Азитромицин и кларитромицин, кој е поефикасен. Клацид или азитромицин што е подобро. Сумамед или кларитромицин што е подобро. Интеракција со други лекови. Индикации за употреба

Дијаграм на фазен контраст микроскоп.
1. Прстен на кондензаторот
2. Предметна рамнина
3. Фазна плоча
4. Примарна слика.
За разлика од референтната светлина, светлината на објектот расфрлана на примерокот, во областите прикажани со сино, ја заобиколува фазната плоча, така што должината на оптичката патека е различна.

Фазна контрастна микроскопија- метод за добивање слики во оптички микроскопи, во кои фазното поместување на електромагнетниот бран се трансформира во контраст на интензитет. Фазна контрастна микроскопија беше откриена од Фриц Зернике, за што ја доби Нобеловата награда во 1953 година.

Принцип на работа

За да се добие слика со фазен контраст, светлината од изворот е поделена на два кохерентни светлосни зраци, еден од нив се нарекува референтен зрак, другиот е зрак на објектот, кој патува низ различни оптички патеки. Микроскопот е прилагоден така што во фокусната рамнина каде што се формира сликата, пречките помеѓу овие два зраци ги поништуваат.

Слика на клетка под фазен контраст микроскоп

Должината на оптичката патека се менува со помош на таканаречената фазна плоча (Англиски)руски , кој се наоѓа на фазниот прстен. Кога примерокот е на патеката на еден од зраците, прекршувањето на светлината во него ја менува оптичката патека и, следствено, фазата што ги менува условите на пречки.

Фазна контрастна микроскопија е особено популарна во биологијата бидејќи не бара прелиминарно боење на клетката, што може да предизвика нејзино умирање.

Историја на откривање

Холандскиот физичар, математичар и хемичар Фриц Зернике започнал да работи на полето на оптиката во 1930 година. Истата година го открил методот на фазен контраст. Во текот на 1930-тите и 1940-тите, Зернике даде придонес во други области на оптиката, додека методот на контраст на фаза не беше забележан од широк круг на научници. Нов методостана надвор од видното поле на научната заедница до Втората светска војна, кога откритието на Цернике беше искористено за создавање на првите фазни контрастни микроскопи за време на германската окупација на Холандија. За време на војната, многу производители почнаа да произведуваат фазни контрастни микроскопи и тие станаа широко користени во биолошките и медицинските истражувања.

Врски

Извори

Фондацијата Викимедија. 2010 година.

Погледнете што е „Микроскопија на фазен контраст“ во другите речници:

Видете Микроскопија со фазен контраст микроскоп. (Извор: „Речник на микробиолошки термини“) ... Речник на микробиологија

Метод на микроскопско испитување заснован на добивање, со помош на специјални уреди, контрастна слика на структури на безбојни проѕирни микрообјекти со различна густина, на пример, живи микроорганизми и ткиво...

МИКРОСКОПИЈА НА ФАЗЕН КОНТРАСТ- фазна контрастна микроскопија, видете Микроскоп, Микроскопска техника... Ветеринарна енциклопедиски речник

оптичка микроскопија со фазен контраст- 4,34 фазна контрастна оптичка микроскопија: Метод на микроскопска анализа базирана на претворање на диференцијални фазни поместувања на светлосните бранови што минуваат низ примерокот во разлики во амплитудите.… … Речник-референтна книга на поими за нормативна и техничка документација

М. на живи необоени објекти, кај кои контрастот на сликата се зголемува со претворање на фазните разлики на зракот на светлосни зраци што минуваат низ објектот во амплитуда ... Голем медицински речник

Општо име за методите за набљудување неразлични предмети преку микроскоп од човечкото окопредмети. За повеќе детали, видете чл. (види МИКРОСКОП). Физички енциклопедиски речник. М.: Советска енциклопедија. Главен уредникА.М.Прохоров. 1983 година ... Физичка енциклопедија

Збир на методи за проучување на мали предмети со помош на микроскопи. Традиционалните типови на М. вклучуваат – луминисцентна М. – врз основа на феноменот на фотолуминисценција што се јавува при боење на препаратите со специјални луминисцентни бои;… … Речник на микробиологија

Шема на микроскопија со темно поле при инцидентно светло. Примерокот е осветлен од страна (зелена линија). Сликата е создадена од светлината расфрлана од нехомогености во примерокот. Микроскопијата со темно поле е вид на оптичка ... Википедија

Метод за проучување главно живи објекти со низок контраст (протозои, бактерии, клетки во културата) со помош на анотрален микроскоп (измислен во 1953 година од финскиот физиолог А. Вилска), тип на фазен контраст микроскоп... Голема советска енциклопедија

Методи за проучување на различни предмети со помош на микроскоп. Во биологијата и медицината, овие методи овозможуваат проучување на структурата на микроскопските објекти чии димензии се надвор од резолуцијата на човечкото око. Основата на М.м.и. изнесува... ... Медицинска енциклопедија

1. Светло поле

Методот на светло поле во пренесената светлина се користи при проучување на проѕирни препарати во кои различни делови од структурата различно ја апсорбираат светлината (тенки обоени делови од животински и растителни ткива, тенки делови од минерали итн.).
Зрак од зраци од системот за осветлување поминува низ примерокот и леќата и создава рамномерно осветлено поле во рамнината на сликата. Структурните елементи на лекот делумно ја апсорбираат и отфрлаат светлината што паѓа врз нив, што предизвикува појава на сликата.

Методот може да биде корисен и при набљудување на предмети кои не апсорбираат, но само ако тие толку силно го распрснуваат светлосниот зрак што значителен дел од него не падне во леќата.
Методот на светло поле во рефлектираната светлина се користи за набљудување на непроѕирни објекти, на пример, гравирани делови од метали, биолошки ткива и разни минерали. Препаратот се осветлува одозгора, преку леќата, која истовремено служи и како систем за осветлување.
Сликата, како и со пренесената светлина, се создава поради фактот што различни областиПрепаратите нееднакво ја отфрлаат светлината што паѓа врз нив, а рефлектираните зраци имаат различен интензитет.

2. Темно поле

Микроскопијата на темно поле се заснова на способноста на микроорганизмите силно да ја распрснуваат светлината. За микроскопија со темно поле, се користат конвенционални цели и специјални кондензатори за темно поле.
Главната карактеристика на кондензаторите со темно поле е тоа централен делтие се затемнети и директните зраци од илуминаторот не стигнуваат до леќата на микроскопот. Објектот е осветлен со коси странични зраци и само зраците расфрлани од честичките во препаратот влегуваат во леќата на микроскопот. Микроскопијата на темно поле се заснова на ефектот Тиндалов, чиј познат пример е откривањето на честички од прашина во воздухот кога се осветлени со тесен зрак на сончева светлина.
За да спречите директни зраци од илуминаторот да навлезат во објективот, отворот на леќата треба да биде помал од отворот на кондензаторот. За да се намали отворот, дијафрагмата се става во обична леќа или се користат специјални леќи опремени со дијафрагма на ирисот.
Со микроскопија со темно поле, микроорганизмите изгледаат светло светлечки на црна позадина. Со овој метод на микроскопија може да се детектираат и најмалите микроорганизми, чии големини се надвор од резолуцијата на микроскопот. Сепак, микроскопијата со темно поле ви овозможува да ги видите само контурите на објектот, но не ви дозволува да ја проучувате внатрешната структура. Со помош на микроскопија со темно поле, се проучуваат препаратите од типот на смачкана „капка“. Лизгачите не треба да бидат подебели од 1,1-1,2 mm, покривките 0,17 mm, без гребнатини или нечистотија.
Кога го подготвувате лекот, треба да избегнувате присуство на меурчиња и големи честички (овие дефекти ќе бидат видливи со силен сјај и нема да ви дозволат да го набљудувате лекот). За темно поле, се користат помоќни илуминатори и максимален интензитет на светилката.
Поставувањето на осветлувањето на темно поле во основа е како што следува:
1) инсталирајте го светлото според Келер;
2) заменете го кондензаторот со светло поле со кондензатор со темно поле;
3) на горната леќа на кондензаторот се нанесува масло за потопување или дестилирана вода;
4) подигнете го кондензаторот додека не дојде во контакт со долната површинастаклен слајд;
5) леќа со мало зголемување е фокусирана на подготовката;
6) со помош на завртки за центрирање, светло место (понекогаш има затемнета централна област) се пренесува во центарот на видното поле;
7) со подигање и спуштање на кондензаторот исчезнува затемнетата централна област и се добива рамномерно осветлена светлосна точка.
Ако ова не може да се направи, тогаш треба да ја проверите дебелината на стаклениот лизгач (овој феномен обично се забележува кога се користат премногу дебели стаклени слајдови - конусот на светлината е фокусиран во дебелината на стаклото).
По точни поставкиКористејќи светлина, инсталирајте леќа со потребното зголемување и испитајте го препаратот.

3. Поларизација

Методот на истражување на поларизиран зрак се користи во пренесената и рефлектираната светлина за таканаречените анизотропни објекти кои имаат двојно прекршување или рефлексија.
Такви предмети се многу минерали, јаглен, некои животински и растителни ткива и клетки, вештачки и природни влакна. При проучување на анизотропните лекови, во вообичаеното коло на микроскоп пред системот за осветлување се додава поларизатор, а после леќата се додава анализатор, кои се во вкрстена или паралелна положба едни на други.
Кога поларизаторот и анализаторот се вкрстени, темните, светли или обоени анизотропни елементи на објектот се видливи во темното видно поле на микроскопот. Појавата на овие елементи зависи од положбата на објектот во однос на рамнината на поларизација и од големината на двојното прекршување.
Попрецизно определување на оптичките податоци на објектот се врши со користење на различни компензатори (фиксни кристални плочи, подвижни клинови и плочи).

4. Фазен контраст

При микроскопирање на необоени микроорганизми освен животната срединасамо според индексот на рефракција нема промена во интензитетот на светлината (амплитудата), туку се менува само фазата на пренесените светлосни бранови. Затоа, окото не може да ги забележи овие промени и набљудуваните предмети изгледаат со низок контраст и транспарентно.
За да се набљудуваат ваквите објекти, се користи фазна контрастна микроскопија, која се заснова на трансформација на невидливите фазни промени воведени од објектот во промени во амплитудата видливи за окото.
Уредот за фазен контраст може да се инсталира на кој било светлосен микроскоп и се состои од:
1) збир на леќи со специјални фазни плочи;
2) кондензатор со ротирачки диск. Содржи прстенести дијафрагми што одговараат на фазните плочи во секоја од леќите;
3) помошен телескоп за прилагодување на фазен контраст.
Поставувањето на фазен контраст е како што следува:
1) заменете ги леќите и кондензаторот на микроскопот со фазни (означени со буквите Ph);
2) инсталирајте леќа со мало зголемување. Дупката во дискот на кондензаторот мора да биде без прстенест дијафрагма (означена со бројот "0");
3) прилагодете го светлото според Келер;
4) изберете фазна леќа со соодветно зголемување и фокусирајте ја на примерокот;
5) завртете го кондензаторскиот диск и инсталирајте ја прстенестата дијафрагма што одговара на леќата;
6) извадете го окуларот од цевката и на негово место вметнете помошен телескоп. Прилагодете го така што фазната плоча (во форма на темен прстен) и прстенестата дијафрагма (во форма на светло прстен со ист дијаметар) се јасно видливи. Користејќи ги завртките за прилагодување на кондензаторот, овие прстени се порамнети. Отстранете го помошниот телескоп и повторно инсталирајте го окуларот.
Благодарение на употребата на овој метод на микроскопија, контрастот на живите необоени микроорганизми нагло се зголемува и тие се појавуваат темни на светла позадина (контраст на позитивен фазен) или светло на темна позадина (негативен фазен контраст).
Фазно-контрастната микроскопија се користи и за проучување на клетките од ткивна култура, за набљудување на ефектите на различни вируси врз клетките итн. Во овие случаи, често се користат биолошки микроскопи со обратна оптика - превртени микроскопи. Во таквите микроскопи, целите се наоѓаат на дното, а кондензаторот е на врвот.

5. Флуоресценција (луминисценција)

Флуоресцентната (луминисцентна) микроскопија се заснова на способноста на некои супстанции да луминисцираат, односно да светат кога се осветлени со невидлива ултравиолетова или сина светлина. Бојата на луминисценцијата е поместена на дел од спектарот со подолга бранова должина во споредба со светлината што ја возбудува (правило на Стоукс).
Кога луминисценцијата е возбудена од сина светлина, нејзината боја може да се движи од зелена до црвена, ако луминисценцијата е возбудена ултравиолетово зрачење, тогаш сјајот може да биде во кој било дел од видливиот спектар. Оваа карактеристика на луминисценцијата овозможува, користејќи специјални филтри кои апсорбираат возбудлива светлина, да се набљудува релативно слаб луминисцентен сјај.
Структурата на флуоресцентниот микроскоп и правилата за работа со него се разликуваат од конвенционалниот светлосен микроскоп главно во следново:
1. Присуство на моќен извор на светлина во илуминаторот, кој емитира претежно во краткиот бран (ултравиолетово, сино) дел од спектарот (жива-кварцна светилка или халогена кварцна ламба).
2. Достапност на систем за филтрирање:
. возбудливите светлосни филтри го пренесуваат само оној дел од спектарот што ја возбудува луминисценцијата;
. филтерот за светлина што заштитува од топлина ги штити другите светлосни филтри, примерокот и оптиката на флуоресцентниот микроскоп од прегревање;
. Филтрите за „заклучување“ се наоѓаат помеѓу окуларот. Овие филтри апсорбираат возбудливо зрачење и пренесуваат луминисцентна светлина од лекот до окото на набљудувачот.
Начинот на осветлување на препаратите за возбудување на луминисценцијата е тоа што препаратот се осветлува со светлина што влегува на неа преку леќата. Поради ова, осветлувањето се зголемува кога се користат предмети со голема нумеричка бленда, односно оние што се користат за проучување на микроорганизми.
Важна улога во овој метод на осветлување игра специјална плоча за разделување на зрак со пречки, која ја насочува светлината во леќата. Тоа е проѕирно огледало кое селективно рефлектира и насочува дел од спектарот во леќата, што ја возбудува луминисценцијата и ја пренесува луминисценциската светлина во окуларот.
Оптиката на целите на флуоресцентниот микроскоп е направена од нелуминисцентни типови на оптичко стакло и залепена со специјално нелуминисцентно лепило. Кога работите со леќи за потопување во масло, се користи нелуминисцентно масло за потопување.
Бидејќи повеќето микроорганизми немаат своја луминисценција, постојат неколку начини да се обработат за набљудување во флуоресцентен микроскоп. Пред сè, ова е флуорохромирање - боење со високо разредени (до неколку микрограми/мл) раствори на флуоресцентни бои (флуорохроми). Во споредба со конвенционалната микроскопија, флуоресцентната микроскопија овозможува:
. комбинираат слики во боја и контраст на предмети;
. проучување на морфологијата на живите и мртвите клетки на микроорганизмите во хранлив медиуми ткива од животни и растенија;
. проучуваат клеточни микроструктури кои селективно апсорбираат различни флуорохроми, кои во исто време се специфични цитохемиски индикатори;
. утврдување на функционални и морфолошки промени во клетките;
. користат флуорохроми во имунолошки реакции и броење бактерии во примероци со мала содржина на бактерии.

6. Хофман контраст

Хофман контрастот (HC) е техника на косо осветлување што го зголемува контрастот кај обоените и необоени примероци со создавање на градиент на оптички фази. CC ви овозможува да набљудувате тродимензионални слики на живи примероци во пластични чаши со висока јасност, што обезбедува проширени можности за решавање на научни и специјални медицински проблеми. Поради употребата на големи работни растојанија и високи нумерички отвори, методот овозможува прецизно следење на движењето во видното поле, на пример, при изведување микроманипулации.

Други студии - како што се електрофизиологијата, асистираните репродуктивни технологии и ИВФ - бараат не само кондензатори, туку и леќи со подолго работно растојание. При проучување на дебели примероци, HC помага да се реши проблемот на слој-по-слој проучување на примерок со избирање на низа од фокални планови. Во исто време, секоја горна фокусна рамнина не носи информации за основната рамнина.
CC може да се користи на микроскоп со флуоресцентен илуминатор. Проучувањето на морфологијата со или без флуоресценција е можно без промена на леќите и примероците. Вреди да се истакне предноста на Хофман контрастот во споредба со Фазен контраст.
Познато е дека фазниот контраст се карактеризира со ефектот Хало - појава на прозрачна ореол долж контурата на сликата на објектот. Како резултат на тоа, може да изгубите важни информации. XK не обезбедува Halo, што го олеснува одредувањето на својствата на рабните структури, на пример, прецизно мерење агли или растојанија.

7. DIC (контраст на диференцијални пречки)

DIC (диференцијален интерферентен контраст) е одличен механизам за создавање контраст кај проѕирните препарати. DIC микроскопијата е систем за пречки со разделување на зракот во кој референтниот зрак се отклонува на мало растојание, обично помало од дијаметарот на кругот на дифракција.
Овој метод произведува монохроматска засенчена слика која го прикажува градиентот на оптичките патеки и на високите и на ниските просторни фреквенции присутни во примерокот.
Оние области на примерокот низ кои оптичките патеки се издолжуваат во однос на контролниот зрак изгледаат посветли или потемни, додека областите меѓу кои разликите се помали имаат спротивен контраст.
Колку е поостар градиентот на оптичките зраци, толку е поостар контрастот на сликата

Метод кој ви овозможува драматично да го зголемите контрастот на сликата на објектот. Принципот на методот е да се детектираат фазните поместувања во светлосните вибрации што се случуваат кога светлината минува низ структура која има индекс на прекршување што се разликува од индексот на прекршување на околниот медиум.

Фазните поместувања не се директно откриени од окото, туку во посебен микроскоп со фазен контраст, структури кои имаат повеќе висока стапкарефракциите (дури и целосно проѕирни) излегуваат потемни (или полесни во зависност од дизајнот на уредот) од околната позадина (Сл. 1.28).

Ориз. 1.28. Фотографија на амеба (фазна контрастна микроскопија)

Поларизациска микроскопија

Метод на набљудување во поларизирана светлина за проучување на препарати кои содржат оптички анизотропни елементи (или целосно се состојат од такви елементи). Тие вклучуваат многу минерали, зрна во тенки делови од легури, некои животински и растителни ткива итн.

Набљудувањето може да се изврши и во пренесената и во рефлектираната светлина (Сл. 1.29).

Ориз. 1.29. Кристали на натриум урати (Samaras N, Rossi C. N Engl J Med. 2012)

Ултравиолетова микроскопија

Методот се заснова на способноста на одредени супстанции селективно да апсорбираат ултравиолетови зраци со одредена бранова должина; фундаментално, речиси не се разликува од конвенционалната светлосна микроскопија и се изведува со помош на микроскопи со кварцна или рефлективна (огледало) оптика. Сликата се гледа визуелно на флуоресцентен екран и исто така е фотографирана. Микроскопијата на предмети ви овозможува да ги идентификувате супстанциите што се испитуваат без да користите боење.

Флуоресценција (луминисценција) микроскопијави овозможува да ја проучувате и внатрешната (примарна) флуоресценција на голем број супстанции и секундарната флуоресценција предизвикана од боење на клеточните структури со специјални бои - флуорохроми. Принципот на методот е дека некои супстанции самите почнуваат да светат кога се изложени на светлина.

За да се возбуди флуоресценцијата во видливиот дел од спектарот, обично се користат сина светлина или ултравиолетови зраци. Многу супстанции кои не флуоресцираат во видливиот регион (особено нуклеинските киселини) почнуваат да флуоресцираат кога се осветлени од ултравиолетовите зраци и може да се детектираат без употреба на флуорохроми (Сл. 1.30).

Ориз. 1.30. Процес на митоза (флуоресцентна микроскопија)

Метод на електронска микроскопија

Метод во кој се користи струја од електрони наместо светлина, стаклени леќизаменет со електромагнетни полиња, максимално зголемување 1,5 милиони пати. Не бара боење на препаратот. (1933 - Германија)

Употребата на електронска микроскопија во биологијата овозможи да се проучува ултрафината клеточна структура на компонентите на екстрацелуларното ткиво. Врз основа на резултатите добиени со овој метод (максимално зголемување до 800 - 1200 илјади), почнувајќи од 40-тите. беше опишана фината структура на мембраните, митохондриите, рибозомите и другите клеточни, како и екстрацелуларните структури, и беа идентификувани некои макромолекули, како што е ДНК.

Растер (скенирање) електронска микроскопијаовозможува да се проучува фината структура на површината на клетките и ткивните структури не само на фиксирани предмети, туку и на живи животни. Техниката на подготовка на биолошки препарати за електронска микроскопија вклучува процедури кои го зачувуваат ткивото во длабок вакуум под електронски зрак и постигнуваат висока резолуција. За да се зголеми контрастот во сликите на клетките, тие се третираат со „електронски бои“ кои силно ги расфрлаат електроните.

Употребата на електронска микроскопија во биологијата значително ги промени и ги продлабочи претходните идеи за тенка структураклетките (Сл. 1.31-1.34).

Ориз. 1.31. Слика на стафилококи со помош на растер електронски микроскоп

Ориз. 1.32. Електронски микроскоп

Ориз. 1.33. Уред за електронски микроскоп

Ориз. 1.34. Скенирање на електронски микроскоп Слика на Helicobacter

(Д-р Патриша Филдс, д-р Колет Фицџералд)

Метод на центрифугирање

Поделба на смесите во составни делови под влијание на центрифугална сила. Се користи за одвојување на клеточни органели, лесни и тешки фракции органска материјаитн додека забрзувањето е 300 пати поголемо од гравитацијата.

Центрифугата се користи за одвојување зрнести тела или течности со различна специфична тежина и одвојување течности од цврсти материисо употреба на центрифугална сила. Кога ротираат во центрифуга, честичките со најголема специфична тежина се наоѓаат на периферијата, а честичките со помала специфична тежина се поблиску до оската на ротација (Сл. 1.35).

Ориз. 1.35. Уред за центрифугирање