დეტალური აგლუტინაციის რეაქცია (RA). მიახლოებითი აგლუტინაციის რეაქცია (RA). პირდაპირი ჰემაგლუტინაციის რეაქციები. ჰემაგლუტინაციის რეაქცია არის არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის რეაქცია.

არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის რეაქცია (IRHA)

სორბირებული სადიაგნოსტიკო საშუალებების გამოყენება ეფუძნება ზედაპირული სტრუქტურების იმუნოლოგიური ამოცნობის პრინციპს, რომელიც მუდმივად რეალიზდება ბუნებაში. ამ თვალსაზრისით, არ არსებობს ფუნდამენტური განსხვავებები, მაგალითად, მიკრობული უჯრედის ან ანტიგენით დატვირთული ხელოვნური მატარებლის (ანტისხეულების) გამოყენებას შორის. სორბირებული პრეპარატების საფუძვლად გამოიყენება სხვადასხვა მატარებლები - მიკრობული უჯრედები, ერითროციტები, ლატექსი, ბენტონინი, ქოლესტერინი, სეფადექსი, დერმატოლი, გააქტიურებული ნახშირბადი, სოკოს სპორები და ა.შ.

A.T. Kravchenko-ს (1945) მუშაობის შემდეგ, სიცოცხლისუნარიანობას მოკლებული და სხვადასხვა ქიმიური რეაგენტებით დაფიქსირებული ერითროციტები ყველაზე ფართოდ გავრცელდა, როგორც ანტიგენების ან ანტისხეულების მატარებელი. ერითროციტების (როგორც ბუნებრივი, ასევე ფიქსირებული) ანტიგენის გადამტანად გამოყენების პრინციპიდან გამომდინარე, ფართოდ გავრცელდა არაპირდაპირი (პასიური) ჰემაგლუტინაციის რეაქცია.

არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის რეაქციის (IRHA) გამოყენების წინადადება დიაგნოსტიკური მიზნებისთვის წარმოიშვა ადრე განვითარებული ცოდნის საფუძველზე ერითროციტების მაღალი სორბციული აქტივობის შესახებ. ანტიგენებისა და ანტისხეულების ბევრ სხვა მატარებელთან შედარებით, ერითროციტებს აქვთ გარკვეული უპირატესობები არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის რეაქციაში. პირველ რიგში, იზოტონურ ფიზიოლოგიურ ხსნარებში ისინი ქმნიან საკმაოდ სტაბილურ ადჰეზიას და არ წყდებიან მოკლე დროში. მეორეც, ერთი და იგივე ცხოველური სახეობის სისხლის წითელი უჯრედები ზომით იგივეა. და ბოლოს, ერითროციტებისთვის შედარებით მარტივია სხვადასხვა სეროლოგიურად აქტიური კომპონენტის პირდაპირ ან სპეციალური დამუშავების შედეგად მიმაგრება.

სტაბილიზირებული ერითროციტებიდან ერითროციტების დიაგნოსტიკის შექმნა შესაძლებელს ხდის იმ სირთულეების დაძლევას, რომლებიც წარმოიქმნება ადგილობრივი ერითროციტების გამოყენებისას.

სხვადასხვა დამამაგრებელი ნივთიერებებით დამუშავებული ერითროციტების შესწავლისას დადგინდა მათი ზოგიერთი საერთო თვისება:

მორფოლოგიის თვალსაზრისით ისინი პრაქტიკულად არ განსხვავდებიან ახალისგან;

არ მოხდეს ჰემოლიზება ჰიპოტონურ ხსნარებში, წყალში და გაყინვა-დნობის შემდეგ;

შესაძლებელია ყინვაში გაშრობა;

მათი ზედაპირის სტრუქტურა ინარჩუნებს ქიმიურად მოდიფიცირების უნარს (მაგალითად, ტანინი, დიაზო ნაერთები) და რეაგირებს ანტიგენებთან და ანტისხეულებთან.

ფიქსირებული ერითროციტების ხარისხის მთავარი კრიტერიუმია მათი გამოყენების შესაძლებლობა სენსიბილიზებული წამლების მისაღებად სტაბილიზაციის სითხეებში არასპეციფიკური წებოვნების არარსებობის შემთხვევაში.

ერითროციტების ზედაპირის მომზადება ანტიგენების სორბციის უნარის გაზრდის მიზნით მნიშვნელოვანია დიაგნოსტიკური პრეპარატების დიზაინში. განსაკუთრებით ფართოდ გავრცელდა სისხლის წითელი უჯრედების ტანინებით მკურნალობა.

მისი გავლენით იცვლება ერითროციტების ანტიგენური თვისებები (გამტარობა, დალექვის სიჩქარე) და იზრდება მათი წინააღმდეგობა გარკვეული ცხიმოვანი მჟავების ჰემოლიზური ზემოქმედების მიმართ. თუმცა, მთავარი მიღწეულია - ტანიზებულ ერითროციტებს აქვთ ცილების მნიშვნელოვნად მეტი შთანთქმის უნარი, რაც ამჟამად ფართოდ გამოიყენება მაღალი ხარისხის ანტიგენისა და ანტისხეულების დიაგნოსტიკის წარმოებაში.

მთრიმლავ ერითროციტებთან ერთად, ქიმიური რეაგენტები, როგორიცაა ბრომელინი, ტრიოფსინი, კალიუმის პერიოდატი, რომლებიც ასევე ცვლის ერითროციტების მემბრანებს, გამოიყენება ერითროციტების დიაგნოსტიკის შესაქმნელად და ანტიგენის მატარებლების მოსამზადებლად.

ერითროციტების ზედაპირის მომზადების შემდეგ ხდება ყველაზე მნიშვნელოვანი პროცესი - ჰემოსენსიბილიზაციის პროცესი - ერითროციტების დიაგნოსტიკის წარმოების საბოლოო ეტაპი.

მატარებელსა და ანტიგენს შორის კავშირის გასაძლიერებლად გამოიყენება სხვადასხვა კონიუგაციური ნივთიერებები - ბისდიაზობენზიდინი, დიფტოროდინიტრობენზინი, ციანოგენის ქლორიდი, კადმიუმის ქლორიდი და აცეტატი, ბრომის ქლორიდი, ფორმალდეჰიდი, გლუტარალდეჰიდი, ციანოგენ ბრომიდი, რივანოლი და ა.შ.

კონიუგირებული ნივთიერებების გამოყენება ხელს უწყობს იმ მინუსების აღმოფხვრას, რაც აქვთ ტანიზებულ ერითროციტებს, რომლებიც გამოიყენება სენსიბილიზაციისთვის ნივთიერებების კონიუგაციის გარეშე.

ყველაზე ფართოდ გამოყენებული კონიუგირებული ნივთიერებებია ქრომის ქლორიდი, გლუტარალდეჰიდი, შავი დიაზოლი C და ამიდოლი. ქრომის ქლორიდით სენსიბილიზაციის პროცესი ძალიან სწრაფად ხდება - 4-დან 10 წუთამდე, რაც მკვლევართა ყურადღებას იპყრობს. ამ შემთხვევაში გამოიყენება ქრომის ქლორიდის კონცენტრაციები 0,05-დან 2%-მდე, pH არ არის 5,0-ზე დაბალი რეაქციული ნარევის ტემპერატურაზე 20-250 C. ქრომის ქლორიდით სენსიბილიზაციის პროცესში აქტიურდება ერითროციტების მემბრანის ცილების კარბოქსილის ჯგუფები. . შედეგად, კოვალენტური ბმა იქმნება სისხლის წითელი უჯრედების მემბრანასა და სენსიტინს შორის.

არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის რეაქცია უაღრესად სპეციფიკურია, ვინაიდან ერითროციტების ადჰეზია ხდება ანტიგენის ურთიერთქმედების შედეგად ერითროციტებზე შეწოვილ ანტისხეულებთან. მისი გამორჩეული თვისებაა მაღალი მგრძნობელობა: აღმოაჩენს 0,02-0,05 მკგ ანტისხეულის პროტეინს. მგრძნობელობის თვალსაზრისით ის მნიშვნელოვნად აღემატება იმუნოდიფუზიის, იმუნოფლუორესცენციის, რადიალური იმუნოდიფუზიის, კომპლემენტის ფიქსაციისა და ნეიტრალიზაციის რეაქციებს. RNGA ნაკლებად მგრძნობიარეა, ვიდრე რადიოიმუნოელექტროფორეზის მეთოდები, რადიოაქტიური ანტისხეულების ცილის რაოდენობის განსაზღვრა იმუნოსორბენტში და ფერმენტული იმუნოანალიზი.

RNGA-ს უპირატესობებში შედის საკმაოდ მაღალი რეპროდუცირება, განხორციელების სიმარტივე და ინგრედიენტების მინიმალური რაოდენობის საჭიროება, განსაკუთრებით მიკრომეთოდის გამოყენებისას.

ბოლო წლების განმავლობაში, RNGA-მ ფართო გამოყენება ჰპოვა ინფექციური რინოტრაქეიტის, დიარეის, ადენოვირუსული ინფექციის, როტა და კოროვირუსული ინფექციების, პარაგრიპის 3 და რესპირატორული სინციციალური ინფექციის დიაგნოსტიკაში.

ჩვენ ვაძლევთ მაგალითს ერითროციტების დიაგნოსტიკის წარმოებისა და გამოყენების შესახებ როტა და კოროვირუსული ინფექციების მიმართ ანტისხეულების გამოსავლენად.

RNGA-ში როტა და კოროვირუსული ანტიგენების იდენტიფიცირებისთვის ანტისხეულების დიაგნოსტიკის მომზადების მეთოდი შემდეგია: ერითროციტების სუსპენზიის მიღება; მათი აკროლეინების ფიქსაცია; ტანიზაცია, რომელიც საშუალებას იძლევა მიიღოთ საჭირო ცილის სტაბილური სორბცია სისხლის წითელ უჯრედებზე; ტანიზებული ერითროციტების სენსიბილიზაცია იმუნოგლობულინებით; მომზადებული დიაგნოსტიკის სპეციფიკის განსაზღვრა. ერითროციტების სუსპენზიის მომზადება ხორციელდება კლინიკურად ჯანმრთელი ცხვრის სისხლის შეგროვებით კოლბაში მინის მძივებით. სისხლის დეფიბრინაციის შემდეგ სისხლის წითელი უჯრედები 3-5-ჯერ უნდა გაირეცხოს იზოტონური (0,9%) ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარით ცენტრიფუგირებით 15-20 წუთის განმავლობაში 400გრ-ზე.

სისხლის წითელი უჯრედების სტაბილიზაციის მიზნით, მათ მკურნალობენ აკროლეინით. როგორც ცნობილია, მისი ეფექტი გარკვეულწილად უფრო რბილია, ვიდრე ფორმალდეჰიდი და უზრუნველყოფს სისხლის წითელი უჯრედების სტაბილურობას და მაღალ აქტივობას. ამისათვის, ერითროციტების 10%-იანი სუსპენზიის თანაბარი მოცულობები ურევენ აკროლეინის 0.2%-იან ხსნარს, რომელიც მომზადებულია ფოსფატის ბუფერულ ხსნარში (PBS) pH 7.2. მიღებული სუსპენზია ინახება 30 წუთის განმავლობაში 37°C ტემპერატურაზე, საფუძვლიანად აურიეთ, რასაც მოჰყვება აკროლეინის მოცილება განმეორებითი ცენტრიფუგირებით 5 წუთის განმავლობაში 600-800 გ-ზე, სანამ სპეციფიკური სუნი მთლიანად არ გაქრება. ამ გზით მომზადებული სისხლის წითელი უჯრედების უპირატესობა ის არის, რომ ისინი ინახება შემდგომი გამოყენებისთვის და შეიძლება დიდხანს ინახებოდეს ჰემოლიზის გარეშე.

შემდგომში, სტაბილიზირებული სისხლის წითელი უჯრედები 10%-იანი კონცენტრაციით ინახება 2-4°C-ზე PBS-ში 7,2 pH-ით ორი თვის განმავლობაში.

სისხლის წითელი უჯრედების სორბციის უნარისა და დანალექის გასაზრდელად აუცილებელია მათი ტანზება გარეცხილი სისხლის წითელი უჯრედების 10%-იანი სუსპენზიისა და ტანინის ხსნარის PBS-ში და pH 7.2-ში 1:30000 განზავებით თანაბარი ნაწილების შერევით. ნარევს კარგად ურევენ და 15 წუთის განმავლობაში აჩერებენ 370 C ტემპერატურაზე, რის შემდეგაც სისხლის წითელი უჯრედები კარგად ირეცხება ტანინიდან ორჯერ PBS-ში 7,2 pH-ით და სამჯერ ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარით 7,2-7,4 pH-ით.

მაღალი ხარისხის ერითროციტების დიაგნოსტიკის მიღების გარანტიის ოპტიმალური პერიოდია მათი სენსიბილიზაცია ტანინებით დამუშავებიდან 24-48 საათში.

დიაგნოსტიკის წარმოების პროცესში, გამხსნელად და კონსერვანტად გამოიყენება 0,3% ფენოლიზებული ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარი 0,1% ნორმალური კურდღლის ან ცხენის შრატით, ადრე ინაქტივირებული 56°C ტემპერატურაზე 30 წუთის განმავლობაში და ადსორბირებული ცხვრის ნორმალური ერითროციტებით. 37°C. 30 წუთის განმავლობაში.

ტანიზებული ერითროციტების სენსიბილიზაცია უნდა განხორციელდეს ჰიპერიმუნური შრატით, შესაბამისად, როტა და მსხვილფეხა რქოსანი კოროვირუსების საწინააღმდეგოდ (წარმოებულია ი.რ. კოვალენკოს სახელობის ექსპერიმენტული ვეტერინარული მედიცინის სრულიად რუსეთის კვლევით ინსტიტუტში). ამ შემთხვევაში, ანტი-როტავირუსის იმუნური შრატის სენსიბილიზებელი დოზა (ცილის კონცენტრაცია) არის 280 მკგ/მლ, ხოლო იმუნური შრატის კოროვირუსის მიმართ არის 260 მკგ/მლ.

სენსიბილიზაცია ხორციელდება გარუჯული ერითროციტების და იმუნური შრატის თანაბარი მოცულობის შერევით, რომელიც წინასწარ გახურებულია 30 წუთის განმავლობაში 560C ტემპერატურაზე ოპტიმალურ კონცენტრაციაში. გარდა ამისა, დაამატეთ ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარის 3 ნაწილი pH 7,2 და 5 ნაწილი 0,1% ქრომის ქლორიდის ხსნარი. ნარევი, დროდადრო აურიეთ, ინახება ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში. განსაზღვრული დროის გასვლის შემდეგ, ნარევი კარგად ირეცხება PBS-ის გამოყენებით pH 7.2, შემდეგ კი მომზადებული ერითროციტების დიაგნოსტიკა ხელახლა ჩერდება კონსერვანტში 1% კონცენტრაციამდე. მომზადებული დიაგნოსტიკა ინარჩუნებს თავის ძირითად თვისებებს 8 თვის განმავლობაში, იმ პირობით, რომ ის ინახება 4°C ტემპერატურაზე.

დიაგნოსტიკური წარმოების ყველა ეტაპზე ხდება თვითაგლუტინაციის მონიტორინგი. მომზადებული დიაგნოსტიკის სპეციფიკა განისაზღვრება RNGA-ს დადგმით, სადაც ანტიგენებად გამოყენებული იყო IRT ვირუსების, AI - 3, ადენოვირუსების, ვირუსული დიარეის სტანდარტული დიაგნოსტიკა, აგრეთვე როტა და კოროვირუსული ანტიგენები.

RNGA-ს ჩატარებისას მზადდება ტესტის ვირუსის შემცველი მასალის თანმიმდევრული ორმაგი განზავება (ფეკალური ნიმუშების 20-50%-იანი სუსპენზია), შემდეგ კი თითოეულ ჭაბურღილს ემატება ერითროციტების სადიაგნოსტიკო სითხის თანაბარი მოცულობა. ფირფიტები რამდენჯერმე უნდა შეანჯღრიოთ საფუძვლიანად და დატოვოთ ოთახის ტემპერატურაზე, სანამ საკონტროლოში ერითროციტები მთლიანად არ დადნება. დადებითი რეაქციის მაჩვენებელია ერითროციტების სადიაგნოსტიკო აგლუტინაცია აგლუტინაციის ინტენსივობით 2+ ტიტრში 1:4 და მეტი.

იგი იყენებს სისხლის წითელ უჯრედებს ან ნეიტრალურ სინთეზურ მასალებს (მაგალითად, ლატექსის ნაწილაკებს), რომელთა ზედაპირზე ანტიგენები (ბაქტერიული, ვირუსული, ქსოვილოვანი) ან ანტისხეულები სორბირებულია. მათი აგლუტინაცია ხდება შესაბამისი შრატების ან ანტიგენების დამატებისას. ანტიგენებით მგრძნობიარე სისხლის წითელ უჯრედებს ეწოდება ანტიგენური ერითროციტების დიაგნოსტიკა და გამოიყენება ანტისხეულების გამოსავლენად და ტიტრირებისთვის. ანტისხეულებით მგრძნობიარე ერითროციტები. ეწოდება იმუნოგლობულინის ერითროციტების დიაგნოსტიკას და გამოიყენება ანტიგენების იდენტიფიცირებისთვის.

პასიური ჰემაგლუტინაციის რეაქცია გამოიყენება ბაქტერიებით (ტიფოიდური და პარატიფოიდური ცხელება, დიზენტერია, ბრუცელოზი, ჭირი, ქოლერა და ა.შ.), პროტოზოები (მალარია) და ვირუსები (გრიპი, ადენოვირუსული ინფექციები, ვირუსული ჰეპატიტი B, წითელა, ტკიპები) გამოწვეული დაავადებების დიაგნოსტიკისთვის. გადატანილი ენცეფალიტი, ყირიმის ჰემორაგიული ცხელება და ა.შ.), ასევე გარკვეული ჰორმონების განსაზღვრა, პაციენტის ჰიპერმგრძნობელობის იდენტიფიცირება წამლებისა და ჰორმონების მიმართ, როგორიცაა პენიცილინი და ინსულინი.

პასიური ჰემაგლუტინაციის რეაქცია (RPHA). პასიური ჰემაგლუტინაციის ტესტი სეროლოგიური დიაგნოსტიკის სენსიტიური მეთოდია და გამოიყენება როგორც ადრეული, ასევე რეტროსპექტული დიაგნოსტიკისთვის, ასევე აცრილი ადამიანების იმუნოპოგიური მდგომარეობის დასადგენად. ტულარემიის მქონე პაციენტებში ანტისხეულები ჩვეულებრივ ვლინდება დაავადების 1-ლი ან მე-2 კვირის ბოლოს; 1-1,5 თვის შემდეგ RPHA ტიტრი აღწევს მაქსიმალურ დონეს (1: 100,000-1: 20,000, ნაკლებად ხშირად უფრო მაღალი), რის შემდეგაც ისინი დაწევა 1:100-1:200 დონემდე ინახება დიდი ხნის განმავლობაში.

ვაქცინირებულ ადამიანებში ანტისხეულებიც მუდმივად ვლინდება, თუმცა უფრო დაბალი ტიტრებით, ვაქცინაციიდან 1-1,5 თვეში არაუმეტეს 1:2000-1:5000 და რჩება რამდენიმე წლის განმავლობაში დაბალ დონეზე 1:20-1:80.

ანტიგენი RPHA-ს დადგმისთვის არის ტულარემია ერითროციტების დიაგნოსტიკა (ანტიგენური). პრეპარატი არის ფორმალინიზებული ცხვრის სისხლის წითელი უჯრედები, მგრძნობიარე ტულარემიის ანტიგენით, ხელმისაწვდომია თხევადი და მშრალი ფორმით. თხევადი პრეპარატი - სისხლის წითელი უჯრედების 10%-იანი სუსპენზია 10%-იანი კონცენტრაციის ფორმალდეჰიდის ხსნარში. მშრალი ლიოფილიზებული პრეპარატი არის სისხლის წითელი უჯრედების ვაკუუმში გამხმარი 10%-იანი სუსპენზია კონსერვანტის გარეშე. გამოყენებამდე იგი განზავებულია ეტიკეტზე მითითებული ინსტრუქციის მიხედვით. პოლისტიროლის ფირფიტებში რეაქციის დასაყენებლად ორივე პრეპარატი გამოიყენება 2,5% კონცენტრაციით, ხოლო რეაქციის მიკრომოცულობებში დაყენებისას - 0,5% კონცენტრაციით.

RPGA-ს დაყენების ტექნიკა. საცდელი შრატები განზავებულია ფიზიოლოგიური ხსნარით 1:5 (1:10) და თბება 56 გრადუს C ტემპერატურაზე 30 წუთის განმავლობაში. ამის შემდეგ, ცხვრის ერითროციტების მიმართ ჰეტეროგენული ანტისხეულების მოსაშორებლად, შრატები მკურნალობენ ცხვრის ფორმალინიზებული ერითროციტების 50%-იანი სუსპენზიით. ამისათვის დაამატეთ სისხლის წითელი უჯრედები 2 წვეთი (0,05 მლ) 1 მლ შრატზე და კარგად შეანჯღრიეთ. შრატი ტოვებენ ერითროციტების სრულ დაბინძურებამდე, ან ცენტრიფუგირდება ოთახის ტემპერატურაზე ერთი საათის შემდეგ, რის შემდეგაც მზადაა გამოკვლევისთვის.

განზავების სითხე 0,5 მლ მოცულობით ასხამენ პოლისტიროლის ფირფიტაზე არსებულ ჭაბურღილების მწკრივში. შრატების წინასწარი შესწავლის დროს მიზანშეწონილია მათი ტესტირება რეაქციის დაყენებით ფირფიტის მოკლე მწკრივში (6 ჭაბურღილი). თუ ანტისხეულები აღმოჩენილია მოკლე სერიით, შრატები ხელახლა გამოკვლეულია განზავების გრძელი სერიით (12 ჭაბურღილი). განზავების სითხის დაღვრის შემდეგ, დაამატეთ 0,5 მლ სატესტო შრატი 1:5 განზავებით ყოველი რიგის პირველ ჭაბურღილში (მოკლე ან გრძელი). შემდეგ შრატის იგივე მოცულობები ტიტრირდება ორმაგი განზავებით. ამრიგად, შრატის განზავება მიიღება მოკლე სერიებში 1:10-დან 1:320-მდე, ხოლო გრძელ სერიებში 1:10-დან 1:20480-მდე. შრატის ტიტრირების შემდეგ თითოეულ ჭაბურღილს ემატება ერთი წვეთი (0,05 მლ) სენსიბილიზებული ერითროციტების მოქმედი 2,5% სუსპენზიის. ფირფიტების შიგთავსი საფუძვლიანად შეირყევა ერთგვაროვანი სუსპენზიის მიღებამდე. ფირფიტები ინახება ოთახის ტემპერატურაზე სტაციონარული მაგიდის ზედაპირზე. რეაქციის წინასწარი ჩაწერა ტარდება 2-3 საათის შემდეგ, ტიტრის საბოლოო განსაზღვრა ხდება ჭაბურღილებში სისხლის წითელი უჯრედების სრული დალექვის შემდეგ. რეაქციისთვის მოწოდებულია შემდეგი კონტროლი: 1) სატესტო შრატი განზავებულია 1:10 0,5 მლ მოცულობით + 1 წვეთი არამგრძნობიარე ერითროციტების 2,5%-იანი სუსპენზიიდან; 2) განზავების სითხე 0,5 მლ მოცულობით + 1 წვეთი 2,5%-იანი სუსპენზიის არამგრძნობიარე ერითროციტების; 3) განზავების სითხე 0,5 მლ მოცულობით + 1 წვეთი სენსიბილიზებული ერითროციტების 2,5%-იანი სუსპენზიის. ყველა საკონტროლო პუნქტმა უნდა მისცეს აშკარად უარყოფითი რეაქცია.

RPGA-ს აღრიცხვა და შეფასება. რეაქცია ფასდება შემდეგი სქემის მიხედვით:

1) მკვეთრად დადებითი რეაქცია (++++) - სისხლის წითელი უჯრედები ეცემა ხვრელის ძირში თანაბარი ფენით „ქოლგის“ სახით, რომელსაც ხშირად აქვს კიდეების დნობა;

2) დადებითი რეაქცია (+++) - სისხლის წითელი უჯრედები ფარავს ჭაბურღილის ფსკერის მინიმუმ 2/3-ს;

3) სუსტად დადებითი რეაქცია (++) - აგლუტინატი მცირეა და მდებარეობს ჭაბურღილის ცენტრში;

4) საეჭვო რეაქცია (+) - ერითროციტების ნალექის ირგვლივ ჭაბურღილის ცენტრში არის აგლუტინატის ცალკეული მარცვლები;

5) უარყოფითი (-) - ხვრელის ბოლოში, სისხლის წითელი უჯრედები წყდება "ღილაკის" ან პატარა რგოლის სახით გლუვი, მკვეთრად გამოხატული კიდეებით.

შრატის ტიტრი მხედველობაში მიიღება შრატის ბოლო განზავების საფუძველზე, რამაც გამოიწვია ძალიან მკაფიო რეაქცია (მინიმუმ სამი პლუსი). 1:100 ან მეტი განზავება განიხილება სადიაგნოსტიკო ტიტრად, თუმცა, ისევე როგორც RA-ს შემთხვევაში, აუცილებელია მისი ზრდის მონიტორინგი.

ტულარემიის RPHA საკმაოდ სპეციფიკურია და ავლენს ზოგიერთ ჯვარედინი რეაქციას მხოლოდ ბრუცელოზის შრატებთან. დიფერენციალური დიაგნოზი შესაძლებელია RPGA-ში ტიტრების სიმაღლით, რომლებიც მნიშვნელოვნად მაღალია ჰომოლოგიური ანტიგენით.

მიკრომოცულობებში RPHA-ს დაყენების ტექნიკა. RPGA შეიძლება შესრულდეს მიკრომოცულობებში ტაკაჩის ტიპის მიკროტიტრატორის (ან მრგვალი ფსკერი მიკროპიპეტებით) გამოყენებით, რაც იძლევა მასალის ტიტრირების საშუალებას 25 μl და 50 μl მოცულობით. რეაქციის ტექნიკა და ყველა ოპერაციის თანმიმდევრობა იგივეა, რაც პოლისტიროლის ფირფიტებში შესწავლისას. თუმცა, გასათვალისწინებელია, რომ მიკრომეთოდის მგრძნობელობა ჩვეულებრივ ერთი განზავების (ანუ 2-ჯერ) დაბალია მაკრომეთოდის მგრძნობელობაზე.

მიკროტიტრატორში რეაქციის დასაყენებლად, საწვეთური პიპეტის გამოყენებით თითოეულ ჭას ემატება განზავების სითხე 50 μl მოცულობით. შემდეგ, 50 μl თავით ტიტრების გამოყენებით, საცდელი შრატი გროვდება მასში თავის ჩაძირვით. დარწმუნდით, რომ სითხემ შეავსო ტიტრატორის თავი. შრატით ტიტრატი გადადის პირველ ჭაბურღილში და ვერტიკალურ მდგომარეობაში დაჭერით, კეთდება რამდენიმე ბრუნვითი მოძრაობა ორივე მიმართულებით. შემდეგ ტიტრატორი გადადის შემდეგ ჭაბურღილში და მანიპულირება მეორდება. ტიტრირება შეიძლება განხორციელდეს ერთდროულად რამდენიმე რიგში. მთელი სერიის ტიტრირების შემდეგ ტიტრატორს რეცხავენ გამოხდილი წყლით (2 ნაწილის შეცვლა) მბრუნავი მოძრაობებით, წყალი ამოღებულია თავიდან ტამპონით და წვავენ ცეცხლმოკიდებულ ცეცხლზე.

ტიტრირების შემდეგ ჭაბურღილებს დაამატეთ 25 მკლ ერითროციტების სადიაგნოსტიკო სითხე. RPHA-ს დიაგნოსტიკის კონცენტრაცია მიკრომოცულობებში უნდა იყოს 0,5% (ანუ სისხლის წითელი უჯრედების 2,5%-იანი სუსპენზია დამატებით განზავებულია 5-ჯერ). სისხლის წითელი უჯრედების დამატების შემდეგ, ფირფიტები ოდნავ უნდა შეირყა, სანამ ერთგვაროვანი სუსპენზია არ მიიღება. შედეგები შეიძლება ჩაიწეროს 1-1,5 საათში, რაც მიკროტიტრში RPGA-ს მნიშვნელოვანი უპირატესობაა. გარდა ამისა, ეს ტექნიკა მოითხოვს მცირე რაოდენობით ყველა რეაქციის ინგრედიენტს და სატესტო შრატს.

რეაქცია მხედველობაში მიიღება შემდეგი სქემის მიხედვით:

1) "+" - სრული ჰემაგლუტინაცია, რომლის დროსაც სისხლის წითელი უჯრედები ხვდება ჭაბურღილის ფსკერზე თანაბარ ფენაში "ქოლგის" სახით, რომელიც იკავებს ფსკერის მინიმუმ 2/3-ს;

2) „+-“ - ნაწილობრივი ჰემაგლუტინაცია, რომლის დროსაც სისხლის წითელი უჯრედები ქვევით ეცემა მცირე ზომის ფხვიერი რგოლის სახით;

3) „-“ – ჰემაგლუტინაციის არარსებობა, როდესაც სისხლის წითელი უჯრედები ქვევით ეცემა პატარა ღილაკის ან გლუვი კიდით რგოლის სახით.

RPHA-ში მიღებული დადებითი შედეგის სპეციფიკა შეიძლება შემოწმდეს სამკომპონენტიანი რეაქციის - პასიური ჰემაგლუტინაციის ინჰიბიციის რეაქციის (PHA) გამოყენებით.

RTPGA-ს დაყენების ტექნიკა. ეს რეაქცია გამოიყენება RPGA დადებითი შედეგის სპეციფიკის დასადასტურებლად, როდესაც ის საეჭვოა ან არის განსაკუთრებული ეპიდემიოლოგიური ინტერესი. რეაქციის მექანიზმი არის ჰემაგლუტინაციის სპეციფიკური დათრგუნვა, როდესაც ტულარემიის მოკლული ბაქტერიის სუსპენზია ემატება ტესტის შრატში. სამი კომპონენტი ურთიერთქმედებს რეაქციაში: ტესტის შრატი, სპეციფიური ტულარემიის ანტიგენი და ანტიგენური ერითროციტების დიაგნოსტიკური RTPHA ჩვეულებრივ მოთავსებულია 7-8 ჭაბურღილის რიგში. მიზანშეწონილია განმეორებითი RPGA-ის დაყენება RTPGA-ის პარალელურად. 0,25 მლ განზავების სითხე შეედინება ორ რიგ ჭებში, შემდეგ საცდელი შრატი 0,25 მლ მოცულობით ემატება ორივე რიგის პირველ ჭებს და კეთდება ტიტრირება, მიიღება შრატის განზავების ორი იდენტური რიგი. მეორე რიგის ყველა ჭაბურღილს დაამატეთ 0,25 მლ განზავების სითხე, ხოლო პირველი რიგის ჭაბურღილებში ტულარემიის ბაქტერიების სუსპენზია 0,25 მლ. გამოიყენება Tularemia diagnosticum (შეიცავს 25 მილიარდ ტულარემიის ბაქტერიას 1 მლ-ში), ადრე განზავებული 50-ჯერ. ეს სუსპენზია შეიცავს 500 მილიონ ბაქტერიას 1 მლ-ში ან 125 მილიონს 0,25 მლ მოცულობით. ანტიგენის დამატების შემდეგ თეფშს ტოვებენ 1 საათი ოთახის ტემპერატურაზე, რის შემდეგაც თითო წვეთი (0,05 მლ) ერითროციტების დიაგნოსტიკა ემატება ორივე რიგის ყველა ჭაბურღილს, თეფშს რხევენ და ტოვებენ ბრტყელ მაგიდაზე. აღრიცხვა ტარდება 2-3 საათის შემდეგ.

RTPGA-ს აღრიცხვა და შეფასება. თუ ტესტის შრატი შეიცავს სპეციფიკურ ტულარემიის ანტისხეულებს, ისინი განეიტრალება დამატებული ანტიგენით და ჰემაგლუტინაცია არ მოხდება ჭაბურღილების პირველ რიგში, ან, შრატის მაღალი ტიტრით, ჰემაგლუტინაცია შეინიშნება უფრო მცირე (2-4) რაოდენობით. ჭაბურღილები ვიდრე RPHA-ს რიგში. ამ შემთხვევაში დადასტურდა შედეგების სპეციფიკა. თუ ჰემაგლუტინაცია აღინიშნება ორივე რიგში, ე.ი. თუ RTPGA და RPGA შედეგები ემთხვევა, ეს მიუთითებს ტესტის შრატში ტულარემიის ანტისხეულების არარსებობაზე. ამ შემთხვევაში, RPGA-ს პირველადი შედეგი განიხილება არასპეციფიკური.

RTHG მიკრომოცულობით დადგმის ტექნიკა. RTPGA, ისევე როგორც RPGA, შეიძლება შესრულდეს მიკრომოცულობით ტაკაჩის ტიპის მიკროტიტრის გამოყენებით. ამისათვის დაამატეთ 0,25 მკლ გამხსნელი სითხე მიკროფილების ჭაბურღილებში 7-8 ჭაბურღილის ორ რიგში. შემდეგ, ტიტრატორის გამოყენებით, ემატება 0,25 მკლ ტესტის შრატი და ტიტრირდება ორივე რიგში. ამის შემდეგ პირველ რიგში თითოეულ ჭაბურღილს ემატება 25 მკლ ტულარემიის ანტიგენი (რომლის კონცენტრაციაა 500 მილიონი ტულარემიის ბაქტერია 1 მლ-ში), ხოლო მეორე რიგს ემატება 25 მკლ განზავების სითხე. ფირფიტებს ტოვებენ 1 საათის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე, რის შემდეგაც 25 მკლ ანტიგენური ზრიტროციტური დიაგნოსტიკა (0,5% კონცენტრაცია) ემატება ორივე რიგის ყველა ჭაბურღილს. შედეგების აღრიცხვა და შეფასება ხორციელდება ისევე, როგორც რეაქცია მაკრომოცულობებში.

რეაქცია მოცემულია:

1) პოლისაქარიდების, ცილების, ბაქტერიული ექსტრაქტების და სხვა უაღრესად დისპერსიული ნივთიერებების, რიკეტსიისა და ვირუსების გამოსავლენად, რომელთა კომპლექსები აგლუტინინებთან არ ჩანს ჩვეულებრივ RA-ებში,

2) პაციენტების შრატში ანტისხეულების აღმოჩენა ამ უაღრესად გაფანტული ნივთიერებებისა და მცირე მიკროორგანიზმების მიმართ.

არაპირდაპირი ან პასიური აგლუტინაცია გაგებულია, როგორც რეაქცია, რომლის დროსაც ანტისხეულები ურთიერთქმედებენ ანტიგენებთან, რომლებიც წინასწარ ადსორბირებულია ინერტულ ნაწილაკებზე (ლატექსი, ცელულოზა, პოლისტირონი, ბარიუმის ოქსიდი და ა.შ. ან ცხვრის სისხლის წითელი უჯრედები, I(0) - ადამიანის სისხლის ჯგუფი).

პასიური ჰემაგლუტინაციის რეაქციაში (RPHA), სისხლის წითელი უჯრედები. ანტიგენით დატვირთული სისხლის წითელი უჯრედები ერთმანეთში ერწყმის ამ ანტიგენის სპეციფიური ანტისხეულების არსებობისას და ნალექი ჩნდება. ანტიგენზე მგრძნობიარე ერითროციტები გამოიყენება RPGA-ში, როგორც ერითროციტების დიაგნოსტიკა ანტისხეულების გამოსავლენად (სეროდიაგნოსტიკა). თუ სისხლის წითელი უჯრედები დატვირთულია ანტისხეულებით (ერითროციტების ანტისხეულების diagnosticum), ის შეიძლება გამოყენებულ იქნას ანტიგენების გამოსავლენად.

ბრინჯი. 3. RPGA სქემა: სისხლის წითელი უჯრედები (1), დატვირთული ანტიგენით (3), დაკავშირებულია სპეციფიკური ანტისხეულებით (4).

Დადგმა. შრატის სერიული განზავების სერია მზადდება პოლისტიროლის ფირფიტების ჭაბურღილებში. ბოლო ჭაბურღილს დაუმატეთ 0,5 მლ აშკარად დადებითი შრატი და ბოლო ჭაბურღილს 0,5 მლ ფიზიოლოგიური ხსნარი. შემდეგ ყველა ჭაბურღილს ემატება 0,1 მლ განზავებული ერითროციტების დიაგნოსტიკა, შეანჯღრიეთ და მოთავსებულია თერმოსტატში 2 საათის განმავლობაში.

Აღრიცხვა. დადებით შემთხვევაში, სისხლის წითელი უჯრედები გროვდება ხვრელის ძირში უჯრედების თანაბარი ფენის სახით დაკეცილი ან დაკბილული კიდით (შებრუნებული ქოლგა); ნეგატიურ შემთხვევაში ისინი დევს ღილაკის ან რგოლის სახით. .

ნახ.4. აღრიცხვა RNGA (RPGA).

ბოტულინის ტოქსინის გამოსავლენად ჩატარებული რენტგენის ტესტის შედეგების აღრიცხვა.

ბოტულიზმის გამომწვევი აგენტი, Clostridium botulinum, გამოიმუშავებს შვიდი სეროვარის ტოქსინებს (A, B, C, D, E, F, G), მაგრამ A, B და E სეროვარი უფრო ხშირია. ყველა ტოქსინი განსხვავდება ანტიგენური თვისებებით და შეუძლია. რეაქციებში დიფერენცირებული იყოს ტიპური შრატების გამოყენებით. ამ მიზნით შეიძლება განხორციელდეს პასიური (ირიბი) ჰემაგლუტინაციის რეაქცია პაციენტის შრატთან, რომელშიც ვარაუდობენ ტოქსინის არსებობას და სისხლის წითელ უჯრედებს დატვირთული ანტიტოქსიური ანტიბოტულინის შრატების ანტისხეულებით A, B, E. ნორმალური. შრატი ემსახურება როგორც კონტროლს.

ბრინჯი. 3. განცხადება და შედეგი RNGA.

Აღრიცხვა. დადებით შემთხვევაში, სისხლის წითელი უჯრედები გროვდება ხვრელის ძირში უჯრედების თანაბარი ფენის სახით დაკეცილი ან დაკბილული კიდით (შებრუნებული ქოლგა); ნეგატიურ შემთხვევაში ისინი დევს ღილაკის ან რგოლის სახით. .

დასკვნა: ბოტულინის ტოქსინი ტიპის E გამოვლინდა პაციენტის შრატში.

ჰემაგლუტინაციის ინჰიბიციის რეაქცია (HRT).

ბრინჯი. 8. ჰემაგლუტინაციის დათრგუნვის რეაქცია (HAI) (სქემა).

რეაქციის პრინციპი ეფუძნება AT-ის უნარს შეაერთოს სხვადასხვა ვირუსები და გაანეიტრალოს ისინი, რაც შეუძლებელს ხდის სისხლის წითელი უჯრედების აგლუტინაციას. ვიზუალურად, ეს ეფექტი ვლინდება ჰემაგლუტინაციის "დათრგუნვით". RTGA გამოიყენება ვირუსული ინფექციების დიაგნოსტიკაში სპეციფიკური ანტიჰემაგლუტინინების იდენტიფიცირებისთვის და სხვადასხვა ვირუსების იდენტიფიცირებისთვის მათი ჰემაგლუტინინებით, რომლებიც ავლენენ Ag.

ვირუსის აკრეფა ხორციელდება RTGA რეაქციაში, ტიპი-სპეციფიკური შრატების ნაკრებით. რეაქციის შედეგები მხედველობაში მიიღება ჰემაგლუტინაციის არარსებობით. A ტიპის ვირუსის ქვეტიპები ანტიგენებით H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 და სხვა შეიძლება დიფერენცირებული იყოს RTGA-ში ჰომოლოგიური ტიპის სპეციფიკური შრატების ნაკრებით.

ბრინჯი. 9. RTGA შედეგები გრიპის ვირუსის ტიპებისთვის

ლეგენდა: - ჰემაგლუტინაციის დათრგუნვა (ღილაკი); - ჰემაგლუტინაცია (ქოლგა).

დასკვნები: შესასწავლი მასალა შეიცავს A ტიპის გრიპის ვირუსს H3N2 ანტიგენთან

რეაქცია ტარდება ტესტის მასალაში პათოგენის ანტიგენების გამოსავლენად მასში იმუნური შრატის დამატებით. ჰომოლოგიური ანტიგენის არსებობისას ანტისხეულები აკავშირებს, შესაბამისად, ანტიგენით მგრძნობიარე ერითროციტების დამატების შემდეგ მათი აგლუტინაცია არ ხდება, რაც დადებით შედეგად ფასდება. იმისათვის, რომ რეაქცია უფრო მგრძნობიარე გახდეს, ტესტის მასალას ემატება სპეციფიკური იმუნური შრატი მინიმალური რაოდენობით (2 ჰემაგლუტინაციის ერთეული). იმუნური შრატის ტიტრი პირველ რიგში განისაზღვრება RNGA-ს გამოყენებით. ჰემაგლუტინაციის ერთი ერთეული არის შრატის მაქსიმალური განზავება, რომელიც იწვევს სისხლის წითელი უჯრედების ერთმანეთთან შეკვრას.

მეთოდოლოგია. დაამატეთ 0,025 მლ კურდღლის ნორმალური შრატის 1% ხსნარი პოლისტიროლის ფირფიტების ან აგლუტინაციის ტუბებში და გააკეთეთ საცდელი მასალის სერიული 2-ჯერადი განზავება. შემდეგ ყველა ჭაბურღილს ემატება 0,025 მლ იმუნური შრატი, თეფშს ურევენ და ტოვებენ 30 წუთის განმავლობაში 37ºC ტემპერატურაზე ან 1 საათის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე. შემდეგ ყველა ჭაბურღილს დაუმატეთ 0,025 მლ ანტიგენური დიაგნოსტიკა, შეანჯღრიეთ და გააჩერეთ 2 საათი, რის შემდეგაც მხედველობაში მიიღება შედეგები.

ამ რეაქციის განხორციელებისას, იმუნური შრატის სპეციფიკურობის კონტროლი ემატება RNHA-ს კონტროლს, რომელიც შედგება სპეციფიკური ანტიგენისგან, იმუნური შრატისგან (2, 1, 0.5 ჰემაგლუტინაციის ერთეული) და სენსიბილიზებული ერითროციტების სუსპენზია.

RTNGA ასევე გამოიყენება სპეციფიური ანტისხეულების (სრული და ბლოკირების) გამოსავლენად, რისთვისაც ანტიგენის დოზირებული რაოდენობა ემატება ტესტის შრატში. თუ ის შეიცავს ანტისხეულებს, მაშინ ისინი შეკრულია ანტიგენით, შესაბამისად, ანტისხეულებით სენსიბილიზებული ერითროციტების დამატების შემდეგ (RTNGA-ს მე-2 სტადია), ერითროციტები არ იკვრება.

მინიმალური რაოდენობის ანტიგენის (2 განეიტრალებელი დოზა) გამოყენების წყალობით, რეაქცია ძალიან მგრძნობიარეა. ანტიგენის პრეპარატში განეიტრალებელი დოზების რაოდენობა განისაზღვრება RNGA-ს გამოყენებით, ხოლო ანტიგენის სერიული 2-ჯერადი განზავება კეთდება კურდღლის ნორმალური შრატის 1%-იან ხსნარში და ჭაბურღილებს ემატება ანტისხეულების ერითროციტების დიაგნოსტიკა. ანტიგენის განეიტრალებელი დოზა ითვლება მის მაქსიმალურ განზავებად, რაც იძლევა მგრძნობიარე ერითროციტების სრულ ადჰეზიას.

რეაქციამდე საცდელი შრატები განზავებულია 1:5-1:10 და ინაქტივირებულია 56°C ტემპერატურაზე 30 წუთის განმავლობაში. ჰემაგლუტინინების ადსორბციისთვის შრატში ემატება ფორმალინიზებული ან ახლად გარეცხილი ცხვრის ერითროციტების 50%-იანი სუსპენზია 0,1 მლ სუსპენზიის სიჩქარით 1 მლ განზავებულ შრატში. ნარევი შერყეული და ინკუბირებულია 30 წუთის განმავლობაში 37ºC ტემპერატურაზე ან 1 საათის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე, რის შემდეგაც სისხლის წითელი უჯრედები დალექილია ცენტრიფუგირებით. შეგიძლიათ შრატი მაცივარში მეორე დღემდე დატოვოთ სისხლის წითელი უჯრედების დასალექად.

ექსპერიმენტის ჩატარებისას საცდელი მასალა განზავებულია კურდღლის ნორმალური შრატის 1%-იან ხსნარში 0,025 მლ მოცულობით მიკროტიტრული პანელის ჭაბურღილებში. შემდეგ თითოეულ ჭაბურღილს ემატება ანტიგენის 2 განეიტრალებელი დოზა 0,025 მლ მოცულობით. ფირფიტები შეანჯღრიეთ და დატოვეთ 30 წუთის განმავლობაში 37 °C ტემპერატურაზე ან 1 საათის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე. შემდეგ ყველა ჭაბურღილს ემატება 0,025 მლ ანტისხეულების ერითროციტების დიაგნოსტიკა. ფირფიტები შერყეული და ინკუბირებულია 1,5-2 საათის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე, რის შემდეგაც მხედველობაში მიიღება რეაქციის შედეგები. აღრიცხვა შესაძლებელია მეორე დღესაც. ტესტის შრატის ტიტრი ითვლება მის მაქსიმალურ განზავებად, რომლის დროსაც სისხლის წითელი უჯრედები არ იკვრება.

ექსპერიმენტს თან ახლავს შემდეგი სახის კონტროლი:

1) სენსიბილიზებული ერითროციტების სტაბილურობა (ერითროციტები + კურდღლის ნორმალური შრატის 1% ხსნარი);

2) ჰემაგლუტინინის დაქვეითების სისრულე თითოეულ სატესტო შრატში (სატესტო შრატი ყველაზე დაბალ განზავებაზე + ფორმალინიზებული ერითროციტები);

3) ანტიგენის მინიმალური გამანეიტრალებელი დოზის განსაზღვრის სისწორე (ანტიგენის 2, 1 და 0,5 განეიტრალებელი დოზა + ანტისხეული erythrocyte diagnosticum).

საპირისპირო არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის (რონგა) რეაქცია გამოიყენება ტესტის მასალებში ბაქტერიული და ვირუსული ანტიგენების მითითებისთვის, ასევე რიგი ინფექციების სწრაფი დიაგნოსტიკისთვის.

RNGA-სგან განსხვავებით, ამ რეაქციაში სისხლის წითელი უჯრედები სენსიბილიზდება არა ანტიგენით, არამედ ანტისხეულებით, რომელთა აგლუტინაცია ხდება ანტიგენის დამატებისას.

სისხლის წითელი უჯრედები წინასწარ ფიქსირდება ფორმალდეჰიდით ან გლუტარალდეჰიდით და შემდეგ უკავშირდება გამა გლობულინს, რომელიც იზოლირებულია იმუნური შრატიდან და იწმინდება შრატის სხვა ცილებისგან. გამა გლობულინის შეერთება სისხლის წითელი უჯრედების ზედაპირზე ხდება ქრომის ქლორიდის დახმარებით. ამისათვის დაამატეთ 1 ტომი იმუნოგლობულინები, გამოყოფილი იმუნური შრატიდან, 1 ტომი ფორმალინიზებული ერითროციტების 50%-იანი სუსპენზია და 1 მოცულობა 0,1-0,2% ქრომის ქლორიდის ხსნარი 8 ტომი გამოხდილ წყალში. ნარევს ტოვებენ 10-15 წუთის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე, შემდეგ სისხლის წითელ უჯრედებს მკურნალობენ, როგორც პასიური ჰემაგლუტინაციის რეაქციაში.

ანტისხეულების დიაგნოსტიკის სპეციფიკა მოწმდება ჰომოლოგიური ანტიგენის მიერ პასიური ჰემაგლუტინაციის დათრგუნვის რეაქციაში. რეაქცია უნდა იყოს დათრგუნული ჰომოლოგიური ანტიგენით მინიმუმ 16-ჯერ და არა ინჰიბირებული ჰეტეროლოგიურით. კონტროლი გამოიყენება სპონტანური ჰემაგლუტინაციის არარსებობის უზრუნველსაყოფად.

ამ რეაქციის გამოყენებით, პათოგენები მითითებულია მკვდარი ადამიანებისა და ცხოველების ორგანოებიდან აღებულ მასალაში, მაგალითად, ტვინიდან, ელენთადან და ფილტვების ღვიძლისგან. მოამზადეთ ამ ორგანოების 10%-იანი სუსპენზია ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონურ ხსნარში, მოათავსეთ ცენტრიფუგა 30-60 წუთის განმავლობაში 10000 rpm-ზე და გამოიყენეთ სუპერნატანტი ანტიგენად.

მეთოდოლოგია.მოამზადეთ საცდელი მასალის (ანტიგენის) 2-ჯერადი განზავება სტაბილიზაციის ხსნარში. ყოველი ანტიგენის განზავების 1 წვეთი დაამატეთ მიკროპანელის 3 მიმდებარე ჭაბურღილს (რეაქცია იკავებს ჭაბურღილების 3 პარალელურ რიგს). პირველი რიგის თითოეულ ჭაბურღილს დაუმატეთ 1 წვეთი სტაბილიზატორი ხსნარი, მეორე რიგის ჭაბურღილებს 1 წვეთი ჰომოლოგიური იმუნური შრატი განზავებული 1:10, მესამე რიგში ჰეტეროლოგიური იმუნური შრატის 1 წვეთი. მეორე და მესამე რიგები ემსახურება რეაქციის სპეციფიკის კონტროლს. ნარევი დატოვეთ 20 წუთის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე.

დაამატეთ 1 წვეთი სენსიბილიზებული ერითროციტების 1% სუსპენზიის (ერითროციტების ანტისხეულების დიაგნოსტიკა) ყველა ჭაბურღილს და კარგად შეანჯღრიეთ ფირფიტები. რეაქციის შედეგები მხედველობაში მიიღება 30-40 წუთის შემდეგ. სპეციფიური ანტიგენის არსებობისას ჰემაგლუტინაცია შეინიშნება პირველ და მესამე რიგში (ჰეტეროლოგური შრატით) და არ არსებობს მეორე რიგში, სადაც ანტიგენი ადრე ნეიტრალიზებულია ჰომოლოგიური შრატით.

რეაქციას თან ახლავს სენსიტირებული ერითროციტების კონტროლი სპონტანური აგლუტინაციისთვის.

შებრუნებული არაპირდაპირი ჰემაგლუტინაციის ინჰიბიციის რეაქცია (RTONGA)საშუალებას გაძლევთ განსაზღვროთ ანტისხეულების არსებობა ადამიანებისა და ცხოველების შრატში.

მეთოდოლოგია. შრატები 10-ჯერ განზავებულია ნატრიუმის ქლორიდის იზოტონური ხსნარით, თბება 20 წუთის განმავლობაში 65 ° C ტემპერატურაზე არასპეციფიკური ინჰიბიტორების განადგურების მიზნით, შემდეგ კი შრატის 2-ჯერადი განზავება მზადდება სტაბილიზირებულ ხსნარში და სამუშაო დოზით. ანტიგენი, რომელიც შეიცავს 4 აგლუტინაციის ერთეულს. მიკროპანელის ჭაბურღილებში დაამატეთ შრატის თითოეული განზავების 1 წვეთი და დაამატეთ მათ 1 წვეთი ანტიგენი, რომლის განზავება შეესაბამება სამუშაო დოზას. ნარევის კომპონენტებთან შეხების შემდეგ ოთახის ტემპერატურაზე 20 წუთის განმავლობაში, დაამატეთ 1 წვეთი ერითროციტების ანტისხეულების დიაგნოსტიკა ყველა ჭაბურღილში და კარგად შეანჯღრიეთ. ოთახის ტემპერატურაზე ინკუბაციიდან 1,5-2 საათის შემდეგ, რეაქციის შედეგები გათვალისწინებულია ჰემაგლუტინაციისთვის. შრატის ტიტრი არის მისი უმაღლესი განზავება, რომელიც მთლიანად აფერხებს ჰემაგლუტინაციის რეაქციას ოთხი აგლუტინაციის ანტიგენის ერთეულით.

რეაქციას თან ახლავს სენსიბილიზებული ერითროციტების კონტროლი სპონტანური აგლუტინაციისთვის: ა) სტაბილიზირებელი ხსნარის თანდასწრებით; ბ) ნორმალური ანტიგენი (მასალიდან, რომელიც არ შეიცავს ვირუსს); გ) საცდელი შრატი. რეაქციის უპირატესობა არის მისი მრავალფეროვნება და მისი გამოყენების შესაძლებლობა სხვადასხვა ანტიგენების გამოსავლენად.

ჰემაგლუტინაციის შედეგების შეფასება. RNGA, RONGA და RTONGA-ს შედეგები მხედველობაში მიიღება ერითროციტების აგლუტინაციის ხარისხის მიხედვით: (++++) – სრული აგლუტინაცია; (+++) – ნაკლებად სრული აგლუტინაცია; (++) – ნაწილობრივი აგლუტინაცია; (+) – აგლუტინაციის კვალი; (–) – აგლუტინაციის არარსებობა.

რეაქცია დადებითად ითვლება, თუ აგლუტინაცია არის დასრულებული (++++) ან თითქმის სრული (+++), დიაგნოსტიკა არ იძლევა სპონტანურ აგლუტინაციას რეაქციის თითოეული კომპონენტის თანდასწრებით და აკონტროლებს სპეციფიკის სპეციფიკას. ანტიგენი ან ანტისხეული დადებითია.

იგი ემყარება იმ ფაქტს, რომ სისხლის წითელი უჯრედები, რომლებზეც ადრე ადსორბირებულია ანტიგენები, იძენენ აგლუტინაციის უნარს ჰომოლოგიური შრატების (ანტისხეულების) არსებობისას.

ამ შემთხვევაში სისხლის წითელი უჯრედები მოქმედებენ როგორც მატარებლები სპეციფიკური დეტერმინანტებით, რომელთა აგლუტინაცია ხდება ანტიგენ + ანტისხეულების რეაქციის შედეგად.

სისხლის წითელ უჯრედებს, რომლებზეც ანტიგენები მყარად არის მიმაგრებული, ეწოდება ერითროციტების ანტიგენი diagnosticum, ან ანტიგენით მგრძნობიარე ერითროციტები.

სხვა ტიპის RNGA - ანტისხეულები ადსორბირდება ერითროციტების ზედაპირზე და მათი შემდგომი აგლუტინაცია ხდება ჰომოლოგიური ანტიგენის არსებობისას. ამ შემთხვევაში, ასეთ ერითროციტებს უწოდებენ ერითროციტების ანტისხეულების დიაგნოსტიკას, ან ანტისხეულებით მგრძნობიარე ერითროციტებს.

ამ ორი ფუნდამენტური მეთოდოლოგიური მიდგომის საფუძველზე, შემუშავებულია და გამოიყენება RNGA-ს მრავალი მოდიფიკაცია. ამრიგად, მცირე სტანდარტული ლატექსის ნაწილაკები გამოიყენება როგორც მატარებლები. ამ შემთხვევაში რეაქციას უწოდებენ ლატექსის აგლუტინაციის რეაქციას (LAR) ან გამოიყენება Staphylococcus aureus - კოაგლუტინაციის რეაქცია და ა.შ. ჩვეულებრივ, ერითროციტების დიაგნოსტიკა მზადდება ბიოლოგიური ინდუსტრიის საწარმოებში, ხოლო RNGA-ს ძირითადი გამოცდილება ტარდება დიაგნოსტიკურ ლაბორატორიებში.

ერითროციტების დიაგნოსტიკის მომზადება მოიცავს შემდეგ ეტაპებს:

• სისხლის წითელი უჯრედების ფიქსაცია ფორმალდეჰიდით ან გლუტარული ან აკრილის ალდეჰიდებით. ასეთი დამუშავებული სისხლის წითელი უჯრედები ინახება დიდი ხნის განმავლობაში. უფრო ხშირად ამ მიზნით გამოიყენება ერითროციტები ცხვრის, ადამიანის, ქათმის და ა.შ.
• ფიქსირებული ერითროციტების მკურნალობა ტანინის ხსნარით. შედეგად, სისხლის წითელი უჯრედები იძენენ თავიანთ ზედაპირზე ცილების (ვირუსების და ანტისხეულების) შეუქცევად შეწოვის უნარს;
• ტანიზირებული ერითროციტების სენსიბილიზაცია ვირუსებით ან ანტისხეულებით.

უნდა აღინიშნოს, რომ ვირუსული ინფექციების ერითროციტების დიაგნოსტიკის მომზადების მეთოდები განსხვავებულია.

ანტისხეულების ტიტრის გამოსავლენად და დასადგენად RNGA-ს ჩატარების პროცედურა შემდეგია:

• ანტიგენით მგრძნობიარე ერითროციტების თანაბარი დოზები ემატება შრატის ზედიზედ 2-ჯერ განზავებას;
• ნარევი ინახება 2-3 საათის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე ან 16-18 საათის განმავლობაში 4 °C ტემპერატურაზე;
• შედეგების გათვალისწინება. თუ შრატი შეიცავს ანტისხეულებს ვირუსის მიმართ, რომლითაც მოხდა სისხლის წითელი უჯრედების სენსიბილიზაცია, აღინიშნება ჰემაგლუტინაცია, რომელიც ფასდება ჯვარედინად.

შრატში ანტისხეულების ტიტრი მიიღება როგორც შრატის ყველაზე მაღალი განზავება, რომელიც მაინც უზრუნველყოფს ჰემაგლუტინაციას მინიმუმ ორი ჯვარედინით.

RNGA-ს ახლავს ყველა შესაბამისი კონტროლი. ჩვეულებრივ რეაქცია ტარდება მიკრომეთოდის გამოყენებით.

RNGA საშუალებას გაძლევთ გადაჭრათ შემდეგი დიაგნოსტიკური პრობლემები:

• ანტისხეულების აღმოჩენა და მათი ტიტრის განსაზღვრა სისხლის შრატში ცნობილი ერითროციტული ანტიგენის დიაგნოსტიკის გამოყენებით;
• უცნობი ვირუსის აღმოჩენა და იდენტიფიცირება ცნობილი ერითროციტების ანტისხეულების დიაგნოსტიკის გამოყენებით.

RNGA-ს უპირატესობები: მაღალი მგრძნობელობა, განთავსების ტექნიკის სიმარტივე და რეაგირების სიჩქარე. თუმცა, მნიშვნელოვანია აღინიშნოს, რომ დიდი სირთულეები წარმოიქმნება სტაბილური ერითროციტების დიაგნოსტიკის მომზადებაში (დიდი დამოკიდებულება გამოყენებული კომპონენტების სისუფთავეზე, თითოეული ტიპის ვირუსისთვის ერითროციტების ფიქსაციის, ტანიზაციისა და სენსიბილიზაციის რეჟიმის არჩევის საჭიროება).