Aqlütinasiya reaksiyaları. Komponentlər, mexanizm, qoyulma üsulları, tətbiqi. Dolayı hemaqlütinasiya reaksiyası. Coombs reaksiyası. Koaglütinasiya reaksiyası. Hemaqlütinasiya inhibə reaksiyası. Dolayı hemaqlütinasiya reaksiyası Daha dəqiq rnga və ya rpga nədir

Dolayı və ya passiv hemaqlütinasiya reaksiyası (RNHA və ya RPHA) aglütinasiya reaksiyasından daha həssas və spesifikdir. Bu reaksiya da iki istiqamətdə istifadə olunur.

1) Xəstənin qan zərdabında antikorları aşkar etmək üçün eritrosit diaqnostikumları istifadə olunur, bu zaman antigen tanin ilə müalicə olunan eritrositlərin səthində adsorbsiya edilir. Bu reaksiya ilə əlaqədar olaraq, RPHA termini daha çox istifadə olunur.

Test serumu plastik plitələrin quyularında seyreltilir və eritrosit diaqnostikumu əlavə edilir. Müsbət reaksiya ilə quyunun divarlarında "krujeva çətiri" şəklində nazik bir film görünür, mənfi reaksiya ilə "düymə" şəklində eritrositlərin sıx bir çöküntüsü görünür.

2) Test materialında toksinləri və bakterial antigenləri aşkar etmək üçün eritrositlərə antikorların adsorbsiya edilməsi yolu ilə əldə edilən antikor eritrosit diaqnostikumlarından istifadə olunur. Bu reaksiya ilə əlaqədar olaraq RNGA termini daha çox istifadə olunur. Məsələn, anticisim diaqnostikumlarının köməyi ilə taun basilinin antigeni, difteriya ekzotoksini, botulinum ekzotoksini aşkar edilir.

Coombs reaksiyası (aptiqlobulin testi)

Reaksiya, natamam antikorları, məsələn, Rh faktoruna qarşı antikorları aşkar etmək üçün istifadə olunur. Test serumu Rh faktoruna natamam antikorların olması gözlənilən Rh + eritrositlərə əlavə edilir. Eritrositlərə bağlanmış natamam antikorlar aglütinasiyaya səbəb olmur, çünki onların yalnız bir aktiv mərkəzi var. Sonra insan qlobulinlərinə antikor ehtiva edən antiqlobulin serumunu əlavə edin. Natamam antikorlarla birləşdirildikdə, antiglobulin serum eritrositlərin aglütinasiyasına səbəb olur.

çökmə reaksiyası

Reaksiyanın mahiyyəti spesifik antikorların təsiri altında antigenin çökməsidir (çökməsi). Görünən bir reaksiya əldə etmək üçün elektrolitin olması lazımdır. Yağış reaksiyasındakı antigen molekulyar dağılmış maddələrdir.

Halqanın çökmə reaksiyası dar çökdürmə borularına yerləşdirilir. İmmun zərdab sınaq borusuna tökülür və test materialı onun üzərinə diqqətlə laylanır. Tərkibində bir antigen olduqda, iki mayenin sərhədində qeyri-şəffaf bir çöküntü halqası meydana gəlir.

Reaksiya məhkəmə tibbdə qan ləkələrində, spermada və s. zülalların növlərini təyin etmək üçün istifadə olunur; qarayara (Askoli reaksiyası), meningit və digər infeksiyaların diaqnozunda antigeni müəyyən etmək; sanitar-gigiyenik tədqiqatlarda - qida məhsullarının saxtalaşdırılmasını müəyyən etmək. İmmun çöküntü zərdabları heyvanları müvafiq antigenlə immunizasiya etməklə əldə edilir. Məsələn, zərdabda çökdürən insan zülalı dovşanı insan zülalı ilə immunizasiya etməklə əldə edilir. Çöküntü zərdabının titri onun reaksiya verdiyi antigenin ən yüksək qatılaşmasıdır. Serum adətən seyreltilmədən və ya 1:5 nisbətində seyreltilmiş istifadə olunur.

Agar gel çöküntü reaksiyası bir neçə yolla həyata keçirilir. Bu, ikiqat immunodiffuziya reaksiyası, radial immunodiffuziya reaksiyası, immunoelektroforez reaksiyasıdır.

İkiqat immunodiffuziya reaksiyası(Ouchterlony-yə görə). Ərinmiş agar geli Petri qabına tökülür və bərkidikdən sonra içindəki quyular kəsilir. Bəzi quyulara antigen, digərlərinə isə immun zərdablar yerləşdirilir, onlar agara diffuziya olunur, görüş nöqtəsində ağ zolaqlar şəklində çöküntü əmələ gətirir.

Radial immunodiffuziya reaksiyası(Mançiniyə görə). İmmun serum ərinmiş agar gelə əlavə edilir, bir qaba tökülür. Aqar bərkidikdən sonra içindəki quyular kəsilir və onların içərisinə antigenlər yerləşdirilir ki, bunlar agara diffuziya edərək quyuların ətrafında həlqəvari yağıntı zonaları əmələ gətirir. Antigen konsentrasiyası nə qədər yüksək olarsa, halqanın diametri bir o qədər böyük olar. Reaksiya, məsələn, qanda immunoqlobulinlərin müxtəlif siniflərini təyin etmək üçün istifadə olunur. IgG, IgM, IgA siniflərinin immunoqlobulinləri bu reaksiyada antigen kimi çıxış edir və onlara qarşı anticisimlər spesifik monoreseptor seralarında olur.

İmmunoelektroforez. Protein antigenlərinin elektroforezi agar geldə aparılır. Çöküntü yaradan serum zülalların hərəkət istiqamətinə paralel gedən yivə daxil edilir. Antigenlər və antikorlar agara diffuziya olunur və onların görüş nöqtəsində çöküntü xətləri əmələ gəlir.

İmmun lizis reaksiyaları

Bir antigen (eritrositlər və ya bakteriyalar) spesifik antikorlarla birləşərək, komplemanın (C1) bağlandığı bir immun kompleksi əmələ gətirir və komplementin aktivləşməsi klassik yol boyunca baş verir. Aktivləşdirilmiş komplement qırmızı qan hüceyrələrini (hemoliz) və ya bakteriyaları (bakterioliz) parçalayır. Bakterioliz reaksiyası vibrio xoleranı müəyyən etmək üçün istifadə olunur.

hemoliz reaksiyası. Reaksiyada olan antigen eritrositlərdir, antikorlar (hemolizinlər) hemolitik serumda olur. Hemolizinlər eritrositlərə bağlanır, eritrositləri parçalayan komplementin aktivləşməsi baş verir. Eritrositlərin buludlu bir süspansiyonu şəffaf parlaq qırmızı mayeyə - "lak qanına" çevrilir. Hemoliz reaksiyası yalnız komplementin iştirakı ilə baş verdiyi üçün ondan komplementin aşkarlanması üçün göstərici kimi istifadə olunur.

Geldə yerli hemoliz reaksiyası(Jerne reaksiyası) - hemoliz reaksiyasının variantı. Dalaq və limfa düyünlərində antikor əmələ gətirən hüceyrələrin (AFC) sayını təyin etməyə xidmət edir.

Ərinmiş agar geli dalaq hüceyrələrinin və eritrositlərin suspenziyası ilə qarışdırılır və agar bərkləşdikdən sonra komplement əlavə edilir. Hemolizinlər istehsal edən hər bir hüceyrənin ətrafında hemoliz zonası əmələ gəlir. Belə zonaların sayı hemolizinlər istehsal edən hüceyrələrin sayını təyin edir.

Mikrobların birbaşa aglütinasiya reaksiyası (RA). Bu reaksiyada antikorlar (aqqlütininlər) birbaşa korpuskulyar antigenləri (aqqlutanogenlər) aglütinləşdirir. Adətən onlar inaktivləşdirilmiş mikroorqanizmlərin süspansiyonu ilə təmsil olunurlar (mikrob aglütinasiya reaksiyası). Yaranan aqqlütinatın təbiətinə görə dənəvər və qabıqlı aglütinasiya fərqlənir. O-antigeni olan mikroblar bir-birinə yapışdıqda dənəvər aglütinasiya baş verir. Flagella (H-antigeni) olan bakteriyalar böyük lopa əmələ gətirmək üçün aglütinləşirlər.

Mikroorqanizmlərin növünü təyin etmək üçün standart diaqnostik aglütinasiya zərdablarından istifadə olunur. Onlar bakteriya suspenziyası ilə laboratoriya heyvanlarının hiperimmunizasiyası ilə əldə edilir. Belə zərdabın titri onun ən yüksək qatılmasıdır, bu zaman müvafiq antigenin aydın aglütinasiyası müşahidə olunur. Bununla belə, bakteriyaların antigen strukturunun mürəkkəbliyi ilə əlaqədar olaraq, aglütinasiya edən zərdablar yalnız növə aid deyil, həm də qrup antigenlərinə qarşı anticisimləri ehtiva edir və əlaqəli bakteriya növləri ilə qrup aqlütinasiyası verə bilir. Növlərə xas antigenlərə zərdabın antikor titrləri həmişə qrup antigenlərinə nisbətən daha yüksəkdir. Qrupa xas anticisimləri çıxarmaq üçün tərkibində qrup antigenləri olan mikroorqanizmlər ardıcıl olaraq seruma əlavə edilir (Castellani üsulu). Bu üsul müəyyən bir mikrob növünə qarşı antikorları ehtiva edən adsorbsiya edilmiş seraların alınması üçün istifadə olunur.

Aqlütinasiya reaksiyası üsulları.Ən çox yayılmış lamellar (göstərici) və yerləşdirilən RA-dır.

Lamellar RA şüşəyə yerləşdirilir. Bu reaksiyada azca seyreltilmiş və ya seyreltilmemiş serumlar istifadə olunur. Antikorların aşkarlanması və ya mikroorqanizmlərin müəyyən edilməsi üçün sürətləndirilmiş üsul kimi istifadə olunur. Şüşəyə bir damla zərdab tətbiq olunur, içərisinə naməlum bakteriyalar kulturası bir döngə ilə daxil edilir, qarışdırılır və 2-3 dəqiqədən sonra incə dənəli və ya lopa aglütinasiya görünüşü müşahidə olunur. Nəzarət üçün, bakteriyaların daxil olmasından sonra bulanıqlığın müşahidə edildiyi bir damla fizioloji məhlul istifadə olunur. Adsorbsiya olunmayan seralardan istifadə edərkən slayddakı reaksiya yalnız təlimat xarakteri daşıyır.

Genişləndirilmiş RA sınaq borularında və ya boşqab quyularında aparılır. Bu halda diaqnostik serum titrə qədər seyreltilir və bərabər miqdarda antigen əlavə edilir. Nəticə müsbət olarsa, sınaq borusunun dibində "çətir" şəklində boş çöküntü, mənfi nəticə olduqda "düymə" şəklində bir çöküntü əmələ gəlir. Serumda qrupa xas anticisimlərin titrləri növə xas olanların titrindən xeyli aşağı olduğundan qrup reaksiyaları yalnız kiçik serum seyreltmələrində müşahidə olunur. Əgər zərdab titrinin titrində və ya yarısında aglütinasiya baş verirsə, bu, növə xasdır.

Xəstənin zərdabında (seroloji diaqnostika) antikorları təyin etmək üçün məlum mikrobların və ya onların antigenlərinin süspansiyonunu ehtiva edən standart mikrobial diaqnostikum istifadə olunur. Bu vəziyyətdə, bir boşqab və yerləşdirilən RA quraşdırmaq da mümkündür.

Hüceyrələrin birbaşa aglütinasiyası reaksiyası. Qan qruplarını müəyyən etmək üçün tərkibində məlum anti-A və ya anti-B antikorları olan standart donor qan seralarından istifadə edilir. Reaksiyalar şüşə və ya boşqablara yerləşdirilir. Eritrositlərdə A (2-ci qan qrupu), B (3-cü qan qrupu) və ya hər iki antigen (4-cü qan qrupu) olduqda, müvafiq zərdab eritrositləri aglütinləşdirir. Donordan və alıcıdan qan damlaları qarışdırıldıqda və aglütinasiya qiymətləndirildikdə qan uyğunluğu testi də istifadə olunur.

Klinikalarda leykositlərin, trombositlərin və digər hüceyrələrin aglütinasiya reaksiyasından avtoantikorları aşkar etmək, həmçinin bu hüceyrələrdə antigenləri təyin etmək üçün istifadə olunur.

Hemaqlütinasiya reaksiyasının əsasını müxtəlif amillərin təsiri altında baş verən eritrositlərin aglütinasiyası fenomeni təşkil edir. Birbaşa və dolayı hemaqlütinasiyanı fərqləndirin.
Birbaşa hemaqlütinasiya reaksiyasında eritrositlər müəyyən antigenlər, məsələn, viruslar onlara adsorbsiya edildikdə bir-birinə yapışır.

Dolayı (passiv) hemaqlütinasiya reaksiyası (RNHA, RPHA) eritrositlərin (və ya lateksin) səthində adsorbsiya edilmiş antigenləri və ya anticisimləri ilə istifadəsinə əsaslanır, xəstələrin qan zərdabının müvafiq antikorları və ya antigenləri ilə qarşılıqlı təsiri eritrositlərin bir-birinə yapışmasına və dibinə tökülməsinə səbəb olur. skaloplu çöküntü şəklində sınaq borusu və ya hüceyrə.

Komponentlər. RNHA istehsalı üçün qoyun, at, dovşan, toyuq, siçan, insan və başqalarının eritrositləri istifadə edilə bilər, gələcəkdə istifadə üçün yığılır, formalin və ya qlutaraldehidlə müalicə olunur. Eritrositlərin adsorbsiya qabiliyyəti tanin və ya xrom xlorid məhlulları ilə müalicə olunduqda artır.

RNGA-da mikroorqanizmlərin polisaxarid antigenləri, bakterial peyvəndlərin ekstraktları, virusların və rikketsiyaların antigenləri, həmçinin digər maddələr antigen kimi xidmət edə bilər.

AG ilə həssaslaşan eritrositlərə eritrosit diaqnostikumu deyilir. Eritrosit diaqnostikumunun hazırlanması üçün ən çox yüksək adsorbsiya aktivliyinə malik olan qoç eritrositlərindən istifadə olunur.

Ərizə. RNHA yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikasında, hamiləlik müəyyən edildikdə sidikdə gonadotrop hormonun müəyyən edilməsində, dərmanlara, hormonlara və bəzi digər hallarda həssaslığın aşkarlanması üçün istifadə olunur.

Seroloji tədqiqatlarda xəstədən təcrid olunmuş virus spesifik immun serumla zərərsizləşdirildikdə və sonra qırmızı qan hüceyrələri ilə birləşdirildikdə birbaşa hemaqlütinasiyanın qarşısının alınması reaksiyasından istifadə olunur. Hemaqlütinasiyanın olmaması virusun və istifadə olunan immun serumun uyğunluğunu göstərir.

Dolayı hemaqlütinasiya reaksiyası (passiv hemaqlütinasiya) müxtəlif antigenlərlə qabaqcadan müalicə olunmuş (sensibilizasiya edilmiş) eritrositlər immun zərdab və ya müvafiq anticisimlərə malik olan xəstə zərdabları ilə tamamlandıqda müşahidə edilir. Eritrositlərin spesifik birləşməsi, onların passiv hemaglutinasiyası var.

Dolayı və ya passiv hemaqlütinasiya reaksiyası həssaslıq və spesifiklik baxımından digər seroloji üsullardan üstündür və o, bakteriya, rikketsiya və protozoaların törətdiyi infeksiyaların diaqnostikasında istifadə olunur.

Dolayı hemaqlütinasiya reaksiyasının təyini üsulu bir neçə mərhələdən ibarətdir.

· Əvvəlcə eritrositlər izotonik natrium xlorid məhlulu ilə yuyulur, sonra zərurət yarandıqda (zülal xarakterli antigenlərdən istifadə edildikdə) 1: 20 000 tannin məhlulu ilə müalicə olunur və həll olunan antigenlərlə həssaslaşdırılır.

Tamponlu izotonik natrium xlorid məhlulu ilə yuyulduqdan sonra eritrosit antigeni istifadəyə hazırdır.

· Tədqiq olunan zərdablar sınaq borularında və ya deşikləri olan xüsusi plastik boşqablarda izotonik natrium xlorid məhlulu ilə seyreltilir, sonra hər bir zərdab seyreltməsinə eritrosit diaqnostikumu əlavə edilir.

· Dolayı hemaqlütinasiya reaksiyasının nəticələri borunun dibində əmələ gələn eritrosit çöküntüsünün xarakteri ilə nəzərə alınır.

· Reaksiyanın nəticəsi müsbət hesab olunur, bu zaman eritrositlər sınaq borusunun bütün dibini bərabər şəkildə əhatə edir. Mənfi reaksiya ilə, kiçik bir disk və ya "düymə" şəklində eritrositlər sınaq borusunun dibinin mərkəzində yerləşir.

37 ° C-də 2 saat inkubasiyadan sonra nəticələr eritrosit çöküntüsünün görünüşünü qiymətləndirərək nəzərə alınır (sarsılmadan): mənfi reaksiya ilə dibində bir kompakt disk və ya üzük şəklində bir çöküntü görünür. quyunun, müsbət reaksiya ilə, xarakterik krujevalı eritrosit çöküntüsü, qeyri-bərabər kənarları olan nazik bir təbəqə

Koaglütinasiya reaksiyası.

Bu reaksiya IgG və IgM-nin Fc fraqmentlərinə bağlanmaq üçün hüceyrə divarında protein A olan qızılı stafilokokun unikal xüsusiyyətinə əsaslanır.

Eyni zamanda, antikorların aktiv mərkəzləri sərbəst qalır və antigenlərin spesifik determinantları ilə qarşılıqlı əlaqədə ola bilər. Müvafiq antikorlarla sensibilizasiya edilmiş stafilokokların 2%-li süspansiyonunun bir damcısı şüşə slaydın üzərinə vurulur və tədqiq edilmiş bakteriyaların bir damla süspansiyonu əlavə edilir. Antigen antikorlara uyğun olduqda, 30-60 saniyədən sonra antikorlarla yüklənmiş stafilokokların aydın aglütinasiyası baş verir.

Stafilokokk hüceyrələrinin sensibilizasiyası və sensibilizasiya prosesinin aparılması üçün istifadə olunan immun seruma tələblər. Koaglütinləşdirici reagent əldə etmək üçün stafilokokların süspansiyonu istənilən antigenə qarşı immun serumla müalicə edilməlidir. Serum IgG-si A proteininə yaxınlığı olan heyvandan götürülməlidir. Onun üçün ən yüksək yaxınlıq insan, donuz, it və qvineya donuzunun immunoqlobulinlərinə, daha az eşşək və dovşanlara, qoyun, at, siçovul və siçan IgG ilə qarşılıqlı əlaqədədir. çox zəifdir.

İstənilən antigenə ciddi spesifikliyə əlavə olaraq, RKOA-da istifadə olunan zərdabda IgG - protein A sistemində olan antigen və antikorların spesifik təsiri səbəbindən stafilokok reagentinin aglütinasiyasının qarşısını almaq üçün qızıl stafilokoklara qarşı anticisimlər olmamalıdır. istisna edilməlidir. Nəzarət bir damcı serum və stafilokok reagentinin 10% suspenziyasını şüşə üzərində qarışdırmaqla həyata keçirilir. Əgər 3-5 dəqiqədən sonra aglutinat lopaları əmələ gəlmirsə, onda zərdab reaksiya üçün uyğun hesab edilir.

Əgər bu antigenin mövcud zərdabları stafilokok aureusunu aglütinləşdirirsə, onda onlar A proteini olmayan stafilokok hüceyrələrin süspansiyonu ilə adsorbsiya oluna bilər (məsələn, Wood-46 ştammları). Bu şəkildə, Fab fraqmentləri səbəbiylə stafilokok ilə reaksiya verən antikorlar çıxarılır.

Beləliklə, laxtalanma reagentini hazırlamaq üçün istifadə olunan serum aşağıdakı tələblərə cavab verməlidir:

IgG-si A proteininə yaxınlığı olan heyvan istehsalçısından əldə edilir;
maraq doğuran antigen üçün spesifik olmalıdır;
anti-stafilokokal antikorlardan azad olun.

· Diaqnostikanın hazırlanması. Hazırlanmış 10% stafilokokal reagent, əvvəllər müəyyən edilmiş optimal işləyən seyreltmədə bərabər həcmdə immun serum ilə birləşdirilir. Qarışıq Schutgel aparatında dəqiqədə 90 vibrasiya ilə 40-42°C temperaturda 60 dəqiqə çalxalanır. Sonra, 15 dəqiqədən sonra, onlar iki dəfə PBS ilə yuyulur, 2% suspenziyaya qədər yenidən dayandırılır və natrium mertiolat (1: 10,000) ilə qorunur.

Dərs 14

Mövzu: Dolayı seroloji reaksiyalar. Dolayı hemaqlütinasiya (RNHA), komplement fiksasiyası (RSK) reaksiyaları.

Antikorlar

Antikorlar antigenlərə spesifik bağlana bilən zülal molekullarıdır. Antikorlar qamma-qlobulinlərdir. Antikorların başqa bir adı immunoqlobulinlərdir. Məməlilərdə öz quruluşuna və bəzi xassələrinə görə fərqlənən immunoqlobulinlərin 5 sinfi var: IgG, IgM, IgA, IgE, IgD.

İmmunoqlobulinlərin quruluşu. IgG ən "tipik" quruluşa malikdir. Molekul 4 zülal zəncirindən ibarətdir: iki yüngül (L) və iki ağır (H), disulfid bağları ilə bir-birinə bağlıdır. Antikorun antigenlə bağlandığı yerə antikorun aktiv yeri deyilir. IgG molekulunun 2 aktiv mərkəzi var. Ağır və yüngül zəncirlərin N-terminal hissələri tərəfindən əmələ gəlir. Disulfid bağlarının yaxınlığında yerləşən ağır zəncirlərin bölgəsi menteşə bölgəsi adlanır. Papain fermentinin köməyi ilə menteşə bölgəsinin üstündəki IgG molekulu 3 fraqmentə bölünür: onlardan 2-si yüngül zəncir və bir hissəsi ağır zəncirdən ibarətdir (Fab fraqmentləri); üçüncü fraqment isə ağır zəncirlərin yalnız bir hissəsindən ibarətdir (Fc fraqmenti). Daşınan menteşə bölgəsi sayəsində Fab fraqmentləri kosmosdakı nisbi mövqelərini dəyişə bilər.

Yüngül və ağır zəncirlərin amin turşusu ardıcıllığı sabit (sabit) və dəyişən bölgələrə bölünür. Dəyişən bölgələr yüngül və ağır zəncirlərin (VL və VH) N-terminusunda yerləşir. Sabit bölgələr zəncirlərin C-terminusunda (CL və CH) yerləşir. Yüngül və ağır zəncirlərdə amin turşusu ardıcıllığı domen adlanan bir neçə qlobulyar struktur əmələ gətirir.

Antikorun aktiv yeri yüngül və ağır zəncirlərin dəyişkən sahələrindən əmələ gəlir və boşluqdur ( paratop), onun səthində elektrik yüklərinin müəyyən konfiqurasiyası və paylanması var. Aktiv sahədə yüklərin ölçüsü, forması və paylanması onun spesifikliyini, yəni müəyyən bir antigen determinantına bağlanma qabiliyyətini müəyyən edir ( epitop), tamamlayıcı quruluşa malikdir.

Antigen determinantları antigen molekullarının səthinə çıxan sahələrdir. Beləliklə, epitop-paratop qarşılıqlı əlaqəsi "açar-kilid" prinsipinə uyğun olaraq baş verir.

Antikorların aktiv mərkəzi ilə antigen determinantı arasındakı əlaqənin gücü yaxınlıq anlayışı ilə xarakterizə olunur. qohumluq aktiv sahənin və antigen təyinedicinin yaxınlığının ölçüsüdür.

IgG sinif immunoqlobulinləri serum immunoqlobulinlərinin ümumi miqdarının 75%-ni təşkil edir. IgG-nin əhəmiyyətli bir xüsusiyyəti plasentanı keçmək qabiliyyətidir. Beləliklə, ananın antikorları uşağın bədəninə daxil olur və onu həyatın ilk aylarında infeksiyadan qoruyur (təbii passiv toxunulmazlıq).

İmmunoqlobulinlərin ümumi hovuzunun təxminən 10% -i IgM sinfinə aiddir. IgM molekulu pentamerdir, yəni quruluşca IgG molekuluna bənzər 5 eyni molekuldan ibarətdir, 10 aktiv mərkəzə malikdir. Alt hissələr disulfid bağları ilə bir-birinə bağlıdır. IgM molekulunda subunitləri bağlayan əlavə bir J-zəncir var. IgM sinifinin antikorları plasental maneədən keçmir.

IgA sinifinin antikorları immunoqlobulinlərin ümumi tərkibinin 15-20% -ni təşkil edir. IgA molekulu 2 yüngül və 2 ağır zəncirdən ibarətdir, 2 aktiv mərkəzə malikdir. Qan zərdabında IgA monomer formada, selikli qişaların sekresiyalarında isə IgA dimerlər şəklində təqdim olunur və sekretor və ya sİgA adlanır, onların 4 aktiv mərkəzi olur. sIgA molekulundakı ağır zəncirlərin C-terminalları bir J zənciri və sekretor komponent adlanan zülal molekulu ilə bir-birinə bağlıdır. Sekretor komponent sIgA-nı selikli qişaların sekresiyasında böyük miqdarda olan proteolitik fermentlər tərəfindən parçalanmadan qoruyur. sIgA-nın əsas funksiyası selikli qişaları infeksiyadan qorumaqdır. IgA plasental maneəni keçmir. sIgA-nın yüksək konsentrasiyası qadınların ana südündə, xüsusən də laktasiyanın ilk günlərində olur. Yenidoğanın mədə-bağırsaq traktını infeksiyadan qoruyurlar.

IgD-lər əsasən B-limfositlərin membranında olur. IgG-yə bənzər bir quruluşa, 2 aktiv mərkəzə malikdirlər. Bioloji rolu tam məlum deyil.

IgE - qan serumunda bu sinif immunoglobulinlərin konsentrasiyası son dərəcə aşağıdır. IgE molekulları əsasən mast hüceyrələrinin və bazofillərin səthində sabitləşir. Strukturunda IgE IgG-yə bənzəyir, 2 aktiv mərkəzə malikdir. Güman edilir ki, antihelmintik immunitetin inkişafında IgE vacibdir. IgE bəzi allergik xəstəliklərin (bronxial astma, ot qızdırması) və anafilaktik şokun patogenezində böyük rol oynayır.

Dolayı hemaqlütinasiya reaksiyası

Dolayı seroloji reaksiyalarda antikorlarla antigen kompleksi adi gözlə görünmür. Belə hallarda antigenlər daha böyük daşıyıcı hissəciklərə (eritrositlər, lateks hissəcikləri) adsorbsiya edilir, antigen eritrosit diaqnostikumu alınır. Belə hissəciklərin sonradan spesifik anticisimlərlə aglütinasiyası aqlütinatı (çökməni) adi gözlə görmək imkanı verir. Dolayı (passiv) hemaqlütinasiya (RIHA) reaksiyası, onlarda adsorbsiya edilmiş antigenləri olan eritrositlər olan bir antigen eritrosit diaqnostikumundan istifadə edərək qan serumunda antikorları aşkar edir.

Üzərlərində adsorbsiya edilmiş antigenləri olan eritrositlər müvafiq qan zərdabının anticisimləri ilə qarşılıqlı əlaqədə olurlar, bu da eritrositlərin bir-birinə yapışmasına və çubuqlu çöküntü şəklində borunun və ya hüceyrənin dibinə tökülməsinə səbəb olur. Mənfi reaksiya ilə eritrositlər bir düymə şəklində yerləşirlər.

RNHA plastik tabletlərə və ya eritrosit diaqnostikumunun əlavə olunduğu qan serumu seyreltmələri ilə sınaq borularına yerləşdirilir.

Bəzən antikor eritrosit diaqnostikumu istifadə olunur - antikorların adsorbsiya edildiyi eritrositlər. Bu reaksiya RONGA adlanır - əks dolayı hemaqlütinasiya reaksiyası.

RNGA komponentləri:

Xəstənin qanının serumu (seyreltmə 1:25);

Eritrosit diaqnostikası (tədqiq olunan patogenin antigeni ilə yüklənmiş eritrositlər);

Yuma həlli.

RNGA səhnələşdirilməsi. İmmunoloji tədqiqatlar üçün lövhənin yeddi quyusuna iki damcı fosfat tampon məhlulu əlavə edilir. Birinci quyuya xəstənin qan zərdabından iki damcı əlavə edilir, bundan sonra birinci quyudan ikinci quyuya 2 damcı, ikinci quyudan üçüncü quyuya və s. altıncı quyudan 2 damcı çıxarılır. Bütün yeddi quyuya (6 eksperimental və 1 nəzarət) 2 damcı eritrosit diaqnostikumu əlavə edin. Hər əməliyyatdan sonra pipeti yuyucu məhlulda yaxalamaq lazımdır. Plitələr otaq temperaturunda 45 dəqiqə saxlanılır, bundan sonra nəticələr nəzərə alınır.

Komplementin fiksasiya reaksiyası

Komplementin fiksasiya reaksiyası ondan ibarətdir ki, bir antigen antikorla birləşdirildikdə, antikorun Fc fraqmenti vasitəsilə tamamlayıcı birləşən bir immun kompleks əmələ gəlir. Əgər antigen-antikor kompleksi əmələ gəlmirsə, onda tamamlayıcı sərbəst qalır. Sərbəst komplement qarışığa qoç eritrositlərindən və onlara qarşı anticisimlərdən ibarət hemolitik sistemin əlavə edilməsi ilə aşkar edilir. Müsbət reaksiya, komplementin antigen + antikor kompleksinə bağlanması nəticəsində hemolizin olmamasıdır. Mənfi reaksiya eritrosit + antieritrosit antikor kompleksinə komplementin bağlanması nəticəsində hemolizin olmasıdır.

RSK komponentləri:

Sağlam qan serumu;

Xəstənin qanının serumu (1:5 nisbətində seyreltilmiş);

Reaksiyanın antigenik komponenti təsirsiz hala salınmış patogendir;

İşçi dozaya uyğun seyreltmədə tamamlayın. Komplement qvineya donuzunun qan serumundan alınır. Komplement titri onun minimal dozasıdır, hemolitik serumun iştirakı ilə eritrositlərin tam hemolizinə səbəb olur. CSC-nin qəbulunda istifadə olunan komplementin işçi dozası onun titrindən 30% çoxdur;

Hemolitik sistem - qoç eritrositlərinə dovşan antikorları ilə müalicə olunan qoç eritrositlərinin dayandırılması.

Yuma həlli.

RSK parametri. RSK iki sınaq borusuna qoydu - eksperimental və nəzarət. Probirkaya xəstənin qan zərdabından 0,5 ml, nəzarət borusuna 0,5 ml sağlam donorun qan zərdabından, hər iki boruya 0,5 ml patogen lizat və 0,5 ml komplement əlavə edilir. Hər əməliyyatdan sonra pipeti yuyucu məhlulda yaxalamaq lazımdır. Borular 30 dəqiqə ərzində 37°C temperaturda termostata yerləşdirilir. İnkubasiyadan sonra hər iki sınaq borusuna 1,0 ml hemolitik sistem əlavə edilir. Borular silkələnir və 30 dəqiqə ərzində 37°C-də termostata yerləşdirilir. Test borusunda müsbət reaksiya ilə hemoliz gecikir (rəngsiz maye və eritrosit çöküntüsü), nəzarət borusunda - eritrositlərin hemolizi.

Dərsə hazırlamaq üçün ədəbiyyat:

1. Borisov mikrobiologiyası, virusologiyası, immunologiyası. M., 2002.

2. Tibbi mikrobiologiya, virusologiya və immunologiya. Ed. . M., 2004.

3. Pozdeyev mikrobiologiyası. M., GEOTAR-MEDIA, 2005.

Antigenlərin əvvəlcədən adsorbsiya olunduğu eritrositlərin homoloji zərdabların (anticisimlərin) iştirakı ilə aglütinasiya qabiliyyəti əldə etməsinə əsaslanır.

Bu zaman eritrositlər spesifik determinantlara malik daşıyıcı rolunu oynayır, onların aglütinasiyası antigen + antikor reaksiyası nəticəsində baş verir.

Səthinə antigenlərin möhkəm bağlandığı eritrositlərə eritrosit antigen diaqnostikum və ya antigenlə həssaslaşan eritrositlər deyilir.

RNHA-nın başqa bir növü - antikorlar eritrositlərin səthində adsorbsiya olunur və onların sonrakı aglütinasiyası homoloji antigenin iştirakı ilə baş verir. Bu zaman belə eritrositlərə eritrosit anticisim diaqnostikum və ya anticisimlər tərəfindən həssaslaşdırılmış eritrositlər deyilir.

Bu iki fundamental metodoloji yanaşma əsasında RNGA-nın bir çox modifikasiyası hazırlanmış və istifadə olunur. Beləliklə, daşıyıcı kimi kiçik standart lateks hissəcikləri istifadə olunur. Bu halda, reaksiya lateks aglütinasiya reaksiyası (RLA) adlanır və ya qızıl stafilokok istifadə olunur - laxtalanma reaksiyası və s.. Adətən, eritrosit diaqnostikləri bioloji sənaye müəssisələrində hazırlanır və əsas RNGA təcrübəsi artıq diaqnostik laboratoriyalarda qurulur.

Eritrosit diaqnostikumunun hazırlanması aşağıdakı addımları əhatə edir:

eritrositlərin formaldehid və ya glutar və ya akril aldehidlərlə fiksasiyası. Belə işlənmiş eritrositlər uzun müddət saxlanılır. Bu məqsədlə daha tez-tez qoyunların, insanların, toyuqların və s. eritrositləri istifadə olunur;
sabit eritrositlərin tanin məhlulu ilə müalicəsi. Nəticədə, eritrositlər öz səthində zülalları (viruslar və antikorlar) geri dönməz şəkildə adsorbsiya edən xüsusiyyət əldə edir;
tanlaşmış eritrositlərin viruslar və ya antikorlar tərəfindən sensibilizasiyası.

Qeyd etmək lazımdır ki, viral infeksiyalar üçün eritrosit diaqnostikumlarının hazırlanması üsulları fərqlidir.

Antikor titrini aşkar etmək və təyin etmək üçün RNHA-nın qurulması texnikası aşağıdakı kimidir:

zərdabın ardıcıl 2 qat seyreltilməsinə bərabər dozada antigen tərəfindən həssaslaşdırılmış eritrositlər əlavə edin;
qarışıq otaq temperaturunda 2-3 saat və ya 4 ° C-də 16-18 saat saxlanılır;
nəticələri nəzərə alın. Serumda eritrositlərin həssaslaşdığı virusa qarşı antikorlar varsa, çarpazlarla qiymətləndirilir, hemaqlütinasiya müşahidə olunur.

Serum antikor titri hələ də ən azı iki çarpazla hemaqlütinasiyanı təmin edən zərdabın ən yüksək durulması kimi qəbul edilir.

RNGA bütün müvafiq nəzarət vasitələri ilə müşayiət olunur. Adətən mikrometodla reaksiya verirlər.

RNHA aşağıdakı diaqnostik vəzifələri həll etməyə imkan verir:

məlum eritrosit antigen diaqnostikumundan istifadə edərək antikorları aşkar etmək və onların qan serumunda titrini təyin etmək;
məlum eritrosit antikor diaqnostikası ilə naməlum virusu aşkar etmək və müəyyən etmək.

RNGA-nın üstünlükləri: yüksək həssaslıq, quraşdırma asanlığı və sürətli cavab. Bununla belə, qeyd etmək lazımdır ki, stabil eritrosit diaqnostikumlarının hazırlanmasında böyük çətinliklər var (istifadə olunan komponentlərin təmizliyindən yüksək asılılıq, hər bir virus növü üçün eritrositlərin fiksasiya, tanlaşma və sensibilizasiya rejimini seçmək ehtiyacı). .

Sayt yalnız məlumat məqsədləri üçün istinad məlumatları təqdim edir. Xəstəliklərin diaqnozu və müalicəsi bir mütəxəssisin nəzarəti altında aparılmalıdır. Bütün dərmanların əks göstərişləri var. Mütəxəssis məsləhəti tələb olunur!

Seroloji qan analizi müəyyən antigenlərin və ya antikorların laboratoriya müayinə üsuludur ( spesifik zülallar) orqanizmin immun reaksiyalarına əsasən xəstənin serumunda. Bu üsul zaman tətbiq edilir diaqnostika yoluxucu xəstəliklər xəstənin qanında müəyyən bir virus və ya bakteriya növünə qarşı antikorların mövcudluğunu aşkar etmək, həmçinin qan qrupunu müəyyən etmək.

Tədqiq olunan material

İlk növbədə, seroloji analiz üçün xəstədən toplanmış bioloji materialdan istifadə olunur:

qan serumu
tüpürcək
nəcis maddəsi

Bəzi hallarda, müəyyən ətraf mühit obyektlərindən təcrid olunmuş material araşdırılır:

torpaq

Analiz və ya qan nümunəsi üsulu

Bu analiz xəstənin xüsusi hazırlığını tələb etmir. Qan götürülməsi səhər acqarına aparılır və tibb müəssisələrinin müalicə otaqlarında ümumi qəbul edilmiş hematoloji üsullara əsasən aparılır. Seroloji müayinə üçün qan nümunəsi iki üsulla aparılır: venoz qan xəstənin kubital venasından, kapilyar qan isə üzük barmağından götürülür. Qan steril möhürlənmiş sınaq borularına yerləşdirilir.

Qanın nəqli və serumun saxlanmasının xüsusiyyətləri

Qan nümunəsi götürüldükdən dərhal sonra xüsusi laboratoriyaya aparılır, burada serum həmin gün hazırlanır. Serumun soyuducuda 2-4 dərəcə temperaturda 4-6 gündən çox olmayaraq saxlanmasına icazə verilir. Daha uzun saxlama tələb olunarsa, serum dondurulur. Serumun keyfiyyətini pozmamaq üçün onu bir dəfə dondurmağa və müvafiq olaraq əriməyə icazə verilir. Uzunmüddətli saxlama zamanı antikorlar öz xüsusiyyətlərini itirir və qismən təsirsiz olurlar, dondurmaya ən həssas olanlar sinfin immunoqlobulinləridir. M. Serumu əritdikdən sonra onu homojen bir kütlə yaranana qədər yaxşıca qarışdırmaq lazımdır ki, bu da bu serumun tərkibində olan antikorların konsentrasiyasını bərpa etməyə kömək edir.

Serologiya nə üçün istifadə olunur?

kimi xəstəlikləri aşkar etmək üçün seroloji laboratoriya diaqnostik üsullarından istifadə edilir exinokokkoz, trixinoz, toksokaroz, opistorxoz, sistikerkoz, toksoplazmoz, amöbiaz, lyamblioz, müalicə kursunun effektivliyini müəyyən etmək və nəhayət, xəstə tam sağaldıqdan sonra xəstəliyin təkrarlanmasını aşkar etmək.

Seroloji diaqnostikanın əsas üsulları

İmmunofluoressensiya reaksiyası (RIF)

Bu reaksiya seroloji tədqiqatın dolayı versiyasıdır, yəni iki mərhələdə aparılır. Birinci mərhələdə immun zərdab zülallarına strukturuna bənzəyən antiqlobulindən istifadə etməklə dövran edən antigen-antikor kompleksində zəruri anticisim aşkar edilir. İstənilən antikorun müəyyən edilməsi, antiqlobulinlərdən istifadə etmədən, flüoresan mikroskop altında əvvəlcədən hazırlanmış antigen preparatı öyrənərkən də mümkündür.

İmmunofluoressensiya reaksiyası mütəxəssisdən çox vaxt və məsuliyyət tələb edən çox vaxt aparan bir prosesdir. Reaksiya məhlulların hazırlanması ilə başlayır, sonra sera və onların nəzarət nümunələri titrə məruz qalır ( sınaq məhlulunu nəzarət olunan miqdarda reagentlə tədricən qarışdırmaqla müəyyən maddənin tərkibini təyin etməyə imkan verən proses). Əvvəllər hazırlanmış seyreltmələr və onların nəzarət nümunələri diqqətlə antigenlə slaydlara tətbiq olunur. Sonra preparatlar inkubasiyaya məruz qalır, sonra yuyulur və havada qurudulur. Antigen tərkibli slaydlara nazik bir antiserum təbəqəsi tətbiq olunur, bundan sonra preparatlar yenidən inkubasiya edilir və hazırlığın qurudulması ilə bitən bütün əvvəlki hərəkətlər zənciri təkrarlanır. Nəticədə, şüşə slaydda olan preparat qliserinlə müalicə olunur və flüoresan mikroskop altında araşdırılır.

Reaksiya nəticələri antigen hüceyrələrinin səthinin sarı-yaşıl lüminesansının intensivliyi ilə xarakterizə olunan dörd ballıq şkala ilə qiymətləndirilir:
+ hüceyrənin çox zəif parıltısı, yalnız onun periferiyasında nəzərə çarpır
++ hüceyrə periferiyasının zəif parıltısı, lakin aydın görünən yaşıl rəng ilə
+++/++++ hüceyrə periferiyasının parlaq yaşıl parıltısı
Reaksiya titri, antigen hüceyrələrinin ən azı 50% -nin aydın səth parıltısını, yəni reaksiyanın nəticəsini göstərdiyi belə bir serum seyreltisi hesab olunur. +++ və ya ++++ . Reaksiya diapazonunun dəyəri 1/80 ilə 1/100 arasındadır.

Reaksiyanın intensivliyi əmələ gələn quyuların dibində çökən eritrositlərin sayından asılıdır:
– hamar kənarları və ya "düymələri" olan kiçik bir halqa şəklində quyuların dibində eritrositlərin çökməsi ilə xarakterizə olunan mənfi reaksiya
+ aşağı intensivlik, bu reaksiya çuxurun altındakı kiçik tək yataqlarla xarakterizə olunur. Qeyri-aqqlütinasiya olunmuş eritrositlər quyunun mərkəzində “kiçik halqa” əmələ gətirir.
++ orta intensivlik, çuxurun dibində qeyri-aqqlütinləşdirilmiş eritrositlərin "geniş sıx halqasının" meydana gəlməsi ilə xarakterizə olunur.
+++ intensiv reaksiya, aglütinasiya olunmuş eritrositlər "çətirlər" adlanan şeyi əmələ gətirir, onların mərkəzində oturmuş qeyri-aqqlütinləşdirilmiş eritrositlərdən əmələ gələn halqalar aydın görünür.
++++ bütün eritrositlərin aglütinasiya edildiyi və "çətirlər" meydana gətirərək deşiklərin dibinə düzüldüyü kəskin intensiv reaksiya.
Bu reaksiyanın titri ən azı eritrositlərin aydın aglütinasiyasını aşkar edən serumun son seyreltisi hesab olunur. +++ , yəni sıx və ya kəskin intensiv reaksiya ilə.

Seroloji diaqnostika üsullarının etibarlılığı və keyfiyyəti təhlilin nəticələrinin keyfiyyətini qiymətləndirmək üçün nəzərdə tutulmuş bir neçə müstəqil prosedurdan ibarət daxili və xarici laboratoriya nəzarətinin təşkilindən asılıdır.