Значение групп крови по системе аво системы. Генетика группы крови и их полиморфизмы. К ошибкам по техническим причинам относятся

На чтение 5 мин. Просмотров 2.2k.

Классификация крови человека, в зависимости от ее характеристик, имеет практическое значение при проведении хирургических вмешательств, в ходе которых требуется ее переливание, при трансплантологии органов и тканей, в судебной медицине для установления факта отцовства, материнства и в случае потери детей в раннем возрасте, а также для планирования беременности.

Групповая принадлежность человека определяется антигенами, находящимися на поверхности красных кровяных телец (эритроцитов), является наследуемым признаком и не меняется в течение нашей жизни. Мировое медицинское сообщество признает различные системы групп крови человека, но общепринятой является определение группы крови по системе АВО.

Классификация

Согласно данной системе кровь делится на подвиды О, А, В и АВ, в зависимости от наличия или отсутствия в ней антигенов А и В.

Открытие и изучение групповой идентификации выявило неравномерное распределение антигенов А и В среди разных рас и народностей человечества. Например, жители северной Европы в своем большинстве — обладатели антигена А. 80% американских индейцев имеют первую группу, а третья и четвертая у них не встречаются. Коренные жители Австралии — люди с первой группой. А среди жителей Центральной и Восточной Азии преобладает третья.

Это дает возможность этнографам изучить происхождение существующих рас и народов, проследить их расселение и миграцию по планете.

Как часто Вы сдаете анализ крови?

Poll Options are limited because JavaScript is disabled in your browser.

Только по назначению лечащего врача 30%, 667 голосов

Один раз в год и считаю этого достаточно 17%, 372 голоса

Как минимум два раза в год 15%, 323 голоса

Чаще чем два раза в год но меньше шести раз 11%, 248 голосов

Я слежу за своим здоровьем и сдаю раз в месяц 7%, 151 голос

Боюсь эту процедуру и стараюсь не сдавать 4%, 96 голосов

21.10.2019

Кроме того, благодаря современным медицинским наблюдениям, установлена закономерность между групповой идентификацией людей и частотой некоторых заболеваний. Эти исследования могут привести к важным открытиям в медицине.

Группа 0

Первая, или AB0 означает, что в ее составе отсутствуют антигены А или В. Долгое время предполагали, что по этой причине кровь данного вида может переливаться всем пациентам, независимо от их групповой принадлежности, поэтому ее обладателей называли универсальными донорами. Согласно исследованиям антропологов, она является самой древней, ее признаки обнаружены еще у первобытных людей, занимавшиеся охотой и собирательством. 40-50% населения всего земного шара являются представителями данного группового подвида.

Считается, что ее носители имеют сильную иммунную систему, менее подвержены инфекциям, но чаще других людей страдают артритом, аллергией и язвенной болезнью.

Группа А

Красные кровяные тельца второй группы крови по системе АВ0 содержат антиген А. Их нельзя использовать как донорский материал для носителей тех групп, где данный антиген отсутствует.

Занимает второе место по распространенности — 30-40%человечества. Сильные стороны здоровья — хороший метаболизм и здоровое пищеварение. Среди носителей ангтигена А чаще диагностируют нарушения в работе печени, желчного пузыря, сердечно-сосудистые заболевания и диабет.

Группа В

В свою очередь, красные кровяные тельца третьей группы крови по системе АВ0 содержат антигены В, которые встречаются только у 10-20%мирового населения.

Важная информация: Меняется ли группа крови и резус-фактор у человека с положительного на отрицательный в течении жизни

Среди представителей этого класса человечества отмечают склонность к возникновению хронической усталости и наличию аутоиммунных заболеваний, соглашаясь вместе с тем, что они являются обладателями крепкой и здоровой пищеварительной системы.

Группа АВ

В крови этого вида присутствуют антигены и А, и В, поэтому ее обладателей называют универсальными реципиентами.

Является самой редкой, ее носители составляют лишь 5% населения. Им присуща сильная иммунная система, но одновременно с этим возможно возникновение различных сердечно-сосудистых заболеваний.

Наследование групповой принадлежности по системе ABO происходит по классическим законам генетики:

• Если у родителей отсутствуют антигены А, В, их не будет и у ребенка.
• В семьях, где родители (один или оба) — обладатели крови АВ (IV), не может родиться ребенок с кровью 0.
• Если у матери и отца вторая группа, то у ребенка будет первая или вторая.

В зависимости от наличия или отсутствия в красных кровяных тельцах человека антигенов А и В, его плазма может содержать антитела, отвечающие за уничтожение чужеродных антигенов. Любое использование крови реципиента или ее составляющих должно производиться лишь с учетом групповой совместимости с донором.

В современной клинической практике переливают кровь, эритроциты и плазму того же вида, что и у пациента. В некоторых экстренных случаях эритроциты группы 0 можно переливать реципиентам других подвидов. Эритроциты группы А можно использовать для переливания пациентам групповой принадлежности А и АВ, а эритроциты от донора В — реципиентам В и АВ. Речь идет только об эритроцитах, использование плазмы и цельной крови для пациентов другой групповой принадлежности может нанести непоправимый вред их здоровью.

Карты совместимости

Кровь донора	реципиент
		А	В	АВ
	+	—	—	—
А	—	+	—	—
В	—	—	+	—
АВ	—	—	—	+
Эритроцицы донора	реципиент
		А	В	АВ
	+	+	+	+
А	—	+	—	+
В	—	—	+	+
АВ	—	—	—	+

Чтобы избежать осложнений при переливании крови даже одноименной группы, проводят предварительную биологическую пробу: пациенту вводят по 25 мл донорского материала 3 раза с перерывами в 3 минуты, наблюдая при этом за состоянием больного. Дальнейшее переливание необходимого общего количества материалов производят только при отсутствии признаков ухудшения состояния человека.

Как определяют группу

Чтобы определить, носителем какой группы крови АВО является человек, достаточно материала, взятого из его пальца. На белую пластинку наносят тес-реагенты анти-А и анти-В, смешивают их с образцами испытуемого и оценивают полученный результат через 3-5 минут.

Если в первом образце образуются сгустки, т.е. происходит склеивание эритроцитов (агглютинация), а во втором случае эритроциты не склеиваются, это означает, что у человека имеется антиген А и отсутствует антиген В. В этом случае у донора первая группа (А). Аналогично определяются и другие группы.

Группы крови системы АВ0

Группы крови системы АВ0 были открыты в 1900 году К.Ландштейнером, который смешивая эритроциты одних лиц с сывороткой крови других лиц, обнаружил, что при одних сочетаниях кровь свертывается, образуя хлопья (реакция агглютинации), а при других нет. На основании этих исследований Ландштейнер разделил кровь всех людей на три группы: А, В и С. В 1907 году была обнаружена еще одна группа крови.

Было установлено, что реакция агглютинации происходит при склеивании антигенов одной группы крови (их назвали агглютиногенами), которые находятся в красных кровяных тельцах - эритроцитах с антителами другой группы (их назвали агглютининам), находящимися в плазме - жидкой части крови. Разделение крови по системе АВ0 на четыре группы основано на том, что кровь может содержать или не содержать антигены (агглютиногены) А и В, а также антитела (агглютинины) α (альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).

Первая группа крови - 0 (I)

I группа - не содержит агглютиногенов (антигенов), но содержит агглютинины (антитела) α и β. Она обозначается 0 (I). Так как эта группа не содержит инородных частиц (антигенов), то ее можно переливать всем людям. Человек с такой группой крови является универсальным донором.

Вторая группа крови А β (II)

II группа содержит агглютиноген (антиген) А и агглютинин β (антитела к агглютиногену В). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген В - это I и II группы.

Третья группа крови Вα (III)

III группа содержит агглютиноген (антиген) В и агглютинин α (антитела к агглютиногену А). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген А - это I и III группы.

Четвертая группа крови АВ0 (IV)

IV группа крови содержит агглютиногены (антигены) А и В, но содержит агглютининов (антител). Поэтому ее можно переливать только тем, у кого такая же, четвертая группа крови. Но, так как в крови таких людей нет антител, способных склеиться с вводимыми извне антителами, то им можно переливать кровь любой группы. Люди с четвертой группой крови являются универсальными реципиентами.

Группы крови по системе АВО

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время существует три способа опреде­ления групп крови по системе АВО:

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам;

С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Суть метода сводится к обнаружению в испыту­емой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей использу­ется реакция агглютинации. Пробу нужно делать в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25° С.

Для проведения пробы необходимы: - Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных се­рий. Сыворотки для определения групп крови изготав­ливают из донорской крови в специальных лаборато­риях. Хранятся сыворотки в холодильнике при темпе­ратуре 4 - 8° С. Срок годности сыворотки указывают на этикетке. На этикетке также указывается титр (то мак­симальное разведение сыворотки, при котором может наступить реакция агглютинации), который должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1:16 /32). Сыворотка должна быть прозрачной, без при­знаков гниения. Стандартные сыворотки для удобства подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Эти цвета сопутствуют всем этикеткам на пре­паратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

Белые фарфоровые или эмалированные тарел­ки или другие пластинки со смачиваемой поверх­ностью, маркированные, согласно группам крови.

Изотонический раствор хлорида натрия.

Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предмет­ные стекла).

Техника проведения реакции.

1. Под соответствующими обозначениями груп­пы крови на тарелку (пластинку) наносят сыворот­ку I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля диаметром около 1 см). Чтобы избежать оши­бок, наносят две серии сывороток, поскольку одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Таким образом, получается 6 капель, образующих два ряда по три капли в сле­дующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).

2. Кровь для исследований берут из пальца или из вены. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель иссле­дуемой крови величиной примерно с булавочную го­ловку 0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Причем количество сыворотки должно в 10 раз превышать количество исследуемой крови. Затем их осторожно переме­шивают между собой стеклянными палочками с за­кругленными краями.

Возможна и более простая методика: на тарел­ку наносится одна большая капля крови, потом ее забирают оттуда уголком предметного стекла и переносят каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая ее с последней. При этом кровь каж­дый раз берут чистым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не смешивались.

3. Смешав капли, тарелку периодически покачи­вают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не ме­нее 5 минут, так как возможна более поздняя агглю­тинация, например с эритроцитами группы А 2 (II).

4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.

Реакция агглютинации может быть положитель­ной или отрицательной

При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невоору­женным глазом мелкие красные зернышки (агглю-тинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мел­кие зернышки постепенно сливаются в более круп­ные зерна или даже в хлопья неправильной формы. При отрицательной реакции капля остается равно­мерно окрашенной в красный цвет.

Результаты реакций двух серий в каплях с сыво­роткой одной и той же группы должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответству­ющей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сы­воротками.

Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).

Определение групп крови моноклональными антителами

Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые по­лучают с помощью гибридомной, биотехнологии.

Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует спе­цифические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, ха­рактерна для опухолевой клетки и присущей лим­фоциту способностью синтезировать антитела.

Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, при­меняемые для определения агглютиногенов эритроци­тов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.

Техника проведения.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соот­ветствующими надписями: анти-А или анти-В. Ря­дом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После переме­шивания компонентов наблюдают за реакцией агг­лютинации в течение 2-3 минут. Оценка результа­тов очень проста.

Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выде­лить три основные группы ошибок: ошибки, свя­занные с низким качеством реагентов; техничес­кие ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови спомощью моноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыво­ротке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной темпера­туре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эрит­роциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подоб­ное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.

Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности про­водить при температуре 37° С, они исчезают.

Нужно строго помнить, что во всех случаях не­четкого или сомнительногскрезультата следует про­вести повторное определение групп крови при по­мощи стандартных сывороток других серий, а так­же перекрестным способом.

66. Методы определения групп крови по системам аво и резус.

Для проведения исследования необходимы стандартные гемагглютинирующие сыворотки I (О), II (А), III (В), IV (АВ), причем первые три варианта сыворотки должны быть представлены двумя сериями.

Сыворотка должна быть пригодной для использования, для этого обязательно проверяют соответствие ее сроку годности, указанному на этикетке сыворотки, определяют визуально ее состояние. Нельзя использовать сыворотку, если она является мутной, содержит посторонние примеси, хлопья, взвесь, изменила цвет.

Сыворотка считается пригодной для использования, если она является прозрачной, ампула имеет этикетку, на которой указаны основные ее свойства (серия, срок годности, групповая принадлежность, цветная маркировка соответственно групповой принадлежности), ампула не повреждена, не вскрыта.

Необходимы чистая тарелка, которую необходимо разделить на четыре части, отметив соответствие каждой определенной группе крови, игла-скарификатор, стерильные ватные тампоны, чистое сухое обезжиренное предметное стекло, спирт. На тарелку в соответствии с маркировкой наносят по капле каждой сыворотки. Затем кожу подушечки четвертого пальца левой руки обрабатывают стерильным ватным тампоном со спиртом. С помощью скарификатора прокалывают кожу, удаляя первую выступившую каплю крови (примесь к ней спирта и тканевой жидкости может исказить результаты исследования). Следующую каплю крови забирают уголком предметного стекла, для каждой капли сыворотки – чистым уголком стекла. Для исследования к капле гемагглютинирующей сыворотки добавляют каплю крови в соотношении 10: 1. Затем, аккуратно поворачивая и покачивая тарелку, производят перемешивание крови. Агглютинация обычно выявляется в виде выпадения хлопьев, которые хорошо визуализируются. Для уточнения результата к капле добавляют изотонический раствор хлорида натрия, после чего с достаточной достоверностью оценивают результат.

Одним из обязательных условий проведения исследования является соблюдение температурного режима.

Оптимальной является температура 20 – 25 оС, поскольку уже ниже 15 оС отмечается холодовая агглютинация, резко нарушающая специфичность данной пробы, а при температуре окружающей среды выше данного интервала скорость реакции агглютинации резко замедляется.

Если гемагглютинация происходит в капле с сыворотками I (О), III (В), но не происходит с сывороткой II (А), причем результат аналогичен с сыворотками двух сывороток, это означает, что исследуемая кровь принадлежит III (B) группе по системе АВО.

Если гемагглютинация происходит в капле с сыворотками I (О), II (А), но не происходит с сывороткой III (В), это означает, что исследуемая кровь принадлежит II (А) группе по системе АВО.

Но возможна и такая ситуация, когда гемагглютинация не происходит ни с одной из исследуемых сывороток, причем обеих серий. Это означает, что исследуемая кровь не содержит агглютиногенов и принадлежит к I (О) группе по системе АВО.

Если же агглютинация происходит со всеми сыворотками, причем обеих серий, это означает, что исследуемая сыворотка содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к IV (АВ) группе по системе АВО.

Экспресс-метод определения групповой принадлежности крови по системе резус. Для исследования необходимо иметь стандартную антирезусную сыворотку, принадлежащую IV (АВ) группе по системе АВО, чашку Петри, изотонический раствор хлорида натрия, 30%-ный раствор реополиглюкина, чистое сухое обезжиренное предметное стекло. Вначале необходимо развести стандартную антирезусную сыворотку раствором реополиглюкина и нанести ее каплю на чашку Петри. Кроме того, на чашку Петри наносят каплю сыворотки IV (АВ) группы, которая не содержит антител. Забор крови производят аналогично способу, описанному при определении системы АВО. Каплю крови забирают с помощью угла предметного стекла, добавляют к капле сыворотки и аккуратно перемешивают. Другим углом забирают каплю для добавления к другой сыворотке и также перемешивают. Предварительный результат оценивают через 4 мин, затем к каждой капле необходимо добавить каплю изотонического раствора хлорида натрия, через 2 мин оценивается окончательный результат. Если в обеих каплях не наблюдается выпадения хлопьев агглютинации, это свидетельствует о том, что исследуемая кровь резус-отрицательная. Если же агглютинации произошла с обеими сыворотками, результат исследования нельзя считать достоверным. Наконец, если агглютинация произошла с антирезусной сывороткой, но не произошла с другой, контрольной, кровь считается резус-положительной.

67. Современные правила переливания крови по группам системы АВО и системы резус. Обязанности врача, переливающего кровь

Необходимость инфузии крови или её компонентов, а также выбор метода и определение дозировки переливания, определяются лечащим врачом на основании клинических симптомов и биохимических проб. Врач, осуществляющий переливание, обязан вне зависимости от данных предыдущих исследований и анализов, лично произвести следующие исследования: определить группу крови больного по системе ABO и сравнить полученные данные с историей болезни; определить группу крови донора и сравнить полученные данные с информацией на этикетке контейнера; проверить совместимость крови донора и больного; получить данные биологической пробы. Запрещается трансфузия крови и её фракций, не прошедшей анализы на СПИД, сывороточный гепатит и сифилис. Гемотрансфузия осуществляется с соблюдением всех необходимых асептических мер. Допускается инфузия крови или её фракций исключительно при совпадении резус-фактора донора и реципиента. В случае необходимости возможна инфузия резус-отрицательной крови первой группы человеку с любой группой крови в объёме до 0,5 л (только взрослым). Резус-отрицательную кровь второй и третьей группы можно трансфузировать человеку со второй, третьей и четвертой группой, вне зависимости от резус-фактора. Человеку с четвертой группой крови положительного резус-фактора можно переливать кровь любой группы. Эритроцитную массу резус-положительной крови первой группы можно инфузировать пациенту с любой группой при резус-положительном факторе. Кровь второй и третьей группы с резус-положительным фактором можно инфузировать человеку с четвертой резус-положительной группой. Так или иначе, перед трансфузией обязательно проведение теста на совместимость. При обнаружении в крови иммуноглобулинов редкой специфики необходим индивидуальный подход к выбору крови и проведение специфических тестов на совместимость.

Пробы на совместимость крови донора и реципиента перед переливанием.

Наконец, если выяснено, что кровь донора и кровь реципиента совпадают по системам АВО и резусу, для переливания необходимо произвести биологическую пробу на совместимость. Ее проводят с самого начала переливания крови. Подсоединив систему для переливания крови, открывают зажим и вводят примерно 20 мл крови донора струйно, затем зажим закрывают и внимательно наблюдают за реакцией пациента в течение 3 мин. Биологическая несовместимость крови донора и пациента в клинической практике встречается нечасто, но может быть очень опасной для здоровья реципиента. О наличии ее можно говорить, если наблюдаются гиперемия лица, психомоторное возбуждение, пациент стремится встать, могут отмечаться неадекватное поведение, тахикардия и тахипноэ, снижение артериального давления. Учащение дыхания может сочетаться с ощущением нехватки воздуха. Подобная реакция является абсолютным противопоказанием для переливания данному реципиенту крови данного донора. Однако это не исключает использования других порций донорской крови от данного лица другим пациентам. Если проведение биологической пробы не сопровождается появлением подобной реакции при повторении ее дважды, она считается пригодной для переливания. Трансфузию продолжают, однако в течение всего времени необходимо тщательно наблюдать за состоянием реципиента, его артериальным давлением, температурой тела, общим состоянием, частотой и ритмом дыхания, оценивать частоту и качество пульса, обращать внимание на субъективные ощущения пациента: чувство жара, ощущение нехватки воздуха, кожный зуд, боли в области поясницы, озноб и др. Подобный мониторинг состояния больного проводится в течение 4 ч после переливания крови, и если через это время реакции на переливание не отмечается, то проведенная гемотрансфузия считается успешной, проведенной без осложнений.

Определение группы крови системы АВ0

Используют стандартные сыворотки I II III IV группы крови 2-х серий.

Надеть передник, маску, очки, перчатки, нарукавники.

Методика проведения.

1. На чистую, сухую, обезжиренную тарелку капают по одной капле стандартных сывороток 2-х серий (6 капель). Каждая сыворотка капается отдельной пипеткой. Пипетки маркируются и находятся во флаконах с физ.раствором.

2. Рядом с каплей стандартной сыворотки палочкой или отдельной пипеткой наносится капля крови (соотношение сыворотка-кровь 10:1).

3. Капли тщательно перемешиваются отдельными палочками.

4. Покачивают тарелку и наблюдают результаты в течение 5минут. По истечению 3минут для исключения ложной агглютинации вносят по капле физ.раствора и продолжают наблюдение.

Определение результатов.

Сыворотки всех групп не дали реакции-исследуемая кровь относится к группе 0(I)

Сыворотки групп 0 (I) и В (III) дали положительную реакцию, сыворотка групп А (II) агглютинацию эритроцитов не вызывала – исследуемая кровь относится к группе А (II)

Сыворотки групп О(I) и А (II) дали положительную реакцию, сыворотка группы В (III) не дала реакцию – кровь отосится к группе

Сыворотки всех групп дали положительную реакцию – кровь можно отнести к группе АВ (IV) . нотолько в том случае, если при проведении контроля исследуемых эритроцитов со стандартной сывороткой группы АВ (IV) реакции агглютинации не будет. Положительная агглютинация с сывороткой АВ (IV)означает наличие неспецифической агглютинации.

Определение группы крови системы АВО моноклональными антителами .

Это современный метод определения группы крови АВО моноклональными реагентами(цоликлонами анти-А и анти-В).

Методика определения: Надеть передник, маску, перчатки, нарукавники

1. на тарелку в две ячейки капают по 1 каплецоликлоны анти-А и анти-В

2. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь в соотношении сыворотка –кровь 10:1.

3. Смешивают реагенты отдельными стеклянными палочками.

4. Наблюдают за результатом 2,5 минут.

Определение результатов:

Агглютинации нет ни с цоликлоном анти-А, ни с цоликлоном анти-В-

кровь принадлежит к группе О(I)

Агглютинация наблюдается только с цоликлоном анти-А- кровь принадлежит к группе А (II)

Агглютинация наблюдается только с цоликлоном анти-В – кровь принадлежит к группе В (III)

Агглютинация наблюдается как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В – кровь принадлежит к группе АВ (IV)

5. Пробы перед переливание крови .

Надеть маску, очки, передник, перчатки.

Из вены больного берут 5мл крови, центрифугируют и получают сыворотку.

А) Проба на индивидуальную совместимость: наносят 2-3 капли сыворотки на планшетку и добавляют каплю крови донора (10:1). Кровь смешивают с сывороткой сухой стеклянной палочкой, планшетку слегка покачивают и наблюдают за результатом.

Результат: отсутствие агглютинации-кровь совместима, есть агглютинация – кровь не совместима.

Б) Проба на резус-совместимость:

Написать на чистой пробирке фамилию, имя, отчество рецепиента и его группу крови, а так же номер флакона донора.

Внести на дно пробирки пастеровской пипеткой 2 капли сыворотки рецепиента, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% р-ра полиглюкина.

Перемешайте полученную в пробирке смесь и, наклоняя пробирку до горизонтального положения, поворачивайте ее таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки в нижней ее трети.

По истечении 5 минут долейте в пробирку2-3 мл изотонического раствора натрия хлорида и перемешайте содержимое путем 2-3 кратного переворачивания пробирки.

Результат:

1. Наличие агглютинации эритроцитов – кровь донора несовместима с кровью больного.

2. Нет признаков агглютинации – кровь совместима.

В) Биологическая проба.

Техника проведения:

Струйно переливать 10-15мл крови (эритроцитарной массы, плазмы), затем в течение 3-х минут наблюдать за больным. При отсутствии клинических проявлений реакции или осложнений (учащения пульса, дыхания, появления одышки, затрудненного дыхания и гиперемии лица ит.д.) вводят вновь 10-15 мл крови (эритроцитарной массы, плазмы и т. д.) и в течение 3-х минут наблюдают за больным. Такую же процедуру повторяют и в 3-й раз. Отсутствие реакции у больного после 3-х кратной проверки, является основанием для продолжения трансфузии. 10-15 мл крови оставляют во флаконе и хранят 1сутки в холодильнике.

6.После переливания крови реципиент в течение 2-часов соблюдает постельный режим и наблюдается врачом. Ежечасно ему измеряют температуру тела, АД, фиксируют эти показания в истории болезни. Контролируется наличие мочевыделения и нормального цвета мочи. На следующий день после переливания обязательно производят общий анализ мочи и крови. Записывается в историю болезни показание к гемотрансфузии и оформляется протокол переливания, содержащий следующие сведения:

– Ф.И.О больного

Группа крови и резус-принадлежность больного

Паспортные данные флаконов крови или компонентов, фамилию и инициалы донора, группу и резус-принадлежность крови, номер флакона, дату заготовки.

Результат контрольного определения группы крови больного

Результаты контрольного определения группы каждого флакона крови и ее компонентов.

Результаты проб на совместимость крови доноров и реципиента при комнатной температуре

Метод и результаты проб на совместимость при температуре

Результаты биологических проб

Состояние больного во время и после трансфузии.

/ 29

29 Методы определения групп крови и резус-фактора. Профилактика возможных ошибок

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток. В лунки планшета для определения групп крови последовательно наносят пипетками по одной крупной капле стандартной сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных серий каждой группы. Затем наносят в каждую лупку по капле исследуемой крови, в 5 - 10 раз меньшую сыворотки. Сухими стеклянными палочками или путем покачивания планшета смешивают стандартные сыворотки и исследуемую кровь. Через 5 минут оценивают результат (табл. 2).

Таблица 2

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток

Группа исследуемой крови	Стандартные сыворотки

Определение групп крови по стандартным эритроцитам. В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III). Капли перемешивают покачиванием планшета. Через 5 минут к каждой капле смеси добавляют по 1 капле физиологического раствора и учитывают результат.

Таблица 3

Определение групп крови с помощью стандартных эритроцитов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты

Определение резус-фактора. На дно сухой пробирки наносят 1 большую каплю универсального реагента анти-резус, затем добавляют такую же каплю исследуемой крови. После встряхивания пробирки производят перемешивание сыворотки анти-резус и крови в течение 5 минут по стенкам пробирки, после чего добавляют 5 - 7 мл физиологического раствора. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

Определение групп крови с помощью цоликлонов. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготовляются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 - 10 мл. Цоликлон анти-А - желтого цвета, анти-В - синего, анти-АВ - бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия.

Техника определения групп крови. Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на пластине или планшете, определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25 X.

Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 - 0,03 мл).

Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.

Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 - 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации с цоликлонами представлена в табл. 4.

Таблица 4

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты

Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) - се отсутствие

При положительном результате реакции агглютинации со всеми гремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую аглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешивают на плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

Определение резус-фактора с помощью цоликлона. В лупку планшета наносят 1 большую каплю цоликлона анти-Д-супер т рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой крови.

Покачивая планшет, смешивают кровь с цоликлоном. За ходом реакции наблюдают в течение 3 минут. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

Функции. Группы крови - это генетически наследуемые признаки, не изменяющиеся в течение жизни при естественных условиях. Группа крови представляет собой определенное сочетание поверхностных антигенов эритроцитов (агглютиногенов) системы АВО.Определение групповой принадлежности широко используется в клинической практике при переливании крови и ее компонентов, в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности. Система групп крови AB0 является основной системой, определяющей совместимость и несовместимость переливаемой крови, т.к. составляющие ее антигены наиболее иммуногенны. Особенностью системы АВ0 является то, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену. Систему группы крови АВ0 составляют два групповых эритроцитарных агглютиногена (А и В) и два соответствующих антитела - агглютинины плазмы альфа(анти-А) и бета(анти-В). Различные сочетания антигенов и антител образуют 4 группы крови:

• Группа 0(I) - на эритроцитах отсутствуют групповые агглютиногены, в плазме присутствуют агглютинины альфа и бета.
• Группа А(II) - эритроциты содержат только агглютиноген А, в плазме присутствует агглютинин бета;
• Группа В(III) - эритроциты содержат только агглютиноген В, в плазме содержится агглютинин альфа;
• Группа АВ(IV) - на эритроцитах присутствуют антигены А и В, плазма агглютининов не содержит.

Определение групп крови проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойной метод, или перекрестная реакция).

Несовместимость крови наблюдается, если эритроциты одной крови несут агглютиногены (А или В), а в плазме другой крови содержатся соответствующие агглютинины (альфа- или бета), - при этом происходит реакция агглютинации.

Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая групповую совместимость. Чтобы избежать несовместимости крови донора и реципиента, необходимо лабораторными методами точно определить их группы крови. Лучше всего переливать кровь, эритроциты и плазму той же группы, которая определена у реципиента. В экстренных случаях эритроциты группы 0 (но не цельную кровь!) можно переливать реципиентам с другими группами крови; эритроциты группы А можно переливать реципиентам с группой крови А и АВ, а эритроциты от донора группы В - реципиентам группы В и АВ.

Карты совместимости групп крови (агглютинация обозначена знаком +):

Кровь донора	Кровь реципиента

Эритроциты донора	Кровь реципиента

Групповые агглютиногены находятся в строме и оболочке эритроцитов. Антигены системы АВО выявляются не только на эритроцитах, но и на клетках других тканей или даже могут быть растворенными в слюне и других жидкостях организма. Развиваются они на ранних стадиях внутриутробного развития, и у новорожденного уже находятся в существенном количестве. Кровь новорожденных детей имеет возрастные особенности - в плазме могут еще не присутствовать характерные групповые агглютинины, которые начинают вырабатываться позже (постоянно обнаруживаются после 10 месяцев) и определение группы крови у новорожденных в этом случае проводится только по наличию антигенов системы АВО.

Помимо ситуаций, связанных с необходимостью переливания крови, определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных.

Гемолитическая болезнь новорожденных

Гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты.. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.

Существуют разновидности (слабые варианты) антигена А (в большей степени) и реже антигена В. Что касается антигена А, имеются варианты: "сильный" А1 (более 80%), слабый А2 (менее 20%), и еще более слабые (А3, А4, Ах - редко). Это теоретическое понятие имеет значение для переливания крови и может вызвать несчастные случаи при отнесении донора А2 (II) к группе 0 (I) или донора А2В (IV) - к группе В (III), поскольку слабая форма антигена А иногда обуславливает ошибки при определении группы крови системы АВO. Правильное определение слабых вариантов антигена А может требовать повторных исследований со специфическими реагентами.

Снижение или полное отсутствие естественных агглютининов альфа и бета иногда отмечается при иммунодефицитных состояниях:

• новообразования и болезни крови - болезнь Ходжкина, множественная миелома, хроническая лимфатическая лейкемия;
• врожденные гипо- и агаммаглобулинемия;
• у детей раннего возраста и у пожилых;
• иммуносупрессивная терапия;
• тяжелые инфекции.

Трудности при определении группы крови вследствие подавления реакции гемагглютинации возникают также после введения плазмозаменителей, переливания крови, трансплатации, септицемии и пр.

Наследование групп крови

В основе закономерностей наследования групп крови лежат следующие понятия. В локусе гена АВО возможны три варианта (аллеля) - 0, A и B, которые экспрессируются по аутосомно-кодоминантному типу. Это означает, что у лиц, унаследовавших гены А и В, экспрессируются продукты обоих этих генов, что приводит к образованию фенотипа АВ (IV). Фенотип А (II) может быть у человека, унаследовавшего от родителей или два гена А, или гены А и 0. Соответственно фенотип В (III) - при наследовании или двух генов В, или В и 0. Фенотип 0 (I) проявляется при наследовании двух генов 0. Таким образом, если оба родителя имеют II группу крови (генотипы AА или А0), кто-то из их детей может иметь первую группу (генотип 00). Если у одного из родителей группа крови A(II) с возможным генотипом АА и А0, а у другого B(III) с возможным генотипом BB или В0 - дети могут иметь группы крови 0(I), А(II), B(III) или АВ (!V).

• Гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по системе АВ0);
• Предоперационная подготовка;
• Беременность (подготовка и наблюдение в динамике беременных с отрицательным резус-фактором)

Подготовка к исследованию: не требуется

При необходимости (обнаружение А2-подтипа) проводится дополнительное тестирование с использованием специфических реактивов.

Сроки исполнения: 1 день

Результат исследования:

• 0 (I) - первая группа,
• A (II) - вторая группа,
• B (III) - третья группа,
• AB (IV) - четвертая группа крови.

При выявлении подтипов (слабых вариантов) групповых антигенов результат выдается с соответствующим комментарием, например, "выявлен ослабленный вариант А2, необходим индивидуальный подбор крови".

Резус-фактор Rh

Основной поверхностный эритроцитарный антиген системы резус, по которому оценивают резус-принадлежность человека.

Функции. Антиген Rh - один из эритроцитарных антигенов системы резус, располагается на поверхности эритроцитов. В системе резус различают 5 основных антигенов. Основным (наиболее иммуногенным) является антиген Rh (D), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Эритроциты примерно 85% людей несут этот белок, поэтому их относят к резус-положительным (позитивным). У 15 % людей его нет, они резус-отрицательны (негативны). Наличие резус-фактора не зависит от групповой принадлежности по системе АВ0, не изменяется в течение жизни, не зависит от внешних причин. Он появляется на ранних стадиях внутриутробного развития, и у новорожденного уже обнаруживается в существенном количестве. Определение резус принадлежности крови применяется в общей клинической практике при переливании крови и ее компонентов, а также в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности.

Несовместимость крови по резус-фактору (резус-конфликт) при переливании крови наблюдается, если эритроциты донора несут Rh -агглютиноген, а реципиент является резус-отрицательным. В этом случае у резус-отрицательного реципиента начинают вырабатываться антитела, направленные против резус-антигена, приводящие к разрушению эритроцитов. Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая совместимость не только по группе крови, но и по резус-фактору. Присутствие и титр уже имеющихся в крови антител к резус-фактору и других аллоиммунных антител можно определить, указав тест "anti-Rh (титр)".

Определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод- резус-положителен. В случае, если у матери Rh +, а плод - резус - отрицателен, опасности гемолитической болезни для плода нет.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденных - гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь может быть обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, N-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам (по статистике 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны с D - резус-антигеном). Любой из указанных антигенов, проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или повторных выкидышей.

В настоящее время существует возможность медицинской профилактики развития резус-конфликта и гемолитической болезни новорожденных. Все резус-отрицательные женщины в период беременности должны находиться под наблюдением врача. Необходимо также контролировать в динамике уровень резус-антител.

Есть небольшая категория резус-положительных лиц, способных образовывать анти-резус антитела. Это лица, эритроциты которых характеризуются значительно сниженной экспрессией нормального антигена Rh на мембране ("слабый" D, Dweak) или экспрессией измененного антигена Rh (частичный D, Dpartial). Эти слабые варианты антигена D в лабораторной практике объединяют в группу Du , частота которой составляет около 1%.

Реципиенты, содержание антиген Du, должны быть отнесены к резус-отрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ. Доноры с антигеном Du квалифицируются как резус-положительные доноры, так как переливание их крови может вызвать иммунный ответ у резус-отрицательных реципиентов, а в случае предшествующей сенсибилизации к антигену D - и тяжелые трансфузионные реакции.

Наследование резус-фактора крови.

В основе закономерностей наследования лежат следующие понятия. Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d - рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные - только генотип dd). Человек получает от каждого из родителей по 1 гену - D или d, и у него возможны, таким образом, 3 варианта генотипа - DD, Dd или dd. В первых двух случаях (DD и Dd) анализ крови на резус фактор даст положительный результат. Только при генотипе dd человек будет иметь резус-отрицательную кровь.

Рассмотрим некоторые варианты сочетания генов, определяющих наличие резус фактора, у родителей и ребенка

• 1) Отец резус - позитивный (гомозигота, генотип DD), у матери резус - отрицательный (генотип dd). В этом случае все дети будут резус - положительными (вероятность 100%).
• 2) Отец резус - позитивный (гетерозигота, генотип Dd), мать - резус- отрицательная (генотип dd). В этом случае вероятность рождения ребенка с отрицательным или положительным резусом одинакова и равна 50 %.
• 3) Отец и мать гетерозиготы по данному гену (Dd), оба резус - позитивны. В этом случае возможно (с вероятностью около 25%) рождение ребенка с отрицательным резусом.

Показания к назначению анализа:

• Определение трансфузионной совместимости;
• Гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по резус-фактору);
• Предоперационная подготовка;
• Беременность (профилактика резус-конфликта).

Подготовка к исследованию: не требуется.

Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)

Метод определения: Фильтрация проб крови сквозь гель, импрегнированный моноклональными реагентами - агглютинация + гель-фильтрация (карточки, перекрестный метод).

Сроки исполнения: 1 день

Интерпретация результатов:

Результат выдается в форме:
Rh + положительная Rh - отрицательная
При выявлении слабых подтипов антигена D (Du) выдается комментарий: "выявлен слабый резус-антиген (Du), рекомендуется при необходимости переливать резус-отрицательную кровь".

Анти - Rh (аллоиммунные антитела к резус-фактору и другим эритроцитарным антигенам)

Антитела к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, в первую очередь резус-фактору, свидетельствующие о сенсибилизации организма к этим антигенам.

Функции. Резус-антитела относятся к так называемым аллоиммунным антителам. Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (к резус-фактору или другим эритроцитарным антигенам) появляются в крови при особых условиях - после переливания иммунологически несовместимой донорской крови или при беременности, когда эритроциты плода, несущие иммунологически чужеродные для матери отцовские антигены, проникают через плаценту в кровь женщины. У неиммунных резусотрицательных людей антител к резус-фактору нет. В системе резус различают 5 основных антигенов, основным (наиболее иммуногенным) является антиген D (Rh), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Помимо антигенов системы резус есть еще ряд клинически важных эритроцитарных антигенов, к которым может возникать сенсибилизация, вызывающая осложнения при переливании крови. Метод скринингового исследования крови на присутствие аллоиммунных антиэритроцитарных антител, использующийся в ИНВИТРО, позволяет, помимо антител к резус-фактору RH1(D), выявить в исследуемой сыворотке аллоиммунные антитела и к другим эритроцитарным антигенам.

Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d - рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные - только генотип dd). Во время беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом возможно развитие иммунологического конфликта матери и плода по резус-фактору. Резус-конфликт может привести к выкидышу или развитию гемолитической болезни плода и новорожденных. Поэтому определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод - резус-положителен. В случае, если у матери резус-антиген положительный, а у плода отрицательный, конфликт по резус-фактору не развивается. Частота развития резус-несовместимости составляет 1 случай на 200-250 родов.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденных - гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО- (групповым) антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Проникновению антигенов в материнский кровоток способствуют инфекционные факторы, повышающие проницаемость плаценты, мелкие травмы, кровоизлияния и другие повреждения плаценты. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.

Во время первой беременности резус-положительным плодом у беременной с Rh "-" риск развития резус-конфликта составляет 10-15 %. Происходит первая встреча организма матери с чужеродным антигеном, накопление антител происходит постепенно, начиная, приблизительно с 7-8 недели беременности. Риск несовместимости возрастает с каждой последующей беременностью резус - положительным плодом, независимо от того, чем она закончилась (искусственным абортом, выкидышем или родами, операцией при внематочной беременности), при кровотечениях во время первой беременности, при ручном отделении плаценты, а также если роды проводятся путем кесарева сечения или сопровождаются значительной кровопотерей. при переливании резус-положительной крови (в том, случае, если они проводились даже в детском возрасте). Если последующая беременность развивается с резус-отрицательным плодом, несовместимость не развивается.

Всех беременных женщин с Rh "-" ставят на специальный учет в женской консультации и проводят динамический контроль над уровнем резус-антител. В первый раз анализ на антитела надо сдать с 8-й до 20-й недели беременности, и затем периодически проверять титр антител: 1 раз в месяц до 30-й недели беременности, дважды в месяц до 36-й недели и 1 раз в неделю до 36-й недели. Прерывание беременности на сроке менее 6-7 недель может не привести к формированию у матери Rh-антител. В этом случае при последующей беременности, если у плода будет положительный резус-фактор, вероятность развития иммунологической несовместимости вновь будет равна 10-15 %.

Проведение тестирования на аллоиммунные антиэритроцитарные антитела важно также при общей предоперационной подготовке, особенно для людей, которым ранее уже проводилось переливание крови.

Показания к назначению анализа:

• Беременность (профилактика резус-конфликта);
• Наблюдение за беременными с отрицательным резус-фактором;
• Невынашивание беременности;
• Гемолитическая болезнь новорожденных;
• Подготовка к гемотрансфузии.

Подготовка к исследованию: не требуется.
Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)

Метод определения: метод агглютинации + гель-фильтрации (карточки). Инкубация стандартных типированных эритроцитов с исследуемой сывороткой и фильтрация путем центрифугирования смеси через гель, импрегнированный полиспецифическим антиглобилиновым реагентом. Агглютинированные эритроциты выявляются на поверхности геля или в его толще.

В методе используются суспензии эритроцитов доноров группы 0(1), типирован-ные по антигенам эритроцитов RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1(K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK (Jk a), JK2(Jk b), LU1 (Lu a), LU2 (LU b), LE1 (LE a), LE2 (LE b), MNS1(M), MNS2 (N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).

Сроки исполнения: 1 день

При обнаружении аллоиммунных антиэритроцитарных антител проводится их полуколичественное определение.
Результат выдается в титрах (максимальное разведение сыворотки, при котором еще обнаруживается положительный результат).

Единицы измерения и коэффициенты пересчета: Ед/мл

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат: Сенсибилизация к резус-антигену или другим эритроцитарным антигенам.

Группы крови.

Группы крови - нормальные иммуногенетические признаки крови, позволяющие объединить людей в определенные группы по

сходству антигенов крови.

Знания о группах крови лежат в основе учения о переливании, трансплантации органов и тканей, в судебно-медицинской экспертизе.

Антигены - вещества, поступающие в организм парентеральным путем и вызывающие специфическую иммунологическую реакцию, которая проявляется в выработке специфических антител.

Антитела - белки глобулиновой фракции сыворотки крови, которые образуются в ответ на введение антигена и специфически взаимодействующие с антигенами, вызвавшими их образование.

Существует более 250 изоантигенов, находящихся в генетической связи. Важное значение в клинике имеют:

1. Система АВО

3. Лютеран

4. Келл-Челлано

Система АВО.

Начало систематическому исследованию групп крови было положено открытием в 1901 г. Ландштейнером групп крови системы АВО.

В этой системе эритроциты человека разделены по принципу наличия у них трех различных антигенных свойств: А, В и АВ (А+В). Антигенные свойства «О» не существует; в крайнем случае можно говорить о свойстве Н, однако специфические антителаанти - Н имеют весьма малое клиническое значение. Таким образом, группа крови человека определяется антигенными свойствами эритроцитов.

В крови новорожденного, как правило, нет антител системы АВО. В течение первого года жизни у ребенка образуются антитела к тем антигенам, которых нет в его собственных эритроцитах (изоантигены, анти-А, анти-В). После этого сыворотка, например, группы О, содержит антитела анти-А и анти-В, а сыворотка группы АВ не содержит этих антител.

В настоящее время установлено, что в кишечнике присутствуют бактерии, несущие те же антигенные детерминанты, что и эритроциты: так называемые гетерофильные антигены. Большая часть антител системы АВО относится к типу

иммуноглобулинов класса М. Обладая 10 участками связывания антигенов, они представляют собой полные антитела, способные вызывать агглютинацию эритроцитов.

Наследование групп крови.

В диплоидном наборе хромосом каждого человека содержатся 2 из трех аллельных генов - А, В и 0(Н), кодирующих свойства элементов крови.

Показано, что свойства А и В являются доминантными, поэтому группа крови 0 фенотипически экспрессирована только у гомозигот. Поскольку генотип АО и ВО может давать соответственно фенотип А и В, у родителей с одной из этих групп крови вполне может быть ребенок с группой крови 0. Аллели А и В находятся в отношениях кодоминантности: при наличии обоих этих генов каждый из них экспрессируется, не взаимодействуя друг с другом.

Зная эти принципы наследования, можно получить некоторую информацию о родителях, исходя из группы крови ребенка. В судебно-медицинской практике принято считать, что мужчина с группой АВ не может быть отцом ребенка с группой крови 0. Чем больше учитывается групповых факторов, тем с большей степенью надежности может быть исключено отцовство (в настоящее время можно достичь вероятности 99%).

Группа крови А подразделяется на подгруппы А1 и А2. Основное различие между этими подгруппами заключается в том, что при смешивании с сывороткой анти-А эритроциты А1 агглютинируют быстрее и в большей степени, чем А2. На эритроцитах группы А2 имеется больше Н-структур, чем на эритроцитах А1. Примерно 80% лиц с группой крови А принадлежат к подгруппе А1, остальные 20% - к подгруппе А2. Практического значения для переливания крови это подразделение не имеет, так как трансфузионные реакции между подгруппами А1 и А2 выражены слабо и встречаются редко. Географическое распределение групп крови.

Более 40% жителей Центральной Европы имеют группу крови а, примерно 40% - группу 0; 10% или более - группу В и около 6% -группу АВ. У 90% коренных жителей Америки отмечена группа 0. Более 20% населения Центральной Азии имеют группу крови в. Исходя из данных о наличии и соотношении различных групп крови в тех или иных районах земного шара, антропологи могут делать выводы о происхождении и смешении народов.

Система Резус (Rh).

Большинство европейцев резус-положительны (Rh +). Это означает, что если их кровь смешать с сывороткой кроликов, предварительно иммунизированных эритроцитами макака - резус, то наступит агглютинация. Если же агглютинация не произойдет, то кровь считается резус-отрицательной. При переливании резус-положительной крови реципиенту резус-отрицательному в организме реципиента постепенно, в течение нескольких месяцев образуются агглютинины к эритроцитам Rh + . Резус-фактор эритроцитов.

Взаимодействие эритроцитов с антирезусной сывороткой обусловлено наличием в разных участках мембраны нескольких антигенов (неполные антигены). Важнейшие из них - С, D, Е, с, е. Наиболее выражены антигенные свойства у антигена D. Для простоты кровь, содержащую D-эритроциты, называют резус-положительной (Rh + или Rh); а кровь без таких эритроцитов -резус-отрицательной (Rh - или rh); 85% европейцев имеют кровь Rh +; 15% - Rh -. Фенотипу Rh + может соответствовать генотип DD или Dd; а фенотипу Rh - только генотип dd.

Одно из различий между системами резус и АВО, имеющее важное практическое значение, заключается в том, что агглютинины системы АВО всегда содержатся в крови человека уже после первых месяцев жизни, тогда как Rh - агглютинины появляются только полсе сенсибилизации: контакта резус-отрицательного индивида с резус-антигенами. Следовательно, при первом переливании резус-несовметимой крови явной реакции обычно не возникает. Реакции антиген-антитело появляются только при повторном переливании такой крови.

Другое различие между двумя системами состоит в том, что большинство резус-агглютининов представляет собой неполные антитела иммуноглобулинов класса G, размеры которых в отличие от размеров полных агглютининов системы АВО достаточно малы, чтобы они могли проникать через плацентарный барьер.

Резус-несовместимость и беременность. При беременности из крови резус-положительного плода в кровь резус-отрицательной матери могут проникать небольшие количества эритроцитов. Это приводит к выработке агглютининов против Rh+ - эритроцитов. Обычно лишь во время родов в кровь матери попадает большое количество (10-15 мл) эритроцитов плода. Поскольку титр антител возрастает в крови матери относительно медленно (в течение нескольких месяцев), при первой беременности осложнений обычно не возникает. Однако при второй беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом титр антител у нее в крови может достигать столь высокого уровня, что в результате проникновения агглютининов через плаценту эритроциты плода начинают разрушаться. Это приводит к серьзным нарушениям жизнедеятельности плода и даже к внутриутробной смерти (эритробластоз плода). Образование антител в организме резус-отрицательной женщины можно ограничить или полностью подавить путем так называемой анти-D-профилактики. Если непосредственно после родов (в том числе преждевременных) женщине ввести анти-D-глобулин, то резус-положительные эритроциты, проникшие в ее кровь, разрушатся и тем самым будет ликвидирован фактор, вызывающий выработку антител иммунной системой. Реакции антиген-антитело могут возникать и при несовместимости матери и плода по другим групповым признакам (в частности, АВО), однако такие реакции обычно бывают слабо выраженными.

Переливание крови.

Правила переливания крови:

1. Переливание изогруппной крови.

2. Определение групповой принадлежности по системе АВО.

3. Определение резус-принадлежности крови.

4. Определение индивидуальной совместимости крови.

5. Проведение биологической пробы.

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО.

1. Методстандартных сывороток - используются стандартные сыворотки первой, второй и третьей групп крови, которые содержат антитела соотвествующей группы: следовательно, в исследуемой крови определяем антигены.

2. Методстандартных эритроцитов - используются стандартные эритроциты второй и третьей групп, которые содержат соответствующие антигены (А, В); следовательно, в исследуемой крови определяют антитела.

3. Методцоликлонов - используются цоликлоны анти-А (альфа) и

анти-В (бета), это моноклональные антитела, в крови определяем

антигены. Определение резус-принадлежности крови.

1. Методантирезусных сывороток - используется антирезусная сыворотка, которую наслаивают по стенке пробирки, следом каплю крови, пробирку покачивают несколько минут, затем добавляют каплю физиологического раствора для исключения ложной агглютинации. Если агглютинация есть - резус положительный; при отсутствии агглютинации - резус отрицательный.

2. Методцоликлонов - цоликлон анти-D-cynep Определение индивидуальной совместимости крови,

1. Кровь донора смешивают с сывороткой реципиента. При наличии агглютинации кровь несовместима; при отсутствии - совместима.

2. Кровь реципиента смешивают с сывороткой донора. Оценка

результатов аналогична. Проведение биологической пробы.

Первые 45 мл крови переливают дробно: через 3 минуты по 15 мл и наблюдают за состоянием больного. Явления несовместимости:

чувство жара во всем теле, бледность кожных покровов, малый и частый пульс, снижение артериального давления; боли в животе, голове, пояснице; моча красно-коричневого цвета: «мясных помоев».

Эта система является основной, определяющей совместимость или несовместимость переливаемой крови. В нее входя два генетически детерминированных важных антигена: А и В - и два вида антител к ним, агглютинины а и в. Сочетания агглютиногенов и агглютининов определяют 4 группы системы АВО. Эта система единственная, где в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему антигену. Агглютиноген А у большинства людей является хорошо вы­раженным (обладает большой антигенной силой): с антителами анти-А (а) он дает резко выраженную реакцию агглютинации эритроцитов. Приблизительно у 12% лиц групп А(11) и AB(IV) антиген имеет слабые антигенные свойства, его обозначают как А2 антиген. Таким образом, имеется группа антигенов A: A1 (сильный) и более слабые А2, A3, А4 и др. О существовании слабых антигеном А следует помнить при определении групп крови, так как эрит­роциты с такими антигенами способны давать лишь позднюю и слабовыраженную агглютинацию, что может привести к ошиб­кам. Слабые разновидности антигена В встречаются очень редко. Антитела системы АВО а (анти-А) и в (анти-В) являются нормальным свойством плазмы крови, качественно не изменяющимся в течение жизни человека, а и в - это полные, холодовые анти­тела. В большинстве случаев они не обнаруживаются у новорожденных и появляются в течение первых трех месяцев жизни или даже года. Полного развития групповые агглютинины достигают к 18 годам, а в старости титр (уровень) их снижается, что наблю­дается также при иммунодефицитных состояниях. Кроме существующих в норме (естественных) групповых ангитсл а и в в ряде случаев возникают иммунные антитела анти-А и анти-В. Наиболее частой причиной этого является беремен­ность, при которой мать и плод имеют разные группы крови, чаще, если мать 1(0) группы, плод 11(A) или Ш(В). Определение группы крови необходимо для совместимого переливания крови. При этом необходимо придерживаться правила: эритроциты донора не должны содержать антигена, соответствующего антителам реципиента, т. е. А и а, В и в, так как иначе произойдет массивное разрушение введенных эрит­роцитов антителами больного - гемолиз, что может привести к смерти реципиента. Групповые антитела донора можно не учитывать, так как они разводятся плазмой реципиента. Следова­тельно, кровь группы O(I), не содержащую агглютиногенов, можно переливать людям с любой группой крови. Лица, имеющие 0(1) группу крови, считаются «универсальными до- норами». Кровь группы А(П) можно переливать реципиентам группы А(П) и группы AB(IV), не имеющей в плазме агглюти­нинов. Кровь группы В(Ш) может быть перелита лицам с группой В(Ш) и AB(IV).

Определение групп крови системы АВО производится сле­дующими методами.

I. Определение группы крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток. При этом способе в крови устанав­ливают наличие или отсутствие агглю­тиногенов и, исходя из этого, делают заключение о групповой принадлеж­ности исследуемой крови.

2. Определение группы крови пе­рекрестным способом, т. е. одновре­менно при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стан­дартных эритроцитов. При этом способе, так же как и при первом, определяют наличие или отсутст­вие агглютиногенов и, кроме того, при помощи стандартных эритроцитов устанавливают наличие или отсутствие групповых агглютининов.

3. Определение группы крови с помощью моноклональных антител (ЦОЛИКЛОНов).

ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУПП КРОВИ

Технические ошибки. Нарушение изложенных правил опредсления групп крови может привести к неправильной оценке ре­зультатов реакции. Отступлением от правил могут явиться:

Использование недоброкачественных стандартных сывороток или эритроцитов (истекший срок годности, загрязнение ими высыхание сывороток);

Перепутывание проб исследуемой крови;

Ошибочное расположение стандартных сывороток или фоцитов в штативах;

Ошибочный порядок нанесения стандартных реагентов на пластину;

Неправильное соотношение количества сыворотки и эритроцитов (не 10:1);

Исследование при температуре менее 15 °С (наступает холодовая агглютинация) или более 25 °С (происходит замедление агглютинации);

Несоблюдение времени, необходимого для проведения реакции (5 мин);

Не осуществляют добавление физиологического раствора с последующим покачиванием пластинки;

Не используют контрольную реакцию с сывороткой АВо(IV) группы;

Применение загрязненных или мокрых пипеток, палочек, пластин.

Во всех случаях нечеткого или сомнительного результата необходимо повторное определение группы крови перекрестным методом с использованием стандартных сывороток других серий.

Ошибки, связанные с биологическими особенностями исследуемой крови.

Неправильное определение группы А 2 и А 2 В. Эритроциты со слабым антигеном А с антисывороткой образуют мелкие, мед­ленно появляющиеся агглютинаты. Реакция может быть учтена как отрицательная, т. е. группа А 2 ошибочно регистрируется как О(1), а А 2 В - как В(Ш). Особенно велик риск такой ошибки при одновременном наличии технических погрешностей (нару­шено соотношение сыворотки и эритроцитов 10:1, температура выше 25 °С, учет результатов ранее 5 мин).

Ошибки, связанные с наличием неспецифической агглю- тинабельности исследуемых эритроцитов. Такое явление наблюдается у больных злокачественными опухолями, лейкозами, сепсисом, ожогами, циррозом печени, аутоиммунной гемолитиче­ской анемией и обусловлено диспротеинемией. Выявляет нали­чие неспецифической агглютинации контроль с сывороткой АВо (IV) группы. В этих случаях необходимо вновь определить групповую принадлежность перекрестным методом. В капли, где на­блюдается агглютинация, можно добавить подогретый до 37° физиологический раствор. При необходимости, можно отмыть теп­лым (37°) физиологическим раствором исследуемые эритроциты и вновь определить группу крови.

Ошибки, связанные с наличием экстраагглютининов. В сыворотке крови лиц групп А2(П) и A2B(IV) приблизительно в 1% случаев обнаруживают антитела к А1 антигену - а1. Это осложняег определение группы крови перекрестным методом, так как сыворотка таких лиц агглютинирует стандартные эритроциты А(П) группы, т. е. проявляет себя как сыворотка 0(1) группы.

При некоторых заболеваниях наблюдается снижение агглютинабельности эритроцитов, особенно группы А(П).

При иммунодефицитных состояниях у стариков наблюдается снижение уровня групповых агглютининов.

Во всех случаях получения сомнительного результата определение групповой принадлежности крови должно производиться повторно перекрестным методом с использованием сывороток более высокой активности.

18.Антигены системы резус. Группы системы резус. Клиническое значение. Методы определения антигенов резус и возможные ошибки.

Антигены резус являются вторыми по значению в трансфузионной практике после групп крови системы АВО В период активного внедрения в клинику гемотрансфузий значительно воз­росло число посттрансфузионных осложнений после повторныхпереливаний совместимой по антигенам АВО крови. В систему резус входят шесть антигенов, для обозначения которых парал­лельно используются двеноменклатуры: Винера (Rh 0 , rh", rh", Hr 0 , hr", hr"); Фишера и Рейса (D, С, E, d, с, e).

Rh 0 - D, rh" - C, rh" - E, Hr 0 - d, hr" - c, hr" - e.

Поскольку в этой системе наиболее активным является антиген Rho(D), его называют резус-фактором. Именно в зависимости от наличия или отсутствия этого фактора людей разделяют на резус-положительных (Rh+) и резус-отрицательных (Rh-). Такое деление принято только в отношении реципиентов. Антигены rh"(C) и rh"(E) менее активны, чем Rho(D), но к ним также могут вырабатываться антитела у людей, не содержащих антигенов С и Е в эритроцитах. Поэтому к эритроцитам резус отрицательных доноров требования более строгие. Эритроциты не должны содержать не только антиген D, но также и С и Е. Антигены Hro(d), hr"(c), hr"(e) характеризуются низкой активностью, хотя антитела hr"(c) могут быть причиной изоиммунологических конфликтов. У 1-3% резус-положительных лиц в эритроцитах имеет слабый вариант антигена D - D", который определяет наличие мелкой, сомнительной агглютинации при определении резуc- фактора. В этих случаях резус-принадлежность крови реципиента или беременной женщины указывают как резус-отрицательную(Rh-), а резус-принадлежность крови донора как резус-положительную (Rh+). Не допускается переливание крови с ангеном D u резус-отрицательным реципиентам. Формируются антигены резус на 8-10 неделе эмбриогенеза, причем антигенность их даже может превышать активность ан­тигенов у взрослых. Система резус в отличие от системы АВО не имеет естест­венных антител. Антитела антирезус возникают только после иммунизации резус-отрицательного организма в результате переливания резус-положительной крови или беременности резус-положительным плодом. В организме сенсибилизированных лиц антитела к резус-антигенам сохраняются несколько лет, иногда на протяжении всей жизни. В большинстве случаев титр антител антирезус постепенно снижается, но опять резко возрастает при повторном попадании в организм резус-положительной крови. Резус-антитела различаются по специфичности (анти-D, ан- III С и т. д.) и по серологическим свойствам (полные и непол­ные). Полные антитела вызывают агглютинацию эритроцитов в солевой среде при комнатной температуре. Для проявления агглютинации под действием неполных антител требуются особые условия: повышенная температура, коллоидная среда (желатин, сывороточный белок). Полные антитела (IgM) синтезируются в начале иммунной реакции и вскоре исчезают из крови. Неполные антитела (IgG, IgA) появляются позже, синтезируются долго и являются причиной развития гемолитической болсзни новорожденных, так как проходят через плаценту и повреждают клетки плода.

Определение резус-принадлежности крови

Метод определения резус-фактора зависит от формы резус-антител в стандартной сыворотке и способа ее изготовления. К сыворотке антирезус прикладывается сопроводительная инст­рукция с описанием того метода, для которого предназначена данная серия выдаваемой сыворотки.

При каждом исследовании для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус необходимо ставить контроль. Для контроля применяются стандартные резус-положительные эритроциты группы 0(1) или той же группы, что и исследуемая кровь, и стандартные резус-отрицательные эритроциты обязательно той же группы, что и исследуемая кровь.

При определении резус-принадлежности двумя сериями стан­дартных сывороток в тех случаях, когда они используются раз­ными методами, результат учитывается как истинный при совпадении его в обеих сериях исследований после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность каждой серии сыворотки антирезус, т. е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритро цитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы 0(1) и в контрольных пробах без сыворотки (реагента) антирезус. Если при определении резус-принаддеж ности наблюдается слабая или сомнительная реакция, то следует повторно исследовать кровь данного лица этими же и другими сериями сыворотки антирезус и желательно включить сыворотку содержащую полные антитела. Если при этом все серии сывороток, содержащих неполные антитела, дадут также слабую или сомнительную реакцию, а с полными антителами реакция будет отрицательная, это значит, что эритроциты содержат слабую paзновидность антигена резус, так называемый фактор D u . В этих случаях резус-принадлежность крови больного или беременной женщины указывают как резус-отрицательную (Rh-), a резус- принадлежность крови донора как резус-положительную (Rh+), не допуская таким образом переливания его крови резус-отрицательным реципиентам.

Определение резус-фактора можно проводить также следующими методиками.

Определение резус-фактора Rh 0 (D) реакцией конглютинации с применением желатина (в пробирке с подогревом до 46-48 °С).

Определение резус-фактора Rho(D) реакцией конглютинации в сывороточной среде на плоскости с подогревом.

Определение резус-фактора Rh 0 (D) реакцией агглютинации в солевой среде в маленьких пробирках. Реакция агглютинации в солевой среде пригодна для работы только с сывороткой, содержащей полные резус-антитела.

Определение резус-фактора Rh 0 (D) с помощью моноклональных антител.

Определение резус-фа ктора Rho(D) с помощью непрямой пробы Кумбса.

19 Анемии. Классификация и краткая характеристика. Этиология и патогенез анемий. Анемия (от греческого anemia - бескровие) - большая груп­па заболеваний, которая характеризуется снижением количества гемоглобина или гемоглобина и эритроцитов в единице объема крови. Анемии различны по этиологии, механизмам развития, клинико-гематологической картине, поэтому есть много различных классификаций, но они недостаточно совершенны. Л. И. Идельсон предложил рабочую классификацию анемий для врачей-клиницистов: 1) острые постгеморрагические анемии; 2) железодефицитные анемии; 3) анемии, связанные с нарушением синтеза или утилизации порфиринов (сидеробластные); 4) анемии, связанные с нарушением синтеза ДНК, РНК (мегалобластные); 5) гемолитические анемии; 6) анемии, связанные с угнетением пролиферации клеток костного мозга (гипопластические, апластические); 7) анемии, связанные с замещением кроветворного костного мозга опухолевым процессом (метапластические).

Анемия может быть как самостоятельным заболеванием, так и сопутствующим симптомом или осложнением некоторых внутренних болезней, инфекционных и онкологических заболевании. Бывают полифакторные анемии, т. е. смешанного генеза, например: гемолитическая анемия с дефицитом железа, апластическая анемия с гемолитическим компонентом и др.

В зависимости от:

1)величины цветового показателя различают анемии:

Нормохромные (цветовой показатель 0,9-1,1);

Гипохромные (цветовой показатель меньше 0,85);

Гиперхромные (цветовой показатель больше 1,15);

2)величины среднего диаметра эритроцитов:

Нормоцитарные (средний диаметр эритроцитов 7,2-7,5 мкм)

Микроцитарные (средний диаметр эритроцитов меньше 6,5 мкм),

Макроцитарные (средний диаметр эритроцитов больше 8,0 мкм),

Мегалоцитарные (средний диаметр эритроцитов равен больше 12 мкм);

3)величины среднего объема эритроцитов в фемтолитрах (фл, 1 фл равен 1 мкм 3):

Нормоцитарные (средний объем эритроцитов 87±5 фл);

Микроцитарные (средний объем эритроцитов меньше 80 фл);

Макроцитарные (средний объем эритроцитов больше 95 фл);

4) уровня ретикулоцитов в периферической крови.

Регенераторные (количество ретикулоцитов 0,5-5%);

Гиперрегенераторные (количество ретикулоцитов больше 5%);

Гипо- и арегенераторные (количество ретикулоцитов сни­жено или они отсутствуют, несмотря на тяжелое течение анемии).

Уровень ретикулоцитов является показателем регенераторной функции костного мозга в отношении эритропоэза.

К нормохромным анемиям относятся острые постгеморраги­ческие (в первые дни после кровопотери), гипо- и апластические, несфероцитарные гемолитические, аутоиммунные гемоли­тические, метапластические (при лейкозах, миеломной болезни и др.), а также анемии, развивающиеся при эндокринных нару­шениях (гипофункция надпочечников), болезнях почек, хрони­ческих инфекциях.

К гипохромным анемиям относятся железодефицитные, си- деробластные, некоторые миелотоксические, гемолитические (талассемия).

Гиперхромными бывают В12-(фолиево)-дефицитные, некото­рые гемолитические анемии (наследственный микросфероцитоз, если среди эритроцитов в мазке преобладают микросфероциты). Иногда витамин-В1 2 -дефицитная анемия бывает нормохромной.

К нормоцитарным относятся острые постгеморрагические, апластические, аутоиммунные гемолитические анемии и др.

К микроцитарным относятся железодефицитные, сидеробластпые анемии, к макроцитарным - вигамин-В12-(фолиево)-дефицитные анемии и др.

К регенераторным относят постгеморрагические анемии; к гиперрегенераторным - гемолитические анемии, особенно со­стояние после гемолитического криза; к гипо- и арегенераторным - гипопластические, апластические анемии.

Костный мозг реагирует на развитие железодефицитных, ге­молитических анемий раздражением, гиперплазией красного рост­ка. При гипопластических анемиях отмечается прогрессирующее падение эритропоэза вплоть до полного его истощения.

20.Лабораторная диагностика железонасыщенных и железоненасыщенных анемий. Железодефицитная анемия. Виды дефицита железа. Лабораторные тесты, отражающие дефицит железа в организме. Картина периферической крови и костного мозга при ЖДА. Лабораторная диагностика сидеробластных анемии. Обмен и роль железа в организме

Железо имеет большое значение для организма, входит в со­став гемоглобина, миоглобина, дыхательных ферментов. Оно распределяется по основным фондам.

Гемоглобиновый фонд. Железо гемоглобина составляет 60- 65% от общего содержания железа в организме.

Запасной фонд. Это железо ферритина и гемосидерина, кото­рые депонированы в печени, селезенке, костном мозге, мышцах. Составляет 30-40% от уровня железа в организме. Ферритин - водорастворимый комплекс трехвалентного железа и белка апоферритина, содержащий 20% железа. Представляет собой ла­бильную фракцию запасного фонда железа. При необходимости легко используется для нужд эритропоэза. Гемосидерин - не­растворимый в воде белок, по составу близок к ферритину, но содержит большее количество железа - 25-30%. Является ста­бильной, прочно фиксированной фракцией запасов железа в организме.

Транспортный фонд представлен железом, связанным с транспортным белком трансферрином. Составляет 1% от содер­жания железа в организме.

Тканевой фонд представлен железом железосодержащих фер­ментов (цитохромы, пероксидаза и др.), миоглобина. Составляет 1% от содержания железа в организме.

Общее содержание железа в организме взрослых равно 4-5 г. Оно поступает в организм с пищевым рационом. Содержится в продуктах животного и растительного происхождения (мясо, особенно говядина, печень, яйца, бобовые, яблоки, курага и др.). Железо всасывается гораздо лучше из продуктов животного про­исхождения, чем растительного, так как оно содержится в них в форме гема. Так, из мяса всасывается 20-25%, из рыбы - 11%, из растительных продуктов - 3-5% содержащегося в них железа. Всасыванию железа способствуют аскорбиновая кислота, орга­нические кислоты (лимонная, яблочная и др.), ингибируют вса­сывание танин, высокое содержание жира в рационе. Всасыва­ние железа из пищевых продуктов лимитировано. За сутки вса­сывается 2-2,5 мг железа, кратковременно после сильного кро­вотечения может всасываться до 3 мг железа. Основное количест­во железа всасывается в 12-перстной кишке и в начальной части тощей кишки. Малое количество железа может всосаться во всех отделах тонкого кишечника.

Всасывание железа происходит в два этапа: 1) слизистая обо­лочка кишечника захватывает железо, поступающее с пищевым рационом; 2) железо из слизистой оболочки кишечника перехо­дит в кровь, нагружается на трансферрин и доставляется к мес­там использования и в депо. Трансферрин также переносит железо из его фондов и клеток системы фагоцитирующих мононук леаров, в которых происходит деструкция эритроцитов, в костный мозг, где оно частично используется для синтеза гемоглобина, а частично откладывается в виде железа запасов, а также в другие места хранения железа. Обычно с железом связывается 1/3 часть трансферрина. Ее называют связанным трансферрином или сы­вороточным железом. В норме содержание железа в сыворотке у мужчин и женщин составляет, соответственно, 13-30 и 12-25 мкмоль/л. Часть трансферрина, не связанную с желе­зом, называют свободным трансферрином или ненасыщенной, латентной железосвязывающей способностью сыворотки. Мак­симальное количество железа, которое мог бы присоединить трансферрин до своего насыщения, обозначают как общую железосвязывающую способность сыворотки (ОЖСС) (в норме 30-85 мкмоль/л). Разница между показателями ОЖСС и сывороточным железом отражает латентную железосвязывающую способ­ность, а отношение сывороточного железа к ОЖСС, выраженное в процентах, отражает процент насыщения трансферрина желе­зом (норма 16-50%). Для суждения о величине запасов железа и организме проводят:

Исследование уровня ферритина в сыворотке радиоимун ными методами;

Десфераловый тест. Десферал (десфероксамин) является комплексоном, который после введения в организм избира­тельно связывается с железом запасов, т. е. с железом ферри­тина, и выводит его с мочой. Больному однократно внутри­мышечно вводят 500 мг десферала, собирают суточную мочу и определяют в ней содержание железа. После введения десферала с мочой в норме выводится от 0,8 до 1,2 мг железа, в то время как у больных железодефицитной анемией или при на­личии скрытого дефицита железа количество выделяемого е мочой железа резко снижается;

Подсчет в пунктате костного мозга количества сидеробла- стов, а в периферической крови - сидероцитов. Сидеробласты - это нормобласты, т. е. ядросодержащие клетки красного ряда, в цитоплазме которых выявляются синего цвета гранулы железа запасов - ферритина. В норме 20-40% нормобластов являются сидеробластами. Сидероциты - это эритроциты, в которых обнаруживаются гранулы ферритина. В норме в периферической кровг: до 1% сидероцитов. Гранулы ферритина в сидеробластах и сидероцитах выявляются при специальной окраске берлинской лазурью.

Организму свойственны физиологические потери железа с мочой, калом, желчью, слущившимися клетками слизистой ки шсчника, с потом, при стрижке волос, ногтей. Женщины теряют железо с месячными.

Развитию железодефицитной анемии предшествует скрытый (латентный) дефицит железа. У больных появляются жалобы и клинические признаки, характерные для железодефицитной пиемии, но менее выраженные (слабость, умеренная бледность кожных покровов и видимых слизистых оболочек, головные боли, сердцебиение, часто извращение вкуса и обоняния, сухость кожи, ломкость ногтей и др.). При обследовании еще не обна­руживается изменений в содержании гемоглобина, эритроцитов и других показателей периферической крови. Но выявляются нарушения в обмене железа: снижается сывороточное железо, Повышаются общая и латентная железосвязывающие способности сыворотки, уменьшается процент насыщения трансферрина, снижается уровень железа запасов. Это сидеропения без анемии. Скрытый дефицит железа может развиться в любом возрасте, особенно часто им страдают женщины, подростки и дети. Если скрытый дефицит железа не компенсируется, а углубляется, раз­минается железодефицитная анемия.