Azitromicin in klaritromicin, ki sta bolj učinkovita. Klacid ali azitromicin, kar je bolje. Sumamed ali klaritromicin, kar je bolje. Medsebojno delovanje z drugimi zdravili. Indikacije za uporabo
Diagram faznega kontrastnega mikroskopa.
1. Kondenzatorski obroč
2. Predmetna ravnina
3. Fazna plošča
4. Primarna slika.
Za razliko od referenčne svetlobe predmetna svetloba, razpršena na vzorcu v modro prikazanih območjih, obide fazno ploščo, zato je njena optična dolžina poti drugačna.
Fazno kontrastna mikroskopija- metoda pridobivanja slik v optičnih mikroskopih, pri kateri se fazni zamik elektromagnetnega valovanja pretvori v intenzitetni kontrast. Fazno kontrastno mikroskopijo je odkril Fritz Zernike, za kar je leta 1953 prejel Nobelovo nagrado.
Princip delovanja
Za pridobitev faznokontrastne slike se svetloba iz vira razdeli na dva koherentna svetlobna žarka, enega od njiju imenujemo referenčni žarek, drugega pa objektni žarek, ki potujeta po različnih optičnih poteh. Mikroskop je nastavljen tako, da se v goriščni ravnini, kjer nastane slika, interferenca med tema dvema žarkoma izniči.
Slika celice pod fazno kontrastnim mikroskopom
Dolžino optične poti spreminjamo s tako imenovano fazno ploščo (Angleščina) ruski , ki se nahaja na faznem obroču. Ko je vzorec na poti enega od žarkov, se zaradi loma svetlobe v njem spremeni optična pot in posledično faza, kar spremeni pogoje interference.
Faznokontrastna mikroskopija je še posebej priljubljena v biologiji, saj ne zahteva predhodnega obarvanja celice, ki lahko povzroči njeno odmiranje.
Zgodovina odkritja
Nizozemski fizik, matematik in kemik Fritz Zernike se je leta 1930 začel ukvarjati s področjem optike. Istega leta je odkril metodo faznega kontrasta. V 30. in 40. letih 20. stoletja je Zernike prispeval na drugih področjih optike, medtem ko metoda faznega kontrasta ni bila opažena v širšem krogu znanstvenikov. Nova metoda znanstvene skupnosti ni bilo vidno do druge svetovne vojne, ko je bilo Zernikejevo odkritje uporabljeno za izdelavo prvih faznokontrastnih mikroskopov med nemško okupacijo Nizozemske. Med vojno so številni proizvajalci začeli izdelovati fazno kontrastne mikroskope in začeli so jih široko uporabljati v bioloških in medicinskih raziskavah.
Povezave
Viri
Fundacija Wikimedia. 2010.
Oglejte si, kaj je "fazno kontrastna mikroskopija" v drugih slovarjih:
Glejte Mikroskopija s fazno kontrastnim mikroskopom. (Vir: “Dictionary of Microbiology Terms”) ... Mikrobiološki slovar
Metoda mikroskopskega pregleda, ki temelji na pridobivanju s pomočjo posebnih naprav kontrastne slike struktur brezbarvnih prozornih mikropredmetov z različno gostoto, na primer živih mikroorganizmov in tkiv ...
FAZNO KONTRASTNA MIKROSKOPIJA- fazno kontrastna mikroskopija, glej Mikroskop, Mikroskopska tehnika... Veterina enciklopedični slovar
fazno kontrastna optična mikroskopija- 4.34 fazno kontrastna optična mikroskopija: metoda mikroskopske analize, ki temelji na pretvorbi diferencialnih faznih premikov svetlobnih valov, ki prehajajo skozi vzorec, v razlike v amplitudah.… … Slovar-priročnik izrazov normativne in tehnične dokumentacije
M. živih nepobarvanih predmetov, pri katerih se kontrast slike poveča s pretvorbo faznih razlik žarka svetlobnih žarkov, ki prehaja skozi predmet, v amplitudo ... Velik medicinski slovar
Splošno ime za metode opazovanja neločljivih predmetov skozi mikroskop s človeškim očesom predmetov. Za več podrobnosti glej čl. (glej MIKROSKOP). Fizični enciklopedični slovar. M.: Sovjetska enciklopedija. Glavni urednik A. M. Prohorov. 1983 ... Fizična enciklopedija
Nabor metod za preučevanje majhnih predmetov z mikroskopi. Tradicionalne vrste M. vključujejo – luminescentne M. – ki temeljijo na pojavu fotoluminiscence, ki se pojavi pri barvanju pripravkov s posebnimi luminiscenčnimi barvili;… … Mikrobiološki slovar
Shema temnopoljske mikroskopije v vpadni svetlobi. Vzorec je osvetljen s strani (zelena črta). Sliko ustvari svetloba, razpršena na nehomogenosti vzorca. Mikroskopija temnega polja je vrsta optičnega ... Wikipedia
Metoda preučevanja predvsem živih objektov z nizkim kontrastom (praživali, bakterije, celice v kulturi) z anoptralnim mikroskopom (ki ga je leta 1953 izumil finski fiziolog A. Wilska), vrsta faznega kontrastnega mikroskopa ... Velika sovjetska enciklopedija
Metode preučevanja različnih predmetov z uporabo mikroskopa. V biologiji in medicini te metode omogočajo preučevanje strukture mikroskopskih predmetov, katerih dimenzije presegajo ločljivost človeškega očesa. Osnova M.m.i. znaša ... ... Medicinska enciklopedija
1. Svetlo polje
Metoda svetlega polja v prepustni svetlobi se uporablja pri proučevanju transparentnih preparatov, pri katerih različni deli strukture različno absorbirajo svetlobo (tanki barvni rezi živalskih in rastlinskih tkiv, tanki rezi mineralov itd.).
Žarki svetlobnega sistema gredo skozi preparat in lečo ter ustvarijo enakomerno osvetljeno polje v slikovni ravnini. Strukturni elementi zdravila delno absorbirajo in odvrnejo svetlobo, ki pada na njih, kar povzroči videz slike.
Metoda je lahko uporabna tudi pri opazovanju neabsorbcijskih predmetov, vendar le, če razpršijo svetlobni žarek tako močno, da njegov večji del ne pade v lečo.
Metoda svetlega polja v odbiti svetlobi se uporablja za opazovanje neprozornih predmetov, na primer jedkanih rezov kovin, bioloških tkiv in različnih mineralov. Preparat je osvetljen od zgoraj, skozi lečo, ki hkrati služi kot sistem osvetlitve.
Slika, tako kot pri prepustni svetlobi, nastane zaradi dejstva, da različna področja Preparati neenakomerno odbijajo svetlobo, ki pada nanje, odbiti žarki pa imajo različno jakost.
2. Temno polje
Temnopoljska mikroskopija temelji na sposobnosti mikroorganizmov, da močno sipajo svetlobo. Za mikroskopijo s temnim poljem se uporabljajo običajni objektivi in posebni kondenzatorji s temnim poljem.
Glavna značilnost kondenzatorjev temnega polja je, da osrednji del so zatemnjeni in neposredni žarki iz osvetljevalca ne dosežejo mikroskopske leče. Predmet osvetljujejo poševni stranski žarki in v mikroskopsko lečo pridejo le žarki, ki jih razpršijo delci v preparatu. Mikroskopija s temnim poljem temelji na Tyndallovem učinku, katerega znan primer je zaznavanje prašnih delcev v zraku, ko jih osvetli ozek snop sončne svetlobe.
Da bi preprečili, da bi neposredni žarki iz osvetljevalca vstopili v objektiv, mora biti odprtina leče manjša od odprtine kondenzorja. Za zmanjšanje zaslonke se v običajni objektiv vstavi diafragma ali pa se uporabljajo posebne leče, opremljene z diafragmo zaslonke.
Z mikroskopijo s temnim poljem so mikroorganizmi videti močno svetleči na črnem ozadju. S to metodo mikroskopiranja lahko zaznamo najmanjše mikroorganizme, katerih velikosti presegajo ločljivost mikroskopa. Vendar pa mikroskopija s temnim poljem omogoča ogled le obrisov predmeta, ne omogoča pa preučevanja notranje strukture. Z mikroskopijo s temnim poljem preučujemo pripravke tipa zdrobljene "kapljice". Predmetna stekelca naj ne bodo debelejša od 1,1-1,2 mm, pokrovna 0,17 mm, brez prask in umazanije.
Pri pripravi zdravila se morate izogibati prisotnosti mehurčkov in velikih delcev (te napake bodo vidne s svetlim sijajem in vam ne bodo omogočile opazovanja zdravila). Za temno polje se uporabljajo močnejši osvetljevalci in največja svetilnost.
Nastavitev osvetlitve temnega polja je v bistvu naslednja:
1) namestite luč po Koehlerju;
2) zamenjajte kondenzator svetlega polja s temnim poljem;
3) na zgornjo lečo kondenzorja se nanese potopno olje ali destilirana voda;
4) dvignite kondenzator, dokler ne pride v stik z spodnjo površino stekelce;
5) leča z majhno povečavo je fokusirana na preparat;
6) s pomočjo centrirnih vijakov se svetlobna točka (včasih s temnim osrednjim delom) prenese v sredino vidnega polja;
7) z dvigovanjem in spuščanjem kondenzorja zatemnjeno osrednje območje izgine in dobimo enakomerno osvetljeno svetlobo.
Če tega ni mogoče storiti, morate preveriti debelino stekelca (ta pojav običajno opazimo pri uporabi predebelih stekelc - svetlobni stožec je fokusiran v debelini stekla).
Po pravilne nastavitve S svetlobo namestite lečo potrebne povečave in preglejte preparat.
3. Polarizacija
Metoda raziskovanja polariziranega žarka se uporablja v prepuščeni in odbiti svetlobi za tako imenovane anizotropne objekte, ki imajo dvojni lom ali odboj.
Takšni predmeti so številni minerali, premog, nekatera živalska in rastlinska tkiva in celice, umetna in naravna vlakna. Pri proučevanju anizotropnih zdravil se običajnemu mikroskopskemu vezju pred svetlobnim sistemom doda polarizator, za lečo, ki sta med seboj v prekrižanem ali vzporednem položaju, pa analizator.
Ko sta polarizator in analizator prekrižana, so v temnem vidnem polju mikroskopa vidni temni, svetli ali barvni anizotropni elementi objekta. Videz teh elementov je odvisen od položaja predmeta glede na ravnino polarizacije in od velikosti dvolomnosti.
Natančnejša določitev optičnih podatkov objekta se izvede z različnimi kompenzatorji (fiksne kristalne plošče, premični klini in plošče).
4. Fazni kontrast
Pri mikroskopiranju neobarvanih mikroorganizmov, razen okolju samo glede na lomni količnik, ne pride do spremembe svetlobne jakosti (amplitude), spremeni se le faza prepuščenega svetlobnega valovanja. Zato oko teh sprememb ne more opaziti in opazovani predmeti so videti nizkokontrastni in prozorni.
Za opazovanje takšnih objektov se uporablja fazno-kontrastna mikroskopija, ki temelji na transformaciji nevidnih faznih sprememb, ki jih vnese objekt, v očesu vidne amplitudne spremembe.
Naprava za fazni kontrast se lahko namesti na katerikoli svetlobni mikroskop in je sestavljena iz:
1) komplet leč s posebnimi faznimi ploščami;
2) kondenzator z vrtljivim diskom. Vsebuje obročaste diafragme, ki ustrezajo faznim ploščam v vsaki od leč;
3) pomožni teleskop za nastavitev faznega kontrasta.
Nastavitev faznega kontrasta je naslednja:
1) zamenjajte leče in kondenzor mikroskopa s faznimi (označeni s črkami Ph);
2) namestite lečo z majhno povečavo. Luknja v kolutu kondenzatorja mora biti brez obročaste membrane (označena s številko "0");
3) prilagodite svetlobo po Koehlerju;
4) izbrati fazno lečo ustrezne povečave in jo izostriti na preparat;
5) zavrtite kondenzatorski disk in namestite obročasto diafragmo, ki ustreza leči;
6) odstranite okular iz cevi in na njegovo mesto vstavite pomožni teleskop. Nastavite ga tako, da sta fazna plošča (v obliki temnega obroča) in obročasta membrana (v obliki svetlega obroča enakega premera) jasno vidni. S pomočjo nastavitvenih vijakov na kondenzatorju so ti obroči poravnani. Odstranite pomožni teleskop in ponovno namestite okular.
Zahvaljujoč uporabi te metode mikroskopije se kontrast živih neobarvanih mikroorganizmov močno poveča in so videti temni na svetlem ozadju (pozitivni fazni kontrast) ali svetli na temnem ozadju (negativni fazni kontrast).
Fazno-kontrastna mikroskopija se uporablja tudi za preučevanje celic tkivne kulture, opazovanje delovanja različnih virusov na celice itd. V teh primerih se pogosto uporabljajo biološki mikroskopi z reverzno optiko - invertni mikroskopi. V takih mikroskopih so objektivi nameščeni na dnu, kondenzor pa na vrhu.
5. Fluorescenca (luminiscenca)
Fluorescenčna (luminiscentna) mikroskopija temelji na sposobnosti nekaterih snovi, da luminiscencirajo, to je, da svetijo, če so osvetljene z nevidno ultravijolično ali modro svetlobo. Barva luminiscence je premaknjena na del spektra z daljšo valovno dolžino v primerjavi s svetlobo, ki jo vzbuja (Stokesovo pravilo).
Ko luminescenco vzbuja modra svetloba, lahko njena barva sega od zelene do rdeče, če je luminescenca vzbujena ultravijolično sevanje, potem je lahko sij v kateremkoli delu vidnega spektra. Ta lastnost luminescence omogoča opazovanje razmeroma šibkega luminiscenčnega sijaja z uporabo posebnih filtrov, ki absorbirajo vznemirljivo svetlobo.
Zgradba fluorescenčnega mikroskopa in pravila za delo z njim se razlikujejo od običajnega svetlobnega mikroskopa predvsem v naslednjem:
1. Prisotnost močnega svetlobnega vira v osvetljevalniku, ki oddaja pretežno v kratkovalovnem (ultravijoličnem, modrem) delu spektra (živosrebrna kvarčna sijalka ali halogenska kvarčna sijalka).
2. Razpoložljivost filtrirnega sistema:
. vzbujajoči svetlobni filtri prepuščajo le tisti del spektra, ki vzbuja luminiscenco;
. toplotno zaščitni svetlobni filter ščiti druge svetlobne filtre, preparat in optiko fluorescenčnega mikroskopa pred pregrevanjem;
. "locking" filtri se nahajajo med okularjem. Ti filtri absorbirajo vznemirljivo sevanje in prenašajo luminiscenčno svetlobo od zdravila do očesa opazovalca.
Metoda osvetljevanja preparatov za vzbujanje luminescence je, da se preparat osvetli s svetlobo, ki vpada nanj skozi lečo. Zaradi tega se osvetlitev poveča pri uporabi objektov z veliko numerično aperturo, torej tistih, ki se uporabljajo za preučevanje mikroorganizmov.
Pomembno vlogo pri tem načinu osvetljevanja ima posebna interferenčna plošča za delitev snopa, ki usmeri svetlobo v lečo. Je prosojno zrcalo, ki selektivno odbije in usmeri del spektra v lečo, ki vzbuja luminiscenco, in prepušča luminiscenčno svetlobo v okular.
Optika fluorescenčnih mikroskopskih objektivov je izdelana iz neluminiscenčnih vrst optičnega stekla in zlepljena s posebnim neluminiscentnim lepilom. Pri delu z oljnimi imerzijskimi lečami se uporablja nesvetleče imerzijsko olje.
Ker večina mikroorganizmov nima lastne luminescence, obstaja več načinov, kako jih obdelati za opazovanje v fluorescenčnem mikroskopu. Najprej je to fluorokromiranje - barvanje z močno razredčenimi (do nekaj mikrogramov/ml) raztopinami fluorescenčnih barvil (fluorokromov). V primerjavi s konvencionalno mikroskopijo fluorescenčna mikroskopija omogoča:
. kombinirati barvne slike in kontrast predmetov;
. proučuje morfologijo živih in odmrlih celic mikroorganizmov v hranilni mediji ter tkiva živali in rastlin;
. proučevanje celičnih mikrostruktur, ki selektivno absorbirajo različne fluorokrome, ki so hkrati specifični citokemični indikatorji;
. ugotavljanje funkcionalnih in morfoloških sprememb v celicah;
. uporaba fluorokromov pri imunoloških reakcijah in štetje bakterij v vzorcih z nizko vsebnostjo bakterij.
6. Hoffmanov kontrast
Hoffmanov kontrast (HC) je tehnika poševne osvetlitve, ki poveča kontrast v obarvanih in neobarvanih vzorcih z ustvarjanjem gradienta optičnih faz. CC vam omogoča opazovanje tridimenzionalnih slik živih vzorcev v plastičnih kozarcih z visoko jasnostjo, kar zagotavlja razširjene možnosti za reševanje znanstvenih in posebnih medicinskih problemov. Zaradi uporabe velikih delovnih razdalj in visokih numeričnih apertur metoda omogoča natančno sledenje gibanja v vidnem polju, na primer pri izvajanju mikromanipulacij.
Druge študije - kot so elektrofiziologija, tehnologije asistirane reprodukcije in IVF - ne zahtevajo le kondenzatorjev, ampak tudi leče z daljšo delovno razdaljo. Pri preučevanju debelih vzorcev HC pomaga rešiti problem študije vzorca po plasteh z izbiro zaporedja žariščnih načrtov. Hkrati pa vsaka zgornja goriščna ravnina ne nosi informacij o spodnji ravnini.
CC se lahko uporablja na mikroskopu s fluorescentnim osvetljevalcem. Preučevanje morfologije s fluorescenco ali brez nje je možno brez menjave leč in vzorcev. Omeniti velja prednost Hoffmanovega kontrasta v primerjavi s faznim kontrastom.
Znano je, da je za fazni kontrast značilen Halo učinek - pojav svetlečega haloja vzdolž obrisa slike predmeta. Posledično lahko izgubite pomembne informacije. XK ne ponuja Halo, ki olajša določanje lastnosti robnih struktur, na primer natančno merjenje kotov ali razdalj.
7. DIC (diferencialni interferenčni kontrast)
DIC (diferencialni interferenčni kontrast) je odličen mehanizem za ustvarjanje kontrasta v transparentnih preparatih. DIC mikroskopija je interferenčni sistem z delitvijo žarka, pri katerem je referenčni žarek odklonjen na majhno razdaljo, običajno manjšo od premera uklonskega kroga.
Ta metoda ustvari monokromatsko zasenčeno sliko, ki prikazuje gradient optičnih poti visokih in nizkih prostorskih frekvenc, prisotnih v vzorcu.
Tista področja preparata, skozi katera se optične poti podaljšujejo glede na kontrolni žarek, so videti svetlejša ali temnejša, medtem ko imajo področja, med katerimi so razlike manjše, nasprotni kontrast.
Čim strmejši postaja gradient optičnih žarkov, ostrejši je kontrast slike
Metoda, ki vam omogoča dramatično povečanje kontrasta slike predmeta. Načelo metode je zaznati fazne premike v svetlobnih vibracijah, ki nastanejo, ko svetloba prehaja skozi strukturo, ki ima lomni količnik, ki se razlikuje od lomnega količnika okoliškega medija.
Faznih premikov oko ne zazna neposredno, ampak v posebnem fazno-kontrastnem mikroskopu strukture, ki imajo več visoka stopnja lomi (tudi popolnoma prozorni) se izkažejo za temnejše (ali svetlejše, odvisno od zasnove naprave) od okoliškega ozadja (slika 1.28).
riž. 1.28. Fotografija amebe (fazno kontrastna mikroskopija)
Polarizacijska mikroskopija
Metoda opazovanja v polarizirani svetlobi za preučevanje pripravkov, ki vsebujejo optično anizotropne elemente (ali so v celoti sestavljeni iz takih elementov). Sem spadajo številni minerali, zrna v tankih rezih zlitin, nekatera živalska in rastlinska tkiva itd.
Opazovanje lahko izvajamo v prepuščeni in odbiti svetlobi (slika 1.29).
riž. 1.29. Kristali natrijevega urata (Samaras N, Rossi C. N Engl J Med. 2012)
Ultravijolična mikroskopija
Metoda temelji na sposobnosti določenih snovi, da selektivno absorbirajo ultravijolične žarke z določeno valovno dolžino, v osnovi se skoraj ne razlikuje od običajne svetlobne mikroskopije in se izvaja z mikroskopi s kvarčno ali odbojno (zrcalno) optiko. Slika se vizualno gleda na fluorescenčnem zaslonu in se tudi fotografira. Mikroskopija predmetov vam omogoča identifikacijo preučevanih snovi brez uporabe barvanja.
Fluorescenčna (luminiscenčna) mikroskopija vam omogoča preučevanje tako lastne (primarne) fluorescence številnih snovi kot sekundarne fluorescence, ki jo povzroča obarvanje celičnih struktur s posebnimi barvili - fluorokromi. Načelo metode je, da nekatere snovi same začnejo svetiti, ko so izpostavljene svetlobi.
Za vzbujanje fluorescence v vidnem delu spektra se običajno uporablja modra svetloba ali ultravijolični žarki. Številne snovi, ki ne fluorescirajo v vidnem območju (zlasti nukleinske kisline), začnejo fluorescirati, ko so osvetljene z ultravijoličnimi žarki in jih je mogoče zaznati brez uporabe fluorokromov. (slika 1.30).
riž. 1.30. Proces mitoze (fluorescenčna mikroskopija)
Metoda elektronske mikroskopije
Metoda, pri kateri se namesto svetlobe uporablja tok elektronov, steklene leče nadomestijo elektromagnetna polja, največja povečava 1,5 milijonkrat. Ne zahteva barvanja pripravka. (1933 - Nemčija)
Uporaba elektronske mikroskopije v biologiji je omogočila preučevanje ultrafine celične strukture komponent zunajceličnih tkiv. Na podlagi rezultatov, pridobljenih s to metodo (največja povečava do 800 - 1200 tisoč), začenši s 40. opisana je bila fina struktura membran, mitohondrijev, ribosomov in drugih celičnih ter zunajceličnih struktur in identificiranih je bilo nekaj makromolekul, kot je DNA.
Raster (skeniranje) elektronska mikroskopija omogoča preučevanje fine strukture površine celic in tkivnih struktur ne samo fiksnih predmetov, ampak tudi živih živali. Tehnika priprave bioloških preparatov za elektronsko mikroskopijo vključuje postopke, s katerimi ohranimo tkivo v globokem vakuumu pod elektronskim žarkom in dosežemo visoko ločljivost. Da bi povečali kontrast na slikah celic, jih obdelamo z »elektronskimi barvili«, ki močno razpršijo elektrone.
Uporaba elektronske mikroskopije v biologiji je bistveno spremenila in poglobila prejšnje predstave o tanka struktura celice (Sl. 1.31-1.34).
riž. 1.31. Slika stafilokokov z uporabo rastra elektronski mikroskop
riž. 1.32. Elektronski mikroskop
riž. 1.33. Naprava za elektronski mikroskop
riž. 1.34. Slika Helicobacter z vrstičnim elektronskim mikroskopom
(dr. Patricia Fields, dr. Collette Fitzgerald)
Metoda centrifugiranja
Ločevanje zmesi na sestavne dele pod vplivom centrifugalne sile. Uporablja se za ločevanje celičnih organelov, lahkih in težkih frakcij organska snov itd. medtem ko je pospešek 300-krat večji od gravitacije.
Centrifuga se uporablja za ločevanje zrnatih teles ali tekočin različnih specifičnih tež in ločevanje tekočin iz trdne snovi z uporabo centrifugalne sile. Pri vrtenju v centrifugi se delci z največjo specifično težo nahajajo na obodu, delci z manjšo specifično težo pa bližje osi vrtenja. (slika 1.35).
riž. 1.35. Naprava za centrifugiranje