Seroloji qan testi nə göstərir? Diaqnostik tədbirlər hər hansı bir xəstəliyin müalicəsində ən vacib mərhələdir. Müalicənin müvəffəqiyyəti yalnız təyin olunan dərmanlardan deyil, həm də diaqnozun nə qədər düzgün qoyulmasından asılıdır.

Bundan əlavə, diaqnostika fəsadların və müşayiət olunan xəstəliklərin qarşısını ala bilər. Xəstənin qanının seroloji analizinin köməyi ilə antikorların və antigenlərin olması aşkar edilir. Tədqiqat bir çox xəstəlikləri tapmağa, onların mərhələsini təyin etməyə və müalicə kursunu idarə etməyə kömək edir.

Serologiya nədir?

Serologiya, antigenlərin antikorlara reaksiyasını öyrənən immunologiyanın bir sahəsidir. Təbabətin bu sahəsi qan plazmasının və onun immunoloji xüsusiyyətlərinin öyrənilməsi ilə məşğul olur.

Bu gün anticisimlər üçün seroloji qan testi insanın immun çatışmazlığı virusu, hepatit, brusellyoz, CYBH və digər həyati təhlükəsi olan xəstəlikləri aşkar etmək üçün etibarlı üsuldur. Hansı hallarda təyin olunduğunu anlayaq.

Təyinat üçün göstərişlər

Diaqnoz qoymaqda çətinlik yarandıqda xəstəliyin törədicisini müəyyən etmək üçün seroloji qan testi lazımdır.

Bu reaksiyanı həyata keçirmək üçün patogenlərin antigenləri plazmaya yeridilir və sonra laborant davam edən prosesi öyrənir. Və ya əks reaksiya həyata keçirirlər: patogenin xüsusi mənsubiyyətini müəyyən etmək üçün yoluxmuş qana antikorlar yeridilir.

Tətbiq sahəsi

Bu tədqiqat tibbin müxtəlif sahələrində istifadə olunur. Bu reaksiyanın köməyi ilə infeksiyalara və viruslara qarşı mübarizə aparmaq üçün orqanizm tərəfindən istehsal olunan xüsusi hüceyrələr və antikorlar aşkar edilir.

Bundan əlavə, seroloji üsuldan istifadə edərək, bir insanın qan qrupu müəyyən edilir.

Bənzər bir seroloji qan testi ginekologiyada cinsi yolla keçən xəstəliklərin diaqnozu üçün istifadə olunur. Bu üsul hamilə qadınların hərtərəfli müayinəsi (toksoplazmoz, HİV, sifilis və s. aşkarlanması) üçün də tətbiq olunur. Antenatal klinikada qeydiyyatdan keçərkən bu testdən keçmək məcburidir.

Uşaqlarda "uşaq" adlanan xəstəliklərin (suçiçəyi, qızılca, məxmərək və s.) diaqnozunu təsdiqləmək üçün simptomların açıq təzahürləri olmadığı və xəstəliyi müəyyən etmək mümkün olmadığı təqdirdə seroloji testdən istifadə olunur. klinik göstəricilərin təhlili.

Zöhrəvi xəstəliklərin aşkarlanması

Venereoloqlar üçün bu test həqiqətən əvəzolunmazdır və çox dəqiq bir diaqnoz qoymağa imkan verir.

Bulanık bir klinik mənzərə ilə sifilis, giardiasis, ureaplazmoz, xlamidiya, herpes və digər xəstəliklər üçün seroloji qan testi antikorların varlığını tez bir zamanda müəyyən etməyə imkan verir.

Viral və yoluxucu xəstəliklər

Seroloji analiz qastroenteroloqlar, hepatoloqlar və yoluxucu xəstəliklər üzrə mütəxəssislər tərəfindən viral hepatitin diaqnostikası üçün fəal şəkildə istifadə olunur.

Seroloji qan testinin deşifr edilməsi xəstəliyin gedişatının mərhələsini təyin etməyə və hazırda xəstəxanaya yerləşdirmənin nə qədər lazım olduğu sualına cavab verməyə imkan verir. Necə düzgün hazırlamaq olar?

Analizin çatdırılmasına hazırlıq

Seroloji qan testləri həm dövlət, həm də ticarət klinikalarında aparılır. Müasir avadanlıqlara və ixtisaslı kadrlara malik laboratoriyaya üstünlük verilməlidir.

Tədqiqat üçün bioloji nümunələr tüpürcək və nəcis ola bilər, lakin əksər hallarda xəstənin venoz qanı istifadə olunur. Seroloji test üçün qan laboratoriyada kubital venadan alınır. Testdən keçməzdən əvvəl bu prosedura hazırlaşmaq üçün həkiminizlə məsləhətləşməlisiniz.

Seroloji tədqiqat üçün analizin çatdırılmasına hazırlaşmaq üçün bir neçə sadə qaydaya əməl etməlisiniz.

Qan yeməkdən əvvəl sakit bir vəziyyətdə, yəni boş bir mədədə alınır. Bundan əvvəl, rentgen, ultrasəs və s. kimi digər tədqiqatlardan keçməməlisiniz.

Qan vermədən bir neçə həftə əvvəl antibakterial və bəzi digər dərmanların istifadəsini istisna etmək lazımdır. Bu vəziyyətdə müəyyən tövsiyələr testin aparıldığı xəstəlikdən asılıdır. Məsələn, hepatit testi prosedurdan 48 saat əvvəl yağlı qidalardan və spirtdən qaçınmağı nəzərdə tutur.

Floresans reaksiyası

Seroloji reaksiyaların növləri arasında flüoresan reaksiya var. Bu texnika qan serumunda antikorları vurğulayan reagentdən istifadə edir.

Birbaşa tipli seroloji reaksiyanın qurulması xüsusi antikorların flüoresan maddə ilə etiketlənməsini nəzərdə tutur. Bu reaksiya ən sürətlidir və bir addımda həyata keçirilir.

Belə bir analizin aparılması üçün başqa bir seçim dolayı və ya RNIF adlanır. İki mərhələdə həyata keçirilir. Birinci mərhələdə antikorlar flüoresan etiketlərlə etiketlənmir, ikincidə isə müvafiq olaraq etiketlənmiş antikorlar antigenləri və antikorları aşkar etmək üçün istifadə olunur. Lüminesans yalnız müəyyən bir antikora bağlandıqdan sonra baş verir.

Seroloji qan testi nə göstərir? Bütün prosedurun nəticəsi radiasiya gücünü təhlil edən, tədqiq olunan obyektin forma və ölçüsünü aşkar edən xüsusi cihaz tərəfindən qiymətləndirilir. İnfeksion xəstəliklərin törədiciləri patologiyanın növü və mərhələsindən asılı olaraq etibarlılığı 90-95% olan nəticə ilə aşkar edilir.

Bağlı immunosorbent analizi

Bu növ serologiyada unikal, sabit reagentlərdən istifadə edilir. İşarələnmiş maddələr sanki arzu olunan antikorlara yapışır. Nəticədə, biz keyfiyyət və ya kəmiyyət nəticə əldə edirik.

Heç bir ifadə işarəsi tapılmazsa, nəticə mənfi hesab ediləcək. Keyfiyyətli tədqiqat zamanı bioloji nümunələrdə antikorların olması aşkar edilərsə, analizin nəticəsi müsbət hesab olunur. Hüceyrələrin miqdarını təyin edərkən analiz daha dəqiq nəticə verir.

Təhlilin göstəricilərini (məsələn, aşkar edilmiş hüceyrələrin miqdarı) təhlil edərək, mütəxəssis xəstəliyin başlanğıc mərhələsində, kəskin mərhələdə olduğunu və ya patologiyanın xroniki formasının ağırlaşdığını müəyyən edir. Diaqnoz qoymaq üçün həkim yalnız seroloji tədqiqatın məlumatlarını deyil, həm də xəstəliyin klinik mənzərəsini nəzərə alır.

Bu testin xüsusiyyətləri

Bu analizin aparılması həmişə müəyyən bir xəstəliyin aşkarlandığına 100% əminlik verə bilmir. Belə olur ki, nəticələr qeyri-müəyyən ola bilər və digər prosedurlar tələb olunur.

Məsələn, brusellyoz üçün test zamanı zərdabın antigen olmadan özünü saxlaması yoxlanılır. Bu, testin etibarlılığını əhəmiyyətli dərəcədə artırır. Brusellyoz üçün analiz müsbət və ya mənfi ola bilər, həmçinin şübhə doğurur.

Birmənalı şərhə malik olmayan şübhəli nəticələr əldə etsəniz, təhlili təkrar etmək tövsiyə olunur. Bundan əlavə, brusellyoz qan kulturaları, sümük iliyi və onurğa beyni mayesinin müayinəsi ilə müəyyən edilə bilər.

Seroloji qan testinin üstünlükləri

Müasir tibb praktikasında seroloji testlərdən istifadə edərək diaqnostik üsullardan geniş istifadə olunur. Bu, xüsusilə tez-tez viral və yoluxucu patologiyaları təyin edərkən edilir.

Eyni testlər infeksiyanın epidemioloji yayılmasının qarşısını almaq üçün coğrafi skrininq və tibbi müayinə zamanı istifadə olunur.

Metodun üstünlüklərinə aşağıdakılar daxildir:

• Yüksək səviyyədə güvən.
• Sürətli cavab və nəticələr. RSC-nin nəticələri 24 saat ərzində məlum olur. Xüsusi bir vəziyyətdə, bir xəstəxana şəraitində, analiz bir neçə saat ərzində hazır olacaq.
• Xəstəliyin inkişafının və terapiyanın effektivliyinin monitorinqi.
• Xəstələr üçün aşağı qiymət və əlçatanlıq.

Metodun mənfi cəhətləri

Bununla belə, seroloji tədqiqatların da çatışmazlıqları var.

Bunlara daha etibarlı bir şəkil əldə etmək üçün analiz zamanı xəstəliyin inkubasiya dövrünü nəzərə almaq lazımdır.

Məsələn, birinci və ya ikinci növ herpes simplexinin təyini yalnız infeksiya anından 14 gün sonra mümkündür. İmmun çatışmazlığı virusunun olması üçün analiz 30 gündən sonra, 90 gündən sonra və yoluxmuş şəxslə təmasdan sonra altı aydan sonra aparılır.

Əlbəttə ki, nəticələrin etibarlılığına insan faktoru da təsir edə bilər: qan nümunəsinin götürülməsinə hazırlıq qaydalarına laqeyd yanaşma və ya reaksiya zamanı laborantın səhvi.

Statistikaya görə, 5% hallarda səhv nəticə əldə edilə bilər. Təcrübəli həkim, xəstəni müayinə edərkən, klinik mənzərəni öyrənərək, əksər hallarda edilən səhvi hesablaya bilər.

Sifilis üçün analiz laboratoriya testləri arasında ən çox görülənlərdən biridir. Profilaktik müayinələr zamanı sifilis üçün testlər geniş istifadə olunur. Mikroskopiyanın köməyi ilə sifilisin törədicisi aşkar edilir -. Seroloji reaksiyaların köməyi ilə sifilis diaqnozu təsdiqlənir, gizli sifilis diaqnozu qoyulur, müalicənin effektivliyinə nəzarət edilir, xəstələrin sağalma sürəti müəyyən edilir.

Sifilisin diaqnozu klinik məlumatlar, material nümunələrində sifilisin törədicilərinin aşkar edilməsi və seroloji tədqiqat üsulları ilə diaqnozun təsdiqi əsasında qoyulur. Sifilisin təzahürləri çoxsaylı və müxtəlifdir, buna görə də xəstəlik müxtəlif ixtisasların həkimləri tərəfindən aşkar edilir. Birincili sifilisin differensial diaqnostikası bir sıra xəstəliklərlə aparılır.

düyü. 1. Fotoda sifilisin ilkin təzahürü sərt bir şansdır.

Solğun treponemaya qarşı anticisimlər və seroloji diaqnostika

Sifilislə yoluxduqda xəstənin bədənində antikorlar əmələ gəlir. Seroloji diaqnostika həkimə xəstəliyin ilkin mərhələlərində, müalicə müddətində və başa çatdıqdan sonra sifilisli bir xəstənin bədənində antikorların əmələ gəlməsinin dinamikasını öyrənməyə, xəstəliyin təkrarlanması məsələsini həll etməyə kömək edir. xəstə və ya təkrar infeksiya (yenidən infeksiya), kütləvi tibbi şəraitdə sifilisin diaqnozu üçün.

Solğun treponemaya qarşı antikorlar IgM

IgM antikorları infeksiyadan sonra ilk olaraq istehsal olunur. Onlar infeksiyadan sonra ikinci həftədən etibarən seroloji reaksiyalar vasitəsilə aşkar edilməyə başlayır. Xəstəliyin 6-9 həftəsində onların sayı maksimum olur. Əgər xəstə müalicə olunmayıbsa, onda antikorlar altı aydan sonra yox olur. IgM antikorları 1-2 aydan sonra yox olur. sonra, 3-6 aydan sonra. - gec sifilisin müalicəsindən sonra. Onların böyüməsi qeydə alınırsa, bu, təkrar infeksiyaya xidmət edir və ya göstərir. IgM molekulları böyükdür və plasentadan fetusa keçmir.

Solğun treponemaya qarşı antikorlar IgG

Antikor immunoqlobulinləri IgG infeksiya anından birinci ayın sonunda (4-cü həftədə) görünür. Onların titri IgM titrindən yüksəkdir. Müalicədən sonra IgG kifayət qədər uzun müddət davam edir.

Qeyri-spesifik antikorlar

Bir çox seroloji reaksiyalar var. Bu, solğun treponemanın antigen çoxluğu ilə əlaqədardır. Sifilisin müxtəlif mərhələlərində xəstə insanın qan zərdabında spesifikdən əlavə müəyyən qeyri-spesifik anticisimlər əmələ gəlir - aqqlütininlər, komplementləri fiksasiya edən, immobilizinlər, immun floresanya səbəb olan anticisimlər, presipitinlər və s. Qeyri aşkar etmək üçün seroloji reaksiyalar. -spesifik antikorların nisbi spesifikliyi var, buna görə də diaqnostik səhvlərin qarşısını almaq üçün bir deyil, seroloji reaksiyalar kompleksindən (CSR) istifadə etməlisiniz.

Sifilis üçün yanlış müsbət testlər

Qeyri-treponemal testlərin fərqli bir xüsusiyyəti yanlış müsbət reaksiyaların istehsalıdır. İnsan qanında kardiolipin antigeninə qarşı əmələ gələn reagin anticisimləri təkcə sifilisdə deyil, digər xəstəliklərdə də qeydə alınır: kollagenoz, hepatit, böyrək xəstəlikləri, tirotoksikoz, xərçəng, yoluxucu xəstəliklər (cüzam, vərəm, brusellyoz, malyariya, tif). ), skarlatina), hamiləlik və menstruasiya zamanı, yağlı qidalar və spirt qəbul edərkən. Qeyd olunur ki, yaş artdıqca yalançı müsbət reaksiyaların sayı artır.

düyü. 2. Şəkildə qadınlarda ilkin sifilis göstərilir.

Seroloji testlərdən istifadə edərək sifilisin laboratoriya diaqnostikası

Sifilis üçün seroloji testlər treponemal və qeyri-treponemal bölünür.

1. Qeyri-treponemal testlər

Bu testlər qrupunda antigen kimi kardiolipin antigeni istifadə olunur. Sifilisin törədicilərinin lipid antigenləri ən çox saydadır. Onlar hüceyrənin quru kütləsinin 1/3 hissəsini təşkil edir. Qeyri-treponemal testlərin köməyi ilə kardiolipin antigeninə qarşı istehsal olunan reagin antikorları aşkar edilir. Bu qrupa komplementlərin fiksasiya reaksiyası (RSKkard), mikroçökmə reaksiyası (RMP), plazma reaginlərinin sürətli təyini (RPR) və s. və kəmiyyət variantında nəticə əldə etmək imkanı müalicənin effektivliyinə nəzarət etmək üçün bu testlərdən istifadə etməyə imkan verir. Qeyri-treponemal testlər üzrə müsbət nəticələr treponemal testlərlə təsdiq edilməlidir. Qeyri-treponemal testlərin fərqli bir xüsusiyyəti yanlış müsbət reaksiyaların istehsalıdır.

2. Treponemal testlər

Treponemal testlərdə solğun treponema mədəniyyətindən təcrid olunmuş treponemal mənşəli antigenlərdən istifadə edilir. Onların köməyi ilə qeyri-treponemal testlərin müsbət nəticələri təsdiqlənir. Qrupa daxildir: RSKtrep - komplementin fiksasiyası reaksiyası, RİF - immunofluoressensiya reaksiyası və onun modifikasiyaları, RİT, RIBT - solğun treponema immobilizasiya reaksiyası, RPHA - passiv hemaqlütinasiya reaksiyası, ELISA - ferment immunoanalizi.

3. Rekombinant antigenlərdən istifadə edərək sifilis üçün testlər

Bu qrup testlər üçün antigenlər gen mühəndisliyi ilə əldə edilir və reaksiyalarda - TPHA və ELISA, immunoblotinq (IB) analizlərində və immunokromatoqrafik analizlərdə istifadə olunur.

düyü. 3. Sifilisin diaqnozu üçün bir sıra seroloji testlərdən istifadə olunur.

Qeyri-treponemal testlərdən istifadə edərək sifilisin diaqnozu

Sifilisin aşkarlanması üçün qeyri-treponemal testlər və ya seroloji reaksiyalar kompleksi (CSR) istifadə olunur. Seroloji diaqnostika yoluxma anından 5-ci həftədən və ya başlanğıcdan 2-3 həftə sonra tətbiq olunacaq. Antikorlar təzə ilkin olan demək olar ki, bütün xəstələrdə aşkar edilir. Seroloji reaksiyalar 70 - 80% xəstələrdə, üçüncü dərəcəli gizli sifilisli xəstələrdə 50 - 60% hallarda müsbətdir.

Qeyri-treponemal testlərdən istifadə edilən seroloji reaksiyalar yanlış müsbət nəticələr verə bilər.

düyü. 4. Sifilis üçün test üçün qan nümunəsi.

Komplement fiksasiya reaksiyası (RSK kartı, KA ilə KSK, Vasserman reaksiyası)

100 ildən çox əvvəl A. Vasserman tərəfindən icad edilmiş Vasserman reaksiyası (RW, РВ), bu gün bir çox dəyişikliklərə məruz qalmışdır, lakin ənənəyə hörmət olaraq, adını bu günə qədər saxlamışdır. Kardiolipin antigenindən istifadə edərək tamamlayıcı fiksasiya testi yalnız antikorları aşkar etmək üçün deyil, həm də zərdabın müxtəlif seyreltmələri ilə kəmiyyətcə həyata keçirilir ki, bu da müalicənin effektivliyinə nəzarət etmək üçün istifadə etməyə imkan verir. Aşağı həssaslıq və spesifiklik, yanlış müsbət nəticələr əldə etmək bu tip tədqiqatın mənfi cəhətləridir.

Vasserman reaksiyasının mahiyyəti belədir: Vasserman reaksiyasının formalaşmasında istifadə olunan antigenlər insan qanında sifilisin törədicilərinə qarşı anticisimlər olduqda, kompliment vasitəsi ilə onlara bağlanır və çökür. Reaksiya intensivliyi (+) işarəsi ilə göstərilir. Reaksiya mənfi (-) ola bilər - çöküntü yoxdur, şübhəli (kiçik çöküntü və ya +), zəif müsbət (++), müsbət (+++) və kəskin müsbət (++++).

Daha həssas modifikasiya edilmiş Wassermann reaksiyasıdır - Kolmer reaksiyası. Onun köməyi ilə, Wasserman reaksiyasının mənfi nəticə verdiyi seralarda antikorlar aşkar edilir.

Kəskin müsbət reaksiyalarla reaginlərin kəmiyyət təyini aparılır, bunun üçün serum 1:10-dan 1: 320-ə qədər seyreltmələrdə istifadə olunur ki, bu da müalicənin effektivliyini izləmək üçün bu növ tədqiqatdan istifadə etməyə imkan verir. Məsələn, antikor titrinin azalması və onların sonrakı seroneqativliyi (mənfi nəticələrin əldə edilməsi) xəstəliyin uğurlu müalicəsini göstərir.

düyü. 5. Sifilis üçün qan testi - Wasserman reaksiyası.

Yağış mikroreaksiyası (MPR)

Yağış mikroreaksiyasından müəyyən əhali qruplarının kütləvi müayinəsi, sifilis diaqnozu və müalicənin effektivliyinə nəzarət üçün istifadə olunur. Bu növ tədqiqatı aparmaq üçün öyrənilən materialın az miqdarı tələb olunur. Çöküntünün mikroreaksiyası immunoloji antigen-antikor reaksiyasına əsaslanır. Subyektin qan serumunda antikorların olması halında, antigen-antikor kompleksi lopa əmələ gəlməsi ilə çökür. Reaksiya xüsusi şüşə boşqabın quyularında aparılır. Vasserman reaksiyası kimi çökən çöküntünün intensivliyi və lopaların ölçüsü (+) ilə qiymətləndirilir. Hamilə qadınları müayinə edərkən, donorlar və müalicənin effektivliyini izləmək üçün istifadə edilmir. VDRL və RPR mikroreaksiya növləridir.

düyü. 6. Şüşə üzərindəki damcıda çökmə reaksiyasının görünüşü.

düyü. 7. Sifilis üçün qan testi - mikropresipitasiya reaksiyası.

düyü. 8. Plazma reaginlərinin sürətli təyini üçün dəst (sifilis RPR üçün test).

Qeyri-spesifik seroloji reaksiyalar zamanı əldə edilən bütün müsbət testlər spesifik reaksiyalarla - treponemal testlərlə təsdiqlənməyi tələb edir.

Treponemal testlərdən istifadə edərək sifilisin diaqnozu

Treponemal testlər apararkən treponemal mənşəli antigenlərdən istifadə olunur. Onların mənfi tərəfi müalicənin effektivliyinə nəzarət etmək üçün istifadənin qeyri-mümkün olması, spiroketoz və zöhrəvi olmayan treponematozlarda müsbət nəticələr əldə edilməsi, onkoloji xəstəliklər, cüzam və bəzi endokrin patologiyalarda yalançı müsbət nəticələr əldə edilməsidir. RPHA, ELISA və RIF kimi testlər sifilis sağaldıqdan sonra uzun illər, bəzi hallarda isə ömürlük müsbət qalır.

RIBT və RIF sifilis diaqnozu üçün istifadə edilən bütün seroloji testlərdən ən spesifikdir. Onlar yalan müsbət reaksiyaları ayırd etməyə, mənfi reaksiyalarla baş verən sifilisin gec formalarını müəyyən etməyə imkan verir. RIBT köməyi ilə hamilə qadınlarda yanlış müsbət reaksiyalar uşağın infeksiyası məsələsini həll etmək lazım olduqda tanınır.

Treponema solğun immobilizasiya reaksiyası (RIBT, RIT)

Reaksiyanın mahiyyəti ondan ibarətdir ki, xəstənin qan zərdabında olan anticisimlər solğun treponemanı hərəkətsizləşdirir. Patogenlərin 20% -ə qədər immobilizasiyası ilə reaksiya mənfi, zəif müsbət - 21 - 50%, müsbət - 50 - 100% hesab olunur. RIBT bəzən yanlış müsbət nəticələr verir. Test mürəkkəbdir və çox vaxt aparır, lakin xəstəliyin gizli formalarının differensial diaqnostikası və seroloji reaksiyaların, o cümlədən hamilə qadınlarda yanlış müsbət nəticələrinin olması üçün zəruridir. RIBT ikincili, erkən və gec sifilisdə 100% müsbət nəticə verir, 94 - 100% hallarda - sifilisin digər formalarında.

İmmunofluoressensiya reaksiyası (RIF)

Reaksiyanın mahiyyəti ondan ibarətdir ki, solğun treponemalar (antigenlər), floroxromlarla işarələnmiş antikorlarla birləşərək flüoresan mikroskopda sarı-yaşıl parıltı verir. Nəticə (+) işarəsi ilə qiymətləndirilir. RİF-in köməyi ilə A sinfi immunoqlobulinlər aşkar edilir.İmmunofluoressensiya reaksiyası Vasserman reaksiyasından tez müsbət olur. İkincili və gizli sifilisdə həmişə müsbət, 95-100% hallarda üçüncü və anadangəlmə sifilisdə müsbət olur. Bu tip tədqiqatın aparılması texnikası RIBT-dən daha sadədir, lakin RIF-i RIBT ilə əvəz etmək mümkün deyil, çünki bu reaksiya spesifiklik baxımından RIBT-dən daha aşağıdır. RIF-10 (RIF modifikasiyası) daha həssasdır, RIF-200 və RIF-abs daha spesifikdir.

düyü. 9. Sifilis üçün qan testi - immunofluoressensiya reaksiyası (RIF).

Treponema solğun immun yapışma testi (TRIPBT)

Reaksiyanın mahiyyəti ondan ibarətdir ki, komplementin iştirakı ilə xəstənin zərdabında həssaslaşan solğun treponemalar eritrositlərin səthinə yapışır. Alınan komplekslər sentrifuqa zamanı çökür. Bu testin həssaslığı və spesifikliyi RIF və RIBT-ə yaxındır.

Sifilis üçün fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi (ELISA)

ELISA-nın köməyi ilə M və G sinif immunoqlobulinləri təyin olunur.Skrininq və təsdiqedici test kimi IgM - ELISA üsulundan istifadə etmək olar. ELISA həssaslığı və spesifikliyi RIF-ə bənzəyir. Sifilis ilə ELISA infeksiyanın üçüncü ayından müsbət nəticələr verir və kifayət qədər uzun müddət (bəzən ömür boyu) müsbət qalır.

düyü. 10. ELISA analizatoru.

Passiv (dolayı) hemaqlütinasiya reaksiyası (RPHA)

TPHA, solğun treponema antigenlərinin adsorbsiya olunduğu eritrositlərin xəstənin serumunun iştirakı ilə bir-birinə yapışma qabiliyyətinə (hemaqlütinasiya) əsaslanır. RPHA latent də daxil olmaqla sifilisin bütün formalarının diaqnostikasında istifadə olunur. Yüksək keyfiyyətli antigen istifadə edərkən, bu tip seroloji reaksiya spesifiklik və həssaslıq baxımından bütün digər testləri üstələyir.

düyü. 11. RPHA sifilisin bütün formalarının diaqnostikasında istifadə olunur.

düyü. 12. Sifilis üçün analiz - passiv (dolayı) hemaglutinasiya reaksiyası (sxem).

düyü. 13. Sınaq borusunun bütün dibini tutan ters çevrilmiş çətirin görünüşü müsbət reaksiyadan xəbər verir. Eritrositlər sınaq borusunun dibinin ortasındakı bir sütunda ("düymə") yerləşdikdə, mənfi reaksiyadan danışırlar.

düyü. 14. Laboratoriya şəraitində RPGA testi.

Mikrobioloji diaqnostika

Seroloji diaqnostika ilə yanaşı, solğun treponemaların aşkarlanması üsulu (mikrobioloji diaqnostika) xüsusilə seroneqativ sifilis dövründə, qanda hələ də antikorların olmadığı, lakin təzə ilkin sifilisin ilk təzahürləri artıq mövcud olduqda mühüm rol oynayır ( ağır şans).

Tədqiqat üçün bioloji material sərt xoraların (şankrların) səthindən axıntı, püstüler sifilidlərin məzmunu, ağlayan və eroziv papüllər, yoluxmuş limfa düyünlərinin nöqtələri, serebrospinal maye və amniotik maye və PCR üçün qandır.

Sifilisin törədicilərini aşkar etməyin ən yaxşı üsulu mikroskopun qaranlıq sahəsində bioloji materialın öyrənilməsidir. Bu texnika solğun treponemanı canlı vəziyyətdə görməyə, onun quruluş və hərəkət xüsusiyyətlərini öyrənməyə, patogen patogenləri saprofitlərdən ayırmağa imkan verir.

düyü. 15. Sifilis üçün analiz - qaranlıq sahə mikroskopiyası.

düyü. 16. Quru yaxmaların öyrənilməsi zamanı Romanovski-Giemsa boyanmasından istifadə olunur. Solğun treponemalar çəhrayı, bütün digər növ spiroketlər bənövşəyi olur.

Qaranlıq sahə mikroskopiyası ilə solğun treponemaların aşkarlanması sifilisin yekun diaqnozu üçün mütləq meyardır.

düyü. 17. Bakteriyaları aşkar etmək üçün immunofluoressensiya reaksiyası (RIF) istifadə olunur - treponemal test. Spesifik antigen-antikor kompleksi flüoresan mikroskopun işığında flüoroxrom ilə işarələnmiş spesifik serumla birləşdirildikdə bakteriyalara yaşılımtıl parıltı verir.

düyü. 18. Levaditi üsulu ilə hazırlanmış yaxmalarda (gümüş hopdurma) sifilisin törədiciləri aydın görünür. Yoluxmuş toxumaların hüceyrələrinin sarı rəngə boyanması fonunda solğun qaranlıq treponemalar.

düyü. 20. Şəkildə solğun treponema koloniyası göstərilir. Bakteriyaların mədəniyyətini əldə etmək çətindir. Onlar praktiki olaraq süni qida mühitində böyümürlər. At və dovşan serumu olan mühitlərdə 3-9-cu günlərdə koloniyalar görünür.

Sifilis üçün PCR

Bu gün effektiv və perspektivli polimeraza zəncirvari reaksiya texnikasıdır. Sifilis üçün PCR bir neçə saat ərzində nəticə əldə etməyə imkan verir və diaqnoz üçün toplanmış materialda ən azı bir neçə patogen ola bilər.

düyü. 21. Sifilis üçün PCR DNT və ya onun solğun treponema fraqmentlərini aşkar etməyə imkan verir.

Bu tədqiqat metodunun həssaslığı bioloji materialda solğun treponemanın olmasından asılıdır və 98,6%-ə çatır. Bu testin spesifikliyi əsasən diaqnostika zamanı gücləndirmə üçün hədəfin düzgün seçilməsindən asılıdır və 100% -ə çatır.

Eyni zamanda, sifilis və PCR diaqnostikasının birbaşa üsullarının həssaslığının və spesifikliyinin kifayət qədər öyrənilməmiş müqayisəli xüsusiyyətlərinə görə, Rusiya Federasiyasında xəstəliyin diaqnozu üçün bu müayinə üsulu hələ də təsdiqlənməmişdir.

İİV-ə yoluxmuş xəstələrdə seroloji üsullardan istifadə edərək sifilisin diaqnozu çətin olduqda, anadangəlmə sifilis, neyrosifilis diaqnozu üçün əlavə üsul kimi yalnız bəzi hallarda sifilis üçün PCR aparılmasına icazə verilir.

düyü. 22. PZR istifadə edərək solğun treponema DNT-nin aşkarlanması ya canlı bakteriyaların mövcudluğunu, ya da ölü bakteriyaların qalıqlarını göstərir, lakin əlavə nüsxələri formalaşdırmağa qadir olan xromosomal DNT-nin ayrı-ayrı bölmələrinin əlavə nüsxələrini ehtiva edir.

Seroloji müayinə və ya başqa sözlə seroloji analiz bioloji materialların laboratoriya şəraitində öyrənilməsidir. Bu analiz tədqiq olunan orqanizmdə və ya nəzarət yoxlamasından keçən məhsullarda patogen bakteriyaların mövcudluğunu müəyyən etməyə imkan verir.

Seroloji diaqnostik üsullar

Sera və ya digər bioloji obyektlərin (süd, öd, tüpürcək, bağırsaq selikli qişasının çubuqları, həmçinin kopromateriallar) tədqiqi bədənin bir yoluxucu agentin tətbiqinə reaksiyası haqqında kifayət qədər etibarlı bir fikir verir. Qeyd etmək lazımdır ki, seroloji tədqiqat metodlarından istifadə təkcə diaqnostik əhəmiyyət kəsb etmir, həm də tədqiq olunan regionda orqanizmin mühafizə səviyyəsi, əhalinin toxunulmazlığının vəziyyəti, müxtəlif növ rotavirusların dövranı haqqında etibarlı məlumat verir. Seroloji tədqiqatların nəticələri həmçinin profilaktik dərmanların antigenik tərkibinin optimallaşdırılması üçün məlumat verə bilər və vaksinlərin immunoloji effektivliyini qiymətləndirmək üçün istifadə edilə bilər.

Bununla belə, qeyd etmək lazımdır ki, 1,5-2 həftəlik fasilələrlə alınan qoşalaşmış qan zərdablarının öyrənilməsi zərurəti və ekspress diaqnostik üsulların mövcudluğu seroloji reaksiyaların diaqnostik dəyərini azaldır.

Buna görə də, ənənəvi seroloji testlər - tamamlayıcı fiksasiya testi (CFR) və hemaqlütinasiya inhibə testi (HIT) hazırda yalnız məhdud istifadə olunur. Buna baxmayaraq, bu üsulların sadəliyi, reagentlərin mövcudluğu və ucuzluğu onları hələ də laboratoriya praktikasında tətbiq etməyə imkan verir. RSK və RTGA-nın təyini ümumi qəbul edilmiş metodlara əsasən həyata keçirilir.

Peyvənddən sonrakı toxunulmazlığın öyrənilməsi üçün RSK-nın istifadəsinə misal olaraq K.Midxanın (1989) əsərini göstərmək olar. 5 aylıq 116 uşağın serumunu araşdırarkən, RSK-ya görə etibarlı serokonversiyalar 44% hallarda, neytrallaşdırma testinin (PH) və ferment immunoassayının (ELISA) nəticələrinə görə - 83 və 96% -də qeyd edildi. müvafiq olaraq.

İmmunitet Tədqiqatı

CSC-nin köməyi ilə əhalinin toxunulmazlığını öyrənmək üçün bir neçə aydan 80 yaşa qədər və yuxarı olan OKZ xəstələrinin 1246 serasını araşdırdıq. Göstərilmişdir ki, tamamlayıcı fiksasiya edən anticisimlərin orta həndəsi titrləri 2-4 və 60 yaşdan yuxarı yaş qruplarında ən yüksək olmuşdur ki, bu da bu yaş qruplarının fərdləri arasında rotavirus infeksiyasının ən yüksək yayılması ilə bağlı əvvəlki məlumatları təsdiqləyir.

Rotavirus testi

RTGA, rotavirus infeksiyasının öyrənilməsində RSK-dan daha tez-tez və bir qayda olaraq, digər laboratoriya testləri ilə birlikdə istifadə olunur. Beləliklə, Andrade J. P. et al. rotavirus VP2, VP4, VP6 və VP7-nin struktur zülallarına qarşı antikorları öyrənmək üçün RTGA, immunoblot, ELISA blokundan istifadə etmişdir. Müəlliflərin fikrincə, 2 yaşdan 4 yaşa qədər olan uşaqlarda rotaviruslara qarşı antihemaqlütinasiya edən anticisimlər 70-80% aşkar edilmişdir.

Müəyyən zülallara qarşı antikorların səviyyəsindən asılı olaraq, RTGA-ya görə, müəlliflər 4 qrup fərdləri müəyyən etdilər. I və II qruplara (60%) VP4 və VP7-yə yüksək səviyyədə antikor olan uşaqlar daxildir və "immun" kimi təsnif edilirdi. III qrupa (4%) "qismən immun" adlanan VP7 və VP6-ya qarşı aşağı səviyyədə antikor olan şəxslər daxildir. RTGA-ya görə antikorlar aşkarlanmayan IV qrup uşaqları (36%) "immunitetsiz" olaraq təyin olundu və risk qrupu təşkil etdi, çünki onların arasında ağır rotavirus infeksiyasının inkişafı mümkündür. Qeyd etmək lazımdır ki, bu müşahidədə RTGA və ELISA blokunun həssaslıq göstəriciləri kifayət qədər müqayisəli idi.

RTGA, VP4 struktur proteinini öyrənmək üçün dəfələrlə istifadə edilmişdir. Tədqiqatlar göstərdi ki, onun hemaqlütinasiya fəaliyyəti xüsusi olaraq antiserumlar tərəfindən inhibə edilir, beləliklə, VP4-ün rotavirusların hemaqlütinini olduğunu təsdiqləyir. Oxşar məlumatlar əvvəllər M. Ezekiel (1995) tərəfindən nəşr edilmişdir.

Beləliklə, təqdim olunan işlər göstərir ki, RSK və RTGA hələ də rotavirus infeksiyasının öyrənilməsində istifadə olunur, lakin bu üsullar köməkçi xarakter daşıyır və digər testlərlə təkrarlanmalıdır.

Neytrallaşdırma testləri

Neytrallaşdırma reaksiyası insan və ya heyvan immun seralarının virusun çoxalmasını neytrallaşdırmaq və bununla da bu fenomenlə əlaqəli təzahürlərin qarşısını almaq qabiliyyətinə əsaslanır. Bioloji modeldən asılı olaraq, bu təzahürlər aşağıdakılar ola bilər: müəyyən bir klinikaya malik bir xəstəliyin inkişafı, virusun çoxalması və təcrid edilməsi, spesifik antikorların istehsalı, həmçinin sitopatik təsirin görünüşü və ya bleblərin meydana gəlməsi. hüceyrə mədəniyyətindən istifadə etməklə.

Makrobioloji modellər hazırda əsasən baytarlıqda istifadə olunur, insanlarda virusların aşkarlanması əksər hallarda həm ilkin, həm də transfuziya edilmiş hüceyrə mədəniyyətində aparılır. PH üsulları əsas quraşdırma sxeminə görə iki qrupa bölünür. Metodların bir qrupunda seyreltilməmiş serum virusun ardıcıl seyreltmələri ilə birləşdirilir, digərində serum seyreltmələri sabit bir virus dozası ilə sınaqdan keçirilir. Neytrallaşdırma reaksiyasını qurmaq üçün açıq sitopatik təsirə səbəb olan və ya bioloji modeldə intensiv şəkildə çoxaldılan patogenə üstünlük verilir.

Lakin, rotaviruslar, təəssüf ki, B.Weber (1992) başçılıq etdiyi tədqiqatçılar tərəfindən inandırıcı şəkildə nümayiş etdirilən mülayim sitopatik təsirə malikdir. CPP nəzarəti altında MA-104 hüceyrələrində virus izolyasiyasının klassik üsulundan istifadə edərək OKI olan uşaqlardan 121 nəcis nümunəsinin öyrənilməsi yalnız 4 müsbət hal (3,3%) aşkar etdi, halbuki rotavirusların aşkarlanması üçün müasir üsulların (ELISA, PCR) istifadəsi , PAAG-da EF) bu rəqəmi 54,4%-ə çatdırmağa imkan verdi. Buna görə də, PH həssaslığını artırmaq üçün əlavə metodoloji üsullar kimi istifadə olunur virus azaldılması vizual yardım tələb olunur: bir radioaktiv və ya immunofluorescent etiket, lövhə formalaşması, immunoperoksidaza boyanma, və s. Qeyd etmək lazımdır ki, çox prinsipi virusu zərərsizləşdirən anticisimlərin səviyyəsinin təyini klassik PH metodu ilə eynidir, ondan yalnız həll yolu ilə, yəni zərdabın virusu neytrallaşdıran fəaliyyətinin vizuallaşdırılması ilə fərqlənir. Bu vəziyyətdə, serumun fəaliyyəti virusun yoluxucu xüsusiyyətlərinin təzahürlərini boğmaq qabiliyyəti ilə müəyyən edilir.

Hal-hazırda, əksər tədqiqatlar rotavirusa qarşı virusu neytrallaşdıran antikorların miqdarını ölçmək üçün iki üsuldan istifadə edir. Onlardan biri flüoresanla birləşmiş anticisimlərə xüsusi olaraq bağlanan fərdi virusla yoluxmuş hüceyrələrin (Plaq üsulu) sayının hesablanmasına əsaslanır. Başqa bir testdə virusun zərərsizləşdirilməsi səviyyəsi immunoassay fermenti ilə virus antigeninin istehsalının azalması ilə qiymətləndirilir. Hər iki metodun müqayisəli tədqiqi ELISA indeksləri ilə rotavirus serotipinin hər bir prototip ştammı üçün lövhə əmələ gətirən vahidlərin sayı arasında xətti əlaqəni göstərdi: Wa, DS-1, P, VA-70. Əldə edilən məlumatlar yoluxucu virusun 60%-nin neytrallaşdırılmasını (neytrallaşdırıcı antikor titrini) təmin edən zərdabın seyreltilməsini təyin etməyi asanlaşdırır. Məlum oldu ki, materialları hər iki üsulla sınaqdan keçirərkən antikor titrləri eynidir və hər iki test nəticələrin təkrarlanma qabiliyyətinə görə fərqlənmir. Müəlliflərin fikrincə, fluorescein ilə etiketlənmiş antikorlardan istifadə edərək metodun bəzi üstünlüyü nəticələrin daha obyektivliyində (avtomatlaşdırılmış qeydiyyat) və daha az zəhmətkeşlikdədir.

Virusları neytrallaşdıran antikorların titrlərini ölçmək üçün modifikasiya edilmiş PH də monoklonal antikorlarla ELISA-nı bloklamaqla istifadə olunur.

• təbii infeksiya və peyvənd zamanı virusu neytrallaşdıran anticisimlərin (VNA) istehsalının intensivliyinin öyrənilməsi;
• rotavirusların müxtəlif struktur zülallarına VNA-nın formalaşması;
• təbii infeksiyadan qorunmaqda tüpürcək və bağırsaq selikli qişasının VNA qan serasının və sekretor antikorlarının rolunun qiymətləndirilməsi (Ward R. et al., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

Yekun olaraq vurğulamaq lazımdır ki, onun müxtəlif modifikasiyalarında neytrallaşma reaksiyası hələ də həm eksperimental, həm də klinik tədqiqatlarda geniş istifadə olunur və yüksək həssaslıq və spesifikliyə malik olmaqla bütün digər seroloji üsullar üçün standart rolunu oynayır.

Yağışların təhlili

Yağış testləri osmotik proseslərdən istifadə edərək və ya gel mühitində və ya digər növ daşıyıcıda elektrik sahəsinin təsiri altında serumun viral antigenlərlə qarşılıqlı təsirinə əsaslanır. Bu üsullardan biri əks immunoelektroforez (VIEF) reaksiyasıdır. Müəlliflər sağlam və xəstə böyüklərin və rotavirus ishalı olan uşaqların qan serumunu, həmçinin insan rotavirusuna qarşı anticisimlərin olub-olmaması üçün spesifik immunoqlobulin preparatlarını 4% polietilen qlikol əlavə etməklə VIEF üsulu ilə 7% agarozada tədqiq etmişlər. Məlum oldu ki, RV-yə qarşı anticisimlər kifayət qədər geniş şəkildə dövr edir və xəstə böyüklərdə və uşaqlarda müvafiq olaraq 90,2-87,7%, eləcə də 1 yaşa qədər sağlam uşaqların 78,4% -ində aşkar edilmişdir. Bütün 32 immunoqlobulin seriyası 1:4-1:128 titrlərində RV-yə qarşı antikorları ehtiva edir. Müəlliflərin fikrincə, metod əhalinin toxunulmazlığını öyrənmək üçün əlverişlidir.

radioimmunopresipitasiya

Başqa bir yağış texnikası radioimmunoprecipitasiyadır. Müəlliflər bu üsuldan ilkin rotavirus infeksiyasında struktur və qeyri-struktur zülallara qarşı immun cavabı öyrənmək üçün istifadə etmişlər və immun cavabın VP7 ilə müqayisədə VP4-də daha aydın olduğunu göstərmişlər.

Yenidoğulmuşlarda tetravalent reassortant peyvəndin istifadəsinə zərdab və sekretor immunoloji reaksiyanı öyrənərkən Bunun üçün ELISA və PH ilə birlikdə radioimmunoassay texnikasından istifadə edilmişdir. Göstərilmişdir ki, zərdabda immun reaksiya yeridilmiş antigenin dozasından asılıdır; tüpürcəkdə antikorların aşkarlanmasına gəldikdə, müəlliflər onların görünüşünü ana südü istehlakı ilə izah edirlər.

Radioimmunopresipitasiya reaksiyası incə tədqiqat işlərində də istifadə olunur. Beləliklə, C.Tosser genom strukturunda VP6 zülalının topologiyasını öyrənmək üçün bu üsuldan istifadə etdi və VP 6-nın daxili kapsid kanallarının formalaşmasında iştirak etdiyini irəli sürdü.

1994-cü ildə digər tədqiqatçılar da rotavirus infeksiyasında immunoloji dəyişiklikləri öyrənmək üçün radioimmunoprecipitasiya metodundan istifadə etdilər. Müəlliflər göstərdilər ki, kəskin dövrdə əsasən IgA-dan VP2-yə və VP6-ya qədər qeydə alınır, sağalma dövründə isə təkcə VP2-yə deyil, həm də digər struktur və qeyri-struktur zülallara ifrazedici anticisimlərin (IgA) istehsalının intensivliyi azalıb. . Daha sonra oxşar məlumatlar radioimmunopresipitasiya üsulu ilə əldə edilmişdir. Müəlliflər göstərdilər ki, immunoloji prosesdə VP4 və VP7 ilə yanaşı, VP2, VP6 və NSP2 də iştirak edir.

Beləliklə, immunoprecipitation təbii rotavirus infeksiyasında immun cavabı öyrənmək üçün diaqnostik olaraq istifadə edilmişdir.

Son illərdə immunoprecipitation radioimmunoprecipitation metodu ilə əvəz edilmişdir, RV infeksiyasında post-vaksinasiya və infeksiya sonrası immuniteti qiymətləndirmək və gözəl tədqiqat işlərinin aparılması üçün istifadə olunur.

hibridləşdirmə üsulları

Rotaviruslara qarşı antikorları təyin etmək üçün immunoblot üsulu geniş istifadə olunur. Rotavirus infeksiyasının diaqnostikasında Western-blotun istifadəsinə nümunə H.Ushijimanın (1989) işidir, o, immunoblotinqdən istifadə edərək OKZ-li 21 uşaqda struktur RV zülallarına qarşı anticisimlərin spesifikliyini, eləcə də bu zülallara IgA və IgG siniflərinin koproanticisimlərinin səviyyəsi.infeksiyasız uşaqlarda. Müəlliflər fərz edirdilər ki, immunoblotinq qoşalaşmış qan zərdablarını araşdırmadan bir koproantikor nümunəsində xəstəliyin diaqnozunu təyin etməyə imkan verə bilər. VP1, VP2, VP4, VP6 və VP7-yə qarşı antikorların səviyyəsini təyin etmək üçün Western-blotdan istifadə etmək imkanı Pavlov I. et al. (1991) tərəfindən nümayiş etdirilmişdir. Müəlliflər insan və heyvan qan serumlarını SA-11, DS-1, Wan Ito rotavirus ştammlarına qarşı antikorların olub-olmaması üçün araşdırıblar və belə nəticəyə gəliblər ki, Western blot klinik praktikada immuniteti qiymətləndirmək üçün uğurla istifadə edilə bilər.

Güman edilir ki, immunoblot bir koproantikor nümunəsi üçün qoşalaşmış seradan istifadə etmədən rotavirus infeksiyasının diaqnozunu təsdiqləmək üçün istifadə edilə bilər.

RTHA və ELISA ilə yanaşı, immunoblot sürü toxunulmazlığını öyrənmək üçün istifadə edilmişdir. Risk qrupunu təmsil edən VP2, VP4, VP6 və VP7-yə qarşı immuniteti olmayan, ilk növbədə aktiv və passiv immunizasiya vasitəsilə qorunma tələb edən bir qrup şəxs aşkar edilmişdir (Andrade J. P. et al., 1996).

Təbii RV infeksiyası prosesində seroloji dəyişikliklərin öyrənilməsində immunoblotun istifadəsi də Begue R. et al. (1998). Müəlliflər təsdiqləyiblər ki, VP2 və VP6-ya qarşı antikorlar infeksiyaya qarşı immun reaksiyada ən çox iştirak edir, VP7 və VP4-ə qarşı antikorlar isə daha az iştirak edir.

İmmunofluoressensiya analizi

Rotaviruslarla yoluxmuş hüceyrələrdə test seralarını titr etmək üçün floroxrom etiketli anti-növ zərdablarından istifadə edərək dolayı immunofluoresan metoddan istifadə edilir. Reaksiya etiketli antikorların və homoloji antigenin spesifik qarşılıqlı təsirinə əsaslanır, antigen-antikor kompleksi isə flüoresan mikroskopdan istifadə etməklə asanlıqla aşkar edilir.

Bu üsuldan istifadə edərək, müəlliflər Cənubi Amerika hindularının iki qrupunda seroloji sorğu keçirmiş və hər iki qrupda seropozitiv şəxslərin yüksək faizini aşkar etmişlər: ELISA ilə müvafiq olaraq 67,8 və 77,4% və IFM ilə 45,5 və 56,7%.

İFM-dən istifadə etməklə göbək qanında RV qrupu C-yə qarşı antikorların səviyyəsinin müəyyən edilməsinə dair başqa bir araşdırmada, reproduktiv yaşda olan qadınların 30%-nin bu anticisimlərlə aşkar edildiyi göstərilmişdir ki, bu da keçmiş infeksiyanın olduğunu göstərir.

ELISA hazırda PH ilə yanaşı, rotavirus infeksiyasının seroloji diaqnostikasında son dərəcə geniş istifadə olunur. Ferment etiketli anticisimlərin və ya antigenlərin istifadəsinə əsaslanan bu üsul, həyata keçirilməsi asanlığı və qənaətcilliyinə görə rotavirus infeksiyasının seroloji diaqnostikasında ən münasib və perspektivli üsuldur. Metod əhalinin kütləvi seroepidemik müayinələrini aparmağa, peyvəndlərin immunoloji və epidemioloji effektivliyini qiymətləndirməyə, insan orqanizminin müxtəlif bioloji mayelərində müxtəlif siniflərin antikorlarının qoruyucu rolunu öyrənməyə, həmçinin rotavirusun seroloji diaqnostikasını aparmağa imkan verir. infeksiya.

ELISA-dan istifadə edən çoxsaylı tədqiqatlar R. Azeredo (1989) tərəfindən həyata keçirilmişdir ki, bu da müəyyən edilmiş rotavirus etiologiyalı OKZ xəstələrinin sayının seroloji müayinənin nəticələrinə görə onların infeksiya səviyyəsindən əhəmiyyətli dərəcədə aşağı olduğunu göstərmişdir. Bu məlumatlar müəyyən etdi ki, rotavirus infeksiyasının bir çox kliniki halları nəcisdə RV-nin aşkarlanması ilə diaqnoz qoyulmur. Rotavirus infeksiyasının yayılması ilə bağlı əlavə tədqiqatlar bu fərziyyəni təsdiqlədi. Seroepidemioloji tədqiqatlar apararkən müəyyən edilmişdir ki, əhalinin 50-70%-də anticisimlər yüksək səviyyədədir ki, bu da insan populyasiyasında RV-nin geniş yayıldığını göstərir.

İmmunoqlobulinlərin müxtəlif siniflərinə aid olan antikorların səviyyəsinin dinamikasını təyin etmək üçün ELISA tərəfindən daha böyük imkanlar açılır. Beləliklə, 1989-cu ildə metodologiyanın müəlliflərinin fikrincə, peyvənd prosesi zamanı qanda RV-yə qarşı antikorların 83-96% -də əhəmiyyətli bir artım müşahidə edildiyini iddia edirlər. IgA və IgG siniflərinin antirotavirus antikorları plazmanın azalması ilə ELISA və PH tərəfindən eyni dərəcədə yaxşı aşkar edilmişdir - müvafiq olaraq 67,6 və 70,0%. İgM sinif antikorlarının serokonversiyaları ELISA və RSC tərəfindən müvafiq olaraq uşaqların 53 və 44% -ində aşkar edilmişdir. Müxtəlif siniflərin antikorlarının istehsal intensivliyinin təhlilinin nəticələrinə əsasən, müəlliflər peyvənddən sonra serokonversiyaların aşkarlanması üçün ən təsirli, sadə və ən sürətli metodun ELISA istifadə edərək IgA antikorlarının aşkarlanması üsulu olduğu qənaətinə gəldilər.

Bu nəticə R. Bishopun (1996) işində də təsdiqlənmişdir ki, RV infeksiyası diaqnozu qoyulmuş 68 ana-uşaq cütlüyünün sorğusunun nəticələrinə əsasən, ELISA istifadə edərək IgA antikorlarının aşkarlanması göstərilmişdir. nəcis materialları ən həssas markerdir.həm kliniki ifadə olunan, həm də asemptomatik infeksiya. Şiddətli RV ishallı uşaqları müayinə edərkən oxşar nəticələr 1998-ci ildə J. Kolomina tərəfindən əldə edilmişdir.

Bununla belə, serokonversiyaların intensivliyini öyrənmək üçün diaqnostik prosesi əhəmiyyətli dərəcədə uzadan qoşalaşmış serumları öyrənmək lazımdır. Eyni zamanda, məlumdur ki, IgM sinifinin antikorlarının görünüşü infeksion prosesin başlanğıcının sübutudur. Rotavirus infeksiyası olan xəstələrin ELISA və RSK ilə müayinəsi zamanı əldə etdiyimiz məlumatlara görə, ELISA-nın nəticələrinə görə, bütün müayinə olunan şəxslərin qanında RV-yə qarşı IgM anticisimləri olduğu, RSK-ya görə isə yalnız 77% (R

Son illərdə, gen və serotip spesifik antikorları təyin etmək imkanının həyata keçirilməsi ilə ELISA, istifadə olunan rotavirus infeksiyasını öyrənmək üçün həqiqətən universal bir üsula çevrildi:

• fərdi struktur və qeyri-struktur RV zülallarına IgA, M, G siniflərinin antikorlarının istehsalını öyrənərkən;
• müxtəlif növ vaksinlərin immunoloji effektivliyinin qiymətləndirilməsində: zəiflədilmiş, soyuqla uyğunlaşdırılmış, DNT əsaslı, reassortant;
• təbii infeksiya şəraitində və immunizasiya zamanı orqanizmin müxtəlif bioloji mayelərində antikorların istehsalını öyrənərkən.

Beləliklə, təqdim olunan məlumatlardan göründüyü kimi, rotavirus infeksiyasının immunoloji aspektləri geniş laboratoriya metodlarından istifadə etməklə öyrənilir. Nəticədə, onun həlli, iqtisadi və vaxt xərcləri nəzərə alınmaqla optimal tədqiqat metodunun seçilməsi kifayət qədər mürəkkəbdir və tədqiqatçıların qarşısında duran vəzifələrdən, eləcə də laboratoriyanın avadanlıqlarından asılıdır. Bununla belə, müxtəlif üsullardan, fikrimizcə, ikisini ayırmaq lazımdır - hüceyrə mədəniyyətində zərərsizləşdirmə reaksiyası və immunoqlobulinlərin müxtəlif siniflərinə antikorların öyrənilməsini təmin edən ferment immunoassay. Rotavirus infeksiyasının ekspress diaqnostikasının mümkünlüyü bu üsulların geniş praktikada istifadə üçün xüsusi vədini müəyyənləşdirir.

SEROLOJİ TƏDQİQATLAR(lat. serum serum + yunan logos doktrinası) - seroloji reaksiyalardan istifadə etməklə antigenləri və ya anticisimləri aşkar etmək üçün insan və ya heyvan qanının spesifik xassələrini öyrənən immunologiya metodları.

S.-nin başlanğıcı və. keçən əsrin sonunda, bir antigenin bir antikorla əlaqəsinin (bax: Antigen - antikor reaksiyası) vizual müşahidə üçün mövcud olan bir sıra hadisələrlə müşayiət olunduğu aşkar edildikdən sonra - aglütinasiya (bax), çökmə (bax) və ya lizis. Bu komponentlərdən biri məlumdursa, antigenlərin (bax) və ya antikorların (bax) xüsusi tanınması ehtimalı var idi.

1897-ci ildə F.Vidal bildirmişdir ki, qarın yatalağı olan xəstələrin qan zərdabında tif bakteriyasını seçici şəkildə aglütinləşdirir və buna görə də bu reaksiya (bax: Vidal reaksiyası) laboratoriyaya tətbiq oluna bilər. tifo qızdırmasının diaqnozu. Elə həmin il göstərilmişdir ki, taun, tif və vəba bakteriyalarının kultura filtratları müvafiq immun zərdablarla birləşdikdə lopa və ya çöküntülər əmələ gətirir.

Çöküntü reaksiyası hər hansı bir protein antigeninin aşkarlanması üçün uyğun olduğunu sübut etdi. 1900-1901-ci illərdə. K. Landsteiner aşkar etdi ki, insan eritrositlərində iki müxtəlif antigen (A və B), qan serumunda isə iki aqqlütinin (a və P) var ki, bu da qan qruplarını təyin etmək üçün hemaqlütinasiya reaksiyasının istifadəsinə kömək etdi (bax).

Qan qrupunu və Rh faktorunu təyin etmək üçün aglütinasiya reaksiyası mamalıq praktikasında qanköçürmə və toxuma transplantasiyası ilə istifadə olunur. Rh faktoruna qarşı antikorlar (bax) natamam antikorlardır, Rh-müsbət eritrositlərlə birbaşa reaksiya verə bilmirlər, buna görə də onları aşkar etmək üçün antiglobulindən istifadə edərək natamam antikorların aşkarlanmasına əsaslanan Coombs reaksiyasından istifadə edin (bax Coombs reaksiyası). sera. Məlum spesifikliyə malik eritrositlərə test zərdabı, ardınca IgG-yə qarşı antiqlobulin serumu (dolayı Coombs reaksiyası) əlavə edilir. Tədqiq olunan qan zərdabının natamam anticisimlərinin Fab fraqmentləri eritrositlərə, IgG-yə qarşı anticisimlər isə bu anticisimlərin sərbəst Fc fraqmentlərinə birləşir və eritrositlərin aqlütinasiyası baş verir. Hemolitik anemiyanın diaqnozu üçün birbaşa Kumbs reaksiyasından istifadə olunur.Belə xəstələrin orqanizmində qırmızı qan hüceyrələri qanda Rh faktoruna qarşı dövr edən anticisimlərlə birləşir. Onları müəyyən etmək üçün xəstədən alınan eritrositlərə IgG-yə qarşı antikorlar əlavə edilir. Eritrosit aglütinasiyasının görünüşü xəstəliyin diaqnozunu təsdiqləyir.

Hemaqlütinasiyanın qarşısının alınması reaksiyası - RTGA (bax: Hemaqlütinasiya) - immun zərdab vasitəsilə eritrositlərin viruslar tərəfindən hemaqlütinasiyasının qarşısının alınması (inhibisyonu) fenomeninə əsaslanır. Virusun hemaqlütinasiyası fenomeni serol deyil. reaksiya və virusun eritrosit reseptorları ilə əlaqəsi nəticəsində baş verir, lakin HTA antiviral antikorları aşkar etmək və titr etmək üçün istifadə olunan seroloji testdir. RTGA qrip, qızılca, məxmərək, parotit, gənə ensefaliti və törədiciləri hemaqlütinasiyaedici xüsusiyyətlərə malik olan digər virus infeksiyalarının serodiaqnostikasının əsas üsuludur.

Passiv və ya dolayı hemagglutinasiyaların reaksiyası, eritrositlərdən və ya neytral sintetik materiallardan (məsələn, lateks hissəcikləri) istifadə olunur, səthində antigenlər (bakterial, viral, toxuma) və ya antikorlar sorulur (bax Boyden reaksiyası). Onların aglütinasiyası müvafiq sera və ya antigenlər əlavə edildikdə baş verir. Antigenlərlə həssaslaşan eritrositlərə antigen eritrosit diaqnostikumu deyilir və anticisimləri aşkar etmək və titr etmək üçün istifadə olunur. Antikorlar tərəfindən həssaslaşdırılan eritrositlər immunoqlobulin eritrosit diaqnostikumları adlanır (bax) və antigenləri aşkar etmək üçün istifadə olunur:

Passiv hemaqlütinasiya reaksiyası bakteriyaların (tif və paratif, dizenteriya, brusellyoz, vəba, vəba və s.), protozoa (malyariya) və virusların (qrip, adenovirus infeksiyaları, gənə ensefaliti, Krım hemorragiyası, və s.). Həssaslıqda passiv hemaglütinasiya reaksiyası, virusun arenoviral xəstəliklərdə (bax), xüsusən də lenfositik xoriomeningitdə təcrid üsulundan aşağı deyil. Lenfositik xoriomeningitin viral antigeni virus daşıyıcılarında (ev siçanları) on minlərlə dəfə seyreltilmiş ekstraksiya edilmiş orqanların süspansiyonları ilə passiv hemaqlütinasiya reaksiyasında aşkar edilir. Salmonellyozla, 1 q nəcisdə bir neçə yüz mikrob cismin konsentrasiyasında passiv hemaglütinasiya reaksiyasında bakteriyalar, 1 q materialın tərkibində ən azı 500 mikrob bədəni olduqda qida məhsullarında dizenteriya bakteriyaları aşkar edilir.

Passiv hemaqlütinasiya reaksiyası viruslu hepatit B-nin diaqnostikasında və profilaktikasında istifadə olunur. Sovet İttifaqında kəskin hepatit B olan xəstələrin qanında HBs antigenini (bax: Avstraliya antigeni) aşkar etmək üçün diaqnostikum hazırlanır ki, bu da toyuq eritrositləridir. HBs antigeninə qarşı keçi immunoqlobulini ilə həssaslaşdırılır. Diaqnostikum damcısı müayinə olunan insanların bərabər həcmdə qan zərdabı ilə birləşdirilir və onda HBs antigeni varsa, aglütinasiya baş verir. Reaksiya 1,5 ng/ml HBs antigenini tutmağa qadirdir. HBs anticisimlərini aşkar etmək üçün xəstələrin qanından təcrid olunmuş, onlara adsorbsiya edilmiş HBs antigeni olan eritrositlərdən istifadə olunur. Pasif hemaqlütinasiya reaksiyası həmçinin xəstənin dərmanlara və hormonlara, məsələn, penisilin və ya insulinə qarşı həssaslığını aşkar etmək üçün istifadə olunur. Bu zaman insanın 0 qan qrupunun eritrositləri dərman maddəsi ilə sensibilizasiya edilir və sonra xəstənin qan zərdabında ona aqqlütininlərin aşkar edilməsi üçün istifadə olunur.

Passiv hemaqlütinasiya reaksiyası hamiləliyin müəyyən edilməsi üçün sidikdə gonadotropini aşkar etmək üçün istifadə olunur (bax: Xorionik gonadotropin). Bunun üçün bu hormon üçün standart serum tədqiq olunan sidiklə inkubasiya edilir. Üzərində adsorbsiya edilmiş hormon olan eritrositlərin sonradan əlavə edilməsi ilə aglütinasiya baş vermir (müsbət cavab), çünki sidikdə olan hormon aglütinasiya edən antikorları neytrallaşdırır.

Yağış hadisəsinə əsaslanan reaksiyalar

Onlar müxtəlif antigenləri və antikorları aşkar etmək üçün istifadə olunur. Keyfiyyətli reaksiyanın ən sadə nümunəsi, bir sınaq borusunda bir antikor üzərində antigenin çökmə sərhədində qeyri-şəffaf bir çökmə zolağının meydana gəlməsidir. Agar və ya agarozun yarı maye gellərində çökmə reaksiyalarının müxtəlif növləri geniş istifadə olunur (Ouchterlon üzrə ikiqat immunodiffuziya üsulu, radial immunodiffuziya üsulu, immunoelektroforez), həm keyfiyyət, həm də kəmiyyət (bax: İmmunodiffuziya, İmmunoelektroforez).

İkiqat immunodiffuziya qurmaq üçün bir şüşə boşqabın üzərinə ərinmiş gel qatı tökülür və bərkidildikdən sonra 1,5-3 mm diametrli deşiklər kəsilir. Test antigenləri dairəvi şəkildə düzülmüş quyulara, spesifikliyi məlum olan immun zərdab isə mərkəzi quyuya yerləşdirilir. Bir-birinə diffuziya edərək, homoloji sera və antigenlər çöküntü əmələ gətirir. Radial immunodiffuziya ilə (Mancini metoduna görə) immun serum agara daxil edilir. Quyulara yerləşdirilən antigen aqar vasitəsilə yayılır və immun zərdab ilə çökmə nəticəsində quyuların ətrafında xarici diametri antigenin konsentrasiyasına mütənasib olan qeyri-şəffaf halqalar əmələ gəlir. Bu reaksiyanın modifikasiyası qripin diaqnozunda IgM və IgG antikorlarının tanınması üçün istifadə olunur (bax: İmmunoqlobulinlər). Qrip antigeni agara, qan serumu isə quyulara daxil edilir. Sonra lövhələr IgM və ya IgG antikorlarına qarşı immun sera ilə müalicə olunur ki, bu da müvafiq antikorların antigenlərlə reaksiyasını müəyyən etməyə kömək edir. Metod eyni zamanda antikorların titrlərini və onların müəyyən bir immunoqlobulin sinfinə aid olduğunu müəyyən etməyə imkan verir.

İmmunoelektroforezin bir növü radioimmunoforezdir. Bu zaman antigenlərin elektroforetik ayrılmasından sonra geldəki antigenlərin hərəkətinə paralel kəsilmiş yiv əvvəlcə təyin olunacaq antigenlərə qarşı radioaktiv yod ilə işarələnmiş immun zərdab, sonra isə antigenlərə qarşı immun zərdab ilə doldurulur. Antikorun meydana gələn komplekslərini antigenlə çökdürən IgG antikorları. Bütün bağlanmamış reagentlər yuyulur və antigen-antikor kompleksi autoradioqrafiya ilə aşkar edilir (bax).

Komplement reaksiyaları. Komplementin iştirakı ilə reaksiyalar (bax) komplementin alt komponentinin Cl (Clq) və sonra tamamlayıcının digər komponentlərinin immun komplekslərə qoşulma qabiliyyətinə əsaslanır.

Komplementin fiksasiyası reaksiyası antigen-antikor kompleksi ilə komplementin fiksasiya dərəcəsinə görə antigenləri və ya antikorları titr etməyə imkan verir. Bu reaksiya iki mərhələdən ibarətdir: antigenin test qan serumu ilə qarşılıqlı təsiri (test sistemi) və hemolitik zərdabın qoyun eritrositləri ilə qarşılıqlı təsiri (indikator sistemi). Müsbət reaksiya ilə test sistemində komplementin fiksasiyası baş verir və sonra antikorla həssaslaşdırılmış qırmızı qan hüceyrələri əlavə edildikdə hemoliz müşahidə edilmir (bax Komplementin fiksasiyası reaksiyası). Reaksiya visseral sifilisin (Vasserman reaksiyasına baxın) və viral infeksiyaların (Virusoloji tədqiqatlara baxın) serodiaqnozu üçün geniş istifadə olunur.

Sitoliz. Hüceyrə strukturlarına qarşı antikorlar komplementin iştirakı ilə bu strukturları daşıyan hüceyrələri həll edə bilər. RBC lizisi hemoglobinin sərbəst buraxılmasının dərəcəsi və intensivliyi ilə asanlıqla qiymətləndirilə bilər. Nüvə hüceyrələrinin parçalanması metilen mavisi ilə boyanmayan ölü hüceyrələrin faizini hesablamaqla qiymətləndirilir. Tez-tez həmçinin əvvəllər kimyəvi cəhətdən hüceyrələrlə əlaqəli olan radioaktiv xromdan istifadə edin. Məhv edilmiş hüceyrələrin sayı hüceyrə lizisi zamanı ayrılan bağlanmamış xromun miqdarı ilə müəyyən edilir.

Geldə eritrositlərin radial hemolizinin reaksiyası baş verə bilər. Qoyun eritrositlərinin bir suspenziyası bir agaroza gelə yerləşdirilir, orada tamamlayıcı əlavə olunur; quyular şüşə üzərində dondurulmuş layda hazırlanır və onlara hemolitik zərdab əlavə edilir. Antikorların radial diffuziyası nəticəsində quyuların ətrafında hemoliz zonası yaranacaq. Hemoliz zonasının radiusu serum titri ilə düz mütənasibdir. Əgər eritrositlərdə hər hansı bir antigen, məsələn, qrip virusunun qlikoprotein hemaqlütinini, məxmərək və ya gənə ensefaliti adsorbsiya edilərsə, o zaman bu viruslara qarşı immun sera ilə hemoliz fenomeni təkrarlana bilər. Geldə radial hemoliz reaksiyası, mərhələlərin asanlığı, zərdab inhibitorlarına qarşı həssaslıq və ardıcıl seyreltmələrə müraciət etmədən qan zərdabını hemoliz zonasının diametrinə uyğun olaraq titr etmək qabiliyyətinə görə viral infeksiyaların diaqnostikasında tətbiq tapmışdır.

immun yapışma. Eritrositlərin, trombositlərin və digər qan hüceyrələrinin səthində üçüncü tamamlayıcı komponent (C3) üçün reseptorlar var. Əgər antigenə (bakteriyalar, viruslar və s.) müvafiq immun zərdab və komplement əlavə olunarsa, onda komplementin C3 komponenti ilə örtülmüş antigen-antikor kompleksi əmələ gəlir. Trombositlərlə qarışdıqda, komplementin C3 komponentinə görə antigen-antikor kompleksi hüceyrələrə yerləşəcək və onların aglütinasiyasına səbəb olacaq (bax İmmunitetlə yapışma). Bu reaksiya HLA sisteminin antigenlərini təyin etmək üçün istifadə olunur (bax Transplantasiya İmmuniteti) və bir sıra viral infeksiyaların (gənə ensefaliti, dang qızdırması) tədqiqində to-çovdar immunopatol ilə müşayiət olunur. antikorlarla birlikdə viral antigenlərin qanında proseslər və dövran.

Neytrallaşdırma reaksiyası antikorların makromolekulyar və ya həll olunan antigenlərin müəyyən spesifik funksiyalarını, məsələn, ferment aktivliyini, bakterial toksinləri, virusların patogenliyini neytrallaşdırmaq qabiliyyətinə əsaslanır. Bakteriologiyada bu reaksiya antistreptolizinləri, antistreptokinazları və antistafilolizinləri aşkar etmək üçün istifadə olunur. Toksinlərin zərərsizləşdirilməsi reaksiyası biol ilə qiymətləndirilə bilər. təsiri, məsələn, anti-tetanus və anti-botulinum serum titrlənir (bax Toxin - antitoksin reaksiya). Heyvanlara verilən toksin və antiserum qarışığı onların ölümünün qarşısını alır. Virusologiyada zərərsizləşdirmə reaksiyasının müxtəlif variantlarından istifadə olunur. Virusları müvafiq antiserum ilə qarışdıraraq və bu qarışığı heyvanlara və ya hüceyrə kulturalarına daxil etməklə virusların patogenliyi zərərsizləşdirilir.

Kimyəvi və fiziki etiketlərdən istifadə edilən reaksiyalar

1942-ci ildə Koons (AN Coons) tərəfindən hazırlanmış immunofluoressensiya serol üçün istifadədən ibarətdir. flüoroxrom ilə etiketlənmiş serum reaksiyaları (bax: İmmunofluoressensiya). Flüoroxrom ilə etiketlənmiş zərdab antigenlə antigen-antikor kompleksi əmələ gətirir və bu, floroxrom parıltısını həyəcanlandıran ultrabənövşəyi şüalarda mikroskop altında müşahidə üçün əlçatan olur. Birbaşa immunofluoressensiya reaksiyası hüceyrə antigenlərini öyrənmək, yoluxmuş hüceyrələrdə virusu aşkar etmək və yaxmalarda bakteriya və rikketsiyanı aşkar etmək üçün istifadə olunur. Belə ki, quduzluğun diaqnostikası üçün virus daşımasında şübhəli bilinən heyvanların beyin hissələrinin izləri quduzluğa qarşı lüminesans serumla müalicə olunur. Müsbət nəticə ilə sinir hüceyrələrinin protoplazmasında parlaq yaşıl rəngli yığınlar müşahidə olunur. Qrip, paraqrip və adenovirus infeksiyasının sürətli diaqnostikası burun mukozasından olan izlərin hüceyrələrində virus antigenlərinin aşkarlanmasına əsaslanır.

Dolayı immunofluoressensiya metodu daha geniş istifadə olunur, IgG antikorlarına qarşı luminescent immun zərdabdan istifadə edərək antigen-antikor kompleksinin aşkarlanmasına əsaslanır və təkcə antigenləri deyil, həm də antikorların titrlənməsini aşkar etmək üçün istifadə olunur. Metod herpes, sitomeqalips, Lassa qızdırmasının serodiaqnozunda tətbiq tapmışdır. Laboratoriyada antigen tərkibli hüceyrə preparatlarının ehtiyatı, məsələn, virusla yoluxmuş VERO hüceyrələri və ya asetonla sabitlənmiş toyuq fibroblastları -20°C temperaturda saxlanmalıdır. Tədqiq olunan qan zərdabı preparatların üzərinə qatlanır, immun kompleksləri əmələ gətirmək üçün preparat f 37°-də termostata yerləşdirilir və sonra bağlanmamış reagentlər yuyulduqdan sonra bu komplekslər insan qlobulinlərinə qarşı etiketli lüminessent serumla aşkar edilir. IgM və ya IgG antikorlarına qarşı etiketli immun seralardan istifadə etməklə, antikorların növünü fərqləndirmək və IgM antikorlarının olması ilə erkən immun cavabı aşkar etmək mümkündür.

Bir fermentdə - immunoloji üsulla fermentlər, hl ilə birləşmiş antikorları tətbiq edin. arr. horseradish peroksidaz və ya qələvi fosfataz. Etiketli zərdabın bir antigenlə əlaqəsini aşkar etmək üçün sarı-qəhvəyi (peroksidaza) və ya sarı-yaşıl (fosfataza) rəngdə boyanma görünüşü ilə seruma əlavə edilmiş bir ferment tərəfindən parçalanan bir substrat əlavə edilir. Yalnız xromogen deyil, həm də lumogen substratı parçalayan fermentlər də istifadə olunur. Bu vəziyyətdə müsbət reaksiya ilə bir parıltı görünür. İmmunofluoressensiya kimi, ferment immunoassay hüceyrələrdə antigenləri aşkar etmək və ya antigen ehtiva edən hüceyrələrdə antikorları titr etmək üçün istifadə olunur.

Ferment-immunoloji metodun ən məşhur növü immunosorbsiyadır. Möhkəm daşıyıcıda, Krım selüloz, poliakrilamid, dekstran və müxtəlif plastik ola bilər, antigeni adsorbsiya edir. Daha tez-tez mikropanel quyularının səthi daşıyıcı kimi xidmət edir. Test qan serumu sorbed antigen olan quyulara əlavə edilir, sonra ferment və substrat ilə etiketlənmiş antiserum. Müsbət nəticələr maye mühitin rənginin dəyişməsi ilə nəzərə alınır. Antigenləri aşkar etmək üçün antikorlar daşıyıcıya adsorbsiya edilir, sonra test materialı quyulara daxil edilir və fermentlə işarələnmiş antimikrob serum ilə reaksiya aşkar edilir.

Radioimmunoloji üsul antigenlərin və ya antikorların radioizotop etiketinin istifadəsinə əsaslanır. Əvvəlcə qanda dövran edən hormonların səviyyəsini ölçmək üçün xüsusi bir üsul olaraq hazırlanmışdır. Test sistemi izotop etiketli hormon (antigen) və ona qarşı antiserum idi. İstədiyiniz hormonu ehtiva edən material belə bir antiseruma əlavə edilərsə, o zaman antikorların bir hissəsini bağlayacaq, sonra etiketli titrlənmiş hormonun tətbiqi ilə nəzarətlə müqayisədə onun daha az miqdarı antikorlara bağlanacaqdır. Nəticə bağlanmış və bağlanmamış radioaktiv etiketin əyrilərini müqayisə etməklə qiymətləndirilir. Bu cür üsul rəqabət reaksiyası adlanır. Radioimmunoloji metodun başqa modifikasiyaları da var. Radioimmunoassay metodu hormonları, dərmanları və antibiotikləri təyin etmək, bakterial, viral, rikketsial, protozoal xəstəliklərin diaqnostikasında, qan zülallarının, toxuma antigenlərinin öyrənilməsində istifadə olunan antigenlərin və anticisimlərin təyini üçün ən həssas üsuldur.

Müqayisəli xarakteristikası və seroloji tədqiqat metodlarının tibbi praktikada istifadəsi

S.-nin üsulları və. artan həssaslıq və istifadənin universallığı istiqamətində davamlı olaraq təkmilləşdirilmişdir. Əvvəlcə serol. diaqnoz antikorların aşkarlanmasına əsaslanır. 20-ci əsrin ortalarının gəlməsi ilə daha yüksək həssaslığa malik olan immunofluoressensiya və passiv hemaqlütinasiya reaksiyaları ilə xəstələrin materialında təkcə antikorları deyil, həm də antigeni birbaşa aşkar etmək mümkün oldu. Enzim-immunoloji və radioimmunoloji üsullar, həssaslıqda immunofluoressensiyadan və passiv hemaqlütinasiyadan 2-3 dərəcə böyükdür, biol metodlarına yaxınlaşır. bakteriya və virusların aşkarlanması. Həm antigenlərin, həm də antikorların aşkarlanması üçün onların tətbiqi sahəsi nəzəri cəhətdən qeyri-məhduddur.

Serodiagnosis inf. xəstəlik, patogenin xəstəliyin kəskin mərhələsində aşkar edilib-edilməməsindən asılı olmayaraq, təcrid olunmuş və ya şübhəli patogenə qarşı antikorların görünüşünə əsaslanır. Xəstəliyin başlanğıcında və 2-3 həftədə alınan qan zərdablarının cütlərini araşdırın. sonra. İkinci qan zərdabında antikorların birinci ilə müqayisədə ən azı 4 dəfə artması diaqnostik cəhətdən əhəmiyyətlidir. İmmunoqlobulinlərin hansı sinif antikorları ilə təmsil olunduğu da vacibdir. IgM antikorları xəstəliyin kəskin dövrünün sonunda və sağalmanın erkən mərhələsində aşkar edilir. IgG antikorları sağalmanın sonrakı mərhələlərində görünür və uzun müddət dövr edir. Hamiləliyin ilk trimestrində olan bir qadında məxmərək virusuna qarşı IgM antikorları aşkar edilərsə, bu, hamiləliyin dayandırılması üçün əsasdır, çünki bu dövrdə döl virusa xüsusilə həssasdır. Fərqli inf. xəstəliklər seçici olaraq ən spesifik və əlverişli üsullardan istifadə edirlər.

S. i. epidemiologiyada geniş istifadə olunur. Əhalinin müxtəlif qruplarından qan nümunələrinin sistematik şəkildə toplanması və tədqiqi əhalinin aktivatorların mənbəyi ilə təmaslarını anlamağa imkan verir. xəstəliklər. Kollektiv toxunulmazlıq səviyyəsinin öyrənilməsi yüksək risk qruplarını müəyyən etməyə və peyvənd tədbirlərini planlaşdırmağa, infeksiyaların coğrafi paylanmasını öyrənməyə imkan verir. S. i. əhalinin müxtəlif yaş qrupları, məsələn, müəyyən dövrlərdə qrip virusunun müxtəlif variantlarının dövriyyəsini retrospektiv olaraq müəyyən etməyə imkan verdi.

S. i. müvafiq hədəf hüceyrələri məhv edən toxuma və orqan spesifik antikorların görünüşü ilə müşayiət olunan irsi xəstəliklərin (bax) və otoimmün xəstəliklərin öyrənilməsində, həmçinin şiş antigenlərinin aşkarlanması üçün onkologiyada böyük əhəmiyyət kəsb edir. Belə ki, qaraciyər xərçənginin immunodiaqnozu xəstələrin qan zərdabında alfa-fetoprotein və digər embrion antigenlərinin immunodiffuziya və radioimmunoassay üsulları ilə təyin edilməsinə əsaslanır.

Serolda tətbiqi sayəsində hüceyrə antigenlərinin, bakteriya və virusların antigenlərinin incə antigenik quruluşunun öyrənilməsində elmin əhəmiyyətli irəliləyişi əldə edilmişdir. monoklonal antikorların reaksiyaları, to-çovdar antigen determinantlarını ayırmaq üçün qəbul etmək mümkündür.

Biblioqrafiya:İmmunologiyada tədqiqat metodları, red. I. Lefkovits və B. Pernis, trans. İngilis dilindən, M., 1981; İmmunologiyaya bələdçi, red. O. E. Vyazova və Ş. X. Xocayev. Moskva, 1973. Klinik laboratoriya diaqnostikası üçün təlimatlar, ed. V. V. Menşikov, Moskva, 1982. İmmunologiya, red. tərəfindən J.-F. Bax, N.Y., 1978.

S. Ya. Qaydamoviç.

Seroloji tədqiqat metodu.

Antigen-antikor reaksiyaları

Antikorun antigenlə qarşılıqlı təsirinin xüsusiyyətləri laboratoriyalarda diaqnostik reaksiyaların əsasını təşkil edir.

Reaksiya in vitro antigen və antikor arasında ehtiva edir:

spesifik

qeyri-spesifik faza.

AT spesifikasiyafiziki faza antikorun aktiv sahəsinin antigenin determinantına sürətli spesifik bağlanması var.

Sonra gəlir qeyri-spesifik faza - daha yavaş, bu da özünü göstərir görünən fiziki hadisələr məsələn, lopa əmələ gəlməsi (aglütinasiya fenomeni) və ya bulanıqlıq şəklində çöküntü. Bu faza müəyyən şərtlər (elektrolitlər, mühitin optimal pH-ı) tələb edir.

Bu məqsədlə müraciət edin seroloji üsullar (latdan. serum - serum və loqolar - doktrina), yəni qan zərdabında və digər mayelərdə, həmçinin bədən toxumalarında müəyyən edilmiş antigen-antikor reaksiyalarından istifadə edərək anticisimlərin və antigenlərin öyrənilməsi üsulları.

Mikrob xəstədən təcrid olunduqda, patogen immun diaqnostik seralardan, yəni spesifik antikorları olan hiperimmunizasiya olunmuş heyvanların qan seralarından istifadə etməklə onun antigen xassələrini öyrənməklə müəyyən edilir. Bu sözdə serolojiidentifikasiya mikroorqanizmlər.

Aqlütinasiya reaksiyaları

Aqqlütinasiya reaksiyası- RA(latdan. aglutinatio - bağlanma) - antikorların korpuskulyar antigenləri (bakteriyalar, eritrositlər və ya digər hüceyrələr, onlarda adsorbsiya edilmiş antigenləri olan həll olunmayan hissəciklər, həmçinin makromolekulyar aqreqatlar) bağladığı sadə reaksiya. Elektrolitlərin iştirakı ilə, məsələn, izotonik natrium xlorid məhlulu əlavə edildikdə baş verir.

Müxtəlif reaksiya variantlarıaglütinasiya:

yerləşdirilmiş,

göstərici,

dolayı və s.

Aqqlütinasiya reaksiyası lopa əmələ gəlməsi ilə özünü göstərir və ya çöküntü (iki və ya daha çox antigen bağlayan mərkəzlərə malik olan antikorlarla "yapışdırılmış" hüceyrələr).

Ra aşağıdakılar üçün istifadə olunur:

1) antikor aşkarlanması qan serumunda ağrınyh məsələn, brusellyoz (Wright, Heddelson reaksiyaları), tif və paratif qızdırma (Vidal reaksiya) və digər yoluxucu xəstəliklərlə;

patogen tərifləri , xəstədən təcrid olunmuş;

qan qruplarının təyini eritrosit allo-antigenlərinə qarşı monoklonal antikorların istifadəsi.

Xəstənin antikorlarını təyin etmək qoyuzadılmış aqlütinasiya reaksiyası: xəstənin qan serumunun seyreltmələrinə əlavə edin diaqnostik(öldürülmüş mikrobların dayandırılması) və 37 ° C-də bir neçə saat inkubasiyadan sonra aglütinasiyanın baş verdiyi, yəni bir çöküntü meydana gəldiyi ən yüksək serum seyreltməsi (serum titri) qeyd olunur.

Aqqlütinasiyanın təbiəti və sürəti antigen və antikorların növündən asılıdır. Məsələn, diaqnostiklərin (O- və K-antigenləri) spesifik antikorlarla qarşılıqlı təsirinin xüsusiyyətləri. ilə aglütinasiya reaksiyası O-diaqnostik(termostabili saxlayaraq istiliklə öldürülən bakteriyalar O antigen) xırda dənəli aglütinasiya şəklində baş verir. H-diagnosticum ilə aglütinasiya reaksiyası (formalin tərəfindən öldürülən, istiliyə davamlı flagellar H-antigenini saxlayan bakteriyalar) qaba dənəli olur və daha sürətli gedir.

Xəstədən təcrid olunmuş patogeni müəyyən etmək lazımdırsa, qoyun oriyentasiya aglütinasiya reaksiyası, diaqnostik antikorlardan (aglütinasiya edən serum) istifadə edərək, yəni patogenin serotiplənməsi aparılır. Təxmini reaksiya bir şüşə slaydda aparılır. 1:10 və ya 1:20 seyreltilmiş diaqnostik aglütinasiya zərdabının bir damlasına xəstədən təcrid olunmuş patogenin təmiz kulturasını əlavə edin. Yaxınlıqda bir nəzarət yerləşdirilir: serum əvəzinə bir damla natrium xlorid məhlulu tətbiq olunur. Serum və mikroblarla bir damcıda flokulyant çöküntü göründükdə, qoyurlar uzadılıb aglütinasiya reaksiyası aglütinasiya edən zərdabın artan seyreltmələri ilə sınaq borularında, 2-3 damcı patogen süspansiyon əlavə edilir. Aqqlütinasiya çöküntünün miqdarı və mayenin aydınlaşma dərəcəsi ilə nəzərə alınır. Reaksiya nəzərə alınırmüsbət, diaqnostik serumun titrinə yaxın seyreltmədə aglütinasiya qeyd edilərsə. Eyni zamanda, nəzarət nəzərə alınır: izotonik natrium xlorid məhlulu ilə seyreltilmiş zərdab şəffaf olmalıdır, eyni məhluldakı mikrobların süspansiyonu çöküntü olmadan bərabər buludlu olmalıdır.

Fərqli əlaqəli bakteriyalar eyni diaqnostik aglütinasiya zərdabında aglütinasiya oluna bilər ki, bu da onların identifikasiyasını çətinləşdirir. Buna görə də zövq alın adsorbsiya edilmiş aglütinasiya edən serumağızlar, onlardan çarpaz reaktiv antikorlar əlaqəli bakteriyalar tərəfindən adsorbsiya yolu ilə çıxarılır. Belə serumlarda yalnız bu bakteriyaya xas olan anticisimlər qalır. Bu yolla monoreseptor diaqnostik aglutinating sera əldə A. Castellani (1902) tərəfindən təklif edilmişdir.

Dolayı (passiv) hemagluti reaksiyasıMillət (RNGA, RPGA)əsasən istifadə olunureritrosit tədqiqatı(və ya lateks) adsorbiro iləonların səthində yuyulmuş antigenlər və yaantikorlar, müvafiq ilə qarşılıqlı əlaqəsi antikorlar xəstələrin qan zərdabında ya da antigenləri səbəb olur yapışqaneritrositlər kiçilir və borunun dibinə düşür və ya çəmən çöküntü şəklində hüceyrələr.

Mənfi reaksiya ilə eritrositlər "düymə" şəklində yerləşirlər. Adətən, RNGA-da antikorlar antigenik eritrosit diaqnostikumundan istifadə edərək aşkar edilir, bu, onlarda adsorbsiya edilmiş antigenləri olan eritrositlərdir. Bəzən antikorların adsorbsiya edildiyi antikor eritrosit diaqnostikumları istifadə olunur. Məsələn, botulinum toksini ona eritrosit antikoru botulinum diaqnostikumu əlavə etməklə aşkar edilə bilər (bu reaksiya deyilir geri reaksiyadolayı hemaqlütinasiya -RONGA). RNHA yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikasında, hamiləlik müəyyən edildikdə sidikdə gonadotrop hormonun müəyyən edilməsində, dərmanlara, hormonlara və bəzi digər hallarda həssaslığın aşkarlanması üçün istifadə olunur.

Koaglütinasiya reaksiyası. Patojen hüceyrələri immun diaqnostik serum ilə əvvəlcədən müalicə olunan stafilokoklardan istifadə edərək müəyyən edilir. Stafilokoklar olan zülallar AMMA, immunoqlobulinlərin Fc fraqmentinə yaxınlığa malik olmaqla, antimikrob anticisimləri qeyri-spesifik adsorbsiya edir, sonra isə xəstələrdən təcrid olunmuş müvafiq mikroblarla aktiv mərkəzlərlə qarşılıqlı əlaqədə olur. Koaqlütinasiya nəticəsində stafilokoklardan, diaqnostik serum anticisimlərindən və təyin olunan mikrobdan ibarət lopa əmələ gəlir.

Hemaqlütinasiya inhibə reaksiyası(RTGA) blokadaya əsaslanır bastırma envirus pələngləri immun serumun antikorları, bunun nəticəsində viruslar qırmızı qan hüceyrələrini aglutinasiya etmək qabiliyyətini itirirlər. RTHA bir çox viral xəstəliklərin diaqnostikasında istifadə olunur, onların törədicisi (qrip, qızılca, məxmərək, gənə ensefaliti və s.) müxtəlif heyvanların eritrositlərini aglutinasiya edə bilir.

Anti-Rhesus anticisimlərinin təyini üçün aglütinasiya testi (dolayı testCoombs) damardaxili hemoliz olan xəstələrdə istifadə olunur. Bu xəstələrin bəzilərində natamam, monovalent olan anti-rezus anticisimləri aşkar edilir. Onlar xüsusi olaraq Rh-müsbət eritrositlərlə qarşılıqlı əlaqədə olurlar, lakin onların aglütinasiyasına səbəb olmurlar. Belə natamam antikorların olması dolayı Coombs reaksiyasında müəyyən edilir. Bunun üçün antiqlobulin zərdabı (insan immunoqlobulinlərinə qarşı anticisimlər) anti-Rh anticisimləri + Rh-müsbət eritrositlər sisteminə əlavə olunur ki, bu da eritrositlərin aglütinasiyasına səbəb olur. Coombs reaksiyasından istifadə edərək, immun mənşəli eritrositlərin damardaxili lizisi ilə əlaqəli patoloji vəziyyətlər, məsələn, yenidoğanın hemolitik xəstəliyi diaqnozu qoyulur: Rh-müsbət dölün eritrositləri qanda dolaşan Rh faktoruna qarşı natamam antikorlarla birləşir. Rh-mənfi anadan olan plasenta.