Kaj pokaže serološki test krvi? Diagnostični ukrepi so najpomembnejša faza pri zdravljenju katere koli bolezni. Uspeh zdravljenja ni odvisen le od predpisanih zdravil, ampak v veliki meri tudi od tega, kako pravilno je bila postavljena diagnoza.

Poleg tega lahko diagnostika prepreči zaplete in sočasne bolezni. S pomočjo serološke analize bolnikove krvi ugotovimo prisotnost protiteles in antigenov. Študija pomaga odkriti številne bolezni, določiti njihovo fazo in nadzorovati potek zdravljenja.

Kaj je serologija?

Serologija je veja imunologije, ki preučuje reakcije antigenov na protitelesa. Ta veja medicine se ukvarja s proučevanjem krvne plazme in njenih imunoloških značilnosti.

Danes je serološki krvni test za protitelesa zanesljiv način za odkrivanje virusa humane imunske pomanjkljivosti, hepatitisa, bruceloze, spolno prenosljivih bolezni in drugih življenjsko nevarnih bolezni. Ugotovimo, v katerih primerih je predpisano.

Indikacije za imenovanje

Serološki test krvi je potreben za identifikacijo povzročitelja bolezni v primeru težav pri postavljanju diagnoze.

Za izvedbo te reakcije se antigeni patogenov injicirajo v plazmo, nato pa laboratorijski pomočnik preučuje proces, ki poteka. Ali pa izvedejo obratno reakcijo: protitelesa se injicirajo v okuženo kri, da se določi specifično pripadnost patogena.

Področje uporabe

Ta študija se uporablja v različnih vejah medicine. S pomočjo te reakcije se zaznajo specifične celice in protitelesa, ki jih proizvaja telo, da bi se borili proti okužbam in virusom.

Poleg tega se s serološko metodo določi krvna skupina osebe.

Podoben serološki krvni test se uporablja v ginekologiji za diagnosticiranje spolno prenosljivih bolezni. Ta metoda se uporablja tudi za celovite preglede nosečnic (odkrivanje toksoplazmoze, HIV, sifilisa itd.). Opravljanje tega testa je obvezno pri registraciji v predporodni kliniki.

Pri otrocih se serološki test uporablja za potrditev diagnoze tako imenovanih "otroških" bolezni (norice, ošpice, rdečke itd.), V primeru, da simptomi nimajo izrazitih manifestacij in bolezni ni mogoče identificirati z analiza kliničnih indikacij.

Odkrivanje spolno prenosljivih bolezni

Za venerologe je to testiranje resnično nepogrešljivo in vam omogoča zelo natančno diagnozo.

Z zamegljeno klinično sliko lahko serološki krvni test za sifilis, giardiozo, ureaplazmozo, klamidijo, herpes in druge bolezni hitro odkrije prisotnost protiteles.

Virusne in nalezljive bolezni

Serološko analizo aktivno uporabljajo gastroenterologi, hepatologi in specialisti za nalezljive bolezni za diagnosticiranje virusnega hepatitisa.

Dešifriranje serološke preiskave krvi omogoča določitev stopnje poteka bolezni in odgovori na vprašanje, kako potrebna je hospitalizacija v tem trenutku. Kako se pravilno pripraviti?

Priprava na dostavo analize

Serološke preiskave krvi se izvajajo v javnih in komercialnih ambulantah. Prednost je treba dati laboratoriju s sodobno opremo in usposobljenim osebjem.

Biološki vzorci za raziskave so lahko slina in blato, vendar se v večini primerov uporablja venska kri bolnika. Krv za serološko preiskavo odvzamemo iz kubitalne vene v laboratoriju. Preden opravite test, se posvetujte s svojim zdravnikom o pripravi na ta postopek.

Za pripravo na dostavo analize za serološko študijo morate upoštevati nekaj preprostih pravil.

Kri se odvzame v mirnem stanju pred obroki, to je na prazen želodec. Pred tem ne smete opraviti drugih študij, kot so rentgenski žarki, ultrazvok itd.

Nekaj ​​tednov pred darovanjem krvi je treba izključiti uporabo antibakterijskih in nekaterih drugih zdravil. Nekatera priporočila so v tem primeru odvisna od bolezni, za katero se preiskava izvaja. Na primer, test za hepatitis vključuje izogibanje mastni hrani in alkoholu 48 ur pred posegom.

Fluorescenčna reakcija

Med vrstami seroloških reakcij je fluorescenčna reakcija. Ta tehnika uporablja reagent, ki poudari protitelesa v krvnem serumu.

Nastavitev neposredne serološke reakcije vključuje označevanje specifičnih protiteles s fluorescentno snovjo. Ta reakcija je najhitrejša in poteka v enem koraku.

Druga možnost za izvedbo takšne analize se imenuje posredna ali RNIF. Izvaja se v dveh fazah. V prvem koraku protiteles ne označujemo s fluorescentnimi oznakami, v drugem koraku pa z ustrezno označenimi protitelesi dokazujemo antigene in protitelesa. Luminescenca se pojavi šele, ko se veže na specifično protitelo.

Kaj pokaže serološki test krvi? Rezultat celotnega postopka se oceni s posebno napravo, ki analizira moč sevanja, razkriva obliko in velikost preučevanega predmeta. Povzročitelje nalezljivih bolezni odkrijemo z rezultatom, katerega zanesljivost je 90-95%, odvisno od vrste in stopnje patologije.

Povezani imunosorbentni test

Te vrste serologije uporabljajo edinstvene, stabilne reagente. Zdi se, da se označene snovi držijo želenih protiteles. Kot rezultat dobimo kvalitativni ali kvantitativni rezultat.

Če ni izraženih markerjev, se bo rezultat štel za negativnega. Če se med kvalitativno študijo odkrije prisotnost protiteles v bioloških vzorcih, se rezultat analize šteje za pozitiven. Pri kvantificiranju celic analiza daje natančnejši rezultat.

Z analizo kazalcev analize (na primer količine odkritih celic) specialist ugotovi, ali je bolezen v začetni fazi, v akutni fazi ali se je kronična oblika patologije poslabšala. Za postavitev diagnoze zdravnik upošteva ne le podatke serološke študije, temveč tudi klinično sliko bolezni.

Značilnosti tega testa

Izvajanje te analize ne more vedno dati 100-odstotne gotovosti, da je bila določena bolezen odkrita. Zgodi se, da so rezultati lahko dvoumni in so potrebni drugi postopki.

Na primer, med testom za brucelozo se serum testira na samozadrževanje brez antigena. To bistveno poveča zanesljivost testiranja. Analiza za brucelozo je lahko pozitivna ali negativna in povzroča tudi dvome.

Če prejmete dvomljive rezultate, ki nimajo nedvoumne razlage, je priporočljivo ponovno opraviti analizo. Poleg tega lahko brucelozo odkrijemo s hemokulturo, pregledom kostnega mozga in cerebrospinalne tekočine.

Prednosti serološke preiskave krvi

Diagnostične tehnike s serološkimi testi se pogosto uporabljajo v sodobni medicinski praksi. To se še posebej pogosto izvaja pri določanju virusnih in nalezljivih patologij.

Isti testi se uporabljajo pri geografskem presejanju in zdravniškem pregledu za preprečevanje epidemiološkega širjenja okužbe.

Prednosti metode vključujejo:

• Visoka stopnja samozavesti.
• Hiter odziv in rezultati. Rezultati RSC so znani v 24 urah. V posebnem primeru, v bolnišničnem okolju, bo analiza pripravljena v nekaj urah.
• Spremljanje razvoja bolezni in učinkovitosti terapije.
• Nizki stroški in dostopnost za bolnike.

Slabosti metode

Vendar pa imajo serološke študije tudi svoje pomanjkljivosti.

Ti vključujejo dejstvo, da je treba pri analizi upoštevati inkubacijsko dobo bolezni, da bi dobili bolj zanesljivo sliko.

Na primer, določitev herpes simpleksa prvega ali drugega tipa je možna šele po 14 dneh od trenutka okužbe. Analiza za prisotnost virusa imunske pomanjkljivosti se opravi po 30 dneh, po 90 dneh in šestih mesecih po stiku z okuženo osebo.

Seveda lahko na zanesljivost rezultatov vpliva tudi človeški dejavnik: zanemarjanje pravil za pripravo na odvzem krvi ali napaka laboratorijskega pomočnika med reakcijo.

Po statističnih podatkih je napačen rezultat mogoče dobiti v 5% primerov. Izkušeni zdravnik pri pregledu pacienta, ki je preučil klinično sliko, lahko v večini primerov izračuna storjeno napako.

Analiza za sifilis je ena najpogostejših med laboratorijskimi preiskavami. Med preventivnimi pregledi se pogosto uporabljajo testi za sifilis. S pomočjo mikroskopije se odkrije povzročitelj sifilisa -. S pomočjo seroloških reakcij potrdimo diagnozo sifilisa, postavimo diagnozo latentnega sifilisa, spremljamo učinkovitost zdravljenja in ugotovimo ozdravitev bolnikov.

Diagnoza sifilisa se postavi na podlagi kliničnih podatkov, odkrivanja povzročiteljev sifilisa v vzorcih materiala in potrditve diagnoze s serološkimi raziskovalnimi metodami. Manifestacije sifilisa so številne in raznolike, zato bolezen odkrivajo zdravniki različnih specialnosti. Diferencialna diagnoza primarnega sifilisa se izvaja s številnimi boleznimi.

riž. 1. Na fotografiji je primarna manifestacija sifilisa trdi šankr.

Protitelesa proti bledi treponemi in serološka diagnostika

Pri okužbi s sifilisom se v telesu pacienta tvorijo protitelesa. Serološka diagnostika pomaga zdravniku preučiti dinamiko tvorbe protiteles v telesu bolnika s sifilisom v začetnih fazah bolezni, v obdobju zdravljenja in po njegovem zaključku, da reši vprašanje ponovitve bolezni pri bolnika ali ponovne okužbe (ponovne okužbe), za diagnosticiranje sifilisa v množičnih zdravstvenih pogojih.

Protitelesa proti bledi treponemi IgM

Protitelesa IgM so prva, ki nastanejo po okužbi. Začnejo jih odkrivati ​​s serološkimi reakcijami od drugega tedna po okužbi. Pri 6-9 tednih bolezni njihovo število postane največje. Če bolnik ni bil zdravljen, protitelesa izginejo po šestih mesecih. Protitelesa IgM izginejo po 1-2 mesecih. po, po 3 - 6 mesecih. - po zdravljenju poznega sifilisa. Če se zabeleži njihova rast, potem to služi ali kaže na ponovno okužbo. Molekule IgM so velike in ne prehajajo skozi placento do ploda.

Protitelesa proti bledi treponemi IgG

Protitelesa proti imunoglobulinom IgG se pojavijo ob koncu prvega meseca (4. teden) od trenutka okužbe. Njihov titer je višji od titra IgM. IgG po zdravljenju vztrajajo precej dolgo.

Nespecifična protitelesa

Obstaja veliko seroloških reakcij. To je posledica antigenske množine bledih treponem. V krvnem serumu bolne osebe na različnih stopnjah sifilisa se poleg specifičnih oblikujejo tudi nekatera nespecifična protitelesa - aglutinini, fiksatorji komplementa, imobilizini, protitelesa, ki povzročajo imunsko fluorescenco, precipitini itd. Serološke reakcije za odkrivanje ne -specifična protitelesa imajo relativno specifičnost, zato, da bi se izognili diagnostičnim napakam, ne uporabite ene, ampak kompleks seroloških reakcij (CSR).

Lažno pozitivni testi za sifilis

Posebnost netreponemskih testov je proizvodnja lažno pozitivnih reakcij. Reaginska protitelesa, ki nastajajo v človeški krvi proti kardiolipinskemu antigenu, so registrirana ne le pri sifilisu, ampak tudi pri drugih boleznih: kolagenozah, hepatitisu, boleznih ledvic, tirotoksikozi, raku, nalezljivih boleznih (gobavost, tuberkuloza, bruceloza, malarija, tifus). ), škrlatinko), med nosečnostjo in menstruacijo, pri uživanju mastne hrane in alkohola. Ugotovljeno je, da se s starostjo število lažno pozitivnih reakcij poveča.

riž. 2. Slika prikazuje primarni sifilis pri ženskah.

Laboratorijska diagnoza sifilisa s serološkimi testi

Serološke preiskave za sifilis delimo na treponemske in netreponemske.

1. Netreponemski testi

V tej skupini testov se kot antigen uporablja kardiolipinski antigen. Najštevilnejši so lipidni antigeni povzročiteljev sifilisa. Sestavljajo 1/3 suhe mase celice. S pomočjo netreponemskih testov se odkrijejo reaginska protitelesa, ki nastajajo proti kardiolipinskemu antigenu. Ta skupina vključuje reakcijo fiksacije komplementa (RSKkard), reakcijo mikroprecipitacije (RMP), hitro določanje plazemskih reaginov (RPR) itd. Z uporabo netreponemskih testov se izvaja primarni presejalni test za sifilis (pregled populacijskih skupin), in možnost pridobivanja rezultatov v kvantitativni različici vam omogoča uporabo teh testov za spremljanje učinkovitosti zdravljenja. Pozitivne rezultate netreponemskih testov je treba potrditi s treponemskimi testi. Posebnost netreponemskih testov je proizvodnja lažno pozitivnih reakcij.

2. Treponemski testi

Treponemski testi uporabljajo antigene treponemskega izvora, izolirane iz kulture treponeme pallidum. Z njihovo pomočjo se potrdijo pozitivni rezultati netreponemskih testov. Skupina vključuje: RSKtrep - reakcija fiksacije komplementa, RIF - reakcija imunofluorescence in njene modifikacije, RIT, RIBT - reakcija imobilizacije bledih treponem, RPHA - reakcija pasivne hemaglutinacije, ELISA - encimski imunski test.

3. Testi za sifilis z uporabo rekombinantnih antigenov

Antigene za to skupino testov pridobivamo z genskim inženiringom in uporabljamo v reakcijah - TPHA in ELISA, v imunobloting (IB) analizah in imunokromatografskih analizah.

riž. 3. Za diagnosticiranje sifilisa se uporablja niz seroloških testov.

Diagnoza sifilisa z uporabo netreponemskih testov

Za odkrivanje sifilisa se uporabljajo netreponemski testi ali kompleks seroloških reakcij (CSR). Serološka diagnostika se izvaja od 5. tedna od trenutka okužbe ali od 2-3 tednov po začetku. Protitelesa odkrijemo pri skoraj vseh bolnikih s svežim primarnim. Serološke reakcije so pozitivne pri 70-80% bolnikov s terciarnim latentnim sifilisom v 50-60% primerov.

Serološke reakcije z uporabo netreponemskih testov lahko dajo lažno pozitivne rezultate.

riž. 4. Vzorčenje krvi za testiranje na sifilis.

Reakcija vezave komplementa (kartica RSK, KSK s KA, Wassermanova reakcija)

Wassermanova reakcija (RW, РВ), ki jo je izumil A. Wasserman pred več kot 100 leti, je danes doživela številne spremembe, vendar je kot poklon tradiciji ohranila svoje ime do danes. Test vezave komplementa s kardiolipinskim antigenom ni namenjen le dokazovanju protiteles, ampak se izvaja tudi kvantitativno z različnimi razredčinami seruma, kar omogoča, da z njim spremljamo učinkovitost zdravljenja. Nizka občutljivost in specifičnost, lažno pozitivni rezultati so negativni vidiki te vrste študije.

Bistvo Wassermanove reakcije je naslednje: antigeni, ki se uporabljajo pri oblikovanju Wassermanove reakcije, se v prisotnosti protiteles proti povzročiteljem sifilisa v človeški krvi s pomočjo komplimenta vežejo nanje in oborijo. Intenzivnost reakcije je označena z znakom (+). Reakcija je lahko negativna (-) - brez usedline, dvomljiva (majhen sediment ali +), šibko pozitivna (++), pozitivna (+++) in močno pozitivna (++++).

Bolj občutljiva je modificirana Wassermannova reakcija - Kolmerjeva reakcija. Z njegovo pomočjo se odkrijejo protitelesa v serumu, kjer je Wassermanova reakcija dala negativen rezultat.

Z močno pozitivnimi reakcijami se izvede kvantitativno določanje reaginov, za katere se serum uporablja v razredčitvah od 1:10 do 1: 320, kar omogoča uporabo te vrste študije za spremljanje učinkovitosti zdravljenja. Na primer, zmanjšanje titra protiteles in njihova kasnejša seronegativnost (pridobivanje negativnih rezultatov) kaže na uspešno ozdravitev bolezni.

riž. 5. Krvni test za sifilis - Wassermanova reakcija.

Precipitacijska mikroreakcija (MPR)

Precipitacijska mikroreakcija se uporablja za množične preglede določenih skupin prebivalstva, diagnozo sifilisa in nadzor nad učinkovitostjo zdravljenja. Za izvedbo te vrste študije je potrebna majhna količina proučevanega materiala. Mikroreakcija precipitacije temelji na imunološki reakciji antigen-protitelo. V primeru prisotnosti protiteles v krvnem serumu preiskovanca se kompleks antigen-protitelo izloča s tvorbo kosmičev. Reakcija se izvaja v vdolbinicah posebne steklene plošče. Ocenjuje se z intenzivnostjo izločene oborine in velikostjo kosmičev v (+) kot Wassermanovo reakcijo. Pri pregledu nosečnic, darovalcev in za spremljanje učinkovitosti zdravljenja se ne uporablja. VDRL in RPR sta vrsti mikroreakcij.

riž. 6. Prikaz reakcije obarjanja v kapljici na steklu.

riž. 7. Krvni test za sifilis - mikroprecipitacijska reakcija.

riž. 8. Komplet za hitro določanje reaginov v plazmi (Test za sifilis RPR).

Vse pozitivne teste, dobljene pri nespecifičnih seroloških reakcijah, je treba potrditi s specifičnimi reakcijami - treponemskimi testi.

Diagnoza sifilisa z uporabo treponemskih testov

Pri izvajanju treponemskih testov se uporabljajo antigeni treponemskega izvora. Njihova negativna stran je nezmožnost njihove uporabe za nadzor učinkovitosti zdravljenja, pridobitev pozitivnih rezultatov pri spirohetozi in ne-veneričnih treponematozah ter pridobitev lažno pozitivnih rezultatov pri onkoloških boleznih, gobavosti in nekaterih endokrinih patologijah. Testi, kot so RPHA, ELISA in RIF, ostanejo pozitivni še več let po ozdravitvi sifilisa, v nekaterih primerih pa vse življenje.

RIBT in RIF sta najbolj specifična od vseh seroloških testov, ki se uporabljata za diagnosticiranje sifilisa. Omogočajo vam razlikovanje med lažno pozitivnimi reakcijami, prepoznavanje poznih oblik sifilisa, ki se pojavijo z negativnimi reakcijami. S pomočjo RIBT prepoznamo lažno pozitivne reakcije pri nosečnicah, ko je treba rešiti vprašanje okužbe otroka.

Reakcija imobilizacije treponeme pallidum (RIBT, RIT)

Bistvo reakcije je, da protitelesa v bolnikovem krvnem serumu imobilizirajo bledo treponemo. Reakcija z imobilizacijo do 20% patogenov se šteje za negativno, šibko pozitivno - 21 - 50%, pozitivno - 50 - 100%. RIBT včasih daje lažno pozitivne rezultate. Test je zapleten in dolgotrajen, vendar je nepogrešljiv za diferencialno diagnozo latentnih oblik bolezni in lažno pozitivnih rezultatov seroloških reakcij, tudi pri nosečnicah. RIBT daje 100% pozitiven rezultat pri sekundarnem, zgodnjem in poznem sifilisu, v 94 - 100% primerov - pri drugih oblikah sifilisa.

Imunofluorescenčna reakcija (RIF)

Bistvo reakcije je, da bledi treponemi (antigeni) v kombinaciji s protitelesi, označenimi s fluorokromi, oddajajo rumeno-zelen sij v fluorescentnem mikroskopu. Rezultat se ovrednoti z znakom (+). S pomočjo RIF se odkrijejo imunoglobulini razreda A. Imunofluorescenčna reakcija postane pozitivna prej kot Wassermanova reakcija. Vedno je pozitiven pri sekundarnem in latentnem sifilisu, v 95-100% primerov je pozitiven pri terciarnem in kongenitalnem sifilisu. Tehnika izvajanja te vrste študije je enostavnejša od tehnike RIBT, vendar je nemogoče zamenjati RIF z RIBT, saj je ta reakcija v specifičnosti slabša od RIBT. RIF-10 (RIF modifikacija) je bolj občutljiv, RIF-200 in RIF-abs sta bolj specifična.

riž. 9. Krvni test za sifilis - imunofluorescenčna reakcija (RIF).

Test imunske adhezije treponeme pallidum (TRIPBT)

Bistvo reakcije je, da se blede treponeme, senzibilizirane s serumom bolnika v prisotnosti komplementa, prilepijo na površino eritrocitov. Dobljeni kompleksi se med centrifugiranjem izločijo. Občutljivost in specifičnost tega testa sta blizu RIF in RIBT.

Encimski imunosorbentni test za sifilis (ELISA)

S pomočjo ELISA določamo imunoglobuline razreda M in G. Metoda IgM - ELISA se lahko uporablja kot presejalni in potrditveni test. Občutljivost in specifičnost ELISA sta podobni RIF. Pri sifilisu ELISA daje pozitivne rezultate od tretjega meseca okužbe in ostane pozitiven precej dolgo (včasih celo življenje).

riž. 10. ELISA analizator.

Reakcija pasivne (posredne) hemaglutinacije (RPHA)

TPHA temelji na sposobnosti eritrocitov, na katere so adsorbirani antigeni treponeme pallidum, da se zlepijo (hemaglutinacija) v prisotnosti bolnikovega seruma. RPHA se uporablja za diagnosticiranje vseh oblik sifilisa, vključno z latentnim. Pri uporabi visokokakovostnega antigena ta vrsta serološke reakcije po specifičnosti in občutljivosti presega vse druge teste.

riž. 11. RPHA se uporablja za diagnosticiranje vseh oblik sifilisa.

riž. 12. Analiza za sifilis - reakcija pasivne (posredne) hemaglutinacije (shema).

riž. 13. Videz obrnjenega dežnika, ki zaseda celotno dno epruvete, kaže na pozitivno reakcijo. V primeru, da se eritrociti usedejo v stolpec ("gumb") na sredini dna epruvete, govorijo o negativni reakciji.

riž. 14. Test RPGA v laboratorijskih pogojih.

Mikrobiološka diagnostika

Skupaj s serološko diagnostiko ima pomembno vlogo metoda odkrivanja bledih treponem (mikrobiološka diagnostika), zlasti v obdobju seronegativnega sifilisa, ko v krvi še ni protiteles, vendar so že prve manifestacije svežega primarnega sifilisa ( trdi šankr).

Biološki material za študijo je izcedek s površine trdih razjed (šankrov), vsebina pustularnih sifilidov, jokajočih in erozivnih papul, punktatov okuženih bezgavk, cerebrospinalne tekočine in amnijske tekočine ter krvi za PCR.

Najboljša metoda za odkrivanje povzročiteljev sifilisa je študija biološkega materiala v temnem polju mikroskopa. Ta tehnika vam omogoča, da vidite bledo treponemo v živem stanju, da preučite njene značilnosti strukture in gibanja, da ločite patogene patogene od saprofitov.

riž. 15. Analiza za sifilis - mikroskopija v temnem polju.

riž. 16. Pri preučevanju suhih brisov se uporablja barvanje po Romanovsky-Giemsa. Blede treponeme postanejo rožnate, vse druge vrste spirohet postanejo vijolične.

Odkrivanje bledih treponem z mikroskopijo v temnem polju je absolutno merilo za končno diagnozo sifilisa.

riž. 17. Za odkrivanje bakterij se uporablja imunofluorescenčna reakcija (RIF) - treponemski test. Specifični kompleks antigen-protitelo v kombinaciji s specifičnim serumom, označenim s fluorokromom, v svetlobi fluorescentnega mikroskopa daje bakterijam zelenkast sijaj.

riž. 18. Povzročitelji sifilisa so jasno vidni v brisih, pripravljenih po metodi Levaditi (impregnacija s srebrom). Bledo temne treponeme na ozadju rumene barve celic okuženih tkiv.

riž. 20. Na fotografiji je prikazana kolonija bledih treponem. Pridobivanje kulture bakterij je težko. Praktično ne rastejo na umetnih hranilnih medijih. Na gojiščih, ki vsebujejo konjski in kunčji serum, se kolonije pojavijo 3. - 9. dan.

PCR za sifilis

Danes je učinkovita in obetavna tehnika verižne reakcije s polimerazo. PCR za sifilis vam omogoča, da dobite rezultat v nekaj urah, v materialu, zbranem za diagnozo, pa je lahko prisotnih vsaj nekaj patogenov.

riž. 21. PCR za sifilis vam omogoča odkrivanje DNK ali njenih fragmentov blede treponeme.

Občutljivost te raziskovalne metode je odvisna od prisotnosti bledih treponem v biološkem materialu in doseže 98,6%. Specifičnost tega testa je v veliki meri odvisna od pravilne izbire tarče za ojačanje med diagnostiko in doseže 100%.

Hkrati pa zaradi nezadostno raziskanih primerjalnih značilnosti občutljivosti in specifičnosti neposrednih metod za diagnosticiranje sifilisa in PCR ta metoda pregleda v Ruski federaciji za diagnosticiranje bolezni še ni bila odobrena.

PCR za sifilis je dovoljeno izvajati le v nekaterih primerih, kot dodatno metodo za diagnosticiranje prirojenega sifilisa, nevrosifilisa, če je težko diagnosticirati sifilis s serološkimi metodami pri bolnikih s HIV.

riž. 22. Odkrivanje DNA treponema pallidum s PCR kaže na prisotnost živih bakterij ali ostankov mrtvih bakterij, ki vsebujejo dodatne kopije posameznih odsekov kromosomske DNA, ki lahko tvorijo dodatne kopije.

Serološka preiskava ali z drugimi besedami serološka analiza je študija bioloških materialov v laboratoriju. Ta analiza vam omogoča, da ugotovite prisotnost patogenih bakterij v proučevanem organizmu ali v izdelkih, ki so podvrženi nadzoru.

Serološke diagnostične metode

Preučevanje serumov ali drugih bioloških predmetov (mleko, žolč, slina, brisi črevesne sluznice, pa tudi kopromateriali) daje dokaj zanesljivo predstavo o odzivu telesa na vnos povzročitelja okužbe. Treba je opozoriti, da uporaba seroloških raziskovalnih metod nima samo diagnostične vrednosti, temveč zagotavlja zanesljive informacije o ravni zaščite telesa, stanju imunosti prebivalstva in kroženju različnih vrst rotavirusov v proučevanem območju. Rezultati seroloških raziskav lahko zagotovijo tudi informacije za optimizacijo antigenske sestave profilaktičnih zdravil in se uporabljajo za oceno imunološke učinkovitosti cepiv.

Vendar je treba opozoriti, da potreba po preučevanju parnih krvnih serumov, odvzetih v intervalih 1,5-2 tednov, in razpoložljivost hitrih diagnostičnih metod zmanjšata diagnostično vrednost seroloških reakcij.

Zato sta tradicionalna serološka testa - test vezave komplementa (CFR) in test inhibicije hemaglutinacije (HIT) trenutno le omejeno uporabna. Kljub temu so te metode zaradi preprostosti, dostopnosti in poceni reagentov še vedno uporabne v laboratorijski praksi. Nastavitev RSK in RTGA se izvaja po splošno sprejetih metodah.

Primer uporabe RSK za preučevanje imunosti po cepljenju je delo K. Midkhana (1989). Pri pregledu serumov 116 otrok, starih 5 mesecev, so zanesljive serokonverzije po RSK opazili v 44% primerov, glede na rezultate nevtralizacijskega testa (PH) in encimskega imunskega testa (ELISA) pa v 83 in 96%, oz.

Raziskave imunosti

Za proučevanje populacijske imunosti s pomočjo CSC smo pregledali 1246 serumov bolnikov z OKZ, starih od nekaj mesecev do 80 let in več. Pokazalo se je, da je bila geometrična sredina titrov protiteles proti vezavi komplementa najvišja v starostnih skupinah 2-4 let in starejših od 60 let, kar potrjuje naše prejšnje podatke o največji prevalenci okužbe z rotavirusi pri posameznikih teh starostnih skupin.

Test za rotavirus

RTGA se pri preučevanju rotavirusne okužbe uporablja pogosteje kot RSK in praviloma v kombinaciji z drugimi laboratorijskimi preiskavami. Tako Andrade J. P. et al. uporabili RTGA, imunoblot, ELISA blok za preučevanje protiteles proti strukturnim proteinom rotavirusa VP2, VP4, VP6 in VP7. Po mnenju avtorjev so pri otrocih, starih od 2 do 4 let, antihemaglutinirajoča protitelesa proti rotavirusom odkrili v 70-80%.

Glede na raven protiteles proti določenim proteinom so po RTGA avtorji identificirali 4 skupine posameznikov. Skupini I in II (60 %) so bili otroci z visoko stopnjo protiteles proti VP4 in VP7 in so bili razvrščeni kot "imuni". V III. skupino (4 %) so osebe z nizko vsebnostjo protiteles proti VP7 in VP6, tako imenovane »delno imune«. Otroci skupine IV (36%), pri katerih po RTGA protitelesa niso bila odkrita, so bili označeni kot "neimuni" in so predstavljali rizično skupino, saj je med njimi možen razvoj hude rotavirusne okužbe. Opozoriti je treba, da so bili v tem opazovanju kazalniki občutljivosti RTGA in bloka ELISA precej primerljivi.

RTGA je bil večkrat uporabljen za preučevanje strukturnega proteina VP4. Študije so pokazale, da njegovo hemaglutinacijsko aktivnost specifično inhibirajo antiserumi, kar potrjuje, da je VP4 hemaglutinin rotavirusov. Podobne podatke je že prej objavil M. Ezekiel (1995).

Tako predstavljena dela kažejo, da se RSK in RTGA še vedno uporabljata pri preučevanju rotavirusne okužbe, vendar sta ti metodi pomožne narave in ju je treba podvojiti z drugimi testi.

Nevtralizacijski testi

Reakcija nevtralizacije temelji na sposobnosti imunskih serumov ljudi ali živali, da nevtralizirajo razmnoževanje virusa in s tem preprečijo manifestacije, povezane s tem pojavom. Odvisno od biološkega modela so lahko te manifestacije: razvoj bolezni s specifično kliniko, razmnoževanje in izolacija virusa, proizvodnja specifičnih protiteles, pa tudi pojav citopatskega učinka ali nastanek mehurčkov pri uporabi. celične kulture.

Makrobiološki modeli se trenutno uporabljajo predvsem v veterinarski medicini, odkrivanje virusov pri ljudeh se v večini primerov izvaja na celični kulturi, tako primarni kot transfuzijski. Metode PH so razdeljene v dve skupini glede na shemo glavne nastavitve. Pri eni skupini metod kombiniramo nerazredčen serum s serijskimi razredčinami virusa, pri drugi pa testiramo razredčine seruma s konstantnim odmerkom virusa. Za postavitev nevtralizacijske reakcije ima prednost patogen, ki povzroča izrazit citopatski učinek ali se intenzivno razmnožuje v biološkem modelu.

Rotavirusi pa imajo na žalost blag citopatski učinek, kar so prepričljivo dokazali raziskovalci pod vodstvom B. Webra (1992). Študija 121 vzorcev blata otrok z OKI s klasično metodo izolacije virusa na celicah MA-104 pod kontrolo CPP je pokazala le 4 pozitivne primere (3,3 %), medtem ko je uporaba sodobnih metod za dokazovanje rotavirusov (ELISA, PCR). , EF v PAAG) dovoljeno dvigniti to številko na 54,4 %. Zato so za povečanje občutljivosti PH potrebne dodatne metodološke tehnike, ki pomagajo vizualizirati redukcijo virusa, ki se uporabljajo kot: radioaktivna ali imunofluorescentna oznaka, tvorba plakov, imunoperoksidazno barvanje itd. Treba je opozoriti, da je sam princip določanja nivoja virusnevtralizirajočih protiteles je enaka klasični PH metodi, od nje se razlikuje le po načinu ločljivosti, to je v vizualizaciji virusnevtralizirajoče aktivnosti seruma. V tem primeru je aktivnost seruma določena z njegovo sposobnostjo zatiranja manifestacij nalezljivih lastnosti virusa.

Trenutno večina študij uporablja dve metodi za merjenje količine virusno nevtralizirajočih protiteles proti rotavirusu. Eden od njih temelji na štetju posameznih z virusom okuženih celic (metoda Plaq), ki se specifično vežejo na fluorescentno konjugirana protitelesa. V drugem testu se stopnja nevtralizacije virusa oceni z zmanjšanjem proizvodnje virusnega antigena z encimskim imunskim testom. Primerjalna študija obeh metod je pokazala linearno razmerje med indeksi ELISA in številom enot, ki tvorijo plake, za vsak prototipni sev serotipa rotavirusa: Wa, DS-1, P, VA-70. Z dobljenimi podatki je enostavno določiti razredčino seruma, ki zagotavlja nevtralizacijo 60 % kužnega virusa (titer nevtralizirajočih protiteles). Izkazalo se je, da so titri protiteles pri testiranju materialov po obeh metodah enaki in da se oba testa ne razlikujeta v ponovljivosti rezultatov. Nekatera prednost metode z uporabo protiteles, označenih s fluoresceinom, je po mnenju avtorjev v večji objektivnosti rezultatov (avtomatizirana registracija) in manjši napornosti.

Za merjenje titrov protiteles, ki nevtralizirajo virus, se uporablja tudi modificiran PH z blokiranjem ELISA z monoklonskimi protitelesi.

• preučevanje intenzivnosti nastajanja virusnevtralizirajočih protiteles (VNA) med naravno okužbo in cepljenjem;
• tvorba VNA do različnih strukturnih proteinov rotavirusov;
• vrednotenje vloge krvnih serumov VNA in sekretornih protiteles sline in črevesne sluznice pri zaščiti pred naravno okužbo (Ward R. et al., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

Na koncu je treba poudariti, da se reakcija nevtralizacije v svojih različnih modifikacijah še vedno pogosto uporablja tako v eksperimentalnih kot kliničnih študijah in z visoko občutljivostjo in specifičnostjo služi kot standard za vse druge serološke metode.

Analiza padavin

Precipitacijski testi temeljijo na interakciji seruma z virusnimi antigeni s pomočjo osmotskih procesov ali pod vplivom električnega polja v gelnem mediju ali drugem nosilcu. Ena od teh metod je reakcija nasprotne imunoelektroforeze (VIEF). Avtorji so pregledali krvne serume zdravih in bolnih odraslih in otrok z rotavirusno drisko, pa tudi specifične imunoglobulinske pripravke za prisotnost protiteles proti humanemu rotavirusu z metodo VIEF v 7% agarozi z dodatkom 4% polietilenglikola. Izkazalo se je, da so protitelesa proti RV precej razširjena in so jih odkrili pri bolnih odraslih in otrocih v 90,2-87,7% oziroma pri 78,4% zdravih otrok, mlajših od 1 leta. Vseh 32 serij imunoglobulinov je vsebovalo protitelesa proti RV v titrih 1:4-1:128. Po mnenju avtorjev je metoda primerna za preučevanje populacijske imunosti.

radioimunoprecipitacija

Druga tehnika obarjanja je radioimunoprecipitacija. Avtorji so s to metodo preučevali imunski odziv na strukturne in nestrukturne proteine ​​pri primarni okužbi z rotavirusom in pokazali, da je imunski odziv bolj izrazit na VP4 kot na VP7.

Pri preučevanju serumskega in sekretornega imunološkega odziva na uporabo tetravalentnega reasortantnega cepiva pri novorojenčkih. Za to smo skupaj z ELISA in PH uporabili tehniko radioimunskega testa. Pokazalo se je, da je imunski odziv v serumu odvisen od odmerka apliciranega antigena; kar zadeva odkrivanje protiteles v slini, avtorji njihov pojav pojasnjujejo z uživanjem materinega mleka.

Reakcija radioimunoprecipitacije se uporablja tudi v finem raziskovalnem delu. Tako je J. Tosser uporabil to metodo za preučevanje topologije proteina VP6 v strukturi genoma in predlagal, da je VP 6 vključen v tvorbo notranjih kapsidnih kanalov.

Tudi drugi raziskovalci so leta 1994 uporabili metodo radioimunoprecipitacije za proučevanje imunoloških sprememb pri rotavirusni okužbi. Avtorji so pokazali, da se v akutnem obdobju registrirajo predvsem IgA proti VP2 in VP6, medtem ko se je v obdobju rekonvalescence zmanjšala intenzivnost nastajanja sekretornih protiteles (IgA) ne le proti VP2, ampak tudi proti drugim strukturnim in nestrukturnim proteinom. . Kasneje so bili podobni podatki pridobljeni z metodo radioimunoprecipitacije. Avtorji so pokazali, da poleg VP4 in VP7 v imunološki proces sodelujejo še VP2, VP6 in NSP2.

Tako je bila imunoprecipitacija diagnostično uporabljena za preučevanje imunskega odziva pri naravni okužbi z rotavirusom.

V zadnjih letih je imunoprecipitacijo nadomestila metoda radioimunoprecipitacije, ki se uporablja za oceno imunosti po cepljenju in po okužbi pri okužbi z RV ter za natančne raziskave.

metode hibridizacije

Metoda imunoblota se pogosto uporablja za določanje protiteles proti rotavirusom. Primer uporabe Western-blota pri diagnozi rotavirusne okužbe je delo H. Ushijima (1989), ki je z uporabo imunoblotinga označil specifičnost protiteles proti strukturnim proteinom RV pri 21 otrocih z OKZ, kot tudi raven koproprotiteles razredov IgA in IgG proti tem proteinom pri neokuženih otrocih. Avtorji so domnevali, da bi lahko imunobloting omogočil postavitev diagnoze bolezni na enem samem vzorcu koproprotiteles brez pregleda seznanjenih krvnih serumov. Možnost uporabe Western-blota za določanje ravni protiteles proti VP1, VP2, VP4, VP6 in VP7 so dokazali Pavlov I. in sodelavci (1991). Avtorji so pregledali krvne serume ljudi in živali na prisotnost protiteles proti sevom rotavirusov SA-11, DS-1, Wan Ito in ugotovili, da se Western blot lahko uspešno uporablja za oceno imunosti v klinični praksi.

Domneva se, da lahko imunoblot uporabimo za potrditev diagnoze rotavirusne okužbe brez uporabe parnih serumov za en vzorec koproprotiteles.

Skupaj z RTHA in ELISA je bil imunoblot uporabljen za študij čredne imunosti. Ugotovljena je bila skupina posameznikov, ki niso imuni na VP2, VP4, VP6 in VP7, ki predstavljajo rizično skupino, ki potrebuje predvsem zaščito z aktivno in pasivno imunizacijo (Andrade J. P. et al., 1996).

Uporabo imunoblota pri študiju seroloških sprememb v procesu naravne okužbe RV ugotavljajo tudi Begue R. et al. (1998). Avtorji so potrdili, da so pri imunskem odgovoru na okužbo največkrat udeležena protitelesa proti VP2 in VP6, redkeje protitelesa proti VP7 in VP4.

Imunofluorescenčna analiza

Za titriranje testnih serumov na celicah, okuženih z rotavirusi, se uporablja indirektna imunofluorescentna metoda z uporabo serumov proti vrstam, označenih s fluorokromom. Reakcija temelji na specifični interakciji označenih protiteles in homolognega antigena, kompleks antigen-protitelo pa zlahka zaznamo s fluorescenčnim mikroskopom.

S to metodo so avtorji izvedli serološko preiskavo dveh skupin južnoameriških Indijancev in ugotovili visok odstotek seropozitivnih posameznikov v obeh skupinah: 67,8 in 77,4 % z ELISA in 45,5 in 56,7 % z IFM.

V drugi študiji o določanju ravni protiteles proti RV skupine C v popkovnični krvi z uporabo IFM je bilo dokazano, da so bila ta protitelesa odkrita pri 30% žensk v rodni dobi, kar kaže na preteklo okužbo.

ELISA se trenutno uporablja skupaj s PH v serološki diagnostiki rotavirusne okužbe izjemno široko. Ta metoda, ki temelji na uporabi z encimi označenih protiteles ali antigenov, je zaradi enostavnosti izvedbe in ekonomičnosti najbolj primerna in obetavna za serološko diagnostiko rotavirusne okužbe. Metoda omogoča izvajanje množičnih seroepidemičnih raziskav prebivalstva, ocenjevanje imunološke in epidemiološke učinkovitosti cepiv, preučevanje zaščitne vloge protiteles različnih razredov v različnih bioloških tekočinah človeškega telesa in tudi izvajanje serološke diagnoze rotavirusa. okužba.

Številne študije z uporabo ELISA je izvedel R. Azeredo (1989), ki je pokazal, da je število bolnikov z OKZ ugotovljene rotavirusne etiologije bistveno nižje od njihove stopnje okužbe glede na rezultate serološke preiskave. Ti podatki so pokazali, da veliko kliničnih primerov rotavirusne okužbe ni diagnosticiranih z odkritjem RV v blatu. Nadaljnje študije o razširjenosti okužbe z rotavirusi so potrdile to domnevo. Pri izvajanju seroepidemioloških raziskav je bilo ugotovljeno, da ima 50-70% populacije visoko raven protiteles, kar kaže na razširjenost RV v človeški populaciji.

Še večje možnosti odpira ELISA pri določanju dinamike ravni protiteles, ki pripadajo različnim razredom imunoglobulinov. Torej, po mnenju avtorjev metodologije leta 1989, trdijo, da so med postopkom cepljenja opazili znatno povečanje protiteles proti RV v krvi pri 83-96%. Antirotavirusna protitelesa razredov IgA in IgG so bila enako dobro odkrita z ELISA in PH z zmanjšanjem plazme - 67,6 oziroma 70,0%. Serokonverzijo protiteles razreda IgM smo z ELISA in RSC odkrili pri 53 oziroma 44 % otrok. Na podlagi analize intenzivnosti nastajanja protiteles različnih razredov so avtorji ugotovili, da je najučinkovitejša, preprosta in najhitrejša metoda za ugotavljanje serokonverzij po cepljenju metoda dokazovanja protiteles IgA z ELISA testom.

Ta zaključek je bil potrjen tudi v delu R. Bishopa (1996), ki je navedel, da je na podlagi rezultatov raziskave 68 parov matere in otroka z diagnozo okužbe z RV dokazano, da je odkrivanje protiteles IgA z uporabo ELISA pri materiali blata je najbolj občutljiv marker.tako klinično izražene kot asimptomatske okužbe. Podobne rezultate pri pregledu otrok s hudo drisko RV je leta 1998 dobil J. Kolomina.

Vendar pa je za preučevanje intenzivnosti serokonverzij potrebno preučevanje parnih serumov, kar bistveno podaljša diagnostični proces. Hkrati je dobro znano, da je pojav protiteles razreda IgM dokaz o začetku infekcijskega procesa. Po naših podatkih, pridobljenih pri pregledu bolnikov z rotavirusno okužbo z ELISA in RSK, se je izkazalo, da so po rezultatih ELISA vse pregledane osebe vsebovale v krvi protitelesa IgM proti RV, po RSK pa le 77 % (R

V zadnjih letih je z uresničitvijo možnosti določanja protiteles, specifičnih za gen in serotip, ELISA postala resnično univerzalna metoda za preučevanje rotavirusne okužbe, ki se uporablja:

• pri preučevanju proizvodnje protiteles razredov IgA, M, G na posamezne strukturne in nestrukturne proteine ​​RV;
• pri ocenjevanju imunološke učinkovitosti različnih vrst cepiv: oslabljenih, hladno prilagojenih, na osnovi DNK, reasortantnih;
• pri preučevanju proizvodnje protiteles v različnih bioloških tekočinah telesa v pogojih naravne okužbe in med imunizacijo.

Tako, kot izhaja iz predstavljenih podatkov, se imunološki vidiki rotavirusne okužbe preučujejo s širokim spektrom laboratorijskih metod. Posledično je izbira optimalne raziskovalne metode, ob upoštevanju njene ločljivosti, ekonomskih in časovnih stroškov, precej zapletena in odvisna od nalog, s katerimi se soočajo raziskovalci, pa tudi od opremljenosti laboratorija. In vendar je po našem mnenju treba iz različnih metod izpostaviti dve - reakcijo nevtralizacije v celični kulturi in encimski imunski test - ki zagotavlja študijo protiteles proti različnim razredom imunoglobulinov. Možnost hitre diagnostike rotavirusne okužbe določa posebno obetavnost teh metod za uporabo v široki praksi.

SEROLOŠKE ŠTUDIJE(lat. serum serum + grški logos doktrina) - metode imunologije, ki proučujejo specifične lastnosti človeške ali živalske krvi z namenom odkrivanja antigenov ali protiteles s pomočjo seroloških reakcij.

S.-jev začetek in. postavljen konec prejšnjega stoletja, potem ko je bilo ugotovljeno, da povezavo antigena s protitelesom (glej Antigen - protitelesna reakcija) spremljajo številni pojavi, ki so na voljo vizualnemu opazovanju - aglutinacija (glej), precipitacija (glej) ali lizo. Obstaja možnost specifičnega prepoznavanja antigenov (glej) ali protiteles (glej), če je ena od teh komponent znana.

Leta 1897 je F. Vidal poročal, da krvni serum bolnikov s trebušnim tifusom selektivno aglutinira bakterije tifusa, zato je to reakcijo (glej Vidalovo reakcijo) mogoče uporabiti v laboratoriju. diagnoza tifusne vročice. Istega leta je bilo dokazano, da filtrati kulture bakterij kuge, tifusa in kolere v kombinaciji z ustreznimi imunskimi serumi tvorijo kosmiče ali oborine.

Precipitacijska reakcija se je izkazala za primerno za dokazovanje kakršnihkoli proteinskih antigenov. V letih 1900-1901. K. Landsteiner je ugotovil, da sta v človeških eritrocitih dva različna antigena (A in B), v krvnem serumu pa dva aglutinina (a in P), kar je prispevalo k uporabi reakcije hemaglutinacije za določanje krvnih skupin (glej).

Aglutinacijska reakcija za določanje krvne skupine in Rh faktorja se uporablja v porodniški praksi, pri transfuziji krvi in ​​presaditvi tkiv. Protitelesa proti Rh faktorju (glej) so nepopolna protitelesa, niso sposobna neposredne reakcije z Rh-pozitivnimi eritrociti, zato jih za odkrivanje uporabite Coombsovo reakcijo (glejte Coombsovo reakcijo), ki temelji na odkrivanju nepopolnih protiteles z uporabo antiglobulina. sera. Eritrocitom znane specifičnosti dodamo testni serum, nato pa antiglobulinski serum proti IgG (indirektna Coombsova reakcija). Fab-fragmenti nepopolnih protiteles proučevanega krvnega seruma se pritrdijo na eritrocite, protitelesa proti IgG pa na proste Fc-fragmente teh protiteles in pride do aglutinacije eritrocitov. Za diagnozo hemolitične anemije se uporablja neposredna Coombsova reakcija.V telesu takih bolnikov se rdeče krvne celice povezujejo s protitelesi, ki krožijo v krvi proti Rh faktorju. Za njihovo identifikacijo bolniku odvzetim eritrocitom dodamo protitelesa proti IgG. Pojav aglutinacije eritrocitov potrjuje diagnozo bolezni.

Reakcija inhibicije hemaglutinacije - RTGA (glej Hemaglutinacija) - temelji na pojavu preprečevanja (inhibicije) hemaglutinacije eritrocitov z virusi z imunskim serumom. Pojav virusne hemaglutinacije ni serolen. reakcija in nastane kot posledica povezave virusa z eritrocitnimi receptorji, vendar je HTA serološki test, s katerim ugotavljamo in titriramo protivirusna protitelesa. RTGA je glavna metoda serodiagnostike gripe, ošpic, rdečk, mumpsa, klopnega encefalitisa in drugih virusnih okužb, katerih povzročitelji imajo hemaglutinacijske lastnosti.

Reakcija pasivne ali posredne hemaglutinacije. Uporablja eritrocite ali nevtralne sintetične materiale (npr. Delce lateksa), na površini katerih so sorbirani antigeni (bakterijski, virusni, tkivni) ali protitelesa (glej Boydenovo reakcijo). Do njihove aglutinacije pride, ko dodamo ustrezne serume ali antigene. RBC, senzibilizirane z antigeni, se imenujejo antigenski eritrocitni diagnostik in se uporabljajo za odkrivanje in titriranje protiteles. Eritrociti, senzibilizirani s protitelesi, se imenujejo imunoglobulinski eritrocitni diagnostiki (glej) in se uporabljajo za odkrivanje antigenov:

Reakcija pasivne hemaglutinacije se uporablja za diagnosticiranje bolezni, ki jih povzročajo bakterije (tifus in paratifus, dizenterija, bruceloza, kuga, kolera itd.), praživali (malarija) in virusi (gripa, adenovirusne okužbe, klopni encefalitis, krimska hemoragična mrzlica, itd.). Reakcija pasivne hemaglutinacije v občutljivosti ni slabša od metode izolacije virusa pri arenovirusnih boleznih (glej), zlasti pri limfocitnem horiomeningitisu. Virusni antigen limfocitnega horiomeningitisa se odkrije pri nosilcih virusa (hišne miši) v reakciji pasivne hemaglutinacije z več deset tisočkrat razredčenimi suspenzijami ekstrahiranih organov. Pri salmonelozi se bakterije odkrijejo v reakciji pasivne hemaglutinacije pri koncentraciji do nekaj sto mikrobnih teles v 1 g blata, bakterije dizenterije v živilih se odkrijejo, ko je vsebnost 1 g materiala vsaj 500 mikrobnih teles.

Reakcija pasivne hemaglutinacije se uporablja pri diagnozi in preprečevanju virusnega hepatitisa B. V Sovjetski zvezi se za odkrivanje antigena HBs (glej avstralski antigen) v krvi bolnikov z akutnim hepatitisom B izdela diagnostika, ki je piščančji eritrocit. senzibiliziran s kozjim imunoglobulinom proti antigenu HBs. Kapljico diagnostikuma združimo z enakim volumnom krvnega seruma preiskovanca in če je v njem prisoten antigen HBs, pride do aglutinacije. Reakcija lahko zajame do 1,5 ng/ml HBs antigena. Za odkrivanje protiteles HBs se uporabljajo eritrociti z adsorbiranim antigenom HBs, izolirani iz krvi bolnikov. Reakcija pasivne hemaglutinacije se uporablja tudi za odkrivanje preobčutljivosti bolnika na zdravila in hormone, na primer penicilin ali insulin. V tem primeru se eritrociti krvne skupine 0 človeka senzibilizirajo z zdravilno učinkovino in se nato uporabijo za odkrivanje aglutininov nanjo v krvnem serumu pacienta.

Reakcija pasivne hemaglutinacije se uporablja za odkrivanje gonadotropina v urinu za ugotavljanje nosečnosti (glej horionski gonadotropin). Da bi to naredili, se standardni serum za ta hormon inkubira s proučevanim urinom. Z naknadnim dodajanjem eritrocitov z sorbiranim hormonom na njih ne pride do aglutinacije (pozitiven odgovor), saj hormon, ki ga vsebuje urin, nevtralizira aglutinirajoča protitelesa.

Reakcije, ki temeljijo na pojavu padavin

Uporabljajo se za odkrivanje najrazličnejših antigenov in protiteles. Najenostavnejši primer kvalitativne reakcije je nastanek neprozornega precipitacijskega traku na meji odlaganja antigena na protitelesu v epruveti. Široko se uporabljajo različne vrste reakcij obarjanja v poltekočih gelih agarja ali agaroze (metoda dvojne imunodifuzije po Ouchterlonu, metoda radialne imunodifuzije, imunoelektroforeza), ki so tako kvalitativne kot kvantitativne (glej Imunodifuzija, Imunoelektroforeza).

Za vzpostavitev dvojne imunodifuzije se plast staljenega gela vlije na stekleno ploščo in po strjevanju izrežejo luknje s premerom 1,5-3 mm. Testne antigene namestimo v krogasto razporejene vdolbinice, v osrednjo vdolbinico pa imunski serum znane specifičnosti. Homologni serumi in antigeni, ki difundirajo drug proti drugemu, tvorijo oborino. Z radialno imunodifuzijo (po Mancinijevi metodi) v agar vnesemo imunski serum. Antigen, nameščen v vdolbinice, difundira skozi agar in zaradi obarjanja z imunskim serumom se okoli vdolbinic oblikujejo neprozorni obroči, katerih zunanji premer je sorazmeren s koncentracijo antigena. Sprememba te reakcije se uporablja pri diagnozi gripe za prepoznavanje protiteles IgM in IgG (glejte Imunoglobulini). V agar vnesemo antigen gripe, v jamice pa krvni serum. Nato plošče obdelamo z imunskimi serumi proti protitelesom IgM ali IgG, kar pomaga prepoznati reakcijo ustreznih protiteles z antigeni. Metoda vam omogoča, da hkrati določite titre protiteles in njihovo pripadnost določenemu razredu imunoglobulinov.

Vrsta imunoelektroforeze je radioimunoforeza. V tem primeru se po elektroforetski ločitvi antigenov žleb, izrezan vzporedno z gibanjem antigenov v gelu, najprej napolni z imunskim serumom, označenim z radioaktivnim jodom proti antigenom, ki jih je treba določiti, nato pa še z imunskim serumom proti Protitelesa IgG, ki oborijo nastale komplekse protitelesa z antigenom. Vsi nevezani reagenti se izperejo, kompleks antigen-protitelo pa se odkrije z avtoradiografijo (glej).

Reakcije komplementa. Reakcije s sodelovanjem komplementa (glej) temeljijo na sposobnosti podkomponente komplementa Cl (Clq) in nato drugih komponent komplementa, da se pridružijo imunskim kompleksom.

Reakcija fiksacije komplementa vam omogoča titriranje antigenov ali protiteles glede na stopnjo fiksacije komplementa s kompleksom antigen-protitelo. Ta reakcija je sestavljena iz dveh faz: interakcije antigena s preiskovanim krvnim serumom (testni sistem) in interakcije hemolitičnega seruma z ovčjimi eritrociti (indikatorski sistem). S pozitivno reakcijo se v testnem sistemu pojavi fiksacija komplementa, nato pa pri dodajanju rdečih krvnih celic, občutljivih na protitelesa, ni opaziti hemolize (glejte Reakcija fiksacije komplementa). Reakcija se pogosto uporablja za serodiagnostiko visceralnega sifilisa (glej Wassermanovo reakcijo) in virusnih okužb (glej virološke študije).

citoliza. Protitelesa proti celičnim strukturam lahko s sodelovanjem komplementa raztopijo celice, ki te strukture nosijo. Lizo eritrocitov je mogoče zlahka oceniti s stopnjo in intenzivnostjo sproščanja hemoglobina. Lizo jedrnih celic ocenimo s štetjem odstotka odmrlih celic, ki se ne obarvajo z metilen modrim. Pogosto se uporablja tudi radioaktivni krom, ki je bil predhodno kemično povezan s celicami. Število uničenih celic je določeno s količino nevezanega kroma, ki se sprosti med celično lizo.

V gelu lahko pride do reakcije radialne hemolize eritrocitov. Suspenzijo ovčjih eritrocitov damo v agarozni gel in tam dodamo komplement; vdolbinice naredimo v sloju zamrznjenega na steklu in jim dodamo hemolitični serum. Zaradi radialne difuzije protiteles se okoli vdolbinic oblikuje območje hemolize. Polmer cone hemolize je neposredno sorazmeren s serumskim titrom. Če se kateri koli antigen adsorbira na eritrocitih, na primer glikoprotein hemaglutinin virusa gripe, rdečk ali klopnega encefalitisa, se lahko pojavi pojav hemolize imunskih serumov na te viruse. Reakcija radialne hemolize v gelu je našla uporabo pri diagnostiki virusnih okužb zaradi enostavnosti določanja stopnje, neobčutljivosti na serumske zaviralce in zmožnosti titracije krvnega seruma glede na premer območja hemolize brez uporabe serijskih razredčitev.

imunska adhezija. Eritrociti, trombociti in druge krvne celice imajo na svoji površini receptorje za tretjo komponento komplementa (C3). Če antigenu (bakterijam, virusom itd.) dodamo ustrezen imunski serum in komplement, nastane kompleks antigen protitelo, prekrit s C3 komponento komplementa. Ko se pomeša s trombociti, se bo zaradi C3 komponente komplementa kompleks antigen-protitelo usedel na celice in povzročil njihovo aglutinacijo (glejte Imunska adhezija). Ta reakcija se uporablja za določanje antigenov sistema HLA (glej Transplantacijska imunost) in pri preučevanju številnih virusnih okužb (encefalitis, ki se prenaša s klopi, mrzlica denga), k rži spremlja imunopatol. procesi in kroženje v krvi virusnih antigenov v kombinaciji s protitelesi.

Reakcija nevtralizacije temelji na sposobnosti protiteles, da nevtralizirajo določene specifične funkcije makromolekularnih ali topnih antigenov, na primer aktivnost encimov, bakterijske toksine, patogenost virusov. V bakteriologiji se ta reakcija uporablja za odkrivanje antistreptolizinov, antistreptokinaz in antistafilolizinov. Reakcijo nevtralizacije toksinov lahko ocenimo z biol. učinek, na primer titriramo serume proti tetanusu in botulinu (glejte Toksin – reakcija proti toksinom). Mešanica toksina in antiseruma, ki se daje živalim, prepreči njihovo smrt. V virologiji se uporabljajo različne različice nevtralizacijske reakcije. Z mešanjem virusov z ustreznim antiserumom in vnosom te mešanice v živali ali celične kulture nevtraliziramo patogenost virusov.

Reakcije z uporabo kemičnih in fizikalnih oznak

Imunofluorescenca, ki jo je razvil Koons (AN Coons) leta 1942, vključuje uporabo serola. reakcije serumov, označenih s fluorokromom (glej Imunofluorescenca). Serum, označen s fluorokromom, tvori z antigenom kompleks antigen-protitelo, ki postane na voljo za opazovanje pod mikroskopom v ultravijoličnih žarkih, ki vzbujajo sij fluorokroma. Neposredna imunofluorescenčna reakcija se uporablja za preučevanje celičnih antigenov, odkrivanje virusa v okuženih celicah ter odkrivanje bakterij in rikecij v brisih. Tako se za diagnozo stekline odtisi delčkov možganov živali, za katere se sumi, da prenašajo virus, obdelajo z luminiscenčnim serumom proti steklini. S pozitivnim rezultatom se v protoplazmi živčnih celic opazijo grude svetlo zelene barve. Hitra diagnoza gripe, parainfluence in adenovirusne okužbe temelji na detekciji virusnih antigenov v celicah odtisov iz nosne sluznice.

Širše se uporablja metoda posredne imunofluorescence, ki temelji na detekciji kompleksa antigen-protitelo s pomočjo luminescentnega imunskega seruma proti protitelesom IgG in se uporablja za detekcijo ne le antigenov, temveč tudi titracijo protiteles. Metoda je našla uporabo pri serodiagnostiki herpesa, citomegalipov, mrzlice Lassa. V laboratoriju je treba zalogo pripravkov celic, ki vsebujejo antigen, na primer z virusom okuženih celic VERO ali piščančjih fibroblastov, fiksiranih z acetonom, hraniti pri -20 °C. Preučevani krvni serum nanesemo na pripravke, pripravek postavimo v termostat pri f 37 °, da tvorimo imunske komplekse, nato pa po izpiranju nevezanih reagentov te komplekse odkrijemo z označenim luminiscenčnim serumom proti človeškim globulinom. Z uporabo označenih imunskih serumov proti protitelesom IgM ali IgG je mogoče razlikovati vrsto protiteles in odkriti zgodnji imunski odziv s prisotnostjo protiteles IgM.

V encimsko-imunološki metodi se uporabljajo protitelesa, konjugirana z encimi, hl. prir. hrenova peroksidaza ali alkalna fosfataza. Za odkrivanje povezave označenega seruma z antigenom dodamo substrat, ki ga encim, vezan na serum, razgradi s pojavom obarvanja v rumeno-rjavo (peroksidaza) ali rumeno-zeleno (fosfataza) barvo. Uporabljajo se tudi encimi, ki razgrajujejo ne samo kromogeni, ampak tudi lumogeni substrat. V tem primeru se ob pozitivni reakciji pojavi sijaj. Tako kot imunofluorescenca se tudi encimski imunski test uporablja za odkrivanje antigenov v celicah ali za titriranje protiteles na celicah, ki vsebujejo antigen.

Najbolj priljubljena vrsta encimsko-imunološke metode je imunosorpcija. Na trdnem nosilcu je lahko Krim celuloza, poliakrilamid, dekstran in različne plastike, ki adsorbirajo antigen. Pogosteje površina vodnjakov mikropanelov služi kot nosilec. V vdolbinice s sorbiranim antigenom dodamo testni krvni serum, nato z encimom označen antiserum in substrat. Pozitivni rezultati se upoštevajo s spremembo barve tekočega medija. Za odkrivanje antigenov se protitelesa adsorbirajo na nosilec, nato se testni material vnese v vdolbinice in zazna reakcija z encimsko označenim protimikrobnim serumom.

Radioimunološka metoda temelji na uporabi radioizotopskega označevanja antigenov ali protiteles. Prvotno je bil razvit kot specifična metoda za merjenje ravni krožečih hormonov v krvi. Testni sistem je bil z izotopom označen hormon (antigen) in antiserum zanj. Če takemu antiserumu dodamo material, ki vsebuje želeni hormon, bo ta vezal del protiteles, ob kasnejšem vnosu označenega titriranega hormona pa se bo le-ta v zmanjšani količini v primerjavi s kontrolo vezala na protitelesa. Rezultat ovrednotimo s primerjavo krivulj vezane in nevezane radioaktivne oznake. Tovrstno metodo imenujemo konkurenčna reakcija. Obstajajo tudi druge modifikacije radioimunološke metode. Radioimunska metoda je najbolj občutljiva metoda za določanje antigenov in protiteles, ki se uporabljajo za določanje hormonov, zdravil in antibiotikov, za diagnosticiranje bakterijskih, virusnih, rikecijalnih, protozojskih bolezni, za preučevanje krvnih beljakovin, tkivnih antigenov.

Primerjalne značilnosti in uporaba seroloških raziskovalnih metod v medicinski praksi

S. metode in. nenehno izboljševali v smeri povečane občutljivosti in vsestranskosti uporabe. Sprva serol. Diagnoza je temeljila na odkritju protiteles. S prihodom sredine 20. st reakcije imunofluorescence in pasivne hemaglutinacije, ki imajo večjo občutljivost, je postalo mogoče zaznati ne le protitelesa, ampak tudi antigen neposredno v materialu bolnikov. Encimsko-imunološke in radioimunološke metode se po občutljivosti za 2-3 velikosti večje od imunofluorescence in pasivne hemaglutinacije približajo metodam biol. odkrivanje bakterij in virusov. Obseg njihove uporabe za odkrivanje tako antigenov kot protiteles je teoretično neomejen.

Serodiagnostika inf. bolezen temelji na pojavu protiteles proti izoliranemu ali sumljivemu povzročitelju, ne glede na to, ali je bil povzročitelj odkrit v akutni fazi bolezni. Preglejte pare krvnih serumov, odvzetih na začetku bolezni in 2-3 tedne. pozneje. Povečanje protiteles v drugem krvnem serumu vsaj 4-krat v primerjavi s prvim je diagnostično pomembno. Pomembno je tudi, kateri razred imunoglobulinov predstavlja protitelesa. Protitelesa IgM najdemo ob koncu akutnega obdobja bolezni in v zgodnji fazi okrevanja. Protitelesa IgG se pojavijo v kasnejših fazah okrevanja in krožijo dolgo časa. Če se pri ženski v prvem trimesečju nosečnosti odkrijejo protitelesa IgM proti virusu rdečk, je to podlaga za prekinitev nosečnosti, saj je v tem obdobju plod še posebej občutljiv na virus. Pri različnih inf. bolezni selektivno uporabljajo najbolj specifične in priročne metode.

S. i. široko uporablja v epidemiologiji. Sistematično zbiranje in raziskovanje vzorcev krvi različnih skupin prebivalstva omogoča razumevanje stikov prebivalstva z virom povzročiteljev inf. bolezni. Študija ravni kolektivne imunosti vam omogoča, da prepoznate skupine z visokim tveganjem in načrtujete dejavnosti cepljenja, preučite geografsko porazdelitev okužb. S. i. različne starostne skupine prebivalstva so na primer omogočile retrospektivno ugotavljanje kroženja različnih variant virusa gripe v določenih časovnih obdobjih.

S. i. so zelo pomembni pri preučevanju dednih bolezni (glej) in avtoimunskih bolezni, ki jih spremlja pojav protiteles, specifičnih za tkiva in organe, ki uničujejo ustrezne ciljne celice, pa tudi v onkologiji za odkrivanje tumorskih antigenov. Tako imunodiagnoza raka jeter temelji na določanju alfa-fetoproteina in drugih embrionalnih antigenov v krvnem serumu bolnikov z metodami imunodifuzije in radioimunoanalize.

Pomemben napredek znanosti pri preučevanju fine antigenske strukture celičnih antigenov, antigenov bakterij in virusov je dosežen z uporabo serola. reakcije monoklonskih protiteles, ki jih je mogoče pridobiti z ločenimi antigenskimi determinantami.

Bibliografija: Metode raziskav v imunologiji, ur. I. Lefkovits in B. Pernis, prev. iz angleščine, M., 1981; Vodnik po imunologiji, ur. Vjazova O. E., Hodžajev Š. X. Moskva, 1973. Smernice za klinično laboratorijsko diagnostiko, ed. V. V. Menšikov, Moskva, 1982. Imunologija, ur. od J.-F. Bach, N.Y., 1978.

S. Ya. Gaidamovič.

Serološka raziskovalna metoda.

Reakcije antigen-protitelesa

Značilnosti interakcije protitelesa z antigenom so osnova diagnostičnih reakcij v laboratorijih.

Reakcija v vitro med antigenom in protitelesom obsega:

specifična

nespecifična faza.

AT specfizična faza pride do hitre specifične vezave aktivnega mesta protitelesa na determinanto antigena.

Potem pride nespecifična faza - počasnejši, kar se kaže vidni fizikalni pojavi, na primer nastanek kosmičev (pojav aglutinacije) ali oborine v obliki motnosti. Ta faza zahteva določene pogoje (elektroliti, optimalen pH medija).

V ta namen se prijavite serološke metode (iz lat. serum - serum in logotipi - doktrina), tj. metode za preučevanje protiteles in antigenov z uporabo reakcij antigen-protitelo, določenih v krvnem serumu in drugih tekočinah ter telesnih tkivih.

Ko mikrob izoliramo od pacienta, identificiramo povzročitelja s preučevanjem njegovih antigenskih lastnosti z uporabo imunskih diagnostičnih serumov, to je krvnih serumov hiperimuniziranih živali, ki vsebujejo specifična protitelesa. Ta t.i serološkeidentifikacija mikroorganizmi.

Aglutinacijske reakcije

Aglutinacijska reakcija- RA(iz lat. aglutinatio - bonding) - preprosta reakcija, pri kateri protitelesa vežejo korpuskularne antigene (bakterije, eritrocite ali druge celice, netopne delce z adsorbiranimi antigeni na njih, pa tudi makromolekularne agregate). Pojavi se v prisotnosti elektrolitov, na primer, ko dodamo izotonično raztopino natrijevega klorida.

Različno možnosti reakcijeaglutinacija:

razporejen,

okvirno,

posredno itd.

Reakcija aglutinacije se kaže s tvorbo lusk ali sediment (celice, "zlepljene" s protitelesi, ki imajo dva ali več centrov za vezavo antigenov).

Ra se uporablja za:

1) odkrivanje protiteles bolečine v krvnem serumunyh, na primer z brucelozo (reakcije Wright, Heddelson), tifus in paratifus (reakcija Vidal) in druge nalezljive bolezni;

opredelitev patogena , izoliran od bolnika;

določanje krvnih skupin z uporabo monoklonskih protiteles proti aloantigenom eritrocitov.

Za določitev bolnikovih protiteles postavitipodaljšana reakcija aglutinacije: dodajte razredčitvam bolnikovega krvnega seruma diagnosticum(suspenzija ubitih mikrobov) in po nekaj urah inkubacije pri 37 °C opazimo največjo razredčitev seruma (serumski titer), pri kateri je prišlo do aglutinacije, tj. do nastanka oborine.

Narava in hitrost aglutinacije sta odvisni od vrste antigena in protiteles. Primer so značilnosti interakcije diagnostičnih (O- in K-antigenov) s specifičnimi protitelesi. Aglutinacijska reakcija z O-diagnostikum(bakterije ubije toplota, ohranijo termostabilen O antigen) poteka v obliki drobnozrnate aglutinacije. Aglutinacijska reakcija s H-diagnosticumom (bakterije, ki jih ubije formalin, obdrži toplotno labilen flagelarni H-antigen) je grobozrnata in poteka hitreje.

Če je treba določiti patogen, izoliran od pacienta, postavite orientacija reakcija aglutinacije, z uporabo diagnostičnih protiteles (aglutinacijski serum), tj. Izvede se serotipizacija patogena. Približno reakcijo izvedemo na stekelcu. Kapljici diagnostičnega aglutinacijskega seruma v razredčini 1:10 ali 1:20 dodamo čisto kulturo povzročitelja, izoliranega od bolnika. V bližini je postavljena kontrola: namesto seruma se nanese kapljica raztopine natrijevega klorida. Ko se v kapljici pojavi kosmičasta usedlina s serumom in mikrobi, dajo podaljšan reakcija aglutinacije v epruvetah z naraščajočimi razredčinami aglutinacijskega seruma, ki mu dodamo 2-3 kapljice suspenzije patogena. Aglutinacija se upošteva glede na količino usedline in stopnjo zbistrenosti tekočine. Upošteva se reakcijapozitivno, če opazimo aglutinacijo v razredčitvi, ki je blizu titru diagnostičnega seruma. Hkrati se upoštevajo kontrole: serum, razredčen z izotonično raztopino natrijevega klorida, mora biti prozoren, suspenzija mikrobov v isti raztopini mora biti enakomerno motna, brez usedline.

Različne sorodne bakterije je mogoče aglutinirati z istim diagnostičnim aglutinacijskim serumom, kar oteži njihovo identifikacijo. Zato, uživajte adsorbirani aglutinacijski serumusta, iz katerih so bila navzkrižno reaktivna protitelesa odstranjena z adsorpcijo sorodnih bakterij. V takih serumih ostanejo protitelesa, specifična samo za to bakterijo. Pridobivanje monoreceptorskih diagnostičnih aglutinacijskih serumov na ta način je predlagal A. Castellani (1902).

Reakcija posrednega (pasivnega) hemaglutanarod (RNGA, RPGA) temelji na rabljenoraziskave eritrocitov(ali lateks) z adsorbiromantigeni, ki se kopali na njihovi površini ozprotitelesa, katerih interakcija z ustreznimi protitelesa ali antigenov v krvnem serumu bolnikov povzroča lepiloeritrociti se skrčijo in padejo na dno epruvete ali celice v obliki nazobčanega sedimenta.

Z negativno reakcijo eritrociti se usedejo v obliki "gumba". Običajno se protitelesa odkrijejo v RNGA z antigenskim eritrocitnim diagnostikom, ki so eritrociti z adsorbiranimi antigeni. Včasih se uporabljajo protitelesni eritrocitni diagnostiki, na katerih se adsorbirajo protitelesa. Na primer, botulinski toksin lahko odkrijemo tako, da mu dodamo eritrocitno protitelo botulinum diagnosticum (to reakcijo imenujemo povratna reakcijaposredna hemaglutinacija -RONGA). RNHA se uporablja za diagnosticiranje nalezljivih bolezni, določanje gonadotropnega hormona v urinu ob ugotovitvi nosečnosti, za odkrivanje preobčutljivosti na zdravila, hormone in v nekaterih drugih primerih.

Reakcija koaglutinacije. Patogene celice se določijo s pomočjo stafilokokov, predhodno obdelanih z imunskim diagnostičnim serumom. Protein, ki vsebuje stafilokoke AMPAK, ki imajo afiniteto za Fc fragment imunoglobulinov, nespecifično adsorbirajo protimikrobna protitelesa, ki nato sodelujejo z aktivnimi centri z ustreznimi mikrobi, izoliranimi od bolnikov. Kot posledica koaglutinacije nastanejo kosmiči, sestavljeni iz stafilokokov, diagnostičnih serumskih protiteles in določenega mikroba.

Reakcija inhibicije hemaglutinacije(RTGA) na podlagi blokade zatiranje envirus tigens protitelesa imunskega seruma, zaradi česar virusi izgubijo sposobnost aglutinacije rdečih krvničk. RTHA se uporablja za diagnosticiranje številnih virusnih bolezni, katerih povzročitelji (gripa, ošpice, rdečke, klopni encefalitis itd.) Lahko aglutinirajo eritrocite različnih živali.

Aglutinacijski test za določanje protiteles anti-Rhesus (posredni testCoombs) Uporablja se pri bolnikih z intravaskularno hemolizo. Pri nekaterih od teh bolnikov najdemo protitelesa proti rezusu, ki so nepopolna, monovalentna. Posebej interagirajo z Rh-pozitivnimi eritrociti, vendar ne povzročajo njihove aglutinacije. Prisotnost takšnih nepopolnih protiteles ugotavljamo v indirektni Coombsovi reakciji. V ta namen sistemu anti-Rh protitelesa + Rh-pozitivni eritrociti dodamo antiglobulinski serum (protitelesa proti človeškim imunoglobulinom), kar povzroči aglutinacijo eritrocitov. Z uporabo Coombsove reakcije se diagnosticirajo patološka stanja, povezana z intravaskularno lizo eritrocitov imunskega izvora, na primer hemolitična bolezen novorojenčka: eritrociti Rh-pozitivnega ploda se združijo z nepopolnimi protitelesi proti Rh faktorju, ki kroži v krvi, ki prečka posteljica Rh-negativne matere.