Yerində hibridləşmə üsulu. Xromosom xəstəliklərinin diaqnostikasında floresan in situ hibridləşmə (FISH) üsulu. Təlim modulu. Hüceyrə biologiyası
FISH - Floresan in situ hibridləşdirmə texnikası 1980-ci illərin ortalarında işlənib hazırlanmışdır və xromosomlarda xüsusi DNT ardıcıllığının, həmçinin 6-cı xromosomun sentromerində yerləşən alfa peyk DNT-nin, CEP6(6p11. 1-q11).
Bu, diaqnostikada əhəmiyyətli fərq yaratdı. onkoloji xəstəliklər melanositar genezis şiş antigenlərinin kəşfi ilə əlaqədar baş vermişdir. Bədxassəli bir fonda üç antigendə mutasiya müəyyən edilir: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) və CMM1 (1p). Bu baxımdan obyektivlik ehtimalı diferensial diaqnoz, melanositar dəri şişlərinin genetik xüsusiyyətlərinin müəyyən edilməsinə əsaslanaraq, erkən diaqnoz melanoma və onun prekursorları tədqiq olunan genlərin və 6-cı xromosomların normal dəstinə malik nüvədə qırmızı rəngə boyanmış iki RREB1 geni, sarı rəngə boyanmış iki MYB geni, iki CCND1 geni vurğulanır. yaşıl, və 6-cı xromosomun iki sentromeri təyin edilmişdir mavi. Diaqnostik məqsədlər üçün flüoresan testlər istifadə olunur.
Reaksiya nəticələrinin qiymətləndirilməsi: hər bir nümunənin 30 nüvəsində qırmızı, sarı, yaşıl və mavi siqnalların miqdarı sayılır, dörd parametr müəyyən edilir. müxtəlif variantlar nümunənin melanoma ilə genetik uyğunluğu olan genetik pozğunluqlar. Məsələn, bir nüvədə CCND1 geninin orta sayı ≥2,5 olarsa, nümunə melanoma ilə uyğun gəlir. Digər genlərin nüsxə sayı eyni prinsiplə qiymətləndirilir. Dörd şərtdən ən azı biri yerinə yetirilərsə, dərman FISH müsbət sayılır. Bütün dörd parametrin kəsmə dəyərlərindən aşağı olduğu nümunələr FISH mənfi hesab olunur.
Xromosomlarda xüsusi DNT ardıcıllığının təyini biopsiya və ya cərrahi materialın bölmələrində aparılır. Praktik tətbiqdə FISH reaksiyası belə görünür: melanositlərin nüvələrində DNT olan tədqiq olunan material, ikiqat zəncirli quruluşu qırmaq və bununla da hüceyrənin istənilən bölgəsinə girişi asanlaşdırmaq üçün molekulunu qismən məhv etmək üçün işlənir. gen. Nümunələr DNT molekuluna bağlandıqları yerə görə təsnif edilir. FISH reaksiyası üçün material klinik praktika Toxumanın parafin bölmələri, smear və izlər istifadə olunur.
FISH reaksiyası gen nüsxələrinin sayının artması, gen itkisi, xromosomların sayındakı dəyişikliklər və keyfiyyət dəyişiklikləri nəticəsində DNT molekulunda baş verən dəyişiklikləri - gen lokuslarının hər ikisinin eyni yerdə hərəkətini aşkar etməyə imkan verir. xromosom və iki xromosom arasında.
FISH reaksiyasından istifadə edərkən əldə edilən məlumatları emal etmək və üç tədqiqat qrupunun genlərinin surət nömrələri arasındakı əlaqəni öyrənmək üçün Spearman korrelyasiya əmsalı istifadə olunur.
Melanoma nevus və displastik nevus ilə müqayisədə surət sayının artması ilə xarakterizə olunur.
Sadə bir nevus, displastik bir nevusla müqayisədə, nüsxə sayında daha az anormalliklərə malikdir (yəni, daha normal surət nömrələri).
Nümunənin müəyyən bir sinfə aid olub-olmadığını təxmin etməyə imkan verən qərar vermə qaydalarının qurulması (sadə və diferensial diaqnostika). displastik nevus), “qərar ağaclarının” riyazi aparatından istifadə olunur. Bu yanaşma praktikada özünü yaxşı sübut etdi və bu metoddan istifadənin nəticələri (neyroşəbəkələr kimi bir çox digər üsullardan fərqli olaraq) sadə, displastik nevus və melanomanın fərqləndirilməsi üçün qərar qaydalarının qurulması üçün aydın şəkildə şərh edilə bilər. Bütün hallarda ilkin məlumatlar dörd genin surət nömrələri idi.
Diferensial diaqnoz üçün qərar qaydasının qurulması vəzifəsi bir neçə mərhələyə bölünür. Birinci mərhələdə melanoma və nevus nevus növü nəzərə alınmadan fərqləndirilir. Növbəti mərhələdə sadə və displastik nevusları ayırmaq üçün qərar qaydası qurulur. Nəhayət, son mərhələdə, displastik nevusun displaziya dərəcəsini təyin etmək üçün "qərar ağacı" qurmaq mümkündür.
Nevusları alt vəzifələrə təsnif etmək tapşırığının bu şəkildə bölünməsi hər mərhələdə proqnozların yüksək dəqiqliyinə nail olmağa imkan verir. “Qərar ağacı”nın qurulması üçün giriş məlumatları melanoma diaqnozu qoyulmuş xəstələr və qeyri-melanoma diaqnozu qoyulmuş xəstələr üçün dörd genin nüsxə sayına dair məlumatlardır (xəstələr müxtəlif növlər nevus - sadə və displastik). Hər bir xəstə üçün 30 hüceyrə üçün gen nüsxə nömrələri haqqında məlumat var.
Beləliklə, diaqnozun proqnozlaşdırılması probleminin bir neçə mərhələyə bölünməsi yüksək dəqiqliklə qurulmağa imkan verir həlledici qaydalar yalnız melanoma və nevusları fərqləndirmək üçün deyil, həm də nevusların növünü müəyyən etmək və displastik nevus üçün displaziya dərəcəsini proqnozlaşdırmaq üçün. Quraşdırılmış "qərar ağacları" gen nüsxələrinin nömrələri haqqında məlumat əsasında diaqnozu proqnozlaşdırmaq üçün vizual üsuldur və dərinin xoşxassəli, bədxassəli və bədxassəli melanositik neoplazmalarını fərqləndirmək üçün klinik praktikada asanlıqla istifadə edilə bilər. Təklif olunur əlavə üsul differensial diaqnoz xəstələrdə nəhəng anadangəlmə piqmentli nevusların və displastik nevusların kəsilməsi zamanı xüsusilə vacibdir. uşaqlıq, belə xəstələr təmasda olduqdan bəri tibb müəssisələri qeyd etdi yüksək faiz diaqnostik səhvlər. Təsvir edilən metoddan istifadənin nəticələri yüksək effektivdir, xüsusən də FAMM sindromu olan xəstələrdə piqmentli dəri şişlərinin diaqnostikasında istifadə etmək məqsədəuyğundur;
Döş xərçəngi qiymətləndirilməməlidir. Bu, tamamilə hər kəsə təsir edə bilər - gənc və yaşlı, qadınlar və kişilər. Müalicənin həddindən artıq mürəkkəbliyi, yüksək ölüm və xəstələnmənin artan dinamikası tibb tərəfindən bu problemə diqqətin artmasının səbəbidir.
Bu günə qədər xəstəliyin müsbət nəticəsini 100% təmin edən heç bir müalicə üsulu yoxdur. Mövcud üsullarəmək tutumlu, bahalıdır və bədənə böyük girov zərər verə bilər.
Bu, ən yaxşı müalicənin risk faktorlarının aradan qaldırılması və vaxtında diaqnozun qoyulması olduğunu deyə biləcəyimiz xəstəliklərdən biridir.
Döş xərçənginə meyl
Xərçəngin ilk dəfə eramızdan əvvəl 15-ci əsrdə təsvir edilməsinə və elm adamlarının çoxlu məlumatlara malik olmasına baxmayaraq, hələ də kifayət deyil. tam təsviri döş xərçənginin etiologiyası.
Faktorlar kifayət qədər etibarlılıqla tapılmadı xarici mühit xərçəngin yaranmasına və ya inkişafına təsir edən. Seçilmiş tədqiqatlar, xüsusi bir kanserogeni göstərən, bütün tibb ictimaiyyəti tərəfindən tam tanınmır. Bununla belə, döş xərçəngi ilə aşağıdakılar arasında müəyyən bir əlaqə var:
Yuxarıda sadalanan ən vacib amillərdən biri yaşdır: illər keçdikcə döş xərçənginin inkişaf ehtimalı böyük ölçüdə artır. Ümumiyyətlə, döş xərçəngi etiologiyası məsələsinin mürəkkəbliyi onun genetik təbiəti ilə bağlıdır. Niyə bir nasazlığın birdən meydana gəldiyi və döş toxumasının nəzarətsiz şəkildə bölünməyə başladığı, qonşu toxumalara təsir etdiyi və bütün bədəndə metastazlara səbəb olduğu bilinmir.
Lakin alimlər bir məsələdə həmfikirdirlər: müasir həyatüçün daha əlverişlidir xərçəng xəstəlikləriəvvəlkindən.
Bəli, üzərində göstərilir böyük dozalar elektromaqnit şüalanması, pis ekologiya, azaldılmış məzmunşəhərlərdə oksigen, fiziki hərəkətsizlik, stress və s. Həyatın əhəmiyyətli dərəcədə artan yaşını nəzərə almamaq mümkün deyil, çünki xərçəng adətən yetkinlik dövründə gələn bir xəstəlikdir.
Lazımi testlər
Xərçəngin müsbət nəticəsinin mümkünlüyü birbaşa müalicənin başlama vaxtı ilə bağlıdır, buna görə də diaqnoza münasibət ən ciddi olmalıdır.
Aşağıdakı diaqnostik üsullar tələb olunur:
- aylıq özünü yoxlamaq(palpasiya testi);
- rübdə bir dəfə həkimə müraciət edin;
- altı ayda bir ultrasəs;
- MRT hər il.
Mamoqrafiya ( rentgen müayinəsi) 30 yaşa qədər tövsiyə edilmir, çünki gənc yaşda radiasiyaya məruz qalmağın qarşısını almaq daha yaxşıdır. Döş xərçəngindən şübhələnirsinizsə, aşağıdakı testlərdən keçməlisiniz:
FISH tədqiqat metodu
FISH tədqiqatı (FISH analizi) membran zülalı HER2 (Human Estrogen Receptor2) öyrənmək üçün istifadə edilən sitogenetik üsuldur. FISH tədqiqatı apararkən, floresan boya ilə etiketlənmiş DNT zondlarından istifadə olunur. Bu zondlar istənilən DNT bölgələrinə daxil edilir və HER2 gücləndirmə dərəcəsini ölçə bilir. Tədqiqat zamanla aparıldığından və genlər bölünməyə davam etdiyindən, HER2 geninin nüsxələrinin sayının normal bölünən bölgənin nüsxələrinin sayına nisbətini qiymətləndirmək mümkündür. 2-dən böyük və ya bərabərdirsə, nəticə HER2 müsbət hesab olunur.
FISH analizi xərçəngin proqnozunda və müalicə prinsiplərinin seçilməsində mühüm rol oynayır. Beləliklə, gücləndirmə və ya aktivliyin artması Bu zülal xərçəng hallarının 30% -ində tapılır və onun funksiyasını maneə törətməyə yönəlmiş xüsusi müalicə tələb edir. Normal şəraitdə HER2 hüceyrə böyüməsini, bölünməsini və özünü təmirini idarə edir. Xərçəng vəziyyətində, bu zülal həddən artıq çox membran reseptoru istehsal edir və hüceyrələrə nəzarətsiz şəkildə bölünməyə göstəriş verir. Hüceyrə beləcə xərçəngə çevrilir.
At müsbət nəticə FISH testi HER2-ni bastırmağa yönəlmiş müalicəni təyin edir. Bu gün əsas dərman Herceptindir. Əgər bu müayinə aparılmazsa və ya onun nəticələrinə məhəl qoyulmazsa, müalicə metodunun seçimi yanlış olacaq və xərçəng xəstəliyinə doğru irəliləyəcək. terminal mərhələsi. Bundan əlavə, belə xərçəng inkişafda HER2-mənfi xərçəngdən daha aqressivdir.
İmmunohistokimyəvi analiz FISH analizi ilə birlikdə aparılır. Bu həm də HER2 zülalını öyrənmək üçün gen üsuludur, lakin immunohistokimyəvi analiz zamanı HER2 zülalının miqdarı hüceyrədə deyil, konkret nümunədə aşkar edilir.
Balıq üsulundan maya dəyərinə görə fərqlənir, lakin məhsul daha az informativ nəticələr verir, bu da tədqiqatçıdan, laboratoriyadan və istifadə olunan meyarlardan asılıdır. HER2 zülalının miqdarı test nümunəsinin rəngi ilə müəyyən edilir və sıfırdan üçə qədər miqyasda qiymətləndirilir. Bu iki üsul birlikdə xəstənin HER2 statusunu öyrənmək üçün qızıl standartdır.
Beləliklə, görünüşünə baxmayaraq, döş xərçəngi kifayət qədər müalicə olunur uğurlu müalicə. Onkoloqların arsenalında təbabətin bütün qabaqcıl nailiyyətləri var. Bütün bu vasitələr ən adi vətəndaş üçün olduqca əlçatandır.
Xəstəliyin uğurlu nəticəsi üçün əsas şey döş xərçəngi üçün vaxtında müayinə, düzgün müalicə metodunun seçilməsi və daha erkən başlamasıdır. Nəticə olmadıqda ümidsiz olmayın, çünki müsbət emosional fon da xəstəliyin gedişatına əhəmiyyətli təsir göstərir.
FISH boyama üsulu (flüoresan in situ hibridləşdirmə) 1986-cı ildə Livermor Milli Laboratoriyasında (ABŞ) işlənib hazırlanmışdır. Bu əsasdır. yeni üsul xromosomların öyrənilməsi - xüsusi molekulyar zondlarla in situ hibridləşmə yolu ilə DNT-nin flüoresan aşkarlanması üsulu. Metod xromosom DNT-nin müəyyən şərtlər altında xromosom DNT-ni tamamlayan nukleotid ardıcıllığını ehtiva edən DNT fraqmentlərinə (DNT zondları) bağlamaq qabiliyyətinə əsaslanır. DNT zondları əvvəlcədən xüsusi maddələrlə (məsələn, biotin və ya digoksigenin) etiketlənir. Etiketli DNT zondları hibridləşmə üçün hazırlanmış metafaza xromosomlarının sitogenetik preparatlarına tətbiq edilir. Hibridləşmə baş verdikdən sonra preparatlar biotin və ya digoksigeninə selektiv şəkildə bağlana bilən maddələrlə konjuge edilmiş xüsusi flüoresan boyalarla müalicə olunur. Hər bir xromosomun özünəməxsus rəngi var. Hibridləşmə radioaktiv etiketli zondlarla da həyata keçirilə bilər. Sitogenetik analiz ultrabənövşəyi işıq altında flüoresan mikroskop altında aparılır.
FISH metodu kiçik delesiyaları və translokasiyaları aşkar etmək üçün istifadə olunur. Müxtəlif rəngli xromosomlar arasında xromosom mübadiləsi (translokasiyalar və disentriklər) çox rəngli strukturlar kimi asanlıqla müəyyən edilir.
İşin sonu -
Bu mövzu bölməyə aiddir:
Təlim modulu. Hüceyrə biologiyası
Daha yüksək peşə təhsili.. Başqırd dövləti tibb universiteti.. Səhiyyə və Sosial İnkişaf Nazirliyi..
Əgər ehtiyacın varsa əlavə material Bu mövzuda və ya axtardığınızı tapmadınız, işlərimiz bazamızda axtarışdan istifadə etməyi tövsiyə edirik:
Alınan materialla nə edəcəyik:
Bu material sizin üçün faydalı olsaydı, onu sosial şəbəkələrdə səhifənizdə saxlaya bilərsiniz:
| Tweet |
Bu bölmədəki bütün mövzular:
Təlim modulu. Ümumi və tibbi genetikanın əsasları
(tələbələr üçün metodiki göstərişlər) Akademik intizam Biologiya Hazırlıq istiqaməti üçün General Medicine Co.
Laboratoriya işlərinin yerinə yetirilməsi qaydaları
Bir obyektin mikroskopik tədqiqinin zəruri elementi onun albomda eskizidir. Eskizin məqsədi obyektin quruluşunu, ayrı-ayrı strukturların formasını daha yaxşı başa düşmək və yaddaşda möhkəmləndirməkdir.
Praktik iş
1. “Soğan plyonka hüceyrələri” müvəqqəti preparatının hazırlanması Soğan plyonka ilə müvəqqəti preparat hazırlamaq üçün onu çıxarın.
Sitoplazmatik membranların quruluşu. Membranların nəql funksiyası
2. Təhsil məqsədləri: Bilmək: - universal bioloji membranın quruluşunu - maddələrin membranlar vasitəsilə passiv daşınmasının qanunauyğunluqlarını.
Eukaryotik hüceyrələrin quruluşu. Sitoplazma və onun komponentləri
2. Təlim məqsədləri: Bilmək: - eukaryotik hüceyrələrin təşkilinin xüsusiyyətlərini - sitoplazmatik orqanoidlərin quruluşunu və funksiyasını.
Maddələrin sintezində iştirak edən orqanoidlər
Hər hansı bir hüceyrədə ona xas olan maddələrin sintezi baş verir ki, bunlar ya köhnəlmiş strukturları əvəz etmək üçün yeni yaranan strukturlar üçün tikinti materialları, ya da biokimyəvi reaksiyalarda iştirak edən fermentlərdir.
Qoruyucu və həzm funksiyaları olan orqanoidlər
Lizosomlar Bu orqanoidlər 20-ci əsrin 50-ci illərindən, belçikalı biokimyaçı de Duve qaraciyər hüceyrələrində hidrolitik maddələr olan kiçik qranulları aşkar etdikdən sonra məlumdur.
Hüceyrənin enerji təchizatında iştirak edən orqanoidlər
Hüceyrə funksiyalarının böyük əksəriyyəti enerji xərclərini əhatə edir. Canlı hüceyrə onu daim baş verən redoks prosesləri nəticəsində əmələ gətirir
Hüceyrənin bölünməsində və hərəkətində iştirak edən orqanoidlər
Bunlara hüceyrə mərkəzi və onun törəmələri - kirpiklər və flagella daxildir. Hüceyrə mərkəzi Hüceyrə mərkəzi heyvan hüceyrələrində və bəzilərində olur
Praktiki iş №1
1. “Onurğa qanqlion hüceyrələrində Qolji kompleksi” daimi preparatının mikroskopik analizi Preparat haqqında sinir hüceyrələri onlar
Ribosomlar
İstifadəsi müəyyən edilmişdir elektron mikroskopiyası bütün pro- və eukaryotik orqanizmlərin hüceyrələrində onların ölçüsü 8-35 nm-dir, endoplazmatik retikulumun xarici membranına bitişikdir. Ribosomlarla həyata keçirilir
Qranulyar endoplazmatik retikulum
Elektron mikroqrafiyada kobud endoplazmatik retikulumun submikroskopik strukturunu nəzərdən keçirək. Aclıq mədəaltı vəzinin acinar hüceyrələrinin üç sahəsi müəyyən edilir yarasa. Əvvəl
Sitoplazmik mikrotubullar
Sitoplazmatik borular bütün heyvan və bitki orqanizmlərinin hüceyrələrində olur. Bunlar 20-30 mikron uzunluğunda, 1 silindrik, sapa bənzər formasiyalardır
Toxumalarda və hüceyrələrdə mitotik fəaliyyət
Hal-hazırda bir çox heyvan və bitki toxumalarının mitotik dövrləri və mitotik fəaliyyət rejimi tədqiq edilmişdir. Məlum olub ki, hər bir toxuma müəyyən səviyyədə mitotik aktivliyə malikdir. Oh m
Soğan kök hüceyrələrində mitoz (dolayı bölünmə).
Aşağı böyüdücü mikroskopdan istifadə edərək, soğanın ucunun çoxalma zonasını tapın və görmə sahəsinin mərkəzinə aydın görünən aktiv bölünən hüceyrələri olan bir sahə qoyun. Sonra hazırlığı yüksək böyütməyə qoyun
Siçan qaraciyər hüceyrələrində amitoz (birbaşa bölünmə).
Siçan qaraciyər hüceyrələrini mikroskop altında yüksək böyütmə ilə yoxlayın. Hazırlıqda hüceyrələr çoxşaxəli formaya malikdir. Bölünməyən hüceyrələrdə nüvə nüvəsi olan dəyirmi formadadır. Bölünməyə başlayan hüceyrələrdə
Yumru qurdun sinkaryon yumurta hüceyrəsi
Aşağı böyüdücü mikroskopdan istifadə edərək, yumru qurdun uşaqlığının yumurtaları olan follikullarla dolu bir hissəsini tapın. Nümunəni yüksək böyütmə ilə yoxlayın. Yumurtalarda sitoplazma kiçilir və qabıqlanır
DNT və RNT-nin quruluşu və funksiyaları. Pro- və eukariotlarda gen quruluşu və gen ifadəsinin tənzimlənməsi. Protein biosintezinin mərhələləri
2. Tədris məqsədləri: Bilmək: - kimyəvi birləşmə nuklein turşularının təşkili və xüsusiyyətlərini; - DNT və RNT arasındakı fərqlər;
Monohibrid kəsişmələrdə əlamətlərin irsiyyət nümunələri. Allelik genlərin qarşılıqlı təsir növləri
2. Təhsil məqsədləri: Bilmək: - monohibrid kəsişmənin qanunauyğunluqlarını; - I və II Mendelin qanunları; - qarşılıqlı təsir növləri
Xüsusiyyətlərin müstəqil irsiyyət qanunu. Qeyri-allelik genlərin qarşılıqlı təsir növləri
2. Təhsil məqsədləri: Bilmək: - di- və polihibrid kəsişmənin qanunauyğunluqlarını; - Mendelin III qanunu; - qarşılıqlı təsir növləri
Dəyişkənlik canlıların xüsusiyyəti kimi, onun forması. Fenotipik (dəyişən və ya irsi olmayan) dəyişkənlik. Genotipik dəyişkənlik
2. Təlim məqsədləri: Bilmək: - dəyişkənliyin əsas formalarını; - tanınmanın nüfuzluluğu və ifadəliliyi haqqında fikirlər əldə etmək
Müəllimin nəzarəti altında tələbələrin müstəqil işi
Praktiki iş Bir əlamətin dəyişkənlik dərəcəsinin və ətraf mühit şəraitindən asılı olaraq dəyişmə əmsalının təyini.
Damazlıq analizi
İnsanlarda müəyyən əlamətlərin irsiyyətini təhlil etmək üçün bütün genetik üsullar tətbiq olunmur. Bununla belə, qohumların bir neçə nəslinin fenotiplərini öyrənməklə irsiyyətin xarakterini müəyyən etmək mümkündür.
İnsan genetikasını öyrənmək üçün əkiz metod
Əkiz metodu bizə müəyyən əlamətin və ya xəstəliyin inkişafında genetik və ətraf mühit amillərinin nisbi rolunu qiymətləndirməyə imkan verir. Əkizlər monozigotik (eyni) və ya dizigotik (bir eyni) ola bilər.
İnsan genetikasını öyrənmək üçün dermatoglifik üsul
Dermatoglifik analiz barmaqların, ovucların və ayaqların papilyar nümunələrinin öyrənilməsidir. Dərinin bu nahiyələrində iri dəri papillaları var və onları əhatə edən epidermis g əmələ gətirir
İnsan genetikasının öyrənilməsində sitogenetik üsul
Bir çox tədqiqat metodları arasında irsi patologiyaİnsan sitogenetik metodu mühüm yer tutur. Sitogenetik metoddan istifadə edərək irsiliyin maddi əsaslarını təhlil etmək mümkündür
Xromosom dəstinin tədqiqi
İki yolla həyata keçirilə bilər: 1) birbaşa üsul - bölünən hüceyrələrdə metafaza xromosomlarının öyrənilməsi, məsələn, sümük iliyi(dan
Praktik iş
1. Sitogenetik laboratoriyada “İnsan Karyotipi” nümayiş preparatına baxılması X90 böyüdülməsində leykositlər görmə sahəsində görünür
Xromosom xəstəlikləri olan xəstələrdə karyotip analizi (fotoşəkillərdən)
No 1. 13-cü xromosomda trisomiya (Patau sindromu). Karyotip 47, +13. No 2. 18-ci xromosomda trisomiya (Edvards sindromu). Karyotip 47, +18. No 3. trisomiya 21 (Daun xəstəliyi).
Barmaq izi analizinin aparılması
Öz barmaq izlərinizi düzəltmək üçün sizə aşağıdakı avadanlıq lazımdır: fotorolik, 20x20 sm2 ölçülü şüşə, bir parça köpük kauçuk, çap mürəkkəbi (və ya oxşar
Karyotipin sitogenetik analizi (metafaza plitələrinin mikrofotoşəkillərinə əsasən)
1. Metafaza lövhəsini çəkin. 2. Xromosomların ümumi sayını hesablayın. 3. A (3 cüt böyük metasentrik xromosomlar), B (iki cüt böyük xromosomlar) qruplarının xromosomlarını müəyyənləşdirin.
Ağız mukozasının epitelinin nüvələrində X cinsi xromatinin öyrənilməsi üçün ekspress metod
Qırıntıdan əvvəl xəstədən yanağın selikli qişasını dişləri ilə dişləməsi və daxili səth Yanaqlarınızı cuna dəsmal ilə silin. Bu prosedur məhv edilmiş hüceyrələri çıxarmaq üçün lazımdır, g
Əhali statistik metodu
Populyasiya - bir ərazidə uzun müddət məskunlaşan, bu növün fərdlərinin digər qruplarından nisbətən təcrid olunmuş, sərbəst şəkildə bir-birinə qarışan və istehsal edən eyni növdən olan fərdlərin məcmusudur.
Biokimyəvi üsul
Biokimyəvi üsullar ferment sistemlərinin fəaliyyətinin öyrənilməsinə əsaslanır (ya fermentin özünün aktivliyinə görə, ya da bu fermentin kataliz etdiyi reaksiyanın son məhsullarının sayına görə). Biokimyəvi maddələr
Molekulyar genetik üsul
Bütün molekulyar genetik üsullar DNT strukturunun öyrənilməsinə əsaslanır. DNT analizinin mərhələləri: 1. DNT-nin nüvəsi olan hüceyrələrdən (qan
DNT sintezinin polimeraza zəncirvari reaksiyası
Polimeraza zəncirvari reaksiya(PCR) in vitro DNT amplifikasiyası (reproduksiyası) üsuludur, onun köməyi ilə bir neçə saat ərzində ölçüsü 80 ilə qədər dəyişən maraq doğuran DNT fraqmentini müəyyən edib çoxalda bilərsiniz.
No Tam adı Genotip İvanov AA Petrov Aa
Müşahidə olunan genotip və allel tezlikləri
Genotiplər, allellər İşlərin sayı Tezlik (kəsrlərdə) AA 1 / 5 = 0,2 Aa
Genotiplərin və allellərin müşahidə edilən və gözlənilən tezlikləri
Müşahidə olunan halların sayı Müşahidə olunan tezlik AA-nın gözlənilən tezliyi (p2)
Müşahidə olunan genotip və allel tezlikləri
Xeyr. Dili boruya yuvarlamaq bacarığı Genotiplər Mən bacarıram (bəli) A_
Ənənəvi sitogenetika karyotipi öyrənərkən həmişə bandın ayırdetmə səviyyəsi ilə məhdudlaşırdı. Diferensial xromosomların rənglənməsi üçün yüksək ayırdetmə üsullarından istifadə edərkən belə, biz yalnız bir xromosomda daha çox zolaq aşkar edirdik, lakin həlletmənin molekulyar səviyyəsinə çatdığımızdan əmin deyildik. DNT texnologiyası və sitogenetikada son nailiyyətlər xromosom DNT-dəki dəyişiklikləri molekulyar səviyyədə təhlil etmək üçün FISH metodlarından istifadə etməyə imkan verdi. Molekulyar sitogenetika sitogenetikada inqilabi sıçrayış təmin edərək, aşağıdakılara imkan verdi:
10-100 kilobaza diapazonunda xromosomların DNT strukturunu təhlil etmək;
prenatal diaqnostika və preimplantasiya genetik diaqnostikaya (PGD) böyük təsir göstərmiş bölünməyən interfaza hüceyrələrinin diaqnozu.
FISH texnologiyası xromosom daxilində xüsusi DNT ardıcıllığını bağlayan və ya tavlayan bir DNT zondundan istifadə edir. Denatürasiya edilmiş zond hüceyrənin yerli DNT-si ilə inkubasiya edilir, eyni zamanda tək zəncirli vəziyyətə gətirilir. Zond biotin deoksiuridin trifosfat və ya digoksigenin uridin trifosfatı timidinlə əvəz edir. Doğma DNT-nin zondla renaturasiyasından sonra zond-DNT kompleksi flüoroxrom etiketli biotin bağlayan avidin və ya ftorxrom etiketli anti-diqoksigeninin əlavə edilməsi ilə aşkar edilə bilər. Əlavə siqnal gücləndirilməsi antiavidin əlavə etməklə və flüoresan mikroskopiyadan istifadə edərək yaranan kompleksi öyrənməklə əldə edilə bilər. Fərqli DNT zondlarını bir neçə fərqli flüoroxrom ilə etiketləməklə, eyni vaxtda bir hüceyrə daxilində çoxsaylı xromosomları və ya xromosom seqmentlərini çoxrəngli siqnallar kimi görüntüləmək mümkündür.
Tərifin mümkünlüyü spesifik gen seqmentləri, xromosomlarda mövcud və ya yoxdur, DNT səviyyəsində gen ardıcıllığı sindromlarını, həmçinin interfaza nüvələrində, çox vaxt ayrı-ayrı hüceyrələrdə translokasiyaları diaqnoz etməyə imkan verdi.
üçün material BALIQ xidmət edə bilər və ya metafaza xromosomları bölünən hüceyrələrdən alınan nüvələr və ya bölünmə mərhələsində olmayan hüceyrələrdən fazalararası nüvələr. Zond və xromatinlə çarpaz hibridləşə bilən RNT-ni çıxarmaq üçün bölmələr RNase və proteinaz ilə əvvəlcədən müalicə olunur. Daha sonra DNT-ni denatürasiya etmək üçün formamiddə qızdırılır və buz kimi soyuq spirtlə bərkidilir. Sonra zond qızdırılmaqla hibridləşmə üçün hazırlanır. Sonra zond və xromosom preparatı qarışdırılır və hibridləşmə üçün 37°C-də örtüklə bağlanır. Hibridləşmə məhlulunun inkubasiya temperaturunu və ya duz tərkibini dəyişdirməklə, bağlamanın spesifikliyini artırmaq və fon etiketini azaltmaq olar.
Floresan in situ hibridləşdirmənin tətbiqi - FISH texnologiyası
FISH texnologiyasının səmərəliliyi ilk olaraq genləri lokallaşdırmaqla nümayiş etdirildi. Floresan etiketləmənin tətbiqi ilə in situ hibridləşdirmə aşkar edilə bilməyən xromosom anomaliyalarının diaqnostikası üçün əvəzolunmaz olduğunu sübut etdi. ənənəvi üsullar bantlama. Ən çox birinə nail olmaqda BALIQLAR da əsas rol oynamışdır qeyri-adi kəşflər müasir genetika - genomik imprinting.
Onun inkişaf texnologiyası BALIQüç formada qəbul edilir. Centromere və ya alfa peyk, zondlar nisbi xromosom spesifikliyi ilə xarakterizə olunur və ən çox interfaza hüceyrələrinin genetikasında istifadə olunur. Bu zondlar sentromer bölgəsində adekvat gücün bir qədər diffuz siqnalları yaradır, lakin oxşar sentromer ardıcıllığına malik xromosomlarla çarpaz hibridləşmir. Hal-hazırda, müəyyən bir xromosom zolağından diskret siqnal təmin edən və çarpaz hibridləşmə fenomenindən qaçan tək surətli zondlar hazırlanmışdır. Bu zondlar həmçinin nüsxə sayını və müəyyən bir sindromla əlaqəli olduğundan şübhələnən xüsusi xromosom bölgələrini müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər. Prenatal diaqnostika üçün 13, 18, 21, X və Y xromosomları üçün nəzərdə tutulmuş tək surətli və sentromer zondlarından istifadə olunur.
Bundan istifadə edərək bütün xromosomları "ləkələmək" də mümkündür BALIQ. Müxtəlif flüoroxromların qarışığından istifadə edən spektral karyotipləmə texnologiyası sayəsində indi hər bir fərdi xromosom üçün 24 ayrı rənglə unikal flüoresan model yaratmaq mümkündür. Bu texnologiya ənənəvi sitogenetik üsullardan istifadə etməklə görünməyən mürəkkəb xromosomların yenidən qurulmasını aşkar etməyə imkan verir.
Metod BALIQ prenatal diaqnostikada. Yaşlı qadınlar üçün reproduktiv yaş Hamiləlik sevinc üçün deyil, narahatlıq üçün bir səbəb ola bilər. Bir qadının yaşı fetal xromosom anomaliyalarının inkişaf riski ilə əlaqələndirilir. Hamiləliyin 16-cı həftəsində həyata keçirilən amniyosentez, ardınca karyotip analizi 10-14 gün çəkir. İlkin müayinədə FISH-dən istifadə diaqnozu sürətləndirə və gözləmə müddətini azalda bilər. Əksər genetiklər və laboratoriyalar belə bir fikirdədirlər ki, FISH hamiləliyin sonrakı idarə olunması ilə bağlı qərarlar qəbul etmək üçün ayrıca istifadə edilməməlidir. FISH metodu karyotipik analizlə tamamlanmalı və onun nəticələri ən azı patoloji mənzərə ilə əlaqələndirilməlidir. ultrasəs müayinəsi(ultrasəs) və ya ana qanından istifadə edərək biokimyəvi müayinə.
Gen sindromları ardıcıllıqlar mikrodelesiya sindromları və ya seqmental anevozomiya kimi də tanınır. Bunlar adətən çoxlu genləri əhatə edən bitişik xromosom fraqmentlərinin silinməsidir. Gen ardıcıllığı sindromları ilk dəfə 1986-cı ildə klassik sitogenetik üsullardan istifadə etməklə təsvir edilmişdir. İndi FISH sayəsində DNT səviyyəsində submikroskopik delesiyaları müəyyən etmək mümkündür ki, bu da kritik bölgə adlanan müəyyən bir sindromun inkişafı ilə əlaqəli ən kiçik silinmiş bölgəni müəyyən etməyə imkan verdi. Sindrom üçün kritik bölgə müəyyən edildikdən sonra, yoxluğu sindromla əlaqəli olduğu qəbul edilən xüsusi genləri müəyyən etmək çox vaxt mümkündür. Gen ardıcıllığı sindromlarının son təlimatında 14 xromosomla əlaqəli 18 silinmə və mikrodelesiya sindromu bildirilir. Ən çox görülən gen ardıcıllığı sindromlarından bəziləri və onların klinik təzahürlər cədvəldə verilmişdir. 5-2.
Telomerlər- xromosomların uzun və qısa qollarının uclarını əhatə edən formasiyalar. Onlar TTAGGG-nin təkrarlanan ardıcıllığından ibarətdir və xromosomların uclarının bir-biri ilə birləşməsinin qarşısını alır. Telomer zondları oynayır mühüm rolənənəvi sitogenetik üsullarla müəyyən edilə bilməyən mürəkkəb translokasiyaların tanınmasında. Bundan əlavə, İnsan Genomu Layihəsinin kəşflərindən biri də xromosomların telomerlərə bitişik bölgələrinin genlərlə zəngin olması idi. İndi sübut edilmişdir ki, submikroskopik subtelomerik delesiyalar bir çox genetik cəhətdən müəyyən edilmiş xəstəliklərin baş verməsindən məsuldur.
FISH 21-ci əsrin molekulyar biologiyasının ən heyrətamiz “alətlərindən” biridir. Preimplantasiya diaqnostikasında FISH tədqiqat texnikası in vitro gübrələmə (IVF) yolu ilə yeni əldə edilmiş embrionun hüceyrələrində xromosom anomaliyalarını və ya xromosom cütləşmə pozğunluqlarını aşkar etmək üçün istifadə olunur. Əgər anomaliya və ya anevloidiya əlamətləri (qoşalaşma pozğunluğu, xromosom cütlərinin olmaması) aşkar edilmirsə, o zaman “süni” embrion həyat qabiliyyətli sayılır. Gələcək ananın uterusuna implantasiya edilə bilər.
FISH həmçinin embrionun xromosom dəstində cinsi xüsusiyyətləri izləməyə imkan verir. Bu, doğulacaq uşağın cinsini hamiləliyin faktiki başlanğıcından əvvəl də müəyyən etməyə imkan verir (əgər bunu bədəndən kənarda doğulmuş embrionun uşaqlıq yoluna implantasiyası ilə başlasaq).
FISH nədir?
İxtisarın dayanması: Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung və ya floresan in-situ hibridləşmə. Transkript, çox güman ki, cahil oxucuya heç nə demir. Buna görə də, biz az tərcümə edilmiş “in-situ”nu sona buraxaraq, mürəkkəb anlayışı hissə-hissə təhlil edəcəyik.
Hibridləşmə
Molekulyar biologiyada bu terminin “adi” biologiyada növlərin kəsişməsi ilə heç bir əlaqəsi olmayan çox xüsusi mənası var.
Hibridləşmə tədqiq olunan hüceyrələrin DNT və RNT vəziyyətini qiymətləndirmək üçün istifadə edilən molekulyar genetik texnikadır. Nuklein turşularının ayrı-ayrı zəncirlərinin vahid molekula bağlanmasına əsaslanır. Bu yolla molekulların və ya onların fraqmentlərinin bir-birini tamamlaması (qarşılıqlı uyğunluğu) yoxlanılır. Tam tamamlayıcılıqla zəncirlər asanlıqla və tez bir zamanda ümumi molekula birləşirlər. Yavaş birləşmə tamamlayıcılığın qeyri-kafi olduğunu göstərir. Zəncirlərin tamamlayıcı olmaması məhz xromosom anomaliyaları (müəyyən sahələrdə xromosomların sırasının pozulması), qoşalaşmamış xromosomlar və ya bəzi cütlərin olmaması ilə bağlıdır.
Tamamlayıcılığı ölçmək üçün "alət" DNT zəncirlərinin ümumi molekula hibridləşdiyi temperaturdur. Bunun üçün əvvəlcə nuklein turşusu preparatını qızdırmaq, sonra isə başqa qızdırılmış preparatla qarışdırdıqdan sonra soyumaq lazımdır. Qızdırıldıqda DNT və ya RNT zəncirləri arasında hidrogen bağları yox olur və molekulların tək zəncirli fraqmentləri əmələ gəlir. İki DNT və ya RNT (və ya DNT - RNT) qarışıq preparatları soyudulur. Soyuduqda tamamlayıcı əsaslar arasında hidrogen bağları tez bərpa olunur və tək, hibrid DNT molekulu (RNT və ya DNT - RNT) əmələ gəlir. Tamamlayıcılığın olmaması ilə proses daha uzun çəkir, tamamlayıcı olmayan fraqmentlər əlavə edilmədən qalır. Nəticə etibarilə, hibridləşmə temperaturu nə qədər yüksək olarsa, hüceyrələrin xromosom quruluşu bir o qədər ahəngdar və korreksiyalıdır. Temperatur nə qədər aşağı olarsa, xromosomlarda bir o qədər anormallıqlar olur. Tamamlayıcı olmayan qalıqların təhlili əsasında spesifik anomaliyalar və ya anevloidiya sahələri müəyyən edilə bilər.
Floresan işarəsi
Hibridləşdirici bir DNT (və ya RNT) molekulunun tamamlayıcılığını təhlil etmək üçün xüsusi genetik zondlar (və ya DNT zondları) istifadə olunur ki, bunlar da təbii ki, məsələn, cərrahiyyədə istifadə olunan adlarla çox az ümumiliyə malikdir.
Genetik zondlar əvvəlcədən müəyyən edilmiş tamamlayıcı xüsusiyyətlərə malik sintez edilmiş və xüsusi olaraq etiketlənmiş tək zəncirli DNT-dir (daha az rast gəlinən RNT). Hibridləşdikdə onlar müəyyən genetik fraqmentlərlə birləşərək onların tamamlayıcılığını təsdiqləyirlər. Probların hibridləşdirilmiş molekulda yerləşməsi bu “süni quruluşun” yığıldığı orijinal xromosom materialının normal və ya qüsurlu quruluşunu göstərir.
Genetik zondlar, xüsusən də parlaq (flüoresan) maddələrlə qeyd olunur ki, bu da onları xüsusi flüoresan mikroskopun obyektivləri altında görünən edir.
Bir neçə zond üçün müxtəlif boyaların istifadəsi müxtəlif genetik strukturların eyni vaxtda təhlilinə, məsələn, bir-birinə və digər anomaliyalara üst-üstə düşmüş iki gen olan xromosomların bölgələrini müəyyən etməyə imkan verir.
Hal-hazırda, bir analizdə, genetik zondlar beş-altı fərqli boya ilə, bəzən hətta yeddi ilə etiketlənir.
In-situ “evdə” deməkdir
Orijinal hibridləşdirmə texnikası çətin idi. Çıxarılan DNT xüsusi termal tamponlarda denaturasiya edilib və sentrifuqada digər denatürasiya olunmuş fraqmentlərlə qarışdırılıb. Hibridləşmə də laboratoriyada, “kimyəvi qabda” aparılıb.
Müasir texnologiya analizləri in-situ, yəni “yerində”, “evdə”, laboratoriyada hazırlanmış preparatlarda deyil, orijinal genetik strukturlarda aparmağa imkan verir. Tədqiqatın obyektləri hüceyrə nüvələrinin özləri idi (qütb cisimlərinin, blastomerlərin və blastosistin səth hüceyrələrinin biopsiyası zamanı çıxarılan).
Genetik materialın bilavasitə hüceyrə nüvələrində müşahidə edilməsi prosesi sürətləndirir, onu daha “təmiz”, xarici təsirlərdən və laboratoriya dərmanlarının istehsalında istisna olunmayan zədələrdən azad edir.
Bununla belə, bu metodun keçilməz sərhədlərinə işarə edən problemlər var. Hüceyrələrdəki bütün xromosom dəstini tək hibridləşmə ilə “örtmək” mümkün deyil. Adətən iki və ya üç ardıcıl hibridləşmə tələb olunur ki, bu da 12-15 xromosom cütünü (və insanlarda isə 23) öyrənməyə imkan verir. DNT zəncirlərinin daha da hibridləşməsi qabiliyyəti hər rehibridləşmədən sonra tədricən azalır. Bu, eyni genetik materialın hərtərəfli təhlili üçün hibridləşmənin "istənilən qədər" həyata keçirilməsinə imkan vermir.