga erythrocyte ay malinaw na nakikita
++++ isang matinding matinding reaksyon kung saan ang lahat ng erythrocytes ay pinagsama-sama at, na bumubuo ng "mga payong", linya sa ilalim ng mga butas.
Ang titer ng reaksyong ito ay itinuturing na huling pagbabanto ng serum, kung saan ang halatang agglutination ng mga erythrocytes ay napansin ng hindi bababa sa. +++ , iyon ay, na may matinding o matinding matinding reaksyon.

Ang pagiging maaasahan at kalidad ng mga pamamaraan ng serological diagnostic ay nakasalalay sa organisasyon ng panloob at panlabas na kontrol sa laboratoryo, na binubuo ng ilang mga independiyenteng pamamaraan na idinisenyo upang masuri ang kalidad ng mga resulta ng pagsusuri.