Əgər cəmi at. IF qan analizi. Sifilis üçün ELISA: analiz texnikası, şərhi, yanlış müsbət nəticələrin səbəbləri

Samoylikov Pavel Vladimiroviç Klinik Laboratoriya Diaqnostikası şöbəsinin internatı

Rusiya Dövlət Tibb Universiteti

İmmunoassay üsulları geniş şəkildə daxil edilir tibbi təcrübə. Bütün sahələrdə müasir tibb istifadə olunur immun analizi, əsasən diaqnostik və analitik məqsədlər üçün. Onların aşağı və çox aşağı konsentrasiyalarda bioloji komponentləri (hormonlar, fermentlər, neyropeptidlər, immun sisteminin məhsulları, antigenlər və s.) müəyyən etməyə imkan verməsi xüsusilə vacibdir. Antikor əldə etmək mümkün olan bütün məhsullar bu üsullarla aşkar edilir.

İmmun analizi komponentlərdən biri (ferment, radionuklid, flüoresan boya və s.) üçün müxtəlif etiketləmə seçimlərindən istifadə etməklə antigen (AG) və antikorun (AT) qarşılıqlı təsirinə əsaslanır. Reaksiyanın qiymətləndirilməsi xüsusi avadanlıqda avtomatik olaraq həyata keçirilir ki, bu da bu üsulları standartlaşdırmağa imkan verir.

İstifadə olunan etiketin növündən və testin qurulması şərtlərindən asılı olaraq, immunoassay ferment immunoassay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), immunofluoressensiya və s. adlanır. Reaksiyalar bir və ya bir neçə mərhələdə həyata keçirildikdə, onlar birbaşa və ya dolayı olaraq təyin olunur. Reaksiyanın aparıldığı mühit vacibdir. Reaksiya səthdə sabitlənmiş reagentlərlə aparılırsa, test bərk faza testi kimi təyin edilir, məsələn, ELISA (fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi).

Bu yazıda yalnız ferment immunoanalizi nəzərdən keçiriləcək - biologiya və tibbdə həm praktik, həm də fundamental olaraq geniş istifadə olunan bir üsul.

ELISA 60-cı illərin ortalarında ortaya çıxdı və əvvəlcə bir antigenin müəyyən edilməsi üçün bir üsul olaraq hazırlanmışdır. histoloji hazırlıq, həmçinin immunodiffuziya və immunoelektroforez testində çökmə xətlərinin vizuallaşdırılması üçün və sonra antigenlərin və antikorların kəmiyyət təyini üçün istifadə olunmağa başlandı. bioloji mayelər. Metodun işlənib hazırlanmasında E.Enqvall və R.Pelman, həmçinin onlardan asılı olmayaraq V.Van Veeman və R.Şurs iştirak etmişlər.

Şəkil 1. ELISA-nın əsas prinsipi.

1) Antigenləri aşkar etmək üçün. 2) Antikorları aşkar etmək üçün.

Metod, bir antikorun bir antigenə spesifik bağlanmasına əsaslanır, komponentlərdən biri isə bir fermentlə birləşir; müvafiq xromogen substrat ilə reaksiya nəticəsində, miqdarı ola bilən rəngli bir məhsul meydana gəlir. spektrofotometrik olaraq təyin edilir (şək. 1).

Müxtəlif daşıyıcılarda antigen və anticisimlərin immobilizasiyasının mümkünlüyünün aşkar edilməsi, onların bağlanma fəaliyyətini saxlamaqla, biologiyanın və təbabətin müxtəlif sahələrində ELISA-nın istifadəsini genişləndirməyə imkan vermişdir.

Monoklonal antikorların görünüşü ELISA-nın daha da inkişafı kimi xidmət etdi, bu da onun həssaslığını, spesifikliyini və nəticələrin təkrarlanmasını artırmağa imkan verdi.

Nəzəri cəhətdən ELISA müasir immunokimya və kimyəvi enzimologiyanın məlumatlarına, antigen-antikor reaksiyasının fiziki-kimyəvi qanunlarına dair biliklərə, həmçinin analitik kimyanın əsas prinsiplərinə əsaslanır. ELISA-nın həssaslığı və onun müddəti bir neçə əsas faktorla müəyyən edilir: antigen-antikor reaksiyasının kinetik və termodinamik xüsusiyyətləri, reagentlərin nisbəti, ferment aktivliyi və onun aşkarlanması üsullarının həlli. IN ümumi görünüş Antigen-antikor reaksiyası sadə şəkildə təsvir edilə bilər:

+[AG]↔[ATAG]

Aşağı molekulyar ağırlıqlı birləşmələrdən tutmuş viruslara və bakteriyalara qədər müxtəlif tədqiqat obyektləri, eləcə də ELISA-nın istifadəsi üçün müxtəlif şərtlərlə əlaqəli qeyri-adi geniş spektrli tapşırıqlar son dərəcə geniş bir tədqiqatın inkişafını müəyyən edir. böyük rəqəm bu metodun variantları.

İstənilən ELISA variantı 3 məcburi mərhələdən ibarətdir:

1. immun kompleksin əmələ gəlməsinə səbəb olan test birləşməsinin ona xas olan antikor tərəfindən tanınması mərhələsi;

2. konyuqatın immun kompleksi və ya sərbəst bağlanma yerləri ilə əlaqəsinin formalaşma mərhələsi;

3. ferment etiketinin qeydə alınmış siqnala çevrilməsi mərhələsi.

ELISA metodlarının təsnifatı bir neçə yanaşmaya əsaslanır:

1. ELISA-nın birinci mərhələsində mövcud olan reagentlərin növünə görə rəqabətli və qeyri-rəqabətli üsullar fərqləndirilir.

A) Rəqabətli ELISA-da, birinci mərhələdə sistem həm analiz edilən birləşməni, həm də fermentlə işarələnmiş və onunla xüsusi bağlanma yerləri üçün rəqabət aparan onun analoqunu ehtiva edir.

B) Qeyri-rəqabətli metodlar üçün sistemdə yalnız təhlil edilən birləşmənin və ona xas olan bağlama mərkəzlərinin birinci mərhələdə olması xarakterikdir.

2. Bütün ELISA üsulları homojen və heterojen bölünür.

ELISA-nın hər üç mərhələsi məhlulda aparılırsa və əsas mərhələlər arasında formalaşmış immun komplekslərin reaksiyaya girməmiş komponentlərdən ayrılması üçün əlavə mərhələlər yoxdursa, üsul homojen olanlar qrupuna aiddir.

Adətən aşağı molekulyar ağırlıqlı maddələri təyin etmək üçün istifadə edilən homojen ELISA-nın əsası, bir antigen və ya antikor ilə birləşdirildikdə ferment fəaliyyətinin inhibə edilməsidir. Antigen-antikor reaksiyası nəticəsində fermentin fəaliyyəti bərpa olunur.

Antikor, tərkibində ferment etiketi olan bir antigenə bağlandıqda, fermentin fəaliyyəti yüksək molekulyar ağırlıqlı substrata nisbətən 95% inhibə edilir, bu da substratın fermentin aktiv mərkəzindən sterik şəkildə çıxarılması ilə əlaqədardır. Antigenin konsentrasiyası artdıqca, daha çox antikor bağlanır və yüksək molekulyar ağırlıqlı substratı hidroliz edə bilən daha çox sərbəst antigen-ferment konjugatları saxlanılır. Təhlil çox tez aparılır, bir təyinat üçün 1 dəqiqə vaxt lazımdır. Metodun həssaslığı olduqca yüksəkdir. Bununla, maddəni pikomollar səviyyəsində təyin edə bilərsiniz.

Heterojen üsullar üçün, bərk fazanın - daşıyıcının və immun komplekslərin reaksiyaya girməmiş komponentlərdən (yuyulma) məcburi ayrılması mərhələsinin iştirakı ilə iki fazalı sistemdə təhlil aparmaq xarakterikdir. müxtəlif fazalar(formalaşmış immun komplekslər bərk fazada, reaksiyaya girməyən komplekslər isə məhluldadır). Birinci mərhələdə immun komplekslərin əmələ gəlməsinin bərk fazada davam etdiyi heterojen üsullara bərk fazalı üsullar deyilir.

Metodlar homogen-heterojen kimi təsnif edilir, əgər 1-ci mərhələ - məhlulda xüsusi komplekslərin əmələ gəlməsi baş verirsə və sonra komponentləri ayırmaq üçün hərəkətsizləşdirilmiş reagentlə bərk faza istifadə olunur.

3. Sınaq maddəsinin təyini prinsipinə görə:

A) Maddənin (antigen və ya anticisim) konsentrasiyasının onunla qarşılıqlı əlaqədə olan bağlama mərkəzlərinin sayına görə birbaşa təyini. Bu halda, ferment etiketi ortaya çıxan xüsusi AG-AT kompleksində olacaqdır. Analitin konsentrasiyası qeydə alınmış siqnalla düz mütənasib olacaqdır.

B) Maddənin konsentrasiyasının fərqlə təyini ümumi sayı bağlama saytları və qalan pulsuz bağlama saytları. Bu halda analitin konsentrasiyası artacaq və qeydə alınan siqnal azalacaq, buna görə də bu halda qeydə alınan siqnalın böyüklüyündən tərs asılılıq yaranır.

Fermentlər.

Ferment etiketləri son dərəcə güclü katalitik təsirə malikdir; bir ferment molekulu çox sayda substrat molekulu ilə reaksiya verə bilər. Beləliklə, cüzi miqdarda mövcud olan bir ferment, məhsulların əmələ gəlməsi, kataliz etdiyi reaksiya ilə aşkar edilə və ölçülə bilər. Fermentlərdən etiket kimi istifadənin digər üstünlüyü molekulda çoxsaylı funksional qrupların (sulfhidril, karboksil, tirazin qalıqları və s.) olması ilə bağlıdır ki, bu qruplar vasitəsilə ligand molekulları kovalent bağlana bilir.

ELISA-da istifadə olunan enzimatik markerlər aşağıdakı xüsusiyyətlərə malik olmalıdır:

– fermentin analiz şəraitində, modifikasiya zamanı və antitellərlə və ya digər zülallarla konjuqada yüksək aktivliyi və sabitliyi;

– həssas substratların olması və fermentativ reaksiyanın məhsullarını və ya substratlarını təyin etmək üsulunun sadəliyi;

– substrat sistemlərinin daha da möhkəmlənməsinə uyğunlaşma imkanı;

- öyrənilən bioloji mayedə fermentin və onun inhibitorlarının olmaması.

ELISA ən azı 15 fərqli fermentdən istifadə edə bilər. Ən Böyük Tətbiq, yuxarıda göstərilən tələblərə uyğun olaraq, horseradish peroksidaza (HRP), qələvi fosfataz (AP) və β-D-qalaktozidaza (cədvəl 1) tapıldı. Hər üçü sabitdir və yüksək həssas reaksiyaları kataliz edir. Bundan əlavə, istifadə olunan substratdan asılı olaraq, bu fermentlərin kataliz etdiyi reaksiyalar nəticəsində əldə edilən məhsullar yalnız kolorimetrik üsullarla deyil, həm də aşkar edilə bilər. floresan üsullar. Digər fermentlər daha az istifadə olunur. Bu, HRP və AP ilə müqayisədə onların daha aşağı spesifik fəaliyyəti ilə izah olunur.

Substratlar.

Substrat seçimi ilk növbədə etiket kimi istifadə olunan ferment tərəfindən müəyyən edilir, çünki ferment-substrat reaksiyası yüksək spesifikdir.

Substrat üçün əsas tələblər:

– konjugatda fermentin aşkarlanmasında metodun yüksək həssaslığının təmin edilməsi;

– ferment-substrat reaksiyasının yaxşı müəyyən edilmiş (məsələn, rəngli) məhsullarının əmələ gəlməsi;

– substrat təhlükəsiz, ucuz, əlçatan və istifadəsi rahat olmalıdır.

Cədvəl 1.

ELISA-da fermentlər və onların substratları ən çox istifadə olunur.

Daha tez-tez xromogen substratlar istifadə olunur, onlar məhv edildikdə rəngli bir maddə meydana gətirirlər. Perspektivli yüksək enerjili substratların istifadəsidir - flüoresan, kimiluminesans. Belə substratların istifadəsi nəzəri cəhətdən ELISA-nın həssaslığını iki böyüklük dərəcəsi ilə artırmağa imkan verir.

Antigenlər və antikorlar.

ELISA-da istifadə edilən AG və AT yüksək təmizlənmiş və yüksək aktiv olmalıdır. Bundan əlavə, AG yüksək antigenliyə, optimal sıxlığa və antigen təyin edənlərin sayına, yadlığa və bircinsliyə malik olmalıdır. Virusların və bakteriyaların bir çox sintetik və rekombinant antigenləri ELISA-da istifadə edildikdə özlərini yaxşı sübut etdilər. Bu, çarpaz reaksiyaları minimuma endirməklə metodun spesifikliyini və təkrar istehsalını əhəmiyyətli dərəcədə artırdı.

ELISA-da ən vacib reagentlərdən biri antikorlardır. ELISA həssaslığı istifadə olunan antikorların konsentrasiyası, aktivliyi və spesifikliyindən asılıdır. İstifadə olunan antikorlar poli- və ya monoklinal, müxtəlif sinif (IgG və ya IgM) və alt sinif (IgGl, IgG2), anti-allotipik və ya anti-idiotip ola bilər. Aşağı AT yaxınlığında AG-AT kompleksinin parçalanması bağlı AG-nin sistemdən çıxarılmasına gətirib çıxarır. Metodun həssaslığı və spesifikliyi monoklonal antikorların istifadəsi ilə gücləndirilir. Bu halda sınaq nümunələrində AG-nin (AT) aşağı konsentrasiyalarını aşkar etmək mümkün olur.

Konjugat formalaşması

Konjugat bir ferment etiketi ilə etiketlənmiş bir antigen və ya antikordur. Konjugatın formalaşması ELISA-da vacib addımlardan biridir.

Konjugat əmələ gətirərkən belə a ən yaxşı üsul konjugatın hər iki komponentinin öz bioloji aktivliyini saxlaması üçün ferment etiketinin tətbiqi: ferment - substratla qarşılıqlı əlaqə və antigen və ya antikor - müvafiq olaraq antigenlik və antigen bağlayan aktivlik. Etiketli, yüksək dərəcədə təmizlənmiş antigenin olması rəqabətli üsullardan istifadə etməyə imkan verir. Bu halda, immobilizasiya edilmiş antikorlara bağlı olmayan konjugatın fəaliyyəti son mərhələdə ölçülə bilər ki, bu da yuyulma prosedurundan qaçır və təhlili daha rahat edir. Bununla belə, antigenlər fiziki-kimyəvi xassələrinə və quruluşuna görə müxtəlifdir, yəni inkişaf etdirmək mümkün deyil. universal texnika antigen ilə konjugat əldə etmək. Bu halda, antigen-ferment konjugatının əldə edilməsi ayrı bir problemdir. ELISA üçün etiketli antikorların hazırlanması metodik olaraq daha əlçatandır.

Fermentin immunokimyəvi cəhətdən aktiv zülallarla konjuqasiyası müxtəlif üsullarla həyata keçirilir: kimyəvi çarpaz əlaqə, ferment molekulunun AG və ya AT ilə kovalent bağlanması və kovalent olmayan bağlar vasitəsilə birləşmələrin əmələ gəlməsi, məsələn, zülallar arasında əlaqə yarandıqda ferment və AG və ya AT immunoloji olaraq, antigen-antikor qarşılıqlı təsiri ilə həyata keçirilir.

Konjugatların hazırlanması üçün ən çox istifadə edilən kovalent üsullar. Bağlanma reaksiyasının seçimi bu protein molekullarında mövcud olan funksional qrupların növü ilə müəyyən edilir. Fermenti antigen və antikor molekullarına daxil etmək üçün istifadə olunan reagentlər kimi qlutaraldehid, natrium periodat və s.

Qlutaraldehiddən istifadə edərək konjugatların alınması üçün bir və iki mərhələli üsullar mövcuddur. Enzimatik aktivliyi azalmış müxtəlif ölçülü konjugatlar (sərbəst fermentin 15 - 60%-i) əmələ gələ bilər. Nəticədə konjugat böyük ölçülər sınaq maddəsinin təyin edilməsinə sterik şəkildə mane ola bilər. Nisbətən aşağı molekulyar ağırlıqlı konjuqatlar Fab fraqmentindən və bir ferment molekulundan ibarətdir.

Əvvəlcə çarpaz birləşdirici maddə ilə dəyişdirilmiş fermentin mərhələli hazırlanmasından, onun təcrid olunmasından, sonra isə antigenlə (antikor) qarşılıqlı təsirindən ibarət iki mərhələli sintez nəticəsində Hər immunoqlobulin molekulunda 1-2 ferment molekulu olan və yüksək fermentativ və immunoloji aktivliyi saxlayan homojen tərkib formalaşır. Bununla belə, əmələ gələn bu cür birləşmələrin miqdarı azdır (horseradish peroksidaza üçün 5-10%).

Fermentin karbohidrat komponentinin natrium periodat ilə oksidləşməsinə əsaslanan immunoperoksidaza konjuqatlarının alınması üsulu (peroksidazanın konyuqata bağlanması fermentin ilkin miqdarının 70-90%-nə çatır) ən böyük praktik tətbiqini tapmışdır.

Etibarlı konjugat aşağıdakı xüsusiyyətlərə malik olmalıdır:

Yüksək antikor pələng və antigen üçün yüksək yaxınlıq, beləliklə yüksək seyreltmədə istifadə edilə bilər və beləliklə qeyri-spesifik bağlanmanı azaldır;

İşçi heyvandarlıqda kifayət qədər spesifiklik;

Monomer formaların polimerlərdən üstün olması, çünki polimer formaları qeyri-spesifik olaraq plastikə yapışmağa meyllidir, nəticədə reaksiyanın yüksək fon səviyyəsi;

Ferment və antikorlar arasında optimal molar nisbət (optimal nisbət təxminən 1: 1-dir);

Konjugatın kifayət qədər fermentativ fəaliyyəti. Bu xassə əsasən konyuqasiya şərtləri və konjugatdakı ferment və antikor molekullarının nisbəti ilə müəyyən edilir.

bərk faza

ELISA üçün bərk faza kimi müxtəlif materiallardan istifadə edilə bilər: polistirol, polivinilxlorid, polipropilen və digər maddələr. Bərk faza bir sınaq borusunun divarları, 96 quyu və digər lövhələr, toplar, muncuqlar, həmçinin nitroselüloz və zülalları aktiv şəkildə udan digər membranlar ola bilər.

Antigenin və ya antikorların bərk fazada immobilizasiyası üç yolla mümkündür:

– zülallar və sintetik səth arasında güclü hidrofobik qarşılıqlı təsirlərə əsaslanan passiv adsorbsiya;

– bərk fazaya kovalent bağlanma;

– immunokimyəvi və s. (qeyri-kovalent və adsorbsiyasız birləşmə).

Titrləmə lövhələrində, nitroselüloz membranlarında ELISA apararkən zülalların passiv adsorbsiyasından geniş istifadə olunur. Passiv adsorbsiya doyma prinsipinə əməl edir və adsorbsiya olunan maddənin molekulyar çəkisi ilə əlaqələndirilir. Müxtəlif tipli (nitroselüloz, neylon və s.) membranların adsorbsiya səthi plastikdən 100-1000 dəfə yüksəkdir.

Polisaxaridlər və yüksək qlikosilləşdirilmiş zülallar çox vaxt polistirol üçün aşağı yaxınlığa malikdirlər. Onları hərəkətsizləşdirmək üçün glutaraldehidlə kovalent birləşmə kimi digər üsullara ehtiyac var. Bərk faza kimi hidrofilik muncuqlar (agaroz) və polistirol muncuqları istifadə olunarsa, kovalent bağlama effektivdir.

İmmunokimyəvi üsullar antigeni və ya antikorları hərəkətsizləşdirmək üçün əvvəlcədən adsorbsiya edilmiş "tələ" anticisimlərinin istifadəsinə əsaslanır. İmmunokimyəvi immobilizasiya olunmuş antigen passiv adsorbsiya edilmiş antigendən 10 dəfə aktivdir. Konkanavalin A (Con A) və ya stafilokokal protein A kimi plastik və ya digər hidrofobik səthlərdə asanlıqla adsorbsiya olunan bakteriyaların lektinləri və ya immunoqlobulin bağlayan zülalları istifadə edilə bilər. Con A HİV virusunun gp 120 zülalını hərəkətsizləşdirməyə qadirdir.

Bərk fazanın səthində sorbiyalı agentlə əlaqəsi olmayan sərbəst yerlər test zamanı digər molekulları, o cümlədən konjugatları düzəldə bilər ki, bu da fon siqnalının artmasına səbəb olur. Əsas materialın bərk fazasında immobilizasiyadan sonra qeyri-spesifik bağlanmanın qarşısını almaq üçün sınaq üçün neytral olan maddələrlə müalicə aparılır. Ən məşhur bloklayıcı agentlər iribuynuzlu zərdab albumini (BSA), kazein və s. bloklayıcı agentin seçimi və bu mərhələnin şərtləri bərk fazanın növündən, sistemin həssaslığından asılıdır.

Hal-hazırda ELISA-nın çoxlu sayda müxtəlif çeşidləri və modifikasiyaları istifadə olunur. Fermentlə əlaqəli immunosorbent analizinin (ELISA) müxtəlif variantları geniş yayılmışdır.

Bərk fazalı ELISA 1971-ci ildə təklif edilmişdir. Dəyişiklikdən asılı olmayaraq bərk fazalı ELISA-nın əsas prinsipləri aşağıdakılardır:

1. Reaksiyanın 1-ci mərhələsində antigenlər və ya anticisimlər bərk fazada adsorbsiya edilir. Bu zaman bərk fazaya bağlı olmayan reagentlər yuyulmaqla asanlıqla çıxarılır.

2. Sınaq nümunəsi sensibilizasiya edilmiş quyularda inkubasiya edilir. Müsbət nəzarət quyularında standart reagentlər var. Bu zaman bərk fazanın səthində immun komplekslər əmələ gəlir. Bağlanmayan komponentlər yuyulma yolu ilə çıxarılır.

3. Antikor-ferment və ya antigen-ferment konjugatı əlavə edildikdə və onu immobilizasiya edilmiş immun kompleksinə bağladıqda, fermentin aktiv sahəsi substratla sonrakı qarşılıqlı əlaqə üçün mövcud olaraq qalır. Substratın immobilizasiya edilmiş konjugatı olan quyularda inkubasiyası rəng reaksiyasının inkişafına səbəb olur. Bu reaksiya istənilən mərhələdə dayandırıla bilər, boyanmanın şiddəti vizual və ya optik sıxlıqla qiymətləndirilə bilər.

Bərk fazalı analizin istənilən variantında mühüm addım bağlanmamış reagentlərin yuyulması prosedurudur. Yalnız bərk fazaya sabitlənmiş komponentləri yaxalamaq deyil, reagentləri təbəqənin bütün dərinliyindən çıxarmaq vacibdir. Bunlar təhlilin ən çox vaxt aparan və zəhmət tələb edən mərhələləridir. Nümunələr xüsusi cihazdan - yuyucudan və ya əl ilə, çoxkanallı pipetka ilə avtomatik yuyula bilər. ELISA aparmaq üçün sizə lazımdır:

- polistirol tablet və ya istifadə olunan digər bərk faza variantları;

- yuyucu məhlul;

– konjugat (enzimatik olaraq işarələnmiş antigenlər və ya antikorlar);

– istifadə olunan substratların qarışığı;

- dayandırıcı məhlul (Stop reagent - reaksiyanı dayandırmaq üçün məhlul);

- müsbət və/və ya mənfi nəzarət üçün istifadə edilən nümunələr;

– standart antigen (kalibrləmə əyrisinin qurulması üçün);

– tək və çoxkanallı pipetlər;

– yuyucu (paltaryuyan);

– sınaq məhlulunun optik sıxlığını təyin etmək üçün optik cihaz (ELISA oxuyucusu, bütün quyuları ardıcıl olaraq fotometr edən oxuyucu);

- 5-100 µl öyrənilən bioloji material.

Birbaşa ELISA

1. Panellərin quyularında antigenlər və ya antikorlar (sınaq materialı) adsorbsiya edilir. Yuxarıda qeyd olundu ki, antigenlər hansı sinif maddələrə (zülallar, karbohidratlar və ya lipoproteinlər) aid olduqlarından asılı olaraq müxtəlif növ plastiklərdə adsorbsiya olunmaq qabiliyyətinə görə əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənirlər. Çox vaxt birbaşa ELISA-da bərk fazada immobilizasiya olunan antigen hüceyrələr və digər hissəcikli antigenlər olur.

Nəzarət. Nəzarət olaraq, mütləq arzu olunan antigeni ehtiva edən adsorbsiya edilmiş müsbət nəzarət nümunəsi olan quyulardan və aşkar şəkildə test antigeni olmayan mənfi nəzarət nümunəsi istifadə olunur. Təmizlənmiş standart antigenin iştirakı ilə reaksiya bir neçə seyreltmədə aparılır ki, kalibrləmə əyrisi qurulsun.

2. “Bərk fazada qalan sərbəst bağlanma yerlərini kazein BSA və s. ilə bloklayın (bərk fazada konyuqatın qeyri-spesifik sorbsiyasının qarşısını almaq üçün).

3. Quyulara ferment etiketli antikorlar və ya antigenlər (konjugat) əlavə edilir və inkubasiya edilir. Birləşmənin bərk fazaya bağlanması yalnız sistemin hər iki komponenti bir-birini tamamlayanda baş verəcəkdir. Konjugat ilə inkubasiya edildikdən sonra quyular yuyulur, beləliklə konjugatın bağlanmamış hissəsi çıxarılır.

4. İstifadə olunan fermentə xas olan substrat daha sonra quyulara əlavə edilir və inkubasiya edilir. Çatdıqda optimal səviyyə müsbət nəzarət quyularında boyanma, fermentativ reaksiya dayandırılır.

5. Reaksiyanın uçotu. Birincisi, reaksiyanın nəticələri vizual olaraq nəzərə alınır. Nəticələrin daha dəqiq hesablanması üçün boyanma intensivliyi müvafiq işıq filtri olan ELISA oxuyucuda qiymətləndirilir. Təhlilin nəticələrinə əsasən optik sıxlığın konsentrasiyadan asılılığının qrafiki çəkilir (şək. 2).

Şəkil 2. Birbaşa ELISA.

a) antigeni aşkar etmək; b) antikorları aşkar etmək üçün.

ELISA-nın bu variantı adətən xüsusi antikorları aşkar etmək üçün istifadə olunur. Standart antigen panellərin quyularında adsorbsiya edilir və xəstədən alınan zərdab və ya digər bioloji materialın nümunələri ilə (beyin onurğası mayesi, tüpürcək və s.) inkubasiya edilir. Bərk fazada antigenə bağlanmış spesifik antikorlar bir antiglobulin konjugatı istifadə edərək aşkar edilir. Təhlilin məqsədindən asılı olaraq, bütün izotiplərin antikorlarını aşkar edən və ya immunoqlobulinlərin ayrı-ayrı siniflərinə və alt siniflərinə xas olan müxtəlif antiqlobulin reagentləri istifadə olunur. Metodun əsas üstünlüyü konjugatın universallığıdır. Eyni konjugat istənilən nümunədə müxtəlif antigenlərə qarşı insan antikorlarını aşkar etmək üçün istifadə edilə bilər. Reaksiya metodik cəhətdən sadədir.

Antikorların aşkarlanması üçün dolayı ELISA-nın əsas mərhələləri:

1. Antigen bərk fazada adsorbsiya edilir, sonra bağlanmamış komponentlərdən yuyulur.

2. Pulsuz bağlama saytlarını bloklayın. Yuyulmuş.

3. Test materialı quyulara əlavə edilir, inkubasiya edilir və sonra yuyulur. Paralel olaraq müsbət və mənfi nəzarətləri olan nümunələr yerləşdirilir.

4. Antiqlobulin konjuqatını işlək durulamaya əlavə edin, inkubasiya edin, bağlanmamış komponentləri yuyun.

5. Substrat daxil edilir, inkubasiya edilir. Müsbət nəzarət quyularında boyanmanın optimal səviyyəsinə çatdıqdan sonra dayandırıcı məhlul əlavə edilərək reaksiya dayandırılır.

6. ELISA oxuyucusunda reaksiya məhsulunun miqdarını ölçün (şəkil 3).

Optimal analiz şəraitində metod yüksək spesifik və həssasdır. O, tədqiq olunan xəstələrin zərdabında anticisimlərin nanoqram miqdarını aşkar etməyə imkan verir. Qənaətbəxş nəticələr əldə etmək üçün reagentlərin və metodologiyaların standartlaşdırılması lazımdır. Bu ELISA variantı monoklonal antikorları yoxlamaq üçün də istifadə edilə bilər.

ilə aşkar edilən antigenlər bu seçim ELISA antikorları bağlaya bilən bir neçə epitopa və ya eyni spesifikliyə malik təkrarlanan, məkanla ayrılmış epitoplara malik olmalıdır.

ELISA-nın bu variantını həyata keçirərkən, bərk fazada adsorbsiya edilmiş yüksək spesifik poli- və ya monoklonal antikorlar sınaq nümunəsi ilə inkubasiya edilir. Yuyulma prosedurundan sonra quyulara eyni antigenə fermentlə işarələnmiş antikorlar (konjugat) əlavə edilir və sonra reaksiyanın bütün digər mərhələləri həyata keçirilir. Təhlilin hər bir mərhələsində spesifik kompleksin formalaşmasının səmərəliliyi antigen-antikor reaksiyasının bağlanma sabitindən asılıdır.

Təhlilin əsas mərhələləri:

1. Monoklonal anticisimlər və ya yaxınlıqdan təmizlənmiş poliklonal anticisimlər bərk fazada hərəkətsizləşdirilir.

2. Sınaq nümunəsi panellərin quyularına daxil edilir, müsbət nəzarət nümunəsi və mənfi nəzarət nümunəsi müxtəlif seyreltmələrdə paralel olaraq yerləşdirilir. İnkubasiya və yuyulur.

3. Quyulara ferment etiketli monoklonal və ya poliklonal anticisimlər (konjugat) daxil edilir. Yuma inkubasiyadan sonra həyata keçirilir.

4. Substrat daxil edilir, inkubasiya edilir. Müsbət nəzarət quyularında optimal boyanma əldə edildikdə reaksiya dayandırılır.

5. ELISA oxuyucusunda nəticələrin uçotu.

Metodun əsas üstünlüyü onun yüksək həssaslığıdır ki, bu da digər ELISA sxemlərinin imkanlarını üstələyir (Şəkil 4).

Şəkil 3. Antikorları aşkar etmək üçün dolayı ELISA.

Bu analiz variantı bərk fazada adsorbsiya edilmiş antigenə bağlanmaq üçün etiketlənmiş (konjugat) və etiketsiz (test) antikorların rəqabətinə əsaslanır. Bərk fazaya bağlanan fermentin miqdarı qarışıqdakı sərbəst antikorların tərkibinə mütənasib olaraq azalacaq. Antigeni müəyyən etmək üçün eyni variantdan istifadə olunur, lakin bu halda istənilən antigen bərk fazanın səthində immobilizasiya olunmuş antikorlara bağlanmaq üçün etiketli, standart antigenlə rəqabət aparır.

Rəqabətli metod minimum sayda əməliyyat, reagentlərin az istehlakını tələb edir və asanlıqla avtomatlaşdırıla bilər. Antikorların aşkarlanması üçün rəqabətli ELISA apararkən, etiketli monoklinal antikorlardan istifadə etmək daha yaxşıdır, sonra test nümunəsi ilə konyuqatın rəqabəti bərk fazada adsorbsiya edilmiş antigenin tək epitopu üçün baş verir. Bu ELISA variantı insan immunoqlobulinləri, xərçəng-embrion antigeni, insulin və s. kimi müxtəlif birləşmələri təyin etmək üçün istifadə olunur. O, yoluxucu agentlərin diaqnostik əhəmiyyətli epitoplarına antikorların aşkar edilməsinə imkan verir.

Antigenin aşkarlanması üçün analizin əsas mərhələləri (Şəkil 5):

1. Aşkar ediləcək antigen üçün spesifik monoklonal antikorlar bərk fazada hərəkətsizləşdirilir.

2. Fermentlə etiketlənmiş antigeni və məlum konsentrasiyada sınaq nümunəsini panellərin quyularına əlavə edin. İnkubasiya və yuyulma aparın. Paralel olaraq, qonşu quyularda müsbət və mənfi nəzarətlər yerləşdirilir. Müxtəlif seyreltmələrdə standart etiketsiz antigendən istifadə edərək kalibrləmə qurmaq.

3. Substrat əlavə edin, inkubasiya edin, müsbət nəzarət quyularında optimal boyanma yarandıqda reaksiyanı dayandırın.

4. ELISA oxuyucusunda reaksiyanın uçotu.

Bu halda test nümunəsindəki antigenin miqdarı bərk fazada fermentativ aktivliyə tərs mütənasibdir.

ELISA-nın bu variantında test nümunəsində mövcud olan antigen fermentlə işarələnmiş monoklonal antikorlara bağlanır və onların bərk fazada immobilizasiya olunmuş standart antigenlə qarşılıqlı təsirini maneə törədir. Nümunədə konyuqata xas olan hətta az miqdarda antigenin olması etiketlənmiş antikorların immobilizasiya edilmiş antigenə bağlanmasına mane olacaq. İnhibə dərəcəsi məhluldakı antigenin tərkibi ilə birbaşa mütənasibdir. Kəmiyyət təhlili üçün standart antigenin ardıcıl seyreltmələrindən istifadə edərək kalibrləmə əyrisi qurulur. Antigenin aşkarlanması üçün inhibitor ELISA-nın əsas mərhələləri (Şəkil 6).

1. Panellərin quyularında standart antigeni adsorbsiya edin. Titrləmə yolu ilə etiketlənmiş antikorların işlək durulmasını seçin.

Şəkil 4. "Sendviç" - ELISA variantı.

2. Konjugat sınaq nümunəsinin, standart antigenin və pozitiv nəzarət nümunələrinin seyreltmələri ilə işçi seyreltmədə əvvəlcədən inkubasiya edilir.

3. Qarışıq panellərin quyularına köçürülür. 100% bağlanmaya nəzarət etmək üçün, inhibitor antigen olmadan yalnız etiketli antikorlar bir neçə quyuya əlavə edilir. Panellər inkubasiya edilir və sonra yuyulur.

4. Substrat əlavə edin.

5. Nəticələri qeyd edin.

Test nümunəsində müəyyən ediləcək antigenin konsentrasiyası bərk fazada fermentativ aktivliyə tərs mütənasibdir.

ELISA yalnız həll olunan bir antigen və ya antikor təyin etmək üçün deyil, həm də müxtəlif zülallar istehsal edən hüceyrələri təyin etmək üçün istifadə edilə bilər.

1983-cü ildə ELISA texnologiyası in vitroda antitellər və ya antigenlər (məsələn, sitokinlər) ifraz edən limfoid hüceyrələrin aşkarlanması üçün uyğunlaşdırılmışdır. Metod ELISPOT (enzimatik immunoanaliz və ya ləkə üsulu) adlanır. Metodun əsas prinsipi:

1. Polistirol quyusunun səthində (24 quyulu hüceyrə kulturası panellərindən istifadə etməklə) “tutma” reagentləri kimi xidmət edən antigenlər və ya antitellər adsorbsiya edilir.

2. Tədqiq olunan limfoid hüceyrələr əlavə edilir, 37°C temperaturda bir neçə saat kultura edilir, onlara müəyyən yer tutmaq və ifrazat funksiyasını yerinə yetirmək imkanı verilir. Belə hüceyrələr tərəfindən ifraz olunan antikorlar və ya antigenlər bərk fazada adsorbsiya edilmiş reagentlər tərəfindən tutulur.

3. Hüceyrələr hüceyrə parçalayıcı yuyucu vasitə ilə yuyulma məhlulu ilə çıxarılır.

4. Sekretor məhsulların yığılma yerləri fermentlə (antiqlobulin reagenti) əlaqəli antikorların əlavə edilməsi ilə göstərilir.

5. Substrat-agaroz qarışığı əlavə edilir (istifadə olunan substratlar agarozada həll olunmalı və həll olunmayan reaksiya məhsulları əmələ gətirməlidir), bərk fazanın səthində qəhvəyi və ya mavi ləkələr əmələ gəlir (istifadə olunan fermentlərdən və substratlardan asılı olaraq), hüceyrələrin yerləşdiyi sahələr aşkar edilir. yerləşmişdilər.

Yaranan ləkələr mikroskop altında sayılır, bu ifraz edən hüceyrələrin sayı olacaqdır.

Nitroselüloz membranı bərk faza kimi istifadə oluna bilər.Bu halda bir sıra üstünlüklər var: NCM-nin yüksək adsorbsiya qabiliyyətinə görə, “tutma” reagenti kimi istifadə olunan xeyli az miqdarda antigen tələb olunur, əlavə olaraq, substrata agarozun daxil edilməsinə ehtiyac yoxdur.

Fərqli substratdan istifadə zamanı mümkün olan ifraz edən hüceyrələrin sayını və quyuda ifraz olunan antigenin və ya anticismin ümumi miqdarını eyni vaxtda təyin etməklə, bir hüceyrə tərəfindən ifraz olunan maddənin miqdarını müəyyən etmək mümkündür.

Bu üsul adsorbsiya edilmiş antikorlar tərəfindən tutulan antigeni ifraz edən hüceyrələrin sayını qiymətləndirmək üçün geniş tətbiq tapdı, sitokinləri ifraz edən hüceyrələrin sayını təyin etmək üçün istifadə olunur (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IFN-y, TNF-a).

Yüksək yaxınlıqlı antikorlardan istifadə edərkən fərdi ELISA variantlarının həssaslığı çox yüksəkdir və nəzəri cəhətdən tək antigen molekullarını aşkarlamağa imkan verir, lakin praktikada həssaslıq bir sıra amillərlə məhdudlaşdırılır: ferment aktivliyi, siqnal intensivliyi və siqnalın uçotu üsulları. . Siqnal gücləndirmə sistemləri müxtəlif ELISA variantlarının həssaslığını artırmağa imkan verir. Bu sistemlərdən bəzilərini nəzərdən keçirin:

Avidin-biotinin qarşılıqlı təsirinə əsaslanır.

Biotin koenzim molekulları (m.m. 244 Da) biotinil-N-hidroksisuksimiddən istifadə edərək antikorlarla birləşir. Kiçik bir biotin molekulunu immunoqlobulinə və ya digər proteinə onun immun və ya fermentativ xüsusiyyətlərini pozmadan əlavə etmək daha asandır. Bu vəziyyətdə ferment bir qlikoproteinə bağlanır yumurta ağı avidin. Avidinin biotinə bağlanma yaxınlığı çox yüksəkdir (kompleksin dissosiasiya sabiti 10-15 mol), avidin-ferment konyuqatı antigen-antikor-biotin kompleksində möhkəm şəkildə sabitləşmişdir. Müvafiq substrat əlavə edildikdən sonra reaksiya məhsulu spektrofotometrik və ya lüminesans intensivliyi ilə müəyyən edilir.

Bir avidin molekulu dörd eyni alt bölmədən ibarətdir, dörd biotin molekulu ilə qarşılıqlı əlaqə qura bilir, bu da onu iki biotin tərkibli birləşmə arasında birləşdirici molekul kimi istifadə etməyə imkan verir. Bu zaman ferment də biotinləşir və avidin biotin qalıqları olan iki molekulu birləşdirən körpü rolunu oynayır. Yaranan antigen-antikor-biotin kompleksinə sərbəst avidin, sonra isə biotinləşdirilmiş ferment əlavə edilir. Reaksiyanı qeyd edin.

Avidin zülalı digər molekullar üzərində qeyri-spesifik olaraq sorbsiya oluna bilər; buna görə də Streptomyces avidinii bakteriyasında olan başqa bir biotin bağlayan zülal, streptavidin getdikcə daha çox istifadə olunur. Streptavidin də biotinlə güclü kompleks əmələ gətirir və dörd eyni subunitdən ibarətdir.

Avidin-biotin kompleksinin istifadəsi ELISA-nın həssaslığını əhəmiyyətli dərəcədə artırmağa imkan verir, çünki konjugat sintezi zamanı onlarla biotin molekulu bir AT molekuluna bağlana bilər. Konjugatların (biotin ilə antikorlar və fermentlər) əldə edilməsi olduqca asandır və onların immunoloji və fermentativ aktivliyində minimal dəyişikliklərlə müşayiət olunur. Fermentlərin biotinlə konjuqatları universal reagentlər kimi istifadə edilə bilər.

Kimilüminessent reaksiyaların istifadəsi.

Metodun həssaslığını artırmaq və analiz vaxtını azaltmaqla ELISA-da siqnal əldə etmək üçün kimyəviluminesans reaksiyalarından istifadə edilə bilər. Horseradish peroksidaza ELISA-da bir etiket kimi geniş istifadə olunur və onu aşkar etmək üçün müxtəlif kimilüminesans reaksiyalarından da istifadə edilə bilər. Kimyalüminessent reaksiyalar luminolun hidrogen peroksid ilə oksidləşdiyi zaman parlama qabiliyyətinə əsaslanır. Birbaşa analizdə enzimatik reaksiya hidrogen peroksid əmələ gətirir və luminol oksidləşdirir; bu reaksiya horseradish peroksidaz tərəfindən kataliz edilir. Siqnalın gücləndirilməsi üçün müxtəlif birləşmələr, məsələn, lusiferin, fenollar istifadə olunur, bu halda lüminesans intensivliyi 10-100 dəfə, bəzi hallarda 500 dəfə artır (gücləndirilmiş kimilüminesans analizi). Luminescent siqnal çox sabitdir, onun səviyyəsi 30 s-də maksimuma çatır (müqayisə üçün: bir göstərici kimi OPD ilə rəng reaksiyası yalnız 30 dəqiqə ərzində tam inkişaf edir).

Luminol və ya onun törəmələri ilə dolayı analizdə antikor etiketlənir. Belə bir etiket azad dövlət işığın buraxılması ilə hidrogen peroksidlə oksidləşə bilər. Əgər kompleks əmələ gətiribsə, oksidləşmə qabiliyyətini itirir.

Kaskad sistemlərə əsaslanır.

ELISA-nın həssaslığını artırmaq üçün ferment kaskad sistemlərindən istifadə edilə bilər. Bu vəziyyətdə, birinci antikorla əlaqəli ferment ikinci ferment sistemi üçün azalda bilən bir substratla nəticələnir. İkinci ferment sistemi substrat-tsiklik və ya redoksisiklik ola bilər. Bu halda, fosfo-qlükoizomeraz, aldolaz, qələvi fosfataz ferment etiketi kimi xidmət edə bilər. Son reaksiya məhsulu vizual və ya spektrofotometrik olaraq müəyyən edilir.

ELISA gücləndirmə sistemləri yüksək həssaslığa nail olur. Belə ELISA sistemləri hormonların (tiroidi stimullaşdıran, progesteron və s.) səviyyəsini təyin etmək üçün istifadə olunur.

ELISA metodun nisbi sadəliyi və yüksək həssaslığına görə tibb və biologiyanın müxtəlif sahələrində geniş tətbiq tapmışdır. ELISA aşağıdakılar üçün uğurla istifadə edilmişdir:

Yoluxucu xəstəliklərin kütləvi diaqnostikası (müxtəlif spesifik antigenlərin və ya onlara qarşı antikorların aşkarlanması);

Hormon səviyyələrinin aşkarlanması və təyini və dərmanlar bioloji nümunələrdə;

Spesifik antigenə qarşı antikorların izotip təyini (IgG, IgM və başqaları);

immun komplekslərin aşkarlanması;

şiş markerlərinin aşkarlanması;

Qan zərdabında zülalların (ferritin, fibronektin və s.) təyini;

Ümumi IgE və spesifik IgE antikorlarının təyini;

Mioklonal antikorların müayinəsi;

Bioloji mayelərdə sitokinlərin tərifləri.

Metod həssaslığı

ELISA əvvəllər geniş istifadə edilənləri əvəz etdi klinik praktika aglütinasiya, çökmə və RİA üsulları. Yuxarıda göstərilən üsullarla müqayisədə ELISA daha az zəhmət tələb edir və daha az vaxt aparır, yerinə yetirmək üçün əlverişlidir böyük rəqəm oxşar təhlillər.

ELISA immunoassayın unikal spesifikliyini birləşdirir yüksək həssaslıq ferment etiketinin təyini. Metodun həssaslığı (həssaslıq altında antikorların və ya antigenin aşkar edilə bilən minimum miqdarı deməkdir) müəyyən edilir. aşağıdakı amillər: antikorların yaxınlığı, monoklonal antikorların istifadəsinə üstünlük verilir; fermentin spesifik fəaliyyəti; siqnal intensivliyi; siqnal həssaslığı. Müxtəlif ELISA variantları həssaslıqlarına görə fərqlənir. Bərk fazalı ELISA-nın ayrı-ayrı variantları nümunədə tək molekulları aşkar etməyə imkan verir. ELISA-nın orta həssaslığı 10-9 - 10-12 mol təşkil edir.

Qalaktionov V.G. İmmunologiya. Moskva Universiteti Nəşriyyatı, 1998

Kişkun A.A. Klinik praktikada yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikası üçün immunoloji tədqiqatlar və üsullar. Tibb Xəbərləri Agentliyi, 2009

Kondratyeva I.A. İmmunologiya üzrə seminar. Dərslik universitetlər üçün. Akademiya, 2004

Lefkovits I., Pernis B. İmmunoloji tədqiqat üsulları. Sülh, 1988

Roit A, Brostoff D, Meil D. İmmunologiya. Sülh, 2000

Sokolov E.I. Klinik immunologiya. Tibb, 1998

Frimel G. İmmunoloji üsullar. Tibb, 1987

Xaitov R. M. İmmunologiya. Tibb, 2000

Şigina Yu.V. İmmunologiya: Dərslik. RIOR nəşriyyatı, 2007

Yarilin A.A. İmmunologiyanın əsasları. Tibb, 1999

Zaman zaman həkimlər ELISA testlərini təyin edirlər, hər kəs bunun nə olduğunu bilmir. ELISA deşifrəsi aşağıdakılara malikdir - ferment immunoassay. Belə bir qan testi bədənin yoluxucu spektrin xəstəlikləri ilə necə mübarizə apardığını anlamağa və xəstəliyin mərhələsini nümayiş etdirməyə kömək edir. Enzim immunoassay qanın qoruyucu fəaliyyətini qiymətləndirməyə, infeksiyalarla əlaqəli patologiyalarda immun çatışmazlığını müəyyən etməyə kömək edir, hormonal problemlər və s.

ELISA qan testi damardan alınan materialla işləyir. Bundan əlavə, tədqiqat üçün məzmun mövcuddur şüşəvari bədən, maye onurğa beyni, uretradan yaxma və ya servikal kanal. Ferment immunoassay üçün hamilə qadınlarda ELISA dölün ətrafındakı mayeni götürə bilər.

Bu vəziyyətdə, müxtəlif üsullardan istifadə edərək, qan birbaşa ELISA üçün yoxlanıla bilər. Düz var dolayı yolla, rəqabət və bloklama. Bədən antigen adlanan bəzi patogen agentlə yoluxduqda, immunitet sistemi, məsələn, hepatit üçün xüsusi antikorlar istehsal etməyə başlayır. Bu antikorlar xarici agentlərlə "müalicə" məqsədi daşıyır. Antikorlar nədir? Bunlar antigenlərə bağlana bilən və antigen-antikor adlanan immunoloji hədəflənmiş komplekslər əmələ gətirə bilən xüsusi zülallardır. Məhz bu komplekslərin aşkarlanması üçün ELISA diaqnostikası cavabdehdir. Bir antigeni aşkar etmək üçün ortaya çıxan qan nümunəsinə antikorlar əlavə edilir və ya əks prosedur həyata keçirilir.

ELISA müsbət nəticəsi immunitet və fermentlərin reaksiyasına əsaslanır. Birincinin təsiri altında infeksiya agentləri və hüceyrə elementləri bağlanır, ikincisi birincinin nəticəsini vizuallaşdırmağa kömək edir. İmmun cavab bir antikor və antigenik bağı əhatə edir. Bu proses nəticəsində immun yönümlü kompleks əmələ gəlir. Bütün hüceyrələrin səthində bir antigen var. immun hüceyrəşübhəli biri tutulur və səthdə sabitlənmiş antigen yaddaşa "yüklənmiş" məlumatla müqayisə prosedurundan keçir. Təsvirin uyğunluğu varsa, hüceyrə evə qayıdır, əgər yoxsa, səthə yapışan antikordan məsul olan bir əlaqə yaranır.

Enzimatik reaksiya isə maddələrin yenilərinə çevrilməsinə imkan verir. Material fermentə məruz qalır. Bu halda enzimatik fərq müxtəlif substratlar tərəfindən təmin edilir. Bu reaksiya nəticəsində yaranan məhsul patogenin miqdarının təyin edilməsinə göndərilir, onun təyini məhlulun rənginin sıxlığına əsaslanır.

Metod xüsusiyyətləri

Allergiyaları, viral mənşəli xəstəlikləri diaqnoz etmək lazım olduqda fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi təyin edilir. Sifilis və bir sıra digər infeksiyalar üçün ELISA testi də var, onların ötürülməsi qorunmayan cinsi əlaqə ilə baş verir. Bu cür diaqnostika PCR ilə müqayisədə getdikcə populyarlaşır. Fakt budur ki, PCR yaxmalarla işləməyi nəzərdə tutur. PCR-dən fərqli olaraq, ELISA nəticələri qan testlərindən əldə edilə bilər.

Bundan əlavə, immun çatışmazlığının mövcudluğunu müəyyən etmək, onkoloji diaqnoz qoymaq, müalicənin nə qədər effektiv olduğunu qiymətləndirmək, hormonal səviyyəni təyin etmək və kombinasiyada əməliyyatdan əvvəl müayinədən keçmək lazım olduqda ELISA qan testi təyin edilə bilər.

ELISA tədqiqatlarını, məsələn, PCR ilə müqayisə etsək, bir sıra üstünlüklər tapa bilərik. Əsas olan imkandır tam diaqnoz inkişafının ən erkən mərhələlərində belə. Bundan əlavə, ELISA-nın nəticələri xəstəliyin konkret mərhələsini, inkişafının hansı səviyyədə olduğunu müəyyən etməyə kömək edir.

PCR ilə müqayisədə ELISA analizi daha yüksək effektivliyə malikdir, əlavə olaraq, CYBH-ləri aşkar etmək üçün hamiləlik zamanı götürülə bilər. Bu testdən keçən hər kəs qan zərdabında TSH konsentrasiyasını öyrənə bilər. Bu, tiroid bezinin reaksiyasını, işində nasazlıqların olub olmadığını yoxlamaq üçün çox vacibdir.

Əlavə üstünlüklər, lakin polimerazdır zəncirvari reaksiya, tədqiqatın sürəti və buna görə də nəticələrin sürətli alınmasıdır. Həkimlər nəticələrin düzgünlüyünü yüksək qiymətləndirirlər. Əgər STD-lərdən danışırıqsa, o zaman səviyyə TSH konsentrasiyasında olduğu kimi 98 faizə çatır.

Təbii ki, çatışmazlıqlar da yoxdur. Ancaq bu halda testin dolayı xüsusiyyətlərindən danışırıq. Xüsusilə, normaların müəyyən edilməsində mümkün səhvləri istisna etməyin mümkün olmadığından danışırıq. Bəzən tamamilə sağlam bir qızın götürdüyü bir analiz yanlış müsbət nəticə və ya əks halda mənfi ola bilər. Bununla belə, psixoloji tədqiqat metodlarının təsnifatı əksər hallarda bu cür çatışmazlıqları düzgün hazırlanmaması və ya materialın götürüldüyü texnikanın pozulması ilə əlaqələndirir.

İcra xüsusiyyətləri

ELISA analizi ilə əksər hallarda qan verilir. Qan vermədən əvvəl ən azı səkkiz saatlıq oruc tutmaq, analizin nəticəsinə təsir edən bir sıra dərmanların istifadəsini istisna etmək vacibdir. Bunlar antihistaminiklər və hormonal preparatlar tiroid bezinin işinə təsir göstərir. Bundan əlavə, spirt ən azı bir gün əvvəl istisna edilməlidir. Qan vermədən ən azı bir saat əvvəl siqaret çəkmədiyinizə əmin olun. Dərman qəbul edərkən nəticənin təhrif edilməsi də mümkündür.

Şifrəni açmağa davam etməzdən əvvəl, belə bir test üçün hansı ölçmə üsullarının istifadə edildiyini qeyd etmək lazımdır. Təhlil nəticəsində antikorlar və ya Ig immunoglobulinləri göstəriləcək. Onlarla əvvəllər müzakirə edilən çox xüsusi zülallar nəzərdə tutulur. B-limfositlər viruslar, bakteriyalar və ya göbələklər bədənə daxil olan kimi onların istehsalına cavabdehdirlər. Latın əlifbası ilə göstərilən beş növ immunoqlobulinlər fərqlənir.

Onların fərqləri müxtəlif molekulyar forma və çəki ilə əlaqələndirilir. Onların müxtəlif yarım ömrü var, müxtəlif yollarla yoluxucu proseslərdə iştirak edir və ya iştirak etmirlər. İnfeksiyanın baş verdiyi andan onların aşkar oluna biləcəyi vaxt çərçivəsi də dəyişir.

İmmunoqlobulinlər molekulyar çəki əsasında təsnif edilirsə, onda IgM ən yüksək göstəricilərə malikdir. Bu tip immunoqlobulinlərin bir xüsusiyyəti plasental maneədən keçə bilməməsidir. Yenidoğulmuş bir uşaqda analizdə IgM aşkar edilərsə, döldə infeksiyanın olmasından danışırıq.

İnsan qanının böyük əksəriyyətində IgG immunoqlobulinləri, ən azı IgE var. Yoluxucu proseslər çərçivəsində işdən danışarkən, A, M, G variantlarına xüsusi əhəmiyyət verilməlidir. IgE allergik reaksiyanın markeri kimi çıxış edir. IgD yalnız limfa düyünlərinin və badamcıqların toxumalarında olur. Bu, yerli səviyyədə immunitetin yaradılması baxımından vacibdir.

Bundan əlavə, analizdə antigenlər müəyyən edilir. Onlar üzvi mənşəyi ilə tanınan yüksək molekulyar tipli maddələr kimi başa düşülür. Xüsusilə, söhbət yoluxucu və digər spektrli xəstəliklərin patogenlərindən gedir. Bundan əlavə, bir sıra xəstəliklərdə qaçılmaz olan müxtəlif hüceyrə dəyişikliklərinə siqnal verən maddələri də nəzərdə tuturuq. İmmunitet prosesində iştirak edən antigen-antikor kompleksini nümayiş etdirən immun kompleksi də göstərilir.

Adətən, istehsal vaxtı müraciət etdiyiniz xüsusi laboratoriyadan asılıdır. Bir sıra laboratoriyalar bir və ya iki gün ərzində nəticə verə bilir, digərləri bir həftə tələb edir. Gecikmələr müəyyən miqdarda zərdab toplamaq ehtiyacı ilə bağlı ola bilər.

Nəticələrə və şərhə təsir

ELISA-nın ən çox biri hesab edilməsinə baxmayaraq dəqiq üsullar yoxlama, səhvlər hələ də baş verir. Materialın götürülməsi proseduru, onun düzgün daşınmaması və materialın saxlanması nəticələrin düzgünlüyünə təsir göstərə bilər. Dərman qəbul etmək, yuxarıda qeyd edildiyi kimi, gizli xəstəliklərin olması. Metabolik pozğunluqlar və ya immun çatışmazlığı da düzgün göstəriciləri əldə etməyə imkan verməyəcək. Bir ilə qədər həyat dövründə yeni doğulmuş körpələr də tamamilə düzgün göstəricilərə malik olmaya bilər. Bu, ananın antikorlarının bədəndə olması ilə əlaqədardır.

Deşifrədən danışarkən, analiz formaları immunoglobulin siniflərinin hər biri üçün hesablamanın nəticələrini göstərən müsbət və ya mənfi işarədən istifadə edir. Mümkün variantlar aşağıdakılardır.

Aşkar edilmiş IgG, IgA və IgM-nin olmaması tam sağalmanı göstərir. IgM, IgA, IgG kimi komponentlər üçün mənfi nəticə infeksiyaya qarşı toxunulmazlığın olmamasıdır.

IgG, IgA üçün müsbət və mənfi nəticənin müsbət IgM ilə birləşməsi bədəndə infeksiyanın mövcudluğunu göstərir. kəskin forma. Mənfi IgA və IgM dəyərləri ilə birlikdə müsbət IgG nəticəsi, peyvənddən sonrakı dövrə və ya infeksiya nəticəsində toxunulmazlığın əldə edilməsinə uyğundur.

Müsbət və ya mənfi IgG, IgA nəticəsi və mənfi IgM nəticəsinin birləşməsi onun xroniki gedişində infeksiyanın mövcudluğunu göstərir. Üç komponent üçün müsbət nəticə: IgG, IgM, IgA, infeksiyanın kəskinləşməsini göstərir. xroniki forma sızmalar. Antikor siniflərini birbaşa aydınlaşdırmaqla yanaşı, ELISA analizinin dekodlanmasının bir hissəsi olaraq, həkim onların kəmiyyət göstəriciləri haqqında məlumat alır. İştirak edən həkimin şifrənin açılmasına cavabdeh olması lazım olduğunu vurğulamaq vacibdir. Fakt budur ki, bəzi komponentlərin birləşməsi onu yenidən təslim olmağa səbəb olacaq yanlış nəticə ideyasına gətirib çıxara bilər. Bu vəziyyətdə öz-özünə şifrələmə faydasızdır.

Laboratoriya testləri həkimlərə yalnız xəstəliyi müəyyən etməyə deyil, həm də bədənin infeksiyalara qarşı müqavimət qabiliyyətini təyin etməyə kömək edir. Bundan əlavə, bəziləri patologiyanın mərhələsini təyin etməyə imkan verir. Belə bir araşdırmanın nümunəsi diaqnostikada tez-tez istifadə olunan ELISA-dır.

ELISA metodu - bu nədir?

Fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi (ELISA) qan nümunəsində müəyyən antigenlərə zülal xarakterli spesifik antikorların müəyyən edilməsinə yönəlmiş laboratoriya tədqiqatıdır. Bir çox antikor arasında mühüm əhəmiyyət kəsb edən immunokomplekslərin bir hissəsi kimi mövcud ola bilən immunoqlobulinlərdir. Onlar orqanizmdə patogen agentin daxil olmasından sonra immun sisteminin neyrohumoral reaksiyaları nəticəsində orqanizmdə sintez olunur.

Patogen hüceyrələrin hər bir növü üçün öz antikorları istehsal olunur - cavab olaraq. Onların ətraflı diaqnostikası və təhlili insan orqanizmində özünü büruzə vermədən mövcud ola biləcək patologiyanın növünü birbaşa müəyyən etməyə kömək edir. Fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi gizli, ləngliyi aşkar edir patoloji proseslər, onların mərhələsini müəyyən edir.

ELISA analizi nəyi göstərir?

ELISA analizi termininin nə demək olduğunu, bunun nə olduğunu başa düşərək, tədqiqatın əsas diaqnostik dəyərini qeyd etmək lazımdır. Bu üsul immun sisteminin aktivləşməsinin nəticəsi olan yoluxucu agentin və antikorların antigenlərinin qan nümunəsində mövcudluğunu müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Antikorların mühüm sinifləri arasında IgA, IgM, IgG-ni ayırmaq lazımdır.

Diferensial diaqnostika zəruridirsə, fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi təyin edilir, yekun diaqnoz qoyulur. Bu, həkimlərə gizli patologiyaları müəyyən etməyə kömək edir. Bundan əlavə, səviyyəni qiymətləndirmək üçün ELISA da təyin edilə bilər immun reaksiya peyvənddən bir gün əvvəl. Əksər hallarda, ELISA analizi (yuxarıda təsvir edilən nədir) aşağıdakı növ patologiyalardan şübhələnirsə təyin edilir:

hepatit;
Suçiçəyi xəstəliyi, suçiçəyi;
helmintozlar;
məxmərək;
poliomielit;
herpes;

Bundan əlavə, müəyyən növ immunoqlobulinlər üçün ELISA aşağıdakılarla da aparıla bilər:

romatoid artrit;
sepsis;
xroniki irinli otit;
sətəlcəm;
meningit;
sinüzit;

Bir ferment immunoassay necə aparılır?

Fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi, ELISA, alınan qan nümunəsinin tədqiqi ilə həyata keçirilir. Əvvəlcədən hazırlanmış xüsusi tabletin səthinə az miqdarda qan serumu və təmizlənmiş antigen qoyulur. Onları birləşdirərək mikroskopda reaksiyanın mənşəyini müşahidə edin. Eyni növdən olan bir antigen və antikor bir kompleks meydana gətirir. Onun meydana gəlməsini diaqnoz etmək üçün əlavə boyanma aparılır. Baş vermiş boyanmanın intensivliyinə əsasən, xəstənin qan serum nümunəsində immunoqlobulinlərin konsentrasiyası ilə bağlı nəticələr çıxarılır.

ELISA ilə analiz (bu nədir, artıq bilirsiniz) hətta kiçik miqdarda immunoqlobulinlərə həssasdır, yüksək spesifikliyə malikdir. Nəticədə, həkimlər oxşar xəstəlikləri dəqiq fərqləndirmək üçün ondan istifadə edə bilərlər klinik şəkil. Təhlil prosedurunun özü uzun sürmür, buna görə də tədqiqatın nəticəsini eyni gündə öyrənmək olar. Təcili diaqnoza ehtiyacınız varsa, qan götürmə anından 2-3 saat sonra cavab ala bilərsiniz.

ELISA qan testi - hazırlıq

Ferment immunoassay metodu həyata keçirilməzdən əvvəl xəstədən müəyyən hazırlıq tələb edir. Test materialı kimi venoz qan xidmət edir. Onun hasarı yalnız səhər, boş bir mədədə aparılır. Prosedurdan əvvəl xəstədən emosional yüklənmədən qaçınmaq tələb olunur, stresli vəziyyətlər, fiziki fəaliyyəti istisna edin. Tədqiqatın obyektiv nəticələrini əldə etmək üçün xlamidiya və digər infeksiyalar üçün ELISA testindən keçməzdən əvvəl:

Təhlildən bir gün əvvəl yağlı qidalar, hisə verilmiş ət və spirt diyetdən xaric edilir.
Tədqiqatdan əvvəl siqaret çəkməyin.
Son yemək, tədqiqatın gözlənilən vaxtından ən azı 8 saat əvvəl bir fasilə ilə təhlil ərəfəsində baş verməlidir.

Ferment immunoassay - material nümunəsi

ELISA analizi nümunə götürməyi əhatə edir venoz qan tədqiqat üçün biomaterial kimi. Prosedur laboratoriya şəraitində həyata keçirilir. Birdəfəlik şprisdən istifadə edərək kubital venadan 5-10 ml qan nümunəsi götürülür. Tez-tez, qanın konteyneri öz-özünə doldurduğu iynəni birləşdirdikdən sonra xüsusi vakuum test boruları istifadə olunur. Qəbul edilmiş nümunə müvafiq olaraq işarələnir və əlavə müayinəyə göndərilir. Daha tez-tez tədqiqatın nəticəsi ertəsi gün məlum olur.

ELISA qan testi - transkript

ELISA analizinin dekodlanması yalnız bir mütəxəssis tərəfindən həyata keçirilir. Bu, bir gün əvvəl aparılan digər tədqiqatların nəticələrini nəzərə alır. Qeyd etmək lazımdır ki, ELISA-nın iki modifikasiyası var - keyfiyyət və kəmiyyət qiymətləndirməsi. ELISA-nın keyfiyyətcə qiymətləndirilməsinin müsbət nəticəsi orqanizmdə müəyyən bir patogen növünə qarşı antikorların mövcudluğunu göstərir. Gələcəkdə xəstəliyin dərəcəsini, mərhələsini təyin etməyə yönəlmiş kəmiyyət qiymətləndirməsi təyin edilir. Mənfi bir analizlə, körpənin bədənində patogenlərin olmamasından danışırlar.

ELISA analizi mənfidir

Testin mənfi nəticəsi həmişə patologiyanın olmadığını göstərmir. Beləliklə, sifilis üçün ELISA testi, terapiya kursundan sonra bədəndəki patogen aşağı konsentrasiyada olduqda, remissiyada mənfi ola bilər. Bu seçimi nəzərə alaraq, həkimlər bir müddət sonra əlavə bir araşdırma aparırlar. Bundan əlavə, antikorlar hələ diaqnostik konsentrasiyada bədən tərəfindən inkişaf etdirilmədikdə, son infeksiyadan sonra da mənfi bir nəticə müşahidə edilə bilər.

Qan testi ELISA müsbətdir

Təhlilin müsbət nəticəsi ilə antikorların titri, onların sinfi müəyyən edilir. Əksər hallarda, yoluxucu proseslərin diaqnozu üçün IgG və IgM konsentrasiyası müəyyən edilir. Onlar müxtəlif vaxtlarda formalaşır.

Məzmun

Bədənin müqavimət qabiliyyətini qiymətləndirmək yoluxucu xəstəliklər və ya qan testi patologiyanın mərhələsini təyin etmək üçün istifadə olunur. ELISA metodu laboratoriya tədqiqatları arasında mühüm yer tutur, fəaliyyətin hərtərəfli öyrənilməsinə kömək edir. qoruyucu funksiya qan, yoluxucu xəstəliklər, qan xəstəlikləri, hormonal, otoimmün proseslərdə immun çatışmazlığı müəyyən edir.

Bir ferment immunoassay nədir

Bu üsul tətbiq edilir laboratoriya tədqiqatı, müəyyən patogen agentlərə (antigenlərə) bir protein təbiətinin (antikorların) qoruyucu qan faktorlarının mövcudluğunu müəyyən edir. Qanın immunoenzim analizi immunokomplekslər şəklində aşkar edilə bilən immunoglobulinləri təyin edir. Onlar mürəkkəb neyrohumoral reaksiyalar baş verdikdə görünür. immun müdafiə insan, xarici antigenlərin tətbiqinə cavab olaraq.

Bədəndə hər bir patogen növünə qarşı xüsusi antikorlar istehsal olunur. Bundan əlavə, bir patoloji mikroorqanizmin və ya antigenin bağlanması baş verir, mürəkkəb bir "antigen-antikor" meydana gəlir. Sonra zərərsizləşdirilir, fermentativ lizis baş verir, faqositoz reaksiyası baş verir və proses bədəndən çəkilməklə başa çatır. ELISA tərəfindən müəyyən edilən xüsusi komplekslərin olması, bir xəstədə zərərli bir maddə olan patogen növünü göstərir.

İmmunoqlobulin sinifləri

Alimlər 5 növ immunoqlobulin aşkar edib tədqiq ediblər: IgE, IgD, IgG, IgM, IgA. Başqa siniflər də var, lakin onlar hələ tədqiqat mərhələsindədirlər və onların rolu tam aydınlaşdırılmamışdır. Praktiki təbabətdə A, M, G vacibdir.Məlumatlılıq, təyinetmənin dəqiqliyi onların yarandığı, maksimuma çatdığı və yox olduğu zaman intervallarına əsaslanır.

ELISA ilə qan testi üçün göstərişlər

Bu analizin köməyi ilə müalicənin effektivliyini qiymətləndirmək, transplantasiya əməliyyatlarından əvvəl hərtərəfli araşdırma aparmaq, immun çatışmazlığı vəziyyətini və 600-dən çox allergen növünə qarşı anticisimləri müəyyən etmək mümkündür. Xərçəng hüceyrələrini aşkar etmək üçün əlavə üsul olaraq ELISA istifadə edərək qan testi istifadə olunur. Zöhrəvi patologiyaları təhrik edən mikroblara qarşı antikorları aşkar etmək lazımdırsa, analiz təyin edilir:

trichomoniasis;
sifilis;
toksoplazmoz;
mikoplazmoz;
ureaplazmoz.

ELISA analizində helmintik işğallarla immunoglobulinlərin sayında artım qeyd olunacaq. Xəstənin varlığını təsdiqləmək üçün tədqiqat aparılır:

Epstein-Barr virusu;
herpetik infeksiyalar;
sitomeqalovirus;
viral hepatit qrupları.

Bir ferment immunoassay immunoqlobulinləri təyin etmək üçün yeganə seçim deyil. Bəzən bu iş üçün bir hasar hazırlanır. serebrospinal maye, şüşəvari bədənin toxuması, amniotik maye. Qan istifadə edərkən, bir enjeksiyon iynəsi istifadə edərək kubital venadan toplanır. Analizi boş bir mədədə aparmaq lazımdır, ELISA-dan əvvəl qəbul etmək tövsiyə edilmir tibbi preparatlar nəticəyə təsir edə bilər. Biomaterialı bağışlamazdan əvvəl alkoqoldan, siqaretdən, narkotikdən imtina etməlisiniz. Test nəticələri variantları:

Mənfi ballarla IgG immunoqlobulinləri, IgM, IgA, həkimlər heç bir patoloji və ya olmadığını söyləyirlər ilkin mərhələ. Eyni nəticə (mənfi) uzun müddətdən sonra tam bərpa olunduqdan sonra olacaq.
IgG müsbətdirsə, lakin IgM və IgA aşkar edilmirsə, bu, peyvənddən və ya yoluxucu xəstəlikdən sonra toxunulmazlığın formalaşmasını göstərir.
IgM-nin yüksək titrləri və mənfi IgA, IgG ilə kəskin yoluxucu xəstəlik diaqnozu qoyulur.
IgG, IgM, IgA müsbət göstəricisi ilə həkimlər mövcud xroniki xəstəliyin residivinin kəskin mərhələsi haqqında danışırlar.
Yatma (remissiya) mərhələsində olan xroniki infeksiya ilə ELISA analizi mənfi IgM titrlərini göstərir və IgA və IgG müsbət olacaqdır.

ELISA analizinin üstünlükləri və mənfi cəhətləri

Bu tədqiqatın əsas mənfi cəhəti yanlış müsbət və ya yanlış mənfi nəticələr əldə etmək ehtimalıdır. Etibarsızlığın səbəbi dərmanların qəbulu, laboratoriyanın texniki qüsurlarıdır. Bədəndə metabolik pozğunluqlar prosesi təhlili saxtalaşdıra bilər. ELISA analizinin əsas üstünlükləri bunlardır:

dəqiqlik, diaqnostik spesifiklik;
analizin aşağı qiyməti;
nəticələrin əldə edilməsi sürəti;
patologiyanın mərhələsinə dinamik nəzarət imkanı, müalicənin effektivliyi;
tədqiqat asanlığı;
infeksiya ocaqlarının kütləvi müayinəsini aparmaq imkanı;
ağrısızlıq, xəstə üçün təhlükəsizlik;
informasiya texnologiyalarının emalında tətbiqi.

Video

Fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi uşaqlarda və böyüklərdə helmintləri aşkar etmək üçün tətbiq olunan bir diaqnostik üsuldur.

İcra üçün göstəriş

Həkimlər aşağıdakı hallarda işğal üçün ELISA təyin edirlər:

bir xəstədə lökositlərin sayı digər patologiyaların simptomları olmadıqda normadan əhəmiyyətli dərəcədə artıqdır;
heç bir səbəb olmadan tez-tez başgicəllənmə və ya baş ağrısından narahat olmaq;
allergik reaksiyalar baş verir;
əzələ ağrısını aradan qaldırmaq, güc itkisi;
öskürək uzun müddət müalicə olunmur;
bəzən qızdırma vəziyyəti var;
ev heyvanlarında qurdların olması aşkar edilir;
yaşayış bölgəsində epidemioloji vəziyyət pisləşir;
xəstənin peşəsi qurdlarla yoluxma riskinin yüksək olması ilə əlaqələndirilir (planlı diaqnostika aparılır).

nəcisin dəyişməsi və tezliyi ilə həzm pozğunluqları;
mədə ağrısı;
qaraciyərdə kolik;
bulantı qusmaya çevrilir;
mərkəzi zədələnmə əlamətləri sinir sistemi: yuxusuzluq, artan əsəbilik, kəskin damlalarəhval-ruhiyyə.

ELISA növləri

Enzimatik reaksiya laborantlar tərəfindən qurulan helmintlərin növlərini onlar haqqında məlumatların vizual ölçülməsi ilə öyrənməyə imkan verir.

Laboratoriyalarda ELISA-nın müxtəlif növləri tətbiq olunur:

Necə götürmək olar

Tədqiqatın nəticələrinin mümkün qədər etibarlı olması üçün bütün laboratoriya tələblərinə ciddi əməl edilməlidir. Zəruri:

qan vermədən 3 gün əvvəl həyati vacib olanlar istisna olmaqla, bütün dərmanların qəbulunu dayandırın;
2 gün ərzində fizioterapiya prosedurlarını dayandırın;
1 gün ərzində spirt və qəhvədən imtina edin;
bir gün əvvəl ifşa olunmamalıdır fiziki fəaliyyət və emosional stress
19-20 saatdan gec olmayaraq nahar edin (səhər bir az su içə bilərsiniz).

Şifrənin açılması

Seçim nömrəsi 1. IgM-, IgA+, IgG-: əsas xəstəlik (infeksiyadan 2 həftə).

Seçim nömrəsi 2. IgM+, IgA+, IgG-: əsas xəstəlik (infeksiyadan 2,5-3 həftə).

Seçim nömrəsi 3. IgM+, IgA+, IgG+: İlkin infeksiya (infeksiyadan 3-4 həftə sonra).

Seçim nömrəsi 4. IgM-, IgA+, IgG+: kəskinləşmə xroniki xəstəlik(kəskinləşmənin başlanğıcından 2 həftə).

Seçim nömrəsi 5. IgM-, IgA+/-, IgG+: xroniki faza.

Seçim nömrəsi 6. IgM-, IgA-, IgG+: sağalmış (keçmiş) infeksiya, toxunulmazlığın olması.

Seçim nömrəsi 7. IgM-, IgA, IgG aşkar edilmir (və ya müalicənin sonunda titrin 2-4 dəfə, müalicədən sonra 1-1,5 aydan sonra 5-8 dəfə azalması): bərpa.

Seçim nömrəsi 8. IgM-, IgA-, IgG-: infeksiyaya qarşı toxunulmazlığın olmaması.

Yaxşı və pis tərəfləri

Bir testin yanlış müsbət və ya yanlış mənfi nəticələr verməsi olduqca nadirdir. Bu çatışmazlığın səbəbləri texniki səhvlər ola bilər. Belə nəticələr romatoid faktor, metabolik pozğunluqlar və digərləri ilə mümkündür xroniki xəstəliklər, bunun sayəsində qoruyucu antikorlar istehsal olunur, həmçinin müəyyən dərmanlar, məsələn, insulin qəbul edərkən.

ELISA metodu müəyyən edir:

tapeworms (donuz əti tapeworms);
dəyirmi qurdlar (yumru qurdlar, pinworms, toxocara, strongyloidit);
yastı qurdlar (cestodes, flukes, nematodlar);
trichinella;
dəyirmi qurdlara - 935 rubl;
toksoplazmaya - 715-1000 rubl.