Ifa kabuuang sa. KUNG pagsusuri ng dugo. ELISA para sa syphilis: diskarte sa pagsusuri, interpretasyon, mga sanhi ng maling positibong resulta

Samoilikov Pavel Vladimirovich Intern ng Department of Clinical Laboratory Diagnostics

Russian State Medical University

Ang mga pamamaraan ng immunoassay ay malawakang kasama sa medikal na kasanayan. Sa lahat ng lugar makabagong gamot ginamit immune assay, pangunahin para sa diagnostic at analytical na layunin. Ito ay lalong mahalaga na ginagawa nilang posible na makilala ang mga biological na bahagi (mga hormone, enzymes, neuropeptides, mga produkto ng immune system, antigens, atbp.) sa mababa at napakababang konsentrasyon. Ang lahat ng mga produkto laban sa kung saan posible na makakuha ng mga antibodies ay nakita ng mga pamamaraang ito.

Ang pagsusuri sa immune ay batay sa pakikipag-ugnayan ng isang antigen (AG) at isang antibody (AT) gamit ang iba't ibang opsyon sa pag-label para sa isa sa mga bahagi (enzyme, radionuclide, fluorescent dye, at iba pa). Ang pagsusuri ng reaksyon ay awtomatikong isinasagawa sa mga espesyal na kagamitan, na ginagawang posible na i-standardize ang mga pamamaraang ito.

Depende sa uri ng label na ginamit at mga kondisyon para sa pag-set up ng pagsubok, ang immunoassay ay tinutukoy bilang enzyme immunoassay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), immunofluorescent at iba pa. Kapag ang mga reaksyon ay itinanghal sa isa o higit pang mga yugto, sila ay itinalaga bilang direkta o hindi direkta. Mahalaga ang daluyan kung saan isinasagawa ang reaksyon. Kung ang reaksyon ay isinasagawa gamit ang mga reagents na naayos sa ibabaw, ang pagsubok ay itinalaga bilang isang solid-phase test, halimbawa, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).

Sa papel na ito, tanging enzyme immunoassay ang isasaalang-alang - isang paraan na malawakang ginagamit sa biology at medisina, parehong praktikal at pundamental.

Ang ELISA ay lumitaw noong kalagitnaan ng 60s at orihinal na binuo bilang isang paraan para sa pagtukoy ng isang antigen sa paghahanda sa histological, pati na rin para sa visualization ng mga linya ng pag-ulan sa pagsubok ng immunodiffusion at immunoelectrophoresis, at pagkatapos ay nagsimulang gamitin para sa dami ng pagpapasiya ng mga antigen at antibodies sa mga biyolohikal na likido. Nakibahagi sina E. Engvall at R. Pelman sa pagbuo ng pamamaraan, gayundin, nang nakapag-iisa sa kanila, sina W. Van Veeman at R. Schurs.

Larawan 1. Pangunahing prinsipyo ng ELISA.

1) Upang makita ang mga antigen. 2) Upang makita ang mga antibodies.

Ang pamamaraan ay batay sa tiyak na pagbubuklod ng isang antibody sa isang antigen, habang ang isa sa mga sangkap ay pinagsama sa isang enzyme; bilang isang resulta ng reaksyon sa kaukulang chromogenic substrate, isang kulay na produkto ang nabuo, ang halaga nito ay maaaring tinutukoy spectrophotometrically (Larawan 1).

Ang pagtuklas ng posibilidad ng antigen at antibody immobilization sa iba't ibang mga carrier habang pinapanatili ang kanilang aktibidad na nagbubuklod ay naging posible upang mapalawak ang paggamit ng ELISA sa iba't ibang larangan ng biology at medisina.

Ang hitsura ng mga monoclonal antibodies ay nagsilbi bilang isang karagdagang pag-unlad ng ELISA, na naging posible upang madagdagan ang pagiging sensitibo, pagtitiyak at muling paggawa ng mga resulta.

Sa teorya, ang ELISA ay batay sa data ng modernong immunochemistry at chemical enzymology, kaalaman sa mga batas ng physicochemical ng reaksyon ng antigen-antibody, pati na rin sa mga pangunahing prinsipyo ng analytical chemistry. Ang sensitivity ng ELISA at ang tagal nito ay tinutukoy ng ilang pangunahing mga kadahilanan: ang kinetic at thermodynamic na mga katangian ng reaksyon ng antigen-antibody, ang ratio ng mga reagents, aktibidad ng enzyme, at ang paglutas ng mga pamamaraan ng pagtuklas nito. SA pangkalahatang pananaw Ang reaksyon ng antigen-antibody ay maaaring ilarawan sa isang simpleng paraan:

+[AG]↔[ATAG]

Ang iba't ibang mga bagay sa pananaliksik mula sa mababang molekular na timbang na mga compound hanggang sa mga virus at bakterya, pati na rin ang isang hindi pangkaraniwang malawak na hanay ng mga gawain na nauugnay sa iba't ibang mga kondisyon para sa paggamit ng ELISA, ay tumutukoy sa pagbuo ng isang labis na isang malaking bilang mga variant ng pamamaraang ito.

Ang anumang variant ng ELISA ay naglalaman ng 3 mandatoryong yugto:

1. ang yugto ng pagkilala sa compound ng pagsubok ng isang antibody na tiyak dito, na humahantong sa pagbuo ng isang immune complex;

2. ang yugto ng pagbuo ng koneksyon ng conjugate sa immune complex o libreng mga site na nagbubuklod;

3. ang yugto ng pag-convert ng label ng enzyme sa isang rehistradong signal.

Ang pag-uuri ng mga pamamaraan ng ELISA ay batay sa ilang mga diskarte:

1. Ayon sa uri ng mga reagents na naroroon sa unang yugto ng ELISA, ang mapagkumpitensya at hindi mapagkumpitensyang mga pamamaraan ay nakikilala.

A) Sa mapagkumpitensyang ELISA, sa unang yugto, ang system ay naglalaman ng parehong nasuri na tambalan at ang analog nito, na may label na enzyme at nakikipagkumpitensya para sa mga partikular na lugar na nagbubuklod dito.

B) Para sa mga pamamaraan na hindi mapagkumpitensya, ang presensya sa system sa unang yugto lamang ng nasuri na tambalan at mga nagbubuklod na sentro na tiyak dito ay katangian.

2. Ang lahat ng pamamaraan ng ELISA ay nahahati sa homogenous at heterogenous.

Kung ang lahat ng tatlong yugto ng ELISA ay isinasagawa sa solusyon at sa pagitan ng mga pangunahing yugto ay walang karagdagang mga yugto ng paghihiwalay ng nabuo na mga immune complex mula sa hindi na-react na mga bahagi, ang pamamaraan ay kabilang sa pangkat ng mga homogenous.

Ang batayan ng homogenous na ELISA, na kadalasang ginagamit upang matukoy ang mababang molekular na timbang na mga sangkap, ay ang pagsugpo sa aktibidad ng enzyme kapag ito ay pinagsama sa isang antigen o antibody. Ang aktibidad ng enzyme ay naibalik bilang resulta ng reaksyon ng antigen-antibody.

Kapag ang isang antibody ay nagbubuklod sa isang antigen na naglalaman ng isang label ng enzyme, ang aktibidad ng enzyme ay hinahadlangan ng 95% na may paggalang sa isang mataas na molekular na timbang na substrate, na dahil sa steric na pagbubukod ng substrate mula sa aktibong sentro ng enzyme. Habang tumataas ang konsentrasyon ng antigen, mas maraming antibodies ang nagbubuklod at mas maraming libreng antigen-enzyme conjugates ang nananatili na maaaring mag-hydrolyze sa mataas na molekular na substrate. Ang pagsusuri ay isinasagawa nang napakabilis, 1 minuto ang kinakailangan para sa isang pagpapasiya. Ang sensitivity ng pamamaraan ay medyo mataas. Gamit ito, maaari mong matukoy ang sangkap sa antas ng picomoles.

Para sa mga heterogenous na pamamaraan, tipikal na magsagawa ng pagsusuri sa isang two-phase system na may partisipasyon ng isang solidong phase - isang carrier, at isang obligadong yugto ng paghihiwalay ng mga immune complex mula sa mga unreacted na bahagi (paghuhugas), na nasa iba't ibang yugto(Ang mga nabuong immune complex ay nasa solid phase, at ang mga unreacted complex ay nasa solusyon). Ang mga heterogenous na pamamaraan, kung saan ang pagbuo ng mga immune complex sa unang yugto ay nagpapatuloy sa solid phase, ay tinatawag na solid-phase na mga pamamaraan.

Ang mga pamamaraan ay inuri bilang homogeneous-heterogeneous, kung ang 1st stage - ang pagbuo ng mga tiyak na complexes ay nangyayari sa solusyon, at pagkatapos ay isang solid phase na may isang immobilized reagent ay ginagamit upang paghiwalayin ang mga bahagi.

3. Ayon sa prinsipyo ng pagtukoy sa sangkap ng pagsubok:

A) Direktang pagtukoy ng konsentrasyon ng isang sangkap (antigen o antibody) sa pamamagitan ng bilang ng mga nagbubuklod na sentro na nakikipag-ugnayan dito. Sa kasong ito, ang label ng enzyme ay nasa resultang partikular na AG-AT complex. Ang konsentrasyon ng analyte ay direktang proporsyonal sa nakarehistrong signal.

B) Pagpapasiya ng konsentrasyon ng isang sangkap sa pamamagitan ng pagkakaiba kabuuang bilang umiiral na mga site at natitirang libreng umiiral na mga site. Sa kasong ito, ang konsentrasyon ng analyte ay tataas, at ang naitala na signal ay bababa, samakatuwid, sa kasong ito, mayroong isang kabaligtaran na pag-asa sa magnitude ng naitala na signal.

Mga enzyme.

Ang mga label ng enzyme ay may napakalakas na catalytic effect; ang isang molekula ng enzyme ay maaaring tumugon sa isang malaking bilang ng mga molekula ng substrate. Kaya, ang isang enzyme na naroroon sa hindi gaanong halaga ay maaaring makita at ma-quantify sa pamamagitan ng pagbuo ng mga produkto, ang reaksyon na ito ay catalyzes. Ang isa pang bentahe ng paggamit ng mga enzyme bilang mga label ay dahil sa presensya sa molekula ng maraming mga functional na grupo (sulfhydryl, carboxyl, tyrazine residues, atbp.), Kung saan ang mga molekula ng ligand ay maaaring magkabit ng covalently.

Ang mga enzymatic marker na ginagamit sa ELISA ay dapat magkaroon ng mga sumusunod na katangian:

– mataas na aktibidad at katatagan ng enzyme sa ilalim ng mga kondisyon ng pagsusuri, sa panahon ng pagbabago at sa conjugate na may mga antibodies o iba pang mga protina;

- ang pagkakaroon ng mga sensitibong substrate at ang pagiging simple ng pamamaraan para sa pagtukoy ng mga produkto o substrate ng reaksyon ng enzymatic;

- posibilidad ng pagbagay ng mga sistema ng substrate sa higit pang pagpapalakas;

- ang kawalan ng enzyme at ang mga inhibitor nito sa pinag-aralan na biological fluid.

Ang ELISA ay maaaring gumamit ng hindi bababa sa 15 iba't ibang mga enzyme. Pinakamahusay na Application, alinsunod sa mga kinakailangan sa itaas, natagpuan ang malunggay peroxidase (HRP), alkaline phosphatase (AP) at β-D-galactosidase (talahanayan 1). Ang lahat ng tatlo ay matatag at pinapagana ang mga sensitibong reaksyon. Bilang karagdagan, ang mga produktong nakuha bilang isang resulta ng mga reaksyon na na-catalyze ng mga enzyme na ito, depende sa substrate na ginamit, ay maaaring makita hindi lamang sa pamamagitan ng mga colorimetric na pamamaraan, kundi pati na rin mga pamamaraan ng fluorescent. Ang iba pang mga enzyme ay hindi gaanong ginagamit. Ito ay ipinaliwanag ng kanilang mas mababang partikular na aktibidad kumpara sa HRP at AP.

Mga substrate.

Ang pagpili ng substrate ay pangunahing tinutukoy ng enzyme na ginamit bilang isang label, dahil ang reaksyon ng enzyme-substrate ay lubos na tiyak.

Mga pangunahing kinakailangan para sa substrate:

– tinitiyak ang mataas na sensitivity ng pamamaraan sa pagtuklas ng enzyme sa conjugate;

- pagbuo ng mahusay na tinukoy (halimbawa, may kulay) na mga produkto ng reaksyon ng enzyme-substrate;

– ang substrate ay dapat na ligtas, mura, naa-access at maginhawang gamitin.

Talahanayan 1.

Ang mga enzyme at ang kanilang mga substrate ay ang pinakamalawak na ginagamit sa ELISA.

Mas madalas, ginagamit ang mga chromogenic substrates, na, kapag nawasak, ay bumubuo ng isang kulay na sangkap. Ang promising ay ang paggamit ng mga high-energy substrates - fluorescent, chemiluminescent. Ang paggamit ng naturang mga substrate ay ginagawang posible na theoretically upang madagdagan ang sensitivity ng ELISA sa pamamagitan ng dalawang mga order ng magnitude.

Mga antigen at antibodies.

Ang AG at AT na ginagamit sa ELISA ay dapat na napakadalisay at lubos na aktibo. Bilang karagdagan, ang AG ay dapat magkaroon ng mataas na antigenicity, pinakamainam na density at bilang ng mga antigenic determinants, foreignness at homogeneity. Maraming synthetic at recombinant na antigens ng mga virus at bacteria ang napatunayang mabuti kapag ginamit sa ELISA. Ito ay makabuluhang nadagdagan ang pagtitiyak at muling paggawa ng pamamaraan sa pamamagitan ng pagliit ng mga cross-reaksyon.

Ang isa sa pinakamahalagang reagents sa ELISA ay mga antibodies. Ang pagiging sensitibo ng ELISA ay nakasalalay sa konsentrasyon, aktibidad at pagtitiyak ng mga antibodies na ginamit. Ang mga antibodies na ginamit ay maaaring poly- o monoclinal, ng iba't ibang klase (IgG o IgM) at subclass (IgGl, IgG2), anti-allotypic o anti-idiotypic. Sa mababang AT affinity, ang pagkasira ng AG-AT complex ay humahantong sa pag-alis ng nakatali na AG mula sa system. Ang sensitivity at pagtitiyak ng pamamaraan ay pinahusay ng paggamit ng mga monoclonal antibodies. Sa kasong ito, nagiging posible na makita ang mababang konsentrasyon ng AG (AT) sa mga sample ng pagsubok.

Pagbubuo ng conjugate

Ang conjugate ay isang antigen o antibody na may label na enzyme label. Ang pagbuo ng conjugate ay isa sa mahahalagang hakbang sa ELISA.

Kapag bumubuo ng isang conjugate, tulad ng isang pinakamahusay na paraan pagpapakilala ng label ng enzyme upang ang parehong mga bahagi ng conjugate ay mapanatili ang kanilang biological na aktibidad: ang enzyme - ang kakayahang makipag-ugnayan sa substrate, at ang antigen o antibody - antigenicity at antigen-binding na aktibidad, ayon sa pagkakabanggit. Ang pagkakaroon ng may label, mataas na purified antigen ay nagpapahintulot sa paggamit ng mga mapagkumpitensyang pamamaraan. Sa kasong ito, ang aktibidad ng conjugate na hindi nakatali sa mga immobilized antibodies ay maaaring masukat sa huling yugto, na iniiwasan ang pamamaraan ng paghuhugas at ginagawang mas maginhawa ang pagsusuri. Gayunpaman, ang mga antigen ay magkakaiba sa kanilang mga katangian ng physicochemical at istraktura, na nangangahulugang imposibleng bumuo mga unibersal na pamamaraan upang makakuha ng isang conjugate na may antigen. Sa kasong ito, ang pagkuha ng antigen-enzyme conjugate ay isang hiwalay na hamon. Ang paghahanda ng mga may label na antibodies para sa ELISA ay mas naa-access sa pamamaraan.

Ang conjugation ng isang enzyme na may immunochemically active proteins ay isinasagawa sa pamamagitan ng iba't ibang paraan: chemical cross-linking, covalent binding ng isang enzyme molecule sa isang AG o AT, at pagbuo ng mga compound sa pamamagitan ng non-covalent bond, halimbawa, kapag ang koneksyon sa pagitan ng enzyme at AG o AT ay isinasagawa sa immunologically, sa pamamagitan ng antigen-antibody interaction.

Ang pinakakaraniwang ginagamit na mga pamamaraan ng covalent para sa paghahanda ng mga conjugates. Ang pagpili ng nagbubuklod na reaksyon ay tinutukoy ng uri ng mga functional na grupo na magagamit sa mga molekulang protina na ito. Ang glutaraldehyde, sodium periodate, atbp. ay ginagamit bilang mga reagents na ginagamit upang ipasok ang enzyme sa mga molekula ng antigen at antibody.

Mayroong isang hakbang at dalawang hakbang na pamamaraan para sa pagkuha ng mga conjugates gamit ang glutaraldehyde. Ang mga conjugates ng iba't ibang laki na may pinababang aktibidad ng enzymatic (15 - 60% ng libreng enzyme) ay maaaring mabuo. Ang resultang conjugate malalaking sukat maaaring makahadlang sa pagtukoy ng sangkap ng pagsubok. Ang medyo mababang molecular weight conjugates ay binubuo ng isang Fab fragment at isang enzyme molecule.

Bilang resulta ng isang dalawang-yugtong synthesis, na binubuo sa yugto-yugtong paghahanda ng isang enzyme na unang binago ng isang cross-linking agent, ang paghihiwalay nito, at pagkatapos ay ang kasunod na pakikipag-ugnayan nito sa isang antigen (antibody), mga molekula ng isang Ang homogenous na komposisyon ay nabuo na naglalaman ng 1-2 enzyme molecule bawat immunoglobulin molecule at pinapanatili ang isang mataas na enzymatic at immunological na aktibidad. Gayunpaman, ang dami ng naturang conjugates na nabuo ay maliit (para sa malunggay peroxidase ito ay 5-10%).

Ang paraan ng pagkuha ng immunoperoxidase conjugates, batay sa oksihenasyon ng carbohydrate component ng enzyme na may sodium periodate (ang pagbubuklod ng peroxidase sa conjugate ay umabot sa 70-90% ng paunang halaga ng enzyme), ay natagpuan ang pinakamalaking praktikal na aplikasyon.

Ang isang maaasahang conjugate ay dapat magkaroon ng mga sumusunod na katangian:

Mataas na antibody tigre at mataas na pagkakaugnay para sa antigen upang magamit ito sa mataas na pagbabanto at sa gayon ay mabawasan ang hindi tiyak na pagbubuklod;

Sapat na pagtitiyak sa nagtatrabaho pag-aanak;

Ang pamamayani ng mga monomeric na anyo sa mga polymeric, dahil ang mga polymeric form ay may posibilidad na sumunod sa hindi partikular sa plastic, na nagreresulta sa isang mataas na antas ng background ng reaksyon;

Ang pinakamainam na molar ratio sa pagitan ng enzyme at antibodies (ang pinakamainam na ratio ay tungkol sa 1:1);

Sapat na aktibidad ng enzymatic ng conjugate. Ang pag-aari na ito ay pangunahing tinutukoy ng mga kondisyon ng conjugation at ang ratio ng mga molekula ng enzyme at antibody sa conjugate.

solidong yugto

Ang iba't ibang mga materyales ay maaaring gamitin bilang isang solidong bahagi para sa ELISA: polystyrene, polyvinyl chloride, polypropylene at iba pang mga sangkap. Ang solid phase ay maaaring ang mga dingding ng isang test tube, 96-well at iba pang mga plato, bola, kuwintas, pati na rin ang nitrocellulose at iba pang mga lamad na aktibong sumisipsip ng mga protina.

Ang immobilization ng antigen o antibodies sa solid phase ay posible sa tatlong paraan:

– passive adsorption batay sa malakas na hydrophobic na pakikipag-ugnayan sa pagitan ng mga protina at isang sintetikong ibabaw;

– covalent attachment sa solid phase;

– immunochemical, atbp. (non-covalent at non-adsorption attachment).

Ang passive adsorption ng mga protina ay malawakang ginagamit kapag nagsasagawa ng ELISA sa titration boards, sa nitrocellulose membranes. Ang passive adsorption ay sumusunod sa prinsipyo ng saturation at nauugnay sa molecular weight ng adsorbed substance. Ang ibabaw ng adsorption ng mga lamad ng iba't ibang uri (nitrocellulose, nylon, atbp.) ay 100-1000 beses na mas mataas kaysa sa plastic.

Ang mga polysaccharides at highly glycosylated na protina ay kadalasang may mababang pagkakaugnay para sa polystyrene. Ang iba pang mga pamamaraan ay kinakailangan upang i-immobilize ang mga ito, tulad ng covalent attachment sa glutaraldehyde. Ang covalent attachment ay epektibo kung ang hydrophilic beads (agarose) at polystyrene beads ay ginagamit bilang solid phase.

Ang mga pamamaraan ng immunochemical ay batay sa paggamit ng mga pre-adsorbed na "trap" na antibodies upang i-immobilize ang antigen o antibodies. Ang immunochemically immobilized antigen ay 10 beses na mas aktibo kaysa sa passively adsorbed antigen. Maaaring gamitin ang mga lectins o immunoglobulin-binding proteins ng bacteria na madaling ma-adsorb sa plastic o iba pang hydrophobic surface, gaya ng concanavalin A (Con A) o staphylococcal protein A. Nagagawa ng Con A na i-immobilize ang gp 120 protein ng HIV virus.

Maaaring ayusin ng mga libreng site sa ibabaw ng solid phase na hindi nakagapos sa sorbed agent ang iba pang mga molecule sa panahon ng pagsubok, kabilang ang mga conjugates, na humahantong sa pagtaas ng signal sa background. Upang maiwasan ang di-tiyak na pagbubuklod pagkatapos ng immobilization sa solid phase ng base material, ang paggamot ay isinasagawa gamit ang mga sangkap na neutral para sa pagsubok. Ang pinakasikat na blocking agent ay bovine serum albumin (BSA), casein, atbp. Ang pagpili ng blocking agent at ang mga kondisyon para sa yugtong ito ay depende sa uri ng solid phase, ang sensitivity ng system.

Sa kasalukuyan, isang malaking bilang ng iba't ibang uri at pagbabago ng ELISA ang ginagamit. Ang iba't ibang variant ng enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ay naging laganap.

Ang solid phase ELISA ay iminungkahi noong 1971. Ang mga pangunahing prinsipyo ng solid-phase ELISA, anuman ang pagbabago, ay ang mga sumusunod:

1. Sa unang yugto ng reaksyon, ang mga antigen o antibodies ay na-adsorbed sa solid phase. Sa kasong ito, ang mga reagents na hindi nakatali sa solid phase ay madaling maalis sa pamamagitan ng paghuhugas.

2. Ang sample ng pagsubok ay inilublob sa mga sensitized na balon. Ang mga positive control well ay naglalaman ng mga karaniwang reagents. Sa kasong ito, ang mga immune complex ay nabuo sa ibabaw ng solid phase. Ang mga hindi nakatali na bahagi ay tinanggal sa pamamagitan ng paghuhugas.

3. Kapag nagdaragdag ng antibody-enzyme o antigen-enzyme conjugate at ibinubuklod ito sa immobilized immune complex, ang aktibong site ng enzyme ay nananatiling available para sa kasunod na pakikipag-ugnayan sa substrate. Ang incubation ng substrate sa mga balon na may immobilized conjugate ay humahantong sa pagbuo ng isang reaksyon ng kulay. Ang reaksyong ito ay maaaring ihinto sa nais na yugto, ang kalubhaan ng paglamlam ay maaaring masuri nang biswal o sa pamamagitan ng optical density.

Ang isang mahalagang hakbang sa anumang variant ng solid-phase analysis ay ang pamamaraan para sa paghuhugas ng mga unbound reagents. Mahalaga hindi lamang upang banlawan ang mga bahagi na naayos sa solid phase, ngunit upang alisin ang mga reagents mula sa buong lalim ng layer. Ito ang pinakamatagal at matrabahong yugto ng pagsusuri. Ang mga sample ay maaaring awtomatikong hugasan gamit ang isang espesyal na aparato - isang washer o manu-mano, na may isang multichannel pipette. Upang magsagawa ng ELISA, kailangan mo:

– polystyrene tablet o iba pang solid phase na mga opsyon na ginamit;

- solusyon sa paghuhugas;

– conjugate (mga antigen o antibodies na may label na enzymatically);

- pinaghalong ginamit na mga substrate;

- stopping solution (Stop reagent - solusyon para itigil ang reaksyon);

- mga sample na ginamit para sa positibo at/o negatibong kontrol;

– karaniwang antigen (para sa pagbuo ng curve ng pagkakalibrate);

- single at multichannel pipette;

– tagapaghugas ng pinggan (washer);

– isang optical device para sa pagtukoy ng optical density ng test solution (ELISA reader, isang reader na sunud-sunod na photometer ang lahat ng mga balon);

- 5-100 µl ng pinag-aralan na biological na materyal.

Direk ELISA

1. Ang mga antigen o antibodies (materyal ng pagsubok) ay na-adsorbed sa mga balon ng mga panel. Nabanggit sa itaas na ang mga antigen ay makabuluhang naiiba sa kanilang kakayahang ma-adsorbed sa iba't ibang uri ng plastik, depende sa kung aling klase ng mga sangkap (protina, carbohydrates, o lipoprotein) sila nabibilang. Kadalasan sa direktang ELISA, ang antigen na hindi kumikilos sa solid phase ay mga cell at iba pang particulate antigens.

Kontrolin. Bilang kontrol, ginagamit ang mga balon na may adsorbed positive control sample, na kinakailangang naglalaman ng ninanais na antigen, at negatibong control sample, na halatang hindi naglalaman ng test antigen, ay ginagamit. Sa pagkakaroon ng isang purified standard antigen, ang reaksyon ay isinasagawa sa ilang mga dilution upang ang isang calibration curve ay maaaring itayo.

2. “Harangan ang mga libreng binding site na natitira sa solid phase gamit ang casein BSA, atbp. (upang maiwasan ang hindi partikular na sorption ng conjugate sa solid phase).

3. Ang mga antibodies na may label na enzyme o antigens (conjugate) ay idinaragdag sa mga balon at inilubog. Ang pagbubuklod ng conjugate sa solid phase ay magaganap lamang kung ang parehong mga bahagi ng system ay magkatugma. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa conjugate, ang mga balon ay hinuhugasan, kaya inaalis ang hindi nakatali na bahagi ng conjugate.

4. Ang substrate na tiyak sa enzyme na ginamit ay idinaragdag sa mga balon at inilubog. Pagkarating pinakamainam na antas paglamlam sa positibong control wells, ang enzymatic reaksyon ay tumigil.

5. Pagtutuos para sa reaksyon. Una, ang mga resulta ng reaksyon ay isinasaalang-alang sa biswal. Para sa mas tumpak na account ng mga resulta, sinusuri ang intensity ng paglamlam sa isang ELISA reader na may naaangkop na light filter. Ayon sa mga resulta ng pagsusuri, ang isang graph ng pag-asa ng optical density sa konsentrasyon ay naka-plot (Larawan 2).

Larawan 2. Direktang ELISA.

a) upang makita ang isang antigen; b) upang makita ang mga antibodies.

Ang variant na ito ng ELISA ay karaniwang ginagamit upang makakita ng mga partikular na antibodies. Ang karaniwang antigen ay na-adsorbed sa mga balon ng mga panel at natupok ng mga sample ng serum o iba pang biological na materyal na nakuha mula sa pasyente (cerebrospinal fluid, laway, atbp.). Ang mga partikular na antibodies na nakagapos sa antigen sa solid phase ay natutukoy gamit ang isang antiglobulin conjugate. Depende sa layunin ng pagsusuri, iba't ibang antiglobulin reagents ang ginagamit na nakakakita ng mga antibodies ng lahat ng isotypes, o partikular sa mga indibidwal na klase at subclass ng mga immunoglobulin. Ang pangunahing bentahe ng pamamaraan ay ang pagiging pangkalahatan ng conjugate. Ang parehong conjugate ay maaaring gamitin upang makita ang mga antibodies ng tao sa isang malawak na iba't ibang mga antigens sa anumang sample. Ang reaksyon ay simple sa pamamaraan.

Ang mga pangunahing yugto ng hindi direktang ELISA para sa pagtuklas ng mga antibodies:

1. Ang antigen ay na-adsorbed sa solid phase, pagkatapos ay nahuhugasan mula sa hindi nakatali na mga bahagi.

2. I-block ang mga libreng binding site. Nilabahan.

3. Ang materyal na pansubok ay idinagdag sa mga balon, inilublob at pagkatapos ay hugasan. Kaayon, inilalagay ang mga sample na may positibo at negatibong kontrol.

4. Magdagdag ng antiglobulin conjugate sa working dilution, incubate, wash off unbound components.

5. Ang substrate ay ipinakilala, incubated. Sa pag-abot sa pinakamainam na antas ng paglamlam sa mga positive control well, ang reaksyon ay itinigil sa pamamagitan ng pagdaragdag ng stop solution.

6. Sukatin ang dami ng produkto ng reaksyon sa ELISA reader (Fig. 3).

Sa ilalim ng pinakamainam na kondisyon ng assay, ang pamamaraan ay lubos na tiyak at sensitibo. Pinapayagan ka nitong makita ang mga nanogram na halaga ng mga antibodies sa sera ng mga pinag-aralan na pasyente. Upang makakuha ng kasiya-siyang resulta, kinakailangan ang standardisasyon ng mga reagents at pamamaraan. Ang ELISA variant na ito ay maaari ding gamitin upang subukan ang monoclonal antibodies.

Natukoy ang mga antigen na may pagpipiliang ito Ang ELISA ay dapat magkaroon ng ilang epitope na may kakayahang magbigkis ng mga antibodies, o magkaroon ng paulit-ulit, spatially separated epitope na may parehong specificity.

Kapag isinasagawa ang variant na ito ng ELISA, ang napakaspesipikong poly- o monoclonal antibodies na na-adsorb sa solid phase ay ini-incubate sa sample ng pagsubok. Pagkatapos ng pamamaraan ng paghuhugas, ang mga antibodies na may label na enzyme (conjugate) sa parehong antigen ay idinagdag sa mga balon, at pagkatapos ay isinasagawa ang lahat ng iba pang mga yugto ng reaksyon. Ang kahusayan ng pagbuo ng isang tiyak na kumplikado sa bawat yugto ng pagsusuri ay nakasalalay sa nagbubuklod na pare-pareho ng reaksyon ng antigen-antibody.

Ang mga pangunahing yugto ng pagsusuri:

1. Ang mga monoclonal antibodies o affinity-purified polyclonal antibodies ay hindi kumikilos sa solid phase.

2. Ang sample ng pagsubok ay ipinapasok sa mga balon ng mga panel, ang isang positibong sample ng kontrol at isang negatibong sample ng kontrol ay inilalagay sa parallel sa iba't ibang mga dilution. Incubated at hugasan.

3. Ang mga monoclonal o polyclonal antibodies na may label na enzyme (conjugate) ay ipinapasok sa mga balon. Ang paghuhugas ay isinasagawa pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog.

4. Ang substrate ay ipinakilala, incubated. Ang reaksyon ay huminto kapag ang pinakamainam na paglamlam ay nakamit sa positibong control well.

5. Accounting para sa mga resulta sa ELISA reader.

Ang pangunahing bentahe ng pamamaraan ay ang mataas na sensitivity nito, na lumampas sa mga kakayahan ng iba pang mga scheme ng ELISA (Larawan 4).

Figure 3. Hindi direktang ELISA upang makita ang mga antibodies.

Ang opsyon sa pagsusuri na ito ay batay sa kumpetisyon ng may label na (conjugate) at walang label na (pagsubok) na antibodies para sa pagbubuklod sa antigen na na-adsorbed sa solid phase. Ang dami ng enzyme na nakakabit sa solid phase ay bababa sa proporsyon sa nilalaman ng mga libreng antibodies sa pinaghalong. Upang matukoy ang antigen, ang parehong opsyon ay ginagamit, ngunit sa kasong ito ang nais na antigen ay nakikipagkumpitensya sa may label, karaniwang antigen para sa pagbubuklod sa mga antibodies na hindi kumikilos sa ibabaw ng solid phase.

Ang mapagkumpitensyang pamamaraan ay nangangailangan ng isang minimum na bilang ng mga operasyon, mababang pagkonsumo ng mga reagents, at maaaring madaling awtomatiko. Kapag nagsasagawa ng isang mapagkumpitensyang ELISA para sa pagtuklas ng mga antibodies, mas mahusay na gumamit ng may label na monoclinal antibodies, pagkatapos ay ang kumpetisyon ng conjugate na may sample ng pagsubok ay nangyayari para sa isang solong epitope ng antigen na na-adsorbed sa solid phase. Ang ELISA variant na ito ay ginagamit upang matukoy ang iba't ibang compound, tulad ng mga immunoglobulin ng tao, cancer-embryonic antigen, insulin, atbp. Nagbibigay-daan ito sa pagtuklas ng mga antibodies sa diagnostic na makabuluhang epitope ng mga nakakahawang ahente.

Ang mga pangunahing yugto ng pagsusuri para sa pagtuklas ng antigen (Larawan 5):

1. Ang mga monoclonal antibodies na tiyak para sa antigen na matutukoy ay hindi kumikilos sa solid phase.

2. Idagdag ang antigen na may label na enzyme at ang sample ng pagsubok sa isang kilalang konsentrasyon sa mga balon ng mga panel. Magsagawa ng pagpapapisa ng itlog at paghuhugas. Sa magkatulad, ang mga positibo at negatibong kontrol ay inilalagay sa mga katabing balon. Upang bumuo ng pagkakalibrate gamit ang isang karaniwang walang label na antigen sa iba't ibang mga dilution.

3. Magdagdag ng substrate, incubate, itigil ang reaksyon kapag ang pinakamainam na paglamlam ay nabuo sa positibong control well.

4. Accounting para sa reaksyon sa ELISA reader.

Sa kasong ito, ang halaga ng antigen sa sample ng pagsubok ay inversely proportional sa aktibidad ng enzymatic sa solid phase.

Sa variant na ito ng ELISA, ang antigen na nasa sample ng pagsubok ay nagbubuklod sa mga monoclonal antibodies na may label na enzyme at pinipigilan ang kanilang pakikipag-ugnayan sa karaniwang antigen na hindi kumikilos sa solid phase. Ang presensya sa sample ng kahit na bakas na dami ng antigen na tiyak sa conjugate ay hahadlang sa pagbubuklod ng mga may label na antibodies sa immobilized antigen. Ang antas ng pagsugpo ay direktang proporsyonal sa nilalaman ng antigen sa solusyon. Para sa quantitative analysis, ang isang calibration curve ay binuo gamit ang serial dilutions ng standard antigen. Ang mga pangunahing yugto ng inhibitory ELISA para sa pagtuklas ng antigen (Larawan 6).

1. I-adsorb ang karaniwang antigen sa mga balon ng mga panel. Pumili ng gumaganang dilution ng mga may label na antibodies sa pamamagitan ng titration.

Figure 4. "Sandwich" - ELISA variant.

2. Ang conjugate ay pre-incubated sa working dilution na may mga dilution ng test sample, standard antigen at positive control samples.

3. Ang halo ay inilipat sa mga balon ng mga panel. Upang makontrol ang 100% na pagbubuklod, tanging mga may label na antibodies ang idinaragdag sa ilang mga balon, nang walang nagbabawal na antigen. Ang mga panel ay incubated at pagkatapos ay hugasan.

4. Magdagdag ng substrate.

5. Itala ang mga resulta.

Ang konsentrasyon ng antigen na tutukuyin sa sample ng pagsubok ay inversely proportional sa aktibidad ng enzymatic sa solid phase.

Ang ELISA ay maaaring gamitin hindi lamang upang matukoy ang isang natutunaw na antigen o antibody, kundi pati na rin ang mga cell na gumagawa ng iba't ibang mga protina.

Noong 1983, ang teknolohiyang ELISA ay iniakma para sa pagtuklas ng mga lymphoid cell na naglalabas ng mga antibodies o antigens (hal., mga cytokine) sa vitro. Ang pamamaraan ay tinatawag na ELISPOT (enzymatic immunoassay o spot method). Ang pangunahing prinsipyo ng pamamaraan:

1. Sa ibabaw ng balon ng polystyrene (gamit ang 24-well cell culture panels), ang mga antigen o antibodies ay na-adsorbed, na nagsisilbing "trap" reagents.

2. Ang pinag-aralan na mga selulang lymphoid ay idinagdag, na ni-culture ng ilang oras sa 37°C, na nagbibigay sa kanila ng pagkakataong sakupin ang isang tiyak na lugar at magsagawa ng secretory function. Ang mga antibodies o antigens na itinago ng naturang mga cell ay nakukuha ng mga reagent na na-adsorb sa solid phase.

3. Tinatanggal ang mga cell gamit ang washing solution na may cell lysing detergent.

4. Ang mga lugar ng akumulasyon ng mga produktong secretory ay ipinapakita sa pamamagitan ng pagdaragdag ng mga antibodies na nauugnay sa enzyme (antiglobulin reagent).

5. Ang substrate-agarose mixture ay idinagdag (ang mga substrate na ginamit ay dapat matunaw sa agarose at bumuo ng mga hindi matutunaw na produkto ng reaksyon), brown o asul na mga spot ay nabuo sa ibabaw ng solid phase (depende sa mga enzyme at substrate na ginamit), na nagpapakita ng mga lugar kung saan ang mga cell ay matatagpuan.

Ang mga nagresultang mga spot ay binibilang sa ilalim ng isang mikroskopyo, ito ang magiging bilang ng mga naglalabas na mga cell.

Ang isang nitrocellulose membrane ay maaaring gamitin bilang isang solid phase. Sa kasong ito, mayroong isang bilang ng mga pakinabang: dahil sa mataas na kapasidad ng adsorption ng NCM, isang makabuluhang mas maliit na halaga ng antigen na ginagamit bilang isang "trap" na reagent ay kinakailangan, bilang karagdagan, hindi na kailangang isama ang agarose sa substrate.

Sa pamamagitan ng sabay-sabay na pagtukoy sa bilang ng mga naglalabas na selula at ang kabuuang halaga ng sikretong antigen o antibody sa balon, na posible kapag gumagamit ng ibang substrate, posibleng matukoy ang dami ng sikretong sangkap ng isang cell.

Ang pamamaraang ito ay nakahanap ng malawak na aplikasyon upang masuri ang bilang ng mga cell na nagtatago ng antigen na nakuha ng mga adsorbed antibodies, ginagamit ito upang matukoy ang bilang ng mga cell na nagtatago ng mga cytokine (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IFN-y, TNF-a) .

Kapag gumagamit ng mga high-affinity antibodies, ang sensitivity ng mga indibidwal na variant ng ELISA ay napakataas at ayon sa teorya ay ginagawang posible na makita ang mga solong molekula ng antigen, ngunit sa pagsasagawa, ang sensitivity ay nalilimitahan ng ilang mga kadahilanan: aktibidad ng enzyme, intensity ng signal, at mga pamamaraan ng accounting ng signal . Ginagawang posible ng mga signal amplification system na mapataas ang sensitivity ng iba't ibang variant ng ELISA. Isaalang-alang ang ilan sa mga sistemang ito:

Batay sa pakikipag-ugnayan ng avidin-biotin.

Ang mga molekula ng biotin coenzyme (m.m. 244 Da) ay pinagsama sa mga antibodies gamit ang biotinyl-N-hydroxysuccimide. Ang isang maliit na molekula ng biotin ay mas madaling ikabit sa isang immunoglobulin o iba pang protina nang hindi nilalabag ang mga katangian ng immune o enzymatic nito. Ang enzyme sa kasong ito ay nagbubuklod sa isang glycoprotein puti ng itlog avidin. Ang nagbubuklod na affinity ng avidin sa biotin ay napakataas (ang dissociation constant ng complex ay 10-15 mol), ang avidin-enzyme conjugate ay matatag na naayos sa antigen-antibody-biotin complex. Matapos idagdag ang naaangkop na substrate, ang produkto ng reaksyon ay tinutukoy ng spectrophotometrically o sa pamamagitan ng intensity ng luminescence.

Ang isang molekula ng avidin ay binubuo ng apat na magkakahawig na mga subunit, ay nagagawang makipag-ugnayan sa apat na mga molekula ng biotin, na nagpapahintulot na magamit ito bilang isang molekula na nag-uugnay sa pagitan ng dalawang mga compound na naglalaman ng biotin. Sa kasong ito, ang enzyme ay biotinylated din, at ang avidin ay gumaganap bilang isang tulay, na nagkokonekta sa dalawang molekula na naglalaman ng biotin residues. Ang libreng avidin ay idinagdag sa nagreresultang antigen-antibody-biotin complex, na sinusundan ng biotinylated enzyme. Itala ang reaksyon.

Ang avidin protein ay maaaring hindi partikular na i-sorbed sa iba pang mga molekula; samakatuwid, ang isa pang biotin-binding protein, streptavidin, na matatagpuan sa bacterium Streptomyces avidinii, ay lalong ginagamit. Ang Streptavidin ay bumubuo rin ng isang malakas na kumplikadong may biotin at binubuo ng apat na magkaparehong mga subunit.

Ang paggamit ng avidin-biotin complex ay ginagawang posible na makabuluhang taasan ang sensitivity ng ELISA, dahil dose-dosenang mga biotin molecule ay maaaring itali sa isang AT molecule sa panahon ng synthesis ng isang conjugate. Ang pagkuha ng mga conjugates (antibodies at enzymes na may biotin) ay medyo madali at sinamahan ng kaunting pagbabago sa kanilang immunological at enzymatic na aktibidad. Ang mga conjugates ng mga enzyme na may biotin ay maaaring gamitin bilang mga unibersal na reagents.

Paggamit ng mga reaksyong chemiluminescent.

Maaaring gamitin ang mga reaksyong chemiluminescent upang makakuha ng signal sa ELISA, habang pinapataas ang sensitivity ng pamamaraan at binabawasan ang oras ng pagsusuri. Ang malunggay peroxidase ay malawakang ginagamit bilang isang label sa ELISA, at iba't ibang chemiluminescent na reaksyon ay maaari ding gamitin upang makita ito. Ang mga reaksyon ng chemiluminescent ay batay sa kakayahan ng luminol na kumikinang kapag na-oxidize sa hydrogen peroxide. Sa direktang pagsusuri, ang isang reaksyong enzymatic ay gumagawa ng hydrogen peroxide at nag-oxidize ng luminol; ang reaksyong ito ay na-catalyzed ng malunggay peroxidase. Upang mapahusay ang signal, ginagamit ang iba't ibang mga compound, halimbawa, luciferin, phenols, sa kasong ito, ang intensity ng luminescence ay pinahusay ng 10-100 beses, sa ilang mga kaso ng 500 beses (pinahusay na pagsusuri ng chemiluminescent). Ang luminescent signal ay napaka-stable, ang antas nito ay umabot sa maximum sa 30 s (para sa paghahambing: ang reaksyon ng kulay sa OPD bilang isang tagapagpahiwatig ay ganap na bubuo lamang sa 30 min).

Sa hindi direktang pagsusuri sa luminol o mga derivatives nito, ang antibody ay may label. Ang nasabing label sa Malayang bansa maaaring ma-oxidized ng hydrogen peroxide sa paglabas ng liwanag. Kung ito ay nakabuo ng isang kumplikado, nawawala ang kakayahang mag-oxidize.

Batay sa mga sistema ng cascade.

Upang mapataas ang sensitivity ng ELISA, maaaring gamitin ang mga enzyme cascade system. Sa kasong ito, ang unang enzyme na nakagapos sa antibody ay nagreresulta sa isang mababawas na substrate para sa pangalawang sistema ng enzyme. Ang pangalawang sistema ng enzyme ay maaaring substrate-cyclic o redoxycyclic. Sa kasong ito, ang phospho-glucoisomerase, aldolase, alkaline phosphatase ay maaaring magsilbi bilang mga label ng enzyme. Ang panghuling produkto ng reaksyon ay tinutukoy ng biswal o spectrophotometrically.

Ang ELISA amplification system ay nakakamit ng mataas na sensitivity. Ang ganitong mga sistema ng ELISA ay ginagamit upang matukoy ang antas ng mga hormone (thyroid-stimulating, progesterone, atbp.).

Natagpuan ng ELISA ang malawak na aplikasyon sa iba't ibang larangan ng medisina at biology dahil sa relatibong pagiging simple at mataas na sensitivity ng pamamaraan. Matagumpay na nagamit ang ELISA para sa:

Mass diagnostics ng mga nakakahawang sakit (detection ng iba't ibang partikular na antigens o antibodies sa kanila);

Ang pagtuklas at pagpapasiya ng mga antas ng hormone at mga gamot sa biological sample;

Isotype determinations (IgG, IgM at iba pa) ng mga antibodies laban sa isang partikular na antigen;

Pagtuklas ng mga immune complex;

Pagtuklas ng mga marker ng tumor;

Pagpapasiya ng mga protina ng serum ng dugo (ferritin, fibronectin, atbp.);

Pagpapasiya ng kabuuang IgE at tiyak na IgE antibodies;

Pagsusuri para sa myoclonal antibodies;

Mga kahulugan ng mga cytokine sa mga biological fluid.

Sensitibo ng pamamaraan

Pinalitan ng ELISA ang malawakang ginagamit noong una klinikal na kasanayan paraan ng agglutination, precipitation at RIA. Kung ikukumpara sa mga pamamaraan sa itaas, ang ELISA ay hindi gaanong matrabaho at mas kaunting oras, maginhawa upang maisagawa isang malaking bilang mga katulad na pagsusuri.

Pinagsasama ng ELISA ang natatanging pagtitiyak ng immunoassay sa mataas na sensitivity pagpapasiya ng label ng enzyme. Ang sensitivity ng pamamaraan (sa ilalim ng sensitivity ay nangangahulugang ang pinakamababang nakikitang dami ng antibodies o antigen) ay tinutukoy ang mga sumusunod na salik: ang affinity ng antibodies, ang paggamit ng monoclonal antibodies ay lalong kanais-nais; tiyak na aktibidad ng enzyme; intensity ng signal; sensitivity ng signal. Iba't ibang variant ng ELISA ay naiiba sa kanilang pagiging sensitibo. Ang mga hiwalay na variant ng solid-phase ELISA ay ginagawang posible na makakita ng mga solong molekula sa isang sample. Ang average na sensitivity ng ELISA ay 10-9 - 10-12 mol.

Galaktinov V.G. Immunology. Moscow University Press, 1998

Kishkun A.A. Mga pag-aaral sa immunological at mga pamamaraan para sa pag-diagnose ng mga nakakahawang sakit sa klinikal na kasanayan. Medical News Agency, 2009

Kondratieva I.A. Workshop sa immunology. Pagtuturo para sa mga unibersidad. Academy, 2004

Lefkovits I., Pernis B. Immunological research method. Kapayapaan, 1988

Roit A, Brostoff D, Meil ​​​​D. Immunology. Kapayapaan, 2000

Sokolov E.I. Klinikal na immunology. Medisina, 1998

Frimel G. Immunological na pamamaraan. Medisina, 1987

Khaitov R. M. Immunology. Medisina, 2000

Shigina Yu.V. Immunology: Teksbuk. RIOR publishing house, 2007

Yarilin A.A. Mga pangunahing kaalaman sa immunology. Medisina, 1999

Paminsan-minsan, inireseta ng mga doktor ang mga pagsusuri sa ELISA, hindi alam ng lahat kung ano ito. Ang ELISA decoding ay may sumusunod - enzyme immunoassay. Ang ganitong pagsusuri sa dugo ay nakakatulong upang maunawaan kung paano nilalabanan ng katawan ang mga sakit ng nakakahawang spectrum at ipakita ang yugto ng sakit. Ang enzyme immunoassay ay tumutulong sa pagtatasa ng proteksiyon na aktibidad ng dugo, pagkilala sa immunodeficiency sa mga pathologies na nauugnay sa mga impeksyon, mga problema sa hormonal at iba pa.

Ang isang pagsusuri sa dugo ng ELISA ay gumagana sa materyal na kinuha mula sa isang ugat. Bilang karagdagan, ang nilalaman ay magagamit para sa pananaliksik vitreous na katawan, likido mula sa spinal cord, pamunas mula sa urethra o cervical canal. Para sa enzyme immunoassay, ang ELISA sa mga buntis na kababaihan ay maaaring kumuha ng likido na nakapaligid sa fetus.

Sa kasong ito, maaaring direktang masuri ang dugo para sa ELISA gamit ang iba't ibang pamamaraan. May tuwid hindi direktang paraan, kumpetisyon at pagharang. Kapag ang katawan ay nahawaan ng ilang pathogenic agent, na tinatawag na antigen, ang immune system ay nagsisimulang gumawa ng mga partikular na antibodies, halimbawa, para sa hepatitis. Ang mga antibodies na ito ay naglalayong "pakitungo" sa mga dayuhang ahente. Ano ang mga antibodies? Ito ay mga espesyal na protina na maaaring magbigkis sa mga antigen at bumuo ng mga immunologically targeted complex, na tinatawag na antigen-antibody. Ito ay para sa pagtuklas ng mga kumplikadong ito na ang mga diagnostic ng ELISA ay may pananagutan. Upang makita ang isang antigen, ang mga antibodies ay idinagdag sa nagresultang sample ng dugo, o ang reverse procedure ay isinasagawa.

Ang positibong resulta ng ELISA ay batay sa reaksyon ng kaligtasan sa sakit at mga enzyme. Sa ilalim ng pagkilos ng una, ang mga ahente ng impeksyon at mga elemento ng cellular ay nagbubuklod, ang pangalawa ay tumutulong upang mailarawan ang resulta ng una. Ang tugon ng immune ay nagsasangkot ng isang antibody at antigenic ligament. Bilang resulta ng prosesong ito, nabuo ang isang immune-directed complex. Ang lahat ng mga cell ay may isang antigen sa kanilang ibabaw. immune cell ang isang kahina-hinala ay nakuha, at ang antigen, na naayos sa ibabaw, ay sumasailalim sa isang pamamaraan ng paghahambing sa impormasyon na "na-load" sa memorya. Kung mayroong isang tugma ng paglalarawan, pagkatapos ay bumalik ang cell sa bahay, kung hindi, pagkatapos ay isang koneksyon ang nangyayari, ang paglikha nito ay responsable para sa antibody na nakakabit sa ibabaw.

Ang reaksyon ng enzymatic, samantala, ay nagpapahintulot sa mga sangkap na mabago sa mga bago. Ang materyal ay nakalantad sa enzyme. Sa kasong ito, ang pagkakaiba ng enzymatic ay ibinibigay ng iba't ibang mga substrate. Ang produkto na nagreresulta mula sa reaksyong ito ay ipinadala sa pagpapasiya ng dami ng pathogen, ang pagpapasiya kung saan ay batay sa density ng kulay ng solusyon.

Mga tampok ng pamamaraan

Ang isang enzyme-linked immunosorbent assay ay inireseta kapag kinakailangan upang masuri ang mga allergy, mga sakit na nagmula sa viral. Mayroon ding pagsusuri sa ELISA para sa syphilis at ilang iba pang mga impeksiyon, na ang paghahatid nito ay nangyayari sa pamamagitan ng hindi protektadong pakikipagtalik. Ang ganitong mga diagnostic ay nagiging mas at mas popular kumpara sa PCR. Ang katotohanan ay ang PCR ay nagsasangkot ng pagtatrabaho sa mga smears. Hindi tulad ng PCR, ang mga resulta ng ELISA ay maaaring makuha mula sa mga pagsusuri sa dugo.

Bilang karagdagan, ang isang pagsusuri sa dugo ng ELISA ay maaaring magreseta kapag kinakailangan upang maitaguyod ang pagkakaroon ng immunodeficiency, masuri ang oncology, suriin kung gaano kabisa ang paggamot, matukoy ang antas ng hormonal at sumailalim sa isang preoperative na pagsusuri sa kumbinasyon.

Kung ihahambing natin ang mga pag-aaral ng ELISA, halimbawa, sa PCR, makakahanap tayo ng ilang mga pakinabang. Ang pangunahing isa ay ang posibilidad kumpletong diagnosis kahit na sa pinakamaagang yugto ng pag-unlad. Bilang karagdagan, ang mga resulta ng ELISA ay tumutulong sa pagtukoy sa tiyak na yugto ng sakit, sa anong antas ang pag-unlad nito.

Ang pagsusuri sa ELISA kumpara sa PCR ay may mas mataas na kahusayan, bilang karagdagan, maaari itong kunin sa panahon ng pagbubuntis upang makita ang mga STD. Maaaring malaman ng sinumang nakapasa sa pagsusulit na ito ang konsentrasyon ng TSH sa serum ng dugo. Ito ay napakahalaga upang suriin ang reaksyon ng thyroid gland, kung may mga malfunctions sa trabaho nito.

Gayunpaman, ang mga karagdagang pakinabang ay polymerase din chain reaction, ay ang bilis ng pag-aaral, at samakatuwid, ang mabilis na pagtanggap ng mga resulta. Pinahahalagahan ng mga doktor ang katumpakan ng mga resulta. Kung pinag-uusapan natin ang tungkol sa mga STD, kung gayon ang antas ay umabot sa 98 porsiyento, tulad ng kaso sa konsentrasyon ng TSH.

Siyempre, hindi ito walang mga kakulangan. Gayunpaman, sa kasong ito pinag-uusapan natin ang tungkol sa hindi direktang mga tampok ng pagsubok. Sa partikular, pinag-uusapan natin ang katotohanan na imposibleng ibukod ang mga posibleng pagkakamali sa kahulugan ng mga pamantayan. Minsan ang isang pagsusuri na kinuha ng isang ganap na malusog na batang babae ay maaaring magpakita ng isang maling positibong resulta, o negatibo sa kabaligtaran na kaso. Gayunpaman, ang pag-uuri ng mga pamamaraan ng sikolohikal na pananaliksik sa karamihan ng mga kaso ay iniuugnay ang gayong mga pagkukulang sa hindi tamang paghahanda o paglabag sa pamamaraan kung saan kinuha ang materyal.

Mga tampok ng pagpapatupad

Sa pagsusuri ng ELISA, sa karamihan ng mga kaso, ang dugo ay naibigay. Bago mag-donate ng dugo, mahalagang mapanatili ang hindi bababa sa walong oras ng pag-aayuno, upang ibukod ang paggamit ng isang bilang ng mga gamot na nakakaapekto sa resulta ng pagsusuri. Ito ay mga antihistamine at hormonal na paghahanda nakakaapekto sa paggana ng thyroid gland. Bilang karagdagan, ang alkohol ay dapat na hindi kasama ng hindi bababa sa isang araw bago. Tiyaking hindi ka naninigarilyo kahit isang oras bago mag-donate ng dugo. Posible rin ang pagbaluktot ng resulta kapag umiinom ng droga.

Bago magpatuloy sa pag-decryption, ito ay nagkakahalaga ng pagbanggit kung anong mga pamamaraan ng pagsukat ang ginagamit para sa naturang pagsubok. Bilang resulta ng pagsusuri, ipapakita ang mga antibodies o Ig immunoglobulin. Sa pamamagitan ng mga ito ay sinadya ang napaka tiyak na mga protina na dati nang tinalakay. Ang mga B-lymphocytes ay may pananagutan sa kanilang produksyon sa sandaling makapasok ang mga virus, bacteria o fungi sa katawan. Limang uri ng mga immunoglobulin ang nakikilala, na ipinahiwatig ng alpabetong Latin.

Ang kanilang mga pagkakaiba ay nauugnay sa iba't ibang molekular na hugis at timbang. Mayroon silang iba't ibang kalahating buhay, kasangkot o hindi nakikibahagi sa mga nakakahawang proseso sa iba't ibang paraan. Ang tagal ng panahon kung saan maaari silang matukoy mula sa sandaling naganap ang impeksyon ay nag-iiba din.

Kung ang mga immunoglobulin ay inuri gamit ang molecular weight bilang batayan, ang IgM ang may pinakamataas na rate. Ang isang tampok ng ganitong uri ng immunoglobulins ay ang kawalan ng kakayahan na dumaan sa placental barrier. Kung ang IgM ay napansin sa pagsusuri sa isang bagong panganak na bata, pinag-uusapan natin ang pagkakaroon ng impeksyon sa fetus.

Ang karamihan sa dugo ng tao ay naglalaman ng mga immunoglobulin ng IgG, hindi bababa sa lahat ng IgE. Sa pagsasalita tungkol sa trabaho sa loob ng balangkas ng mga nakakahawang proseso, ang partikular na kahalagahan ay dapat ibigay sa mga opsyon A, M, G. Ang IgE ay gumaganap bilang isang marker ng isang reaksiyong alerdyi. Ang IgD ay matatagpuan lamang sa mga tisyu ng mga lymph node at tonsil. Ito ay mahalaga mula sa punto ng view ng paglikha ng kaligtasan sa sakit sa lokal na antas.

Bilang karagdagan, ang mga antigen ay tinutukoy sa pagsusuri. Ang mga ito ay nauunawaan bilang mga sangkap na may mataas na uri ng molekular, na kilala sa kanilang organikong pinagmulan. Sa partikular, pinag-uusapan natin ang tungkol sa mga pathogens ng mga nakakahawang sakit at iba pang spectrum na sakit. Bilang karagdagan, ang ibig naming sabihin ay mga sangkap na nagpapahiwatig ng iba't ibang mga pagbabago sa cell na hindi maiiwasan sa maraming sakit. Ang immune complex ay ipinahiwatig din, na nagpapakita ng antigen-antibody complex na kasangkot sa proseso ng immune.

Karaniwan, ang oras ng produksyon ay nakasalalay sa partikular na laboratoryo kung saan ka nag-apply. Ang isang bilang ng mga laboratoryo ay makakapagbigay ng mga resulta sa loob ng isang araw o dalawa, ang iba ay nangangailangan ng isang linggo. Ang mga pagkaantala ay maaaring dahil sa pangangailangan na makaipon ng isang tiyak na halaga ng suwero.

Epekto sa mga resulta at interpretasyon

Sa kabila ng katotohanan na ang ELISA ay itinuturing na isa sa mga pinaka tumpak na pamamaraan pag-verify, nangyayari pa rin ang mga error. Ang pamamaraan para sa pagkuha ng materyal, ang hindi wastong transportasyon at pag-iimbak ng materyal ay maaaring makaapekto sa kawastuhan ng mga resulta. Ang pag-inom ng gamot, tulad ng nabanggit sa itaas, ang pagkakaroon ng mga nakatagong sakit. Ang mga metabolic disorder o immunodeficiency ay hindi rin papayag na makuha mo ang mga tamang indicator. Sa panahon ng buhay hanggang sa isang taon, ang mga bagong silang ay maaaring walang ganap na tamang mga tagapagpahiwatig. Ito ay dahil sa ang katunayan na ang maternal antibodies ay naroroon sa katawan.

Sa pagsasalita tungkol sa pag-decode, ang mga form ng pagsusuri ay gumagamit ng isang positibo o negatibong tanda, na nagpapahiwatig ng mga resulta ng pagkalkula para sa bawat isa sa mga klase ng immunoglobulin. Ang mga posibleng pagpipilian ay ang mga sumusunod.

Ang kawalan ng nakitang IgG, IgA at IgM ay nagpapahiwatig ng kumpletong pagbawi. Ang isang negatibong resulta para sa mga sangkap tulad ng IgM, IgA, IgG ay ang kakulangan ng kaligtasan sa sakit sa impeksyon.

Ang kumbinasyon ng isang positibo at negatibong resulta para sa IgG, IgA sa kumbinasyon ng isang positibong IgM ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng isang impeksiyon sa katawan sa talamak na anyo. Ang isang positibong resulta ng IgG na sinamahan ng mga negatibong halaga ng IgA at IgM ay tumutugma sa panahon pagkatapos ng pagbabakuna o ang pagkakaroon ng kaligtasan sa sakit bilang resulta ng isang impeksiyon.

Ang kumbinasyon ng isang positibo o negatibong IgG, resulta ng IgA at isang negatibong resulta ng IgM ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng impeksiyon sa talamak na kurso nito. Ang isang positibong resulta para sa tatlong bahagi: IgG, IgM, IgA ay nagpapahiwatig ng paglala ng impeksiyon na nasa talamak na anyo pagtagas. Bilang karagdagan sa direktang paglilinaw sa mga klase ng antibody, bilang bahagi ng pag-decode ng pagsusuri ng ELISA, ang doktor ay tumatanggap ng impormasyon tungkol sa kanilang mga quantitative indicator. Mahalagang bigyang-diin na ang dumadating na manggagamot ay dapat na responsable para sa pag-decode. Ang katotohanan ay ang kumbinasyon ng ilang mga sangkap ay maaaring humantong sa kanya sa ideya ng isang maling resulta, na hahantong sa isang muling pagsuko. Ang self-decryption sa kasong ito ay walang silbi.

Ang mga pagsusuri sa laboratoryo ay tumutulong sa mga doktor na hindi lamang matukoy ang sakit, ngunit matukoy din ang kakayahan ng katawan na labanan ang mga impeksiyon. Bilang karagdagan, pinapayagan ka ng ilan na itakda ang yugto ng patolohiya. Ang isang halimbawa ng naturang pag-aaral ay ang ELISA, na kadalasang ginagamit sa mga diagnostic.

Paraan ng ELISA - ano ito?

Ang Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ay isang pag-aaral sa laboratoryo na naglalayong tukuyin ang mga partikular na antibodies na may likas na protina sa ilang antigen sa isang sample ng dugo. Ang pinakamahalaga sa maraming antibodies ay ang mga immunoglobulin, na maaaring umiral bilang bahagi ng mga immunocomplex. Ang mga ito ay synthesized sa katawan bilang isang resulta ng neurohumoral reaksyon ng immune system pagkatapos ng pagpapakilala ng isang pathogenic ahente sa katawan.

Para sa bawat uri ng mga pathogenic na selula, ang kanilang sariling mga antibodies ay ginawa - bilang isang tugon. Ang kanilang mga detalyadong diagnostic at pagsusuri ay tumutulong upang direktang matukoy ang uri ng patolohiya na maaaring naroroon sa katawan ng tao nang hindi nagpapakita ng sarili. Ang Enzyme-linked immunosorbent assay ay nagpapakita ng tago, tamad mga proseso ng pathological, tinutukoy ang kanilang yugto.

Ano ang ipinapakita ng pagsusuri sa ELISA?

Ang pagkakaroon ng pakikitungo sa kung ano ang ibig sabihin ng terminong pagsusuri ng ELISA, kung ano ito, kinakailangang tandaan ang pangunahing halaga ng diagnostic ng pag-aaral. Ang pamamaraang ito ay ginagamit upang matukoy ang presensya sa isang sample ng dugo ng mga antigen ng nakakahawang ahente at mga antibodies, na resulta ng pag-activate ng immune system. Kabilang sa mga mahahalagang klase ng antibodies, kinakailangan na makilala ang IgA, IgM, IgG.

Ang isang enzyme-linked immunosorbent assay ay inireseta kung kinakailangan ang differential diagnosis, ang isang pangwakas na diagnosis ay ginawa. Tinutulungan nito ang mga doktor na makilala ang mga nakatagong pathologies. Bilang karagdagan, ang ELISA ay maaari ding magreseta upang masuri ang antas nakasanayang responde pagkatapos ng pagbabakuna sa araw bago. Sa karamihan ng mga kaso, ang isang pagsusuri sa ELISA (kung ano ito, inilarawan sa itaas) ay inireseta kung ang mga sumusunod na uri ng mga pathologies ay pinaghihinalaang:

• hepatitis;
• bulutong;
• helminthiases;
• rubella;
• polio;
• buni;

Bilang karagdagan, ang ELISA para sa ilang uri ng mga immunoglobulin ay maaari ding isagawa gamit ang:

• rheumatoid arthritis;
• sepsis;
• talamak purulent otitis;
• pulmonya;
• meningitis;
• sinusitis;

Paano isinasagawa ang isang enzyme immunoassay?

Ang Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA, ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagsusuri ng sample ng dugong kinuha. Ang isang maliit na halaga ng serum ng dugo at purified antigen ay inilalagay sa ibabaw ng isang pre-prepared na espesyal na tablet. Pagkonekta sa kanila, obserbahan ang pinagmulan ng reaksyon sa isang mikroskopyo. Ang isang antigen at isang antibody ng parehong species ay bumubuo ng isang kumplikado. Upang masuri ang pagbuo nito, ang karagdagang paglamlam ay isinasagawa. Batay sa tindi ng paglamlam na naganap, ang mga konklusyon ay iginuhit tungkol sa konsentrasyon ng mga immunoglobulin sa sample ng serum ng dugo ng pasyente.

Ang pagsusuri ng ELISA (kung ano ito, alam mo na) ay sensitibo kahit sa isang maliit na halaga ng mga immunoglobulin, ay may mataas na pagtitiyak. Bilang resulta, magagamit ito ng mga manggagamot upang tumpak na makilala ang mga sakit na may katulad klinikal na larawan. Ang mismong pamamaraan ng pagsusuri ay hindi nagtatagal, kaya ang resulta ng pag-aaral ay malalaman sa parehong araw. Kung kailangan mo ng agarang pagsusuri, maaari kang makakuha ng sagot pagkatapos ng 2-3 oras mula sa sandali ng pag-sample ng dugo.

ELISA blood test - paghahanda

Ang paraan ng enzyme immunoassay ay nangangailangan ng ilang paghahanda mula sa pasyente bago ito isagawa. Ang venous blood ay nagsisilbing test material. Ang bakod nito ay isinasagawa ng eksklusibo sa umaga, sa isang walang laman na tiyan. Bago sumailalim sa pamamaraan, ang pasyente ay kinakailangan upang maiwasan ang emosyonal na labis na karga, nakababahalang mga sitwasyon, ibukod ang pisikal na aktibidad. Upang makakuha ng mga layunin na resulta ng pag-aaral, bago kumuha ng ELISA test para sa chlamydia at iba pang mga impeksyon, kailangan mong:

1. Isang araw bago ang pagsusuri, ang mga mataba na pagkain, pinausukang karne at alkohol ay hindi kasama sa diyeta.
2. Huwag manigarilyo bago ang pag-aaral.
3. Ang huling pagkain ay dapat mangyari sa bisperas ng pagsusuri na may pagitan ng hindi bababa sa 8 oras bago ang inaasahang oras ng pag-aaral.

Enzyme immunoassay - materyal sampling

Kasama sa pagsusuri ng ELISA ang sampling venous blood bilang isang biomaterial para sa pananaliksik. Ang pamamaraan ay isinasagawa sa isang laboratoryo. Ang isang sample ng dugo na 5-10 ml ay kinuha mula sa cubital vein gamit ang isang disposable syringe. Kadalasan, ginagamit ang mga espesyal na vacuum test tube, pagkatapos ikonekta ang karayom ​​kung saan pinupuno ng dugo ang lalagyan sa sarili nitong. Ang natanggap na sample ay minarkahan nang naaayon at ipinadala para sa karagdagang pagsusuri. Mas madalas, ang resulta ng pag-aaral ay malalaman sa susunod na araw.

ELISA blood test - transcript

Ang pag-decode ng pagsusuri ng ELISA ay isinasagawa ng eksklusibo ng isang espesyalista. Isinasaalang-alang nito ang mga resulta ng iba pang pag-aaral na isinagawa noong nakaraang araw. Dapat tandaan na ang ELISA ay may dalawang pagbabago - qualitative at quantitative assessment. Ang isang positibong resulta ng isang qualitative assessment ng ELISA ay nagpapahiwatig ng presensya sa katawan ng mga antibodies sa isang tiyak na uri ng pathogen. Sa hinaharap, ang isang quantitative assessment ay itinalaga, na naglalayong itatag ang antas ng sakit, ang yugto. Sa isang negatibong pagsusuri, nagsasalita sila tungkol sa kawalan ng mga pathogen sa katawan ng sanggol.

Negatibo ang pagsusuri sa ELISA

Ang isang negatibong resulta ng pagsubok ay hindi palaging nagpapahiwatig ng kawalan ng patolohiya. Kaya, ang isang ELISA test para sa syphilis ay maaaring negatibo sa pagpapatawad, kapag ang pathogen sa katawan ay nasa mababang konsentrasyon pagkatapos ng kurso ng therapy. Dahil sa pagpipiliang ito, ang mga doktor ay nagsasagawa ng karagdagang pag-aaral pagkatapos ng ilang panahon. Bilang karagdagan, ang isang negatibong resulta ay maaari ding maobserbahan pagkatapos ng isang kamakailang impeksyon, kapag ang mga antibodies ay hindi pa nabuo ng katawan sa isang diagnostic na konsentrasyon.

Positibong ELISA ang pagsusuri sa dugo

Sa isang positibong resulta ng pagsusuri, ang titer ng mga antibodies, ang kanilang klase, ay tinutukoy. Sa karamihan ng mga kaso, para sa pagsusuri ng mga nakakahawang proseso, ang konsentrasyon ng IgG at IgM ay tinutukoy. Nabubuo sila sa iba't ibang panahon.

Nilalaman

Upang masuri ang kakayahan ng katawan na lumaban Nakakahawang sakit o isang pagsusuri sa dugo ay ginagamit upang matukoy ang yugto ng patolohiya. Ang pamamaraan ng ELISA ay sumasakop sa isang mahalagang lugar sa mga pag-aaral sa laboratoryo, nakakatulong ito upang komprehensibong pag-aralan ang aktibidad proteksiyon na function dugo, matukoy ang immunodeficiency sa mga nakakahawang sakit, mga sakit sa dugo, hormonal, mga proseso ng autoimmune.

Ano ang enzyme immunoassay

Nalalapat ang pamamaraang ito sa pananaliksik sa laboratoryo, tinutukoy ang pagkakaroon ng mga proteksiyon na kadahilanan ng dugo ng isang likas na protina (antibodies) sa ilang mga pathogenic na ahente (antigens). Ang pagsusuri ng immunoenzyme ng dugo ay tumutukoy sa mga immunoglobulin, na maaaring makita sa anyo ng mga immunocomplex. Lumilitaw ang mga ito kapag nangyari ang mga komplikadong neurohumoral na reaksyon. proteksyon sa immune tao, na nagiging tugon sa pagpapakilala ng mga dayuhang antigens.

Ang mga partikular na antibodies ay ginawa sa katawan laban sa bawat uri ng pathogen. Dagdag pa, ang pagbubuklod ng isang pathological microorganism o antigen ay nangyayari, isang kumplikadong tambalang "antigen-antibody" ay nabuo. Pagkatapos ito ay neutralisado, nangyayari ang enzymatic lysis, ang reaksyon ng phagocytosis, at ang proseso ay nagtatapos sa pag-alis mula sa katawan. Ang pagkakaroon ng mga partikular na complex, na tinutukoy ng ELISA, ay nagpapahiwatig ng uri ng pathogen, isang nakakapinsalang sangkap sa isang pasyente.

Mga klase ng immunoglobulin

Natuklasan at pinag-aralan ng mga siyentipiko ang 5 uri ng immunoglobulin: IgE, IgD, IgG, IgM, IgA. Mayroong iba pang mga klase, ngunit sila ay nasa yugto pa rin ng pananaliksik, at ang kanilang tungkulin ay hindi pa ganap na naipapaliwanag. Sa praktikal na gamot, mahalaga ang A, M, G. Ang pagiging informative, ang katumpakan ng pagpapasiya ay batay sa mga agwat ng oras kung saan lumilitaw ang mga ito, umabot sa maximum at nawawala.

Mga indikasyon para sa pagsusuri ng dugo sa pamamagitan ng ELISA

Sa tulong ng pagsusuri na ito, posible na suriin ang pagiging epektibo ng paggamot, magsagawa ng isang komprehensibong pag-aaral bago ang mga operasyon ng transplant, matukoy ang estado ng immunodeficiency at antibodies sa higit sa 600 mga uri ng allergens. Ang pagsusuri sa dugo gamit ang ELISA ay ginagamit bilang karagdagang paraan para sa pagtukoy ng mga selula ng kanser. Ang isang pagsusuri ay inireseta kung kinakailangan upang makita ang mga antibodies sa mga microbes na pumukaw sa mga venereal pathologies:

• trichomoniasis;
• syphilis;
• toxoplasmosis;
• mycoplasmosis;
• ureaplasmosis.

Sa mga helminthic invasion sa pagsusuri ng ELISA, mapapansin ang pagtaas sa bilang ng mga immunoglobulin. Ang pananaliksik ay isinasagawa upang kumpirmahin ang presensya ng pasyente:

• Epstein Barr virus;
• mga impeksyon sa herpetic;
• cytomegalovirus;
• mga grupo ng viral hepatitis.

Ang isang enzyme immunoassay ay hindi lamang ang opsyon para sa pagtukoy ng mga immunoglobulin. Minsan may ginagawang bakod para sa pag-aaral na ito. cerebrospinal fluid, tissue ng vitreous body, amniotic fluid. Kapag gumagamit ng dugo, ito ay kinokolekta mula sa cubital vein gamit ang isang injection needle. Kinakailangan na kunin ang pagsusuri sa isang walang laman na tiyan, hindi inirerekomenda na kunin ito bago ang ELISA medikal na paghahanda na maaaring makaapekto sa resulta. Dapat mong iwanan ang alkohol, paninigarilyo, paggamit ng droga bago ibigay ang biomaterial. Mga pagpipilian sa resulta ng pagsubok:

1. Sa mga negatibong marka Mga immunoglobulin ng IgG, IgM, IgA, sabi ng mga doktor walang patolohiya o paunang yugto. Ang parehong resulta (negatibo) ay pagkatapos ng ganap na paggaling pagkatapos ng mahabang panahon.
2. Kung ang IgG ay positibo, ngunit ang IgM at IgA ay hindi nakita, ito ay nagpapahiwatig ng pagbuo ng kaligtasan sa sakit pagkatapos ng pagbabakuna o isang nakakahawang sakit.
3. Sa mataas na titer ng IgM at negatibong IgA, IgG, ang isang talamak na nakakahawang sakit ay nasuri.
4. Sa isang positibong tagapagpahiwatig ng IgG, IgM, IgA, pinag-uusapan ng mga doktor ang talamak na yugto ng pagbabalik ng isang umiiral na malalang sakit.
5. Sa isang talamak na impeksiyon na nasa yugto ng paghina (remission), ang pagsusuri sa ELISA ay nagpapakita ng mga negatibong titer ng IgM, at ang IgA at IgG ay magiging positibo.

Mga kalamangan at kawalan ng pagsusuri sa ELISA

Ang pangunahing negatibong punto ng pag-aaral na ito ay ang posibilidad na makakuha ng maling positibo o maling negatibong resulta. Ang dahilan para sa hindi pagiging maaasahan ay ang paggamit ng mga gamot, mga teknikal na pagkukulang ng laboratoryo. Ang proseso ng mga metabolic disorder sa katawan ay maaaring pekein ang pagsusuri. Ang pangunahing bentahe ng pagsusuri ng ELISA ay:

• katumpakan, pagtitiyak ng diagnostic;
• mababang halaga ng pagsusuri;
• ang bilis ng pagkuha ng mga resulta;
• ang posibilidad ng dynamic na kontrol ng yugto ng patolohiya, ang pagiging epektibo ng paggamot;
• kadalian ng pananaliksik;
• ang kakayahang magsagawa ng mass examinations ng foci ng impeksiyon;
• kawalan ng sakit, kaligtasan para sa pasyente;
• aplikasyon sa pagproseso ng teknolohiya ng impormasyon.

Video

Ang Enzyme-linked immunosorbent assay ay isang diagnostic na pamamaraan na ginagawa upang makita ang mga helminth sa mga bata at matatanda.

Indikasyon para sa pagsasagawa

Inirereseta ng mga doktor ang ELISA para sa pagsalakay sa mga sumusunod na kaso:

• ang bilang ng mga leukocytes sa isang pasyente ay makabuluhang lumampas sa pamantayan sa kawalan ng mga sintomas ng iba pang mga pathologies;
• nag-aalala tungkol sa madalas na pagkahilo o pananakit ng ulo nang walang maliwanag na dahilan;
• nangyayari ang mga reaksiyong alerdyi;
• pagtagumpayan ang sakit ng kalamnan, pagkawala ng lakas;
• ang ubo ay hindi gumagaling sa mahabang panahon;
• kung minsan ay may lagnat na estado;
• sa mga alagang hayop, ang pagkakaroon ng mga bulate ay napansin;
• lumalala ang sitwasyon ng epidemiological sa rehiyon ng paninirahan;
• ang propesyon ng pasyente ay nauugnay sa isang mataas na peligro ng impeksyon sa mga bulate (naisasagawa ang mga naka-iskedyul na diagnostic).

• digestive disorder na may pagbabago sa dumi at dalas nito;
• sakit sa tiyan;
• colic sa atay;
• pagduduwal na nagiging pagsusuka;
• mga palatandaan ng pinsala sa gitna sistema ng nerbiyos: hindi pagkakatulog, nadagdagan ang nerbiyos, matalim na patak mga mood.

Mga uri ng ELISA

Ginagawang posible ng reaksyon ng enzymatic na pag-aralan ang mga uri ng helminth na itinatag ng mga katulong sa laboratoryo na may visual na pagsukat ng data tungkol sa kanila.

Ang iba't ibang uri ng ELISA ay isinasagawa sa mga laboratoryo:

Paano kumuha

Upang ang mga resulta ng pag-aaral ay maging maaasahan hangga't maaari, ang lahat ng mga kinakailangan sa laboratoryo ay dapat na mahigpit na sundin. kailangan:

• 3 araw bago mag-donate ng dugo, itigil ang pag-inom ng lahat ng gamot, maliban sa mga mahahalagang gamot;
• suspindihin ang mga pamamaraan ng physiotherapy sa loob ng 2 araw;
• iwanan ang alkohol at kape sa loob ng 1 araw;
• hindi malantad sa araw bago pisikal na Aktibidad at emosyonal na stress
• maghapunan nang hindi lalampas sa 19-20 na oras (maaari kang uminom ng tubig sa umaga).

Pag-decryption

Opsyon numero 1. IgM-, IgA+, IgG-: pangunahing sakit (2 linggo mula sa impeksyon).

Opsyon numero 2. IgM+, IgA+, IgG-: pangunahing sakit (2.5-3 linggo mula sa impeksyon).

Opsyon numero 3. IgM+, IgA+, IgG+: Pangunahing impeksiyon (3-4 na linggo pagkatapos ng impeksiyon).

Opsyon numero 4. IgM-, IgA+, IgG+: exacerbation malalang sakit(2 linggo mula sa simula ng exacerbation).

Opsyon numero 5. IgM-, IgA+/-, IgG+: talamak na yugto.

Opsyon numero 6. IgM-, IgA-, IgG+: gumaling (nakaraang) impeksyon, pagkakaroon ng kaligtasan sa sakit.

Opsyon numero 7. Ang IgM-, IgA, IgG ay hindi nakita (o pagbaba ng titer ng 2-4 beses sa pagtatapos ng paggamot, ng 5-8 beses pagkatapos ng 1-1.5 na buwan pagkatapos ng paggamot): pagbawi.

Opsyon numero 8. IgM-, IgA-, IgG-: kakulangan ng kaligtasan sa impeksyon.

Mga kalamangan at kahinaan

Napakabihirang para sa isang pagsubok na magbigay ng maling positibo o maling negatibong mga resulta. Ang mga dahilan para sa kakulangan na ito ay maaaring mga teknikal na pagkakamali. Ang ganitong mga resulta ay posible sa rheumatoid factor, na may metabolic disorder at iba pa malalang sakit, dahil sa kung saan ang mga proteksiyon na antibodies ay ginawa, gayundin kapag umiinom ng ilang partikular na gamot, tulad ng insulin.

Tinutukoy ng pamamaraang ELISA:

• tapeworms (pork tapeworms);
• roundworms (roundworms, pinworms, toxocara, strongyloiditis);
• flatworms (cestodes, flukes, nematodes);
• trichinella;
• sa mga roundworm - 935 rubles;
• sa toxoplasma - 715-1000 rubles.