İMMUNOMİKROBİOLOJİ TƏDQİQATLAR

Bir çox problemləri həll etmək üçün immunoloji üsullardan istifadə olunur:

1. İmmunitet sisteminin hüceyrələrinin və onların məhsullarının kəmiyyət və funksional xüsusiyyətlərini təyin etməklə insan immun sisteminin vəziyyətinin (immun statusunun) qiymətləndirilməsi.

2. İnsan toxumalarının tərkibinin və xüsusiyyətlərinin müəyyən edilməsi: qan qrupları, Rh faktoru, transplantasiya antigenləri.

3. Anticisim titrlərinin aşkarlanması və təyin edilməsi (serodiaqnoz), orqanizmdə patogen antigenlərin müəyyən edilməsi və bu antigenlərə hüceyrə reaksiyalarının müəyyən edilməsi yolu ilə yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikası və onlara qarşı müqavimət.

4. İnsan və heyvanların orqanizmindən təcrid olunmuş bakteriya və virusların mədəniyyətlərinin seroid identifikasiyası.

5. İnsan orqanizmində və xarici mühitdə antigen və ya hapten xassələrə malik olan hər hansı maddələrin (hormonlar, fermentlər, zəhərlər, dərmanlar, dərmanlar və s.) aşkar edilməsi.

6. İmmunopatoloji vəziyyətlərin, allergiyanın, transplantasiya və antitümör reaksiyalarının müəyyən edilməsi.

Seroloji reaksiyalarda antigen və antikorun qarşılıqlı əlaqəsi prosesi iki mərhələdə baş verir:

1) xüsusi- antikorların (paratopların) və antigen epitoplarının aktiv mərkəzlərinin tamamlayıcı birləşməsinin meydana gəldiyi qarşılıqlı təsir mərhələsi. Tipik olaraq bu mərhələ bir neçə saniyə və ya dəqiqə davam edir;

2) qeyri-spesifik- immun komplekslərin formalaşmasının xarici əlamətləri ilə xarakterizə olunan təzahür mərhələsi. Bu mərhələ bir neçə dəqiqədən bir neçə saata qədər inkişaf edə bilər.

Antikorların antigenlə optimal spesifik qarşılıqlı təsiri neytrala yaxın pH ilə izotonik məhlulda baş verir. In vitro sistemdə antigen-antikor reaksiyası bir neçə hadisənin baş verməsi ilə müşayiət oluna bilər.

· aglütinasiya,

· yağıntı,

· lizis.

Reaksiyanın xarici təzahürləri antigenin fiziki-kimyəvi xassələrindən (hissəcik ölçüsü, fiziki vəziyyət), antikorların sinfi və növündən (tam və natamam), həmçinin eksperimental şəraitdən (orta konsistensiya, duz konsentrasiyası, pH, temperatur) asılıdır. ).

Antigenlərin və antikorların polivalentliyi adi gözlə görünən aqreqatların əmələ gəlməsini təmin edir. Bu, şəbəkə formalaşması nəzəriyyəsinə uyğun olaraq baş verir, buna görə digər antikor və antigen molekulları meydana gələn antigen-antikor kompleksinə ardıcıl olaraq bağlanır. Nəticədə, çökən aqreqatlara çevrilən şəbəkə strukturları yaranır. Reaksiyanın xarakteri və şiddəti antigenlərin və antikorların kəmiyyət nisbətindən asılıdır. Ən intensiv reaksiyalar reagentlər ekvivalent nisbətdə olduqda baş verir.

Şəbəkənin (şəbəkələrin) formalaşması üçün zəruri şərt hər bir antigen molekulu üçün üçdən çox antigen determinantının və hər bir antikor molekulu üçün iki aktiv mərkəzin olmasıdır. Antigen molekulları qəfəs düyünləridir və antikor molekulları birləşdirici bağlardır. Çöküntü əmələ gəldikdən sonra supernatantda nə sərbəst antigenlər, nə də sərbəst antikorlar aşkar edilmədikdə, antigen və antikor konsentrasiyalarının optimal nisbətləri (ekvivalent zonası) bölgəsi.

Antigenlər tam antikorlarla birləşdikdə çökə bilən aqreqatlar əmələ gəlir. Natamam antikorlar (monovalent) şəbəkə strukturlarının və böyük aqreqatların formalaşmasına səbəb olmur. Belə antikorları aşkar etmək üçün antiglobulinlərin istifadəsinə əsaslanan xüsusi üsullar (Coombs reaksiyası) istifadə olunur.

Seroloji reaksiyalar yüksək spesifikliyi və həssaslığına görə antigenlərin və antitellərin aşkarlanması və kəmiyyətinin müəyyən edilməsi üçün istifadə olunur. Reaksiyalardakı immunoreagentlərin miqdarı titrlə ifadə edilir - reaksiya hələ də müşahidə olunduğu serum və ya antigenin maksimum seyreltilməsi.

Mikrobioloji və immunoloji laboratoriyalarda seroloji reaksiyalar iki məqsəd üçün istifadə olunur:

1) məlum antikordan (immun diaqnostik zərdab) istifadə etməklə, ümumiyyətlə, mikroorqanizmlərin, toksinlərin, antigenlərin seroidifikasiyası üçün;

2) serodiaqnoz üçün - məlum antigendən (diaqnostikum) istifadə edərək, bakterial, viral və daha az tez-tez digər yoluxucu xəstəliklər üçün xəstənin qan zərdabında antikorun təbiətinin müəyyən edilməsi.

Antigenin ümumi, növ və növünü müəyyən etmək üçün məlum immun diaqnostik serumlar tələb olunur. Onlar heyvanlara (adətən dovşanlara) artan dozada öldürülmüş və ya canlı mikroorqanizmlərin, onların çürümə məhsullarının, zərərsizləşdirilmiş və ya yerli toksinlərin təkrar tətbiqi ilə əldə edilir. Heyvanların müəyyən bir immunizasiya dövründən sonra kütləvi qanaxma və ya heyvanın ümumi qanaxması həyata keçirilir. Steril qabda toplanan qan laxtalanmağı sürətləndirmək üçün əvvəlcə 37°C temperaturda termostata 4 - 6 saat, sonra isə bir sutka ərzində buz qutusuna qoyulur. Yaranan şəffaf zərdab steril qaba sorulur, konservantlar əlavə edilir, anticisim titri təyin edilir, sterilliyi yoxlanılır və ampulalara tökülür.

İstifadə olunur adsorbsiya olunmayan Və adsorbsiya edilmişdir diaqnostik serum. Adsorbsiya olunmayan serumlar yüksək antikor titrlərinə malikdir, lakin qrup (çarpaz) reaksiyalar verməyə qadirdir.

Adsorbsiya edilmiş zərdablar hərəkətin ciddi spesifikliyi ilə xarakterizə olunur (yalnız homoloji antigenlə reaksiya verirlər). Yalnız bir spesifik antigenə qarşı antikorları ehtiva edən sera adlanır monoreseptor.

Onlar həmçinin flüoroxromlar, fermentlər və radioizotoplarla etiketlənmiş zərdablar istehsal edirlər ki, bu da antigenin hətta izlərini yüksək dəqiqliklə aşkar etməyə imkan verir.

Seroloji reaksiyalarda antigen (diaqnostikum) kimi canlı və ya öldürülmüş bakteriyaların süspansiyonları, onların parçalanma məhsulları, toksinləri və virusları istifadə olunur. Bəzi hallarda mikroorqanizmlərdən və heyvan toxumalarından ekstraktlar və ya kimyəvi cəhətdən təcrid olunmuş antigenlər istifadə olunur.

Bütün immunomikrobioloji üsulları 3 qrupa bölmək olar:

1) əsasında antigenin antikorla birbaşa qarşılıqlı təsiri(aqqlütinasiya, çökmə, hemaqlütinasiya, immobilizasiya və s. hadisələri);

2) əsasında antigenin antikor ilə qarşılıqlı əlaqəsi(dolayı hemaqlütinasiya, laxtalanma, lateks aglütinasiya, karbon aqlomerasiyası, bentonit aqqlütinasiyası, komplementin fiksasiyası və s. reaksiyaları);

3) istifadə etiketli antikorlar və ya antigenlər(flüoresan antikor üsulu, fermentlə əlaqəli immunosorbent və radioimmunoanalizlər və digər üsullar).

AGLUTİNASİYA REAKSİYASI

Bu reaksiyalar antikorlar və çöküntü ilə bir-birinə yapışdırılan hissəciklər (mikrob hüceyrələri, qırmızı qan hüceyrələri və digər korpuskulyar antigenlər) şəklində antigenləri əhatə edir.

Aqqlütinasiya reaksiyasını yerinə yetirmək üçün(RA) üç komponent lazımdır: 1) antigen (aqqlütinogen);

2) antikor (aqqlütinin)

3) elektrolit (izotonik natrium xlorid məhlulu).

Təxmini aglütinasiya reaksiyası (RA)

Göstərici və ya boşqab, RA otaq temperaturunda bir şüşə slaydın üzərinə qoyulur. Bunun üçün Pasteur pipetkasından istifadə edərək 1:10-1:20 nisbətində seyreltilmiş bir damcı serum və ayrıca stəkana izotonik natrium xlorid məhlulunun nəzarət damcısı tətbiq edin. Koloniyalar və ya gündəlik bakteriya mədəniyyəti (bir damcı diaqnostikum) hər iki bakterioloji döngəyə daxil edilir və hərtərəfli qarışdırılır. Reaksiyalar bir neçə dəqiqədən sonra vizual olaraq nəzərə alınır, bəzən böyüdücü şüşə (x5) istifadə olunur. Müsbət RA ilə, zərdab damlasında böyük və kiçik lopaların görünüşü qeyd olunur, mənfi RA ilə serum vahid buludlu qalır;

Ətraflı aglütinasiya reaksiyası xəstədə spesifik antikorların titrini müəyyən etmək üçün.

Serodiaqnoz üçün tam partladılmış RA xəstələrin serumunda aparılır. O, həmçinin izotonik natrium xlorid məhlulunda 1:50 - 1:100-dən 1:800 və ya 1:1600 nisbətində seyreltilir, çünki aşağı zərdab titrləri sağlam insanlarda və ya başqa bir diaqnozu olan xəstələrdə (diaqnostik titr) olan normal aglutininləri ehtiva edə bilər. Bu reaksiyada bir antigen kimi diaqnostikumlar istifadə olunur - məlum süspansiyonlar, adətən öldürülmüş bakteriyalar.

1 ml izotonik natrium xlorid məhlulu əvvəlcə aglütinasiya borularına tökülür. Bunlardan birincisinə 1:100 nisbətində seyreltilmiş 1 ml zərdab əlavə edilir və qarışdırıldıqdan sonra 1 ml ikinciyə, ikincidən üçüncüyə və s. 1 ml-də 3 milyard mikrob bədəni olan bakterial suspenziyadan 1-2 damcı zərdabın ikiqat qatılmalarına (1:100-dən 1:1600 və ya daha çox) əlavə edilir. Borular silkələnir və 37°C-də 2 saat termostata yerləşdirilir, sonra otaq temperaturunda 24 saat saxlanılır.

Təfərrüatlı aglütinasiya reaksiyası hər bir sınaq borusunu ardıcıl olaraq, nəzarət borularından başlayaraq yumşaq silkələməklə qiymətləndirməklə nəzərə alınır. Nəzarət borularında aglütinasiya olmamalıdır. Aqqlütinasiya reaksiyasının intensivliyi aşağıdakı əlamətlərlə qeyd olunur: ++++ - tam aglütinasiya (mütləq şəffaf mayedə aglütinat lopaları); +++ - natamam aglütinasiya (bir az opalescent mayedə lopa); ++ - qismən aglütinasiya (lopalar aydın görünür, maye bir qədər buludludur); + - zəif, şübhəli aglütinasiya - maye çox buludlu, içindəki lopa zəif fərqlənir; - - aglütinasiyanın olmaması (maye vahid buludlu olur).

Serum titri onun son qatılaşdırılması kimi qəbul edilir, burada aglütinasiya intensivliyi ən azı iki müsbət (++) kimi qiymətləndirilir.

Aqlütinasiya reaksiyası (latdan. aglütinasiya- yapışdırmaq) - elektrolitlərin iştirakı ilə cisimciklərin (bakteriyaların, qırmızı qan hüceyrələrinin və s.) antitellərlə yapışdırılması.

Aqlütinasiya reaksiyası antikorlarla “bir-birinə yapışdırılmış” cisimciklərdən (məsələn, bakteriyalardan) ibarət lopa və ya çöküntü şəklində özünü göstərir (şək. 7.37). Aqqlütinasiya reaksiyası aşağıdakılar üçün istifadə olunur: xəstədən təcrid olunmuş patogeni müəyyən etmək; xəstənin qan serumunda antikorların təyini; qan qruplarının təyini.

düyü. 7.37 a, b. ilə aglütinasiya reaksiyasıIgM-antikorlar (a) vəIgG-antikorlar (b)

1. Xəstədən təcrid olunmuş patogenin təyini şüşə üzərində təxmini aglütinasiya reaksiyası (şəkil 7.38). Xəstədən təcrid olunmuş bakteriyaların suspenziyası bir damla aglütinasiya edən seruma əlavə edilir (1:20 seyreltmə). Flokulyant çöküntü əmələ gəlir.

düyü. 7.38.

Xəstədən təcrid olunmuş patogen ilə geniş aglütinasiya reaksiyası (Şəkil 7.39). Xəstədən təcrid olunmuş bakteriyaların süspansiyonu aglütinasiya edən serumun seyreltmələrinə əlavə edilir.

düyü. 52

2. Xəstənin qan zərdabında anticisimlərin təyini
Xəstənin qan serumu ilə ətraflı aglütinasiya reaksiyası (Şəkil 7.39). Diagnosticum xəstənin serumunun seyreltilməsinə əlavə edilir.
- O-diagnosticum ilə aglütinasiya (istilikdən ölən, O-antigeni saxlayan bakteriyalar) xırda dənəli aglütinasiya şəklində baş verir.
- H-diagnosticum ilə aglutinasiya (formaldehid tərəfindən öldürülən, flagellar H-antigenini saxlayan bakteriyalar) böyükdür və daha sürətli baş verir.
3. Qan qruplarının təyini üçün aglütinasiya reaksiyası Qan qruplarını təyin etmək üçün aqlütinasiya reaksiyası A (I), B (III) qan qrupu antigenlərinə qarşı immun serum anticisimləri ilə eritrositlərin aglütinasiyasından istifadə edərək ABO sistemini qurmaq üçün istifadə olunur (Cədvəl b). Nəzarət belədir: tərkibində antikor olmayan serum, yəni. serum AB (IV) qan qrupu; A (II), B (III) qruplarının qırmızı qan hüceyrələrində olan antigenlər. Mənfi nəzarətdə antigenlər yoxdur, yəni O (I) qrupu eritrositləri istifadə olunur.

Cədvəl 7.6. ABO qan qruplarının təyini

Reaksiya nəticələri		Qrup
		aid
		tədqiq edilmişdir qan
qırmızı qan hüceyrələri ilə	serum (plazma)
standart	standartla
serumlar

mikrobiologiyada

"Aqqlütinasiya reaksiyası və onun növləri (RA)"

Plan:

1. Giriş………………………………………………………………………………..3

2. Şüşə üzərində RA……………………………………………………………………….4

3. Sınaq borusu RA…………………………………………………………………………………….5

4. İstifadə olunmuş ədəbiyyat……………………………………………………………..7

1. Giriş.

Mikrob antigeninin və antikorların qarşılıqlı təsiri təbiətdə ciddi şəkildə spesifikdir və heyvan orqanizmində patogenin və onun toksinlərinin zərərsizləşdirilməsinə yönəldilmişdir. Antigen və antikorların in vitro qarşılıqlı təsiri, müəyyən şərtlər altında, praktiki məqsədlər üçün seroloji (latın zərdabından) adlanan AG-AT reaksiyalarından istifadə etməyə imkan verən görünən hadisələrlə (aglütinasiya, çökmə, immun lizis) müşayiət olunur. Biofabrikalar məlum spesifik xarakterli (diaqnostik) antigenlər və immun sera (antikorlar) istehsal edir. Seroloji reaksiyalarda belə zərdablardan istifadə etməklə naməlum mikroorqanizmi müəyyən etmək və ya məlum antigendən istifadə etməklə patogenin daxil olmasına cavab olaraq orqanizmdə sintez olunan anticisimləri aşkar etmək və bununla da diaqnoz qoymaq (seroloji diaqnostika) mümkündür. Bundan əlavə, seroloji reaksiyalar peyvənddən və ya yoluxucu xəstəlikdən sonra immunitet reaksiyasının intensivliyini qiymətləndirmək üçün istifadə edilə bilər.

Dolayı aglütinasiya və Kumbs kimi aglütinasiya reaksiyaları korpuskulyar antigenlərin antikorlarla in vitro qarşılıqlı əlaqəsinə və yaranan komplekslərin çökmə qabiliyyətinə əsaslanır. Korpuskulyar antigenlər kimi mikroorqanizmlərdən çıxarılan və daşıyıcı cisimciklərdə sorbsiya edilən bakterial hüceyrələr və ya həll olunan antigenlər: qırmızı qan hüceyrələri, lateks hissəcikləri və s.

Korpuskulyar antigenlərin antigen determinantları xüsusi olaraq homoloji antikorlarla (reaksiyanın spesifik, görünməz mərhələsi) qarşılıqlı əlaqədə olur və sonra antigen-antikor kompleksləri çılpaq gözlə görünən böyük konqlomeratlar əmələ gətirir və çökdürür - agglutinate (reaksiyanın qeyri-spesifik, görünən mərhələsi). ). Mikrobların flagellatsız formaları (Brucellae) dənəvər aqlyutinantlar əmələ gətirir, bayraqlı formalar (Escherichia, Salmonella) isə ters çevrilmiş çətir şəklində sınaq borusunun dibinə çökən və çalxalananda asanlıqla qırılan iri pambıqlı aqqlutinantlar əmələ gətirir. Antigenlər və antikorlar yalnız elektrolitin (0,8% natrium xlorid məhlulu) iştirakı ilə qarşılıqlı təsir göstərir. Reaksiyanın gedişinə elektrolitdəki duz konsentrasiyası, süspansiyondakı mikrob hüceyrələrinin sayı, serum konsentrasiyası, pH, temperatur və digər amillər təsir göstərir.

Aqqlütinasiya reaksiyası (ra).

Antigenin qarşılıqlı təsirinə əsaslanan xüsusi aglütinasiya var ilə homoloji antikor , bu antigenin daxil olduğu heyvanın bədənində olan (immunoaglütinasiya); qeyri-spesifik (kimyəvi), ətraf mühitin pH dəyişməsi, elektrolitlərin konsentrasiyası nəticəsində yaranır; spontan, bakteriyaların (R şəklində) fizioloji məhlulda dayandırılması və qızdırılması zamanı müşahidə olunur ki, bu da bakteriya hüceyrəsinin kolloid vəziyyətinin dəyişməsi ilə əlaqələndirilir. Antigen , RA-da iştirak edən aqqlütinogen, antikora aqqlütinin və yaranan çöküntü aglütinat adlanır. Aqqlütinat əmələ gəldikdə, antigen və antikorların kəmiyyət nisbəti vacibdir (optimum fenomen). Antikorların artıqlığı və ya çatışmazlığı ilə gecikmə baş verir.

Aqqlütinasiya reaksiyası (RA) mikrobioloji praktikada istifadə edilən ilk immunoloji reaksiyalardan biridir. İlk dəfə (1895) F.Vidal tif xəstəliyinə diaqnoz qoymaq üçün RA-dan istifadə etmişdir. Daha sonra (1897) A. Rayt insanlarda brusellyoz diaqnozu qoymaq üçün eyni reaksiyadan istifadə etdi. RA həmçinin toyuqlarda pullorozun diaqnostikasında, leptospirozda, mareslərin infeksion abortunda, həmçinin məlum aglütinasiya zərdabından istifadə edərək naməlum mikrob kulturalarının yazılmasında tətbiq tapmışdır. RA yüksək həssasdır; 1 ml-də 0,01 μg antikor protein azotunu aşkar etmək üçün istifadə edilə bilər.

Aqqlütinasiya reaksiyasının metodoloji icrası və tədqiqatın məqsədi ilə fərqlənən bir neçə variantı hazırlanmışdır.

2. Şüşə üzərində Ra.

RA-nın bu variantında test subyektləri ya serum, ya da antigen ola bilər, lakin əksər hallarda bu seçim mikroorqanizmləri müəyyən etmək üçün istifadə olunur.

1. Mikroorqanizmi (m/o) identifikasiya etmək üçün yağsız şüşə slaydın üzərinə bir damcı məlum aglütinasiya zərdabından, məsələn, Salmonella zərdabından və bir damcı fizioloji məhlul (nəzarət) ayrı-ayrılıqda vurulur. Daha sonra bakterioloji ilmədən istifadə etməklə tədqiq olunan kulturanın bakterial kütləsi Petri qabındakı koloniyadan və ya maili MPA-nın səthindən sınaq borusunda götürülür və homojen suspenziya yaranana qədər immun zərdabda və fizioloji məhlulda ayrıca asılır. əldə edilmişdir. Nəticə 2...4 dəqiqədən sonra nəzərə alınır.

Nəticələrin uçotu: nəzarət nümunəsində heç bir dəyişiklik olmamalıdır. Əgər bakterial kultura xüsusi olaraq immun zərdabına uyğun gələrsə, aglutinat lopaları əmələ gəlir (aqqlütinasiya fenomeni olmadıqda müsbət nəticə), tədqiq olunan bakterial mədəniyyətin immun zərdabına uyğun olmadığı qənaətinə gəlinir.

2. Brusellyozun serodiaqnozunda istifadə edilən qızılgül benqal testinin nümunəsindən istifadə edərək, test qan zərdabında anittellərin aşkar edilməsini nəzərdən keçirək. Şüşə slaydın üzərinə 0,3 ml sınaqdan keçirilmiş heyvan qan zərdabından və 0,03 ml brusellyoz antigeni (qızıl-Benqal boyalı Brusella hüceyrələri) vurulur. Komponentlər stəkanı silkələməklə yaxşıca qarışdırılır və nəticə 4 dəqiqədən sonra nəzərə alınır.

Nəticələrin qeydi: reaksiya müsbət olarsa, çəhrayı aglutinat lopaları görünür. Bu tip seroloji reaksiya keyfiyyət kimi təsnif edilir, çünki heyvanın qan zərdabında patogenə qarşı antikorları aşkar etmək üçün istifadə edilə bilər, lakin onların kəmiyyət tərkibini qiymətləndirmək mümkün deyil.

Aqlütinasiya reaksiyası.

Aqqlütinasiya reaksiyası elektrolitin iştirakı ilə antikorların təsiri altında mikrob və ya digər hüceyrələrin (eritrositlərin) yapışması və çökməsidir. Reaksiyanın görünən təsiri (aqqlütinasiya fenomeni) aglütinat adlanan çöküntünün əmələ gəlməsidir.

Bu reaksiya üçün istifadə olunur serodiaqnoz Və seroidifikasiya. RA serodiaqnoz (xəstələrin qan serumunda anticisimlərin aşkarlanması) üçün istifadə olunur. tifo və paratif(Vidal reaksiya), brusellyoz(Raytın reaksiyası) tulyaremiya və leptospiroz. RA zamanı seroididentifikasiya (xəstədən təcrid olunmuş patogenin növünü təyin etmək) üçün istifadə olunur bağırsaq infeksiyaları, göy öskürək, xolera və s.

Komponentlərreaksiyalar:

1. A ntigen (aqqlütinogen) - bunlar tam (məhv edilməmiş) mikrob və ya digər hüceyrələrdir ( korpuskulyar, həll olunmayan antigen). Aqlütinogenlər- bu dayandırmadır diri və ya öldürüldü mikrob hüceyrələri və ya hər hansı digər hüceyrələr. Antigenlər naməlum və ya məlum ola bilər. Naməlum aqqlütinogen müəyyən edilməli olan xəstənin bədənindən təcrid olunmuş mikrob mədəniyyətidir. Məlum antigen - diaqnostik- diaqnostik dərman; ölülərin dayandırılması mikroblar məlum növlər salin məhlulunda. Bu dayandırma buludlu (şəffaf), çünki mikrob hüceyrələri həll olunmur, lakin toxunulmaz qalır. Xəstələrin qan zərdabında naməlum anticisimləri aşkar etmək üçün məlum aqqlütinogendən istifadə ediləcək.

2. Antikor (aqqlütinin)- qan serumunda aşkar edilir. Antikorlar da bilinməyən və ya bilinən ola bilər. Müəyyən edilməli olan naməlum antikorlar qan serumundadır xəstə insan. Məlum antikorlar tapılır immun diaqnostik sera adlanır aglütinasiya edən sera. Onlar sero-identifikasiya üçün istifadə olunur, yəni. naməlum antigeni müəyyən etmək - mikrob mədəniyyətinin bir növü.

3. Elektrolit- 0,9% natrium xlorid məhlulu.

RA-nın təyini üsulları.

1. Təxmini (lamelli) RA- şüşə üzərində aparılır. Şüşə slaydın üzərinə 2 damcı serum və 1 damcı izotonik məhlul tətbiq edin. Mikrob kulturası zərdab damcılarından birinə və bir damcı izotonik məhlulun içinə halqa şəklində daxil edilir və qarışdırılır. Bir damla izotonik məhlul mikroblarla – antigen nəzarəti, damcı mikrobsuz serumlar – antikor nəzarəti, damcı mikrobları olan serumlar – təcrübə.Əgər zərdabda onunla qarışan mikrob antigenlərinə uyğun anticisimlər varsa, o zaman antikorlar və antigenlər xüsusi olaraq bir-birinə bağlanacaq və 1-3 dəqiqədən sonra test damlasında aglütinat lopaları görünəcək. Antigen nəzarəti bulanıq olmalıdır və antikor nəzarəti aydın olmalıdır. Reaksiya nəticələri aglutinat lopalarının görünüşünə əsasən qeyd olunur . Lopa tökülürsə, reaksiya müsbətdir, yəni. Bir antigen bir antikora uyğundur və antigen antikoru müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər və ya əksinə. Buludluluq qalırsa, reaksiya mənfi olur.

2. Ətraflı aglütinasiya reaksiyası - sınaq borularında aparılır. Əvvəlcə xəstə bir insanın qan zərdabından 1:50-dən 1:1600-ə qədər 2 qat seyreltmə hazırlayın. 6 sınaq borusuna 1 ml izotonik natrium xlorid məhlulu tökülür. 1 ml xəstənin qan zərdabından 1:50 nisbətində seyreltilmiş birinci sınaq borusuna əlavə edilir, qarışdırılır və 1:100 nisbətində seyreltmə alınır, sonra 1 ml 1:100 nisbətində seyreltilmiş ikinci sınaq borusuna köçürülür. və 1:200 nisbətində seyreltmə alınır və s. Antigen və serum nəzarəti üçün iki boru saxlanılır. Serum nəzarətinə yalnız 1:50 seyreltmə ilə serum, antigen nəzarətinə - yalnız antigen əlavə edin. Bütün digər sınaq borularına 0,1 ml antigen - diagnosticum (O- və ya H-) əlavə edin və bütün sınaq borularını 18-20 saat ərzində 37°C temperaturda termostata qoyun. Reaksiya nəticələri təbiətinə, əmələ gələn çöküntünün (aqqlütinatın) miqdarına və bulanıqlıq dərəcəsinə görə qeydə alınır. Mühasibat uçotu yalnız nəzarətdə aşağıdakı nəticələrlə aparılır: serum nəzarəti - şəffaf, antigen nəzarəti - buludlu. O-antikorları incə dənəli çöküntü verir. H-antikorları - qaba dənəli. Aqqlütinasiya reaksiyasının hələ də göründüyü son sınaq borusu əsasında qurulur diaqnostik titr.

Xəstəliklərin serodiaqnozu zamanı yalnız müəyyən bir patogenə xüsusi antikorları aşkar etmək deyil, həm də onların miqdarını müəyyən etmək vacibdir, yəni. antikor titrini təyin edin ki, bu patogenin yaratdığı bir xəstəliyin olması haqqında danışaq. Bu titrə diaqnostik titr deyilir. Məsələn, tif xəstəliyinə diaqnoz qoymaq üçün 1:400 antikor titrini təyin etməlisiniz, lakin az deyil. Cütləşmiş zərdablarda antikorların artması aşkar edilərək daha dəqiq nəticələr əldə edilir. Xəstənin serumu xəstəliyin başlanğıcında və 3-5 və ya daha çox gündən sonra toplanır. Antikor titri ən azı 4 dəfə artarsa, deməli, indiki xəstəlikdən danışa bilərik.